UD 6.

DETERMINACION DE ENZIMAS

1. LAS ENZIMAS EN EL LDC

La determinación de enzimas en el laboratorio es muy frecuente y puede servir para el diagnóstico, tratamiento o pronóstico de una
enfermedad. En el LDC las enzimas pueden ser utilizadas de distintas formas:
- Los enzimas como reactivos: para determinar la concentración de determinados metabolitos en diversos líquidos biológicos. En este
caso el metabolito a determinar ha de ser sustrato del enzima utilizado. Un ejemplo es la determinación de glucosa mediante la
glucosa oxidasa (Técnicas enzimáticas).
- Los enzimas como marcadores. Son los denominados enzimoinmunoanálisis (EIA). Se utilizan las propiedades catalíticas de los
enzimas para detectar y cuantificar las reacciones Ag – Ac. Ejemplo: técnica de ELISA.
- Los enzimas como componente celular. La mayoría de los enzimas se encuentran en el interior de las células, ya que son los
responsables de las reacciones químicas. Cuando se producen lesiones en los tejidos, los enzimas intracelulares pasan al plasma o a
otros líquidos biológicos. La determinación de la actividad enzimática en estos líquidos es de gran importancia para el diagnóstico y
pronóstico de diversas patologías (Enzimología diagnóstica).
- Enzimopatías: Estudio de enzimas que no funcionan correctamente o que son afuncionales, debido a un fallo en su síntesis por
alteraciones en el gen o los genes que las codifican. Un ejemplo es el albinismo.

2. DEFINICIÓN Y ESTRUCTURA

Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que actúan como catalizadores, aumentando la velocidad de las reacciones químicas (de
106 a 1012 veces en comparación con las reacciones no catalizadas).
Las enzimas son proteínas de alto peso molecular. Poseen todas las propiedades de las proteínas, incluida la posibilidad de desnaturalizarse, en
cuyo caso pierden su actividad.

También pueden ionizarse según el pH del medio, por lo que se puede aprovechar esta cualidad para hacer una electroforesis.
Las enzimas se sintetizan en las células y están presentes en todos los tejidos, aunque no todos los tejidos tienen las mismas enzimas ni en
igual cantidad. Es precisamente el conocimiento de su función y ubicación en los tejidos lo que permite utilizarlas como verdaderos
marcadores de ciertas patologías. La determinación en plasma o en otro líquido biológico de una enzima o de un grupo de enzimas nos informa
sobre el tejido o células de las que provienen.

Las enzimas pueden ejercer su actividad:

• De forma solitaria.
• De forma conjugada, formando un complejo denominado holoenzima:
o A la porción proteica la llamamos apoenzima.
o A la no proteica la llamamos cofactor modifica, en cierto modo, el sitio de unión del sustrato, facilitando que se
una el sustrato. Los cofactores pueden ser:
o Compuestos inorgánicos o iones metálicos (Zn++, Fe++, Mg++, etc.). Se les llama activadores enzimáticos.
o Compuestos orgánicos:
▪ Si se unen a la parte proteica de forma reversible se denominan coenzimas, como el NAD o
NADP.
▪ Si se unen de forma irreversible se denominan grupos prostéticos, como el piridoxal-5-
fosfato.

3. FUNCIÓN

Enzimas catalizan reacciones en las que se transforman una o más moléculas de sustrato (S) en una o más moléculas de producto (P):S→P.

Las enzimas funcionan como catalizadores biológicos y disminuyen la energía de activación del sustrato. Permiten
así que la reacción se haga a la temperatura normal del cuerpo, sin un aporte extra de calor.
La enzima se une al sustrato y forma un complejo enzima-sustrato (E-S). Una vez que se efectúa la catálisis, el
sustrato se transforma en producto y la enzima permanece sin cambio y queda en libertad para catalizar otras
reacciones. La reacción general es:
E+S→E–S→P+E

La enzima tiene una o varias regiones llamadas sitios activos por donde se une al sustrato. Es la parte principal de
la enzima.
Sólo los sustratos compatibles con el sitio activo pueden enlazarse con la enzima. De este modo, cada enzima cataliza sólo determinadas
reacciones, porque puede unirse sólo a determinados sustratos.

4. PROPIEDADES

Las propiedades de las enzimas son:

- Son eficaces en muy pequeñas cantidades.
- No se alteran ni se consumen durante la reacción.
- Aceleran la velocidad de la reacción química pero no alteran la constante de equilibrio, ya que no cambia la cantidad de producto
formada a partir del sustrato.
- Son específicas para cada sustrato o grupo de sustratos. La mayoría de las enzimas presentan especificidad absoluta (catalizan sólo
una reacción específica con un sustrato específico) pero otras muestran especificidad de grupo (varios sustratos con estructura
similar pueden reaccionar con la enzima). Algunas son específicas de un determinado enlace y otras son estereoespecíficas (sólo
reaccionan con ciertos isómeros ópticos).
- Enzimas reguladores o alostéricos: Un enzima alostérico es el primer enzima que actúa en una secuencia de reacciones químicas y
es inhibido por el producto final. Enzimas más especializados y desempeñan una función reguladora además de su actividad
catalítica.

5. ISOENZIMAS

Isoenzimas: (en algunos casos) varias formas moleculares de una misma enzima catalizan la misma reacción química. Con técnicas
apropiadas se pueden separar las isoenzimas de una enzima. Por ejemplo:

- Como muchas isoenzimas presentan variaciones de carga, pueden separarse por técnicas electroforéticas.
- También pueden separarse por sus diferencias a la inactivación por calor (podemos provocar que se inactiven aplicando calor, pero
cada isoenzima se inactiva a una temperatura distinta).
- Adsorción selectiva a diferentes soportes.
- Incubación con diferentes sustratos o con inhibidores selectivos.
La ventaja de las determinaciones de isoenzimas es que cada una proviene de un tejido distinto y podemos así detectar el tejido u órgano
afectado. Proporcionan mayor especificidad.

6. CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS

La Comisión de Enzimas de la Unión Internacional de Bioquímica elaboró unos principios generales de nomenclatura y clasificación de enzimas.
El nombre de la enzima tiene 2 partes: la primera nombra al sustrato y la segunda termina en "asa" e indica el tipo de reacción que cataliza.
Sin embargo, se tiende a utilizar cada vez más un código para cada enzima. Consta de las siglas EC y de 4 números separados por puntos. Esos
4 números significan, en este orden, lo siguiente:
• Primer número: la clase de enzima (hay 6 posibles clases).
o Oxidorreductasas: catalizan reacciones de oxidación y reducción entre 2 sustratos. Se transfieren electrones.
o Transferasas: transfieren grupos funcionales (amino, fosfato, etc.) de una molécula a otra.
o Hidrolasas: rompen enlaces al añadir una molécula de agua.
o Liasas: rompen enlaces eliminando grupos químicos de una molécula. Se forman entonces dobles enlaces.
o Isomerasas: un isómero se transforma en otro.
o Ligasas: catalizan la unión entre 2 moléculas.
• Segundo número: subclase.
• Tercer número: subsubclase.
• Cuarto número: número de serie específico de la enzima.
Ejemplo: LDH (LACTATO DESHIDROGENASA). No me lo tengo que saber
➢ Código: EC 1.1.1.27
➢ Primer número: 1. Indica que la clase es oxidorreductasa.
➢ Segundo número: 1. Indica subclase oxidasa.
➢ Tercer número: 1. Indica que la subsubclase es citocromo oxidasa.
➢ Cuarto número: 27. El número de esta enzima dentro de la subsubclase.
 7. CINÉTICA ENZIMÁTICA

La cinética enzimática es el estudio de las velocidades de las reacciones enzimáticas y los factores que la afectan.
Las enzimas reaccionan ofreciendo su sitio activo al sustrato con el cual se acoplan y forman un complejo enzima – sustrato, dónde actúa
con gran rapidez, hasta liberar el producto transformado sin que en esta reacción se altere el enzima, que queda libre para fijar otra molécula
de sustrato. La actividad enzimática es una medida de la conversión de sustrato en producto.
Michaelis – Menten explicaron que si mantenemos constantes las condiciones de la reacción (pH, temperatura, cofactores y concentración
del enzima), la velocidad de la reacción aumenta a medida que aumentamos la concentración de sustrato, hasta que llegamos a un punto
(velocidad máxima – Vmax) a partir del cual la velocidad es constante, aunque siga aumentando la concentración de sustrato. Esto se debe
a que, al aumentar mucho la cantidad de sustrato, la enzima se ve saturada, alcanzándose es este momento la mayor velocidad de reacción
posible, que depende únicamente del tiempo que necesite la enzima para transformar el sustrato.
Después, a medida que se consume el sustrato, se acumulan productos que pueden ser inhibidores y también empieza a hacerse notar la
reacción en sentido inverso. Por tanto, la velocidad de reacción disminuye.

𝑉𝑚𝑎𝑥 𝑥 [𝑆]
La ecuación de Michaelis – Menten es: 𝑉=
𝐾𝑚+[𝑆]

Orden cero Siendo:

- V: Velocidad de reacción
- Vmax: Velocidad máxima
- [S]: Concentración de sustrato
- Km: Constante de Michaelis – Menten. Es un parámetro que nos indica la
concentración de sustrato (en moles litro) a la cual la velocidad de la reacción
Primer orden
es la mitad de la velocidad máxima. Esta constante es característica de cada
pareja enzima-sustrato y nos permite tener información sobre la afinidad de la
encima por su sustrato. Si [S] = Km → V = Vmax/2. Cuanto mayor sea Km menor
será la afinidad del enzima por el sustrato porque se alcanza la Vmax con menos
concentración de sustrato.

En la práctica podemos diferenciar dos situaciones distintas en función de la concentración de sustrato:

• Si trabajamos con pequeñas concentraciones de sustrato respecto a la cantidad de enzima presente ([S] → 0), la ecuación de
𝑉𝑚𝑎𝑥 𝑥 [𝑆]
Michaelis – Menten se simplifica, ya que [S]+ Km ≈ Km y quedaría de la siguiente forma: 𝑉𝐴 =
𝐾𝑚
Por lo tanto, a bajas concentraciones de sustrato, la velocidad de la reacción es lineal y directamente proporcional a la
concentración de sustrato (que sería el factor limitante), es decir, la cinética sería de primer orden. Esta situación es la que se
utiliza para la cuantificación de analitos (sustratos) cuando las enzimas actúan como reactivos.

• Si partimos de una concentración de sustrato muy superior a la Km ([S] → ∞), el valor de Km es despreciable frente a la
concentración de sustrato, de forma que [S]+Km≈[S], de lo que se deduce:

VA = Vmax

Por tanto, a altas concentraciones de sustrato, la velocidad de la reacción enzimática es igual a la Vmax prácticamente desde el
inicio, ya que se parte de una enzima saturada al comienzo de la reacción, es decir, la cinética es de orden cero desde el inicio
de la reacción. Esta situación es la que se utiliza para determinar una actividad enzimática, ya que la velocidad de reacción es
lineal con el tiempo, independientemente de la concentración de sustrato, siendo directamente proporcional a la concentración
de la enzima (factor limitante) y su actividad correspondiente, es decir, el que haya actividad enzimática no depende de la
concentración de sustrato, sino sólo de que exista o no enzima.
En la práctica, si mantenemos constante la temperatura y el pH para que no se afecte la enzima, con una concentración de sustrato que
sea unas 10 veces superior a la Km, o más, podemos estar seguros de que la reacción va a ser de cinética de orden cero. La mayoría de los
reactivos comercializados para análisis enzimático incluyen una concentración de sustrato de al menos 100 veces el valor de Km, para evitar
que el sustrato se agote durante la reacción.
 8. Factores que influyen en la actividad enzimática

8.1. CONCENTRACION DEL SUSTRATO

Visto anteriormente

8.2. CONCENTRACION DE LA ENZIMA

Este debe ser el único factor limitador para que una determinación enzimática en el laboratorio sea válida. La velocidad de reacción aumenta
cuando la concentración de enzima es mayor y se reduce cuando es menor. Sin embargo, el valor de Km es independiente de la concentración
de enzima.

Si la concentración de enzima es muy alta, llega un momento en que no hay sustrato disponible para ocupar a todas las moléculas de enzima.
Se agota el sustrato antes de que finalice la observación de la reacción. En ese momento la reacción deja de ser lineal (cinética de orden cero)
y no refleja la actividad enzimática. Este momento es el límite de linealidad de una determinación enzimática.
La mayoría de las determinaciones enzimáticas necesitan varias lecturas a tiempos determinados (monitorización) que nos confirmen que la
reacción no ha perdido la linealidad.

8.3. TEMPERATURA
La velocidad de las reacciones aumenta a medida que la temperatura aumenta, hasta que se alcanza un valor óptimo. Si se sobrepasa, la
enzima se desnaturaliza, pierde actividad y la velocidad disminuye.
La desnaturalización comienza a temperaturas superiores a 40⁰C, variando según la enzima. Es irreversible. La mayoría de los análisis enzimáticos
se hacen a 25, 30 o 37 ⁰C.

8.4. pH
Cada enzima tiene un pH al que su actividad es máxima. La mayoría tienen un pH óptimo entre 6 y 8. Hay que añadir soluciones tampones a las
muestras en las que se quiere hacer una determinación enzimática, para evitar que el pH varíe.

8.5. ACTIVADORES ENZIMATICOS

Hay sustancias que incrementan la velocidad de la reacción. En general, son iones metálicos (como Mg++, Fe++, etc.). Es necesario que estén
presentes para que funcionen aquellas enzimas que los requieran. Si no están presentes, la actividad enzimática no será óptima. Las coenzimas
como NAD y NADP funcionan igual que los activadores.
Un exceso de complementos inorgánicos puede inhibir la reacción, por lo que las concentraciones deben ser fijadas cuidadosamente.

8.6. INHIBIDORES

Son sustancias que inhiben la actividad de determinadas enzimas y que pueden variar la velocidad de la reacción o el valor de Km.
Existen inhibidores naturales en los tejidos y en el suero, pero que no suelen afectar significativamente los test enzimáticos en el laboratorio.
Sólo en la orina se han detectado inhibidores que interfieren en la determinación cuantitativa de ciertas enzimas, por lo que se recomienda
dializar la orina antes de proceder a la determinación enzimática.
- Inhibición competitiva: Cuando el inhibidor se une en el centro activo de la enzima impidiendo que el sustrato se una a él. Si aumenta
la concentración de sustrato, podemos desplazar al inhibidor, por lo que evitamos la inhibición de la enzima. La velocidad máxima
es la misma con o sin inhibidor, pero necesitamos más concentración de sustrato para llegar a ella y que la cinética sea de orden
cero. El valor de Km es más alto.
- Inhibición no competitiva: Cuando el inhibidor se une reversiblemente a un punto diferente del centro activo, pero con su actuación
lo modifica lo suficiente que, aunque se puedan unir la enzima y el sustrato, la catálisis no se produce o la velocidad de ésta disminuye.
La velocidad máxima de la reacción queda disminuida y esto no se puede contrarrestar, aunque aumentemos la cantidad de sustrato.
El valor de Km no cambia sustancialmente. Un ejemplo de inhibidores no competitivos son algunos detergentes que contaminan el
material de vidrio del laboratorio.

9. DETERMINACION DE LA ACTIVIDA.D ENZIMATICA

9.1. MÉTODOS
El estudio de las enzimas en el laboratorio se basa en la demostración in vitro de la actividad catalítica que una
enzima tiene in vivo. No nos interesa la cantidad o concentración (que no se puede medir directamente con los
métodos habituales) ni el peso de la enzima, sino su actividad.
La actividad de una enzima se mide mediante la determinación de la cantidad de sustrato que se transforma en
producto por unidad de tiempo, en condiciones definidas y controladas. Si no ponemos sustrato, la enzima no actúa
porque no hay reacción y no podremos detectarla, aunque estuviera en grandes cantidades en la muestra.

Realmente para calcular la actividad enzimática lo que se mide es la formación de un producto o la desaparición
de un sustrato mediante espectrofotometría UV-visible, es decir, por variaciones en los valores de absorbancia
según aumente o disminuya la concentración de los mismos.

Según la forma de medir la velocidad de las reacciones enzimáticas hay 3 tipos de métodos:
1) Métodos a punto final o a tiempo fijo: Se determina la cantidad de sustrato
transformado en un tiempo definido, después de detener la reacción. El
tiempo elegido para la incubación tendrá que estar necesariamente en la zona
que corresponda a una velocidad constante. (según los minutos que que deje
posteriormente tendré que dividir entre este número).
2) Métodos de puntos múltiples: Se va detectando a intervalos regulares de
tiempo el cambio (aumento o disminución) de alguno de los compuestos que
participan en la reacción, a medida que ésta se va produciendo.
El aumento o disminución de la absorbancia por unidad de tiempo es
directamente proporcional a la actividad enzimática, que es lo que se quiere
medir en la muestra. Con este método se hace una lectura basal y después
varias lecturas más a intervalos iguales de tiempo, a medida que se va
desarrollando la reacción enzimática. En esas lecturas se va observando cómo
va disminuyendo o aumentando la absorbancia de una forma constante. Las
diferencias entre cada lectura y la anterior (incrementos de absorbancia)
deben ser iguales a lo largo de la reacción (para establecer la linealidad).
3) Métodos de monitorización continua: El espectrofotómetro va conectado a
un registrador que detecta de manera continuada el cambio de la
concentración de alguno de los compuestos que participan en la reacción a lo
largo de un intervalo de tiempo determinado. (puedo ir viendo la curva
durando todo momento)

Los 2 últimos tipos de métodos son preferibles siempre que las características de los reactivos y del aparataje lo permitan. Tienen la ventaja
de que permiten identificar el momento a partir del cual la velocidad deja de ser constante.
Antes de llevar a cabo la medida hay que tener en cuenta que en una reacción enzimática se distinguen tres fases:
a) Fase de retardo o de incubación: se mezclan bien los reactivos y la muestra problema (sustrato9 Es el tiempo de incubación.
b) Fase lineal: la formación del producto es constante, por lo que la velocidad de reacción es constante y el único factor limitante
es la concentración de la enzima. En esta fase se debe realizar la determinación enzimática.
c) Fase de agotamiento de sustrato: Al disminuir la concentración de sustrato, disminuye la velocidad de reacción hasta que la
reacción deja de producirse.

9.2 MUESTRAS
Generalmente, la determinación de la actividad enzimática se realiza mejor en suero que en plasma, ya que los anticoagulantes utilizados más
frecuentemente inhiben la actividad de muchas de ellas. El plasma será heparinizado.
Los inhibidores también pueden introducirse accidentalmente en la solución reactiva. Los más frecuentes son los restos de detergentes
empleados en la limpieza del material de vidrio, así como los inhibidores que se forman en soluciones NADH y NADPH. Por ello deben
prepararse siempre soluciones de coenzima frescas.
Las enzimas séricas se encuentran también en el interior de los hematíes, pero en concentraciones muy superiores, por lo que las muestras
hemolizadas no pueden utilizarse para la determinación de actividad enzimática, ya que los valores resultarán falsamente elevados.
Por otro lado, en muestras congeladas y recongeladas varias veces, las enzimas pueden perder su actividad.
 9.3 UNIDADES DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
• La unidad de actividad enzimática es el katal/litro, que equivale a un mol de sustrato catalizado por segundo.
• Sin embargo, en la mayoría de los laboratorios se sigue usando la unidad/litro = 1 micromol de sustrato catalizado por minuto de
actividad enzimática (UI).

9.4 MÉTODOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS PARA LA DETRMINACIÓN DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Aunque se pueden utilizar diversos procedimientos para medir las variaciones en la concentración del sustrato, cofactor o producto, el método
que más se utiliza en el laboratorio clínico es la espectrofotometría UV-V. Para ello, la reacción enzimática ha de producir un cambio en la
absorbancia de alguno de los componentes de la reacción.
Si la reacción enzimática no contiene un componente con absorbancia a una determinada longitud de onda, se puede acoplar otra reacción
usando el producto de la primera reacción como sustrato de la segunda. Se pueden encadenar así 2 o más reacciones.
Para que no limiten la velocidad de la primera reacción, las enzimas de las reacciones auxiliares e indicadoras han de tener mayor actividad
que la enzima que se va a medir y, por eso, los reactivos deben llevar concentraciones en exceso de estas enzimas. En caso contrario, la falta
de estas enzimas frenaría el proceso y se obtendría un valor erróneo de la actividad de la enzima que se analiza.
Los métodos que más se utilizan miden la variación de la concentración de los cofactores NADH o NADPH, ya que ambos presentan un
máximo de absorción a 340 nm que no poseen las formas oxidadas NAD y NADP.

Por tanto, si en una reacción enzimática se forma NAD o NADP, se observará una disminución de la absorbancia a medida que se va
efectuando la reacción. Si se forma NADH o NADPH (el H es el que hace que aumente la absorbancia, siempre que se forme algo con H
aumenta la Absorbancia), se observará que aumenta la absorbancia a medida que va progresando la reacción.

9.5 CALCULO DE LA ACTIVDAD ENZIMÁTICA

Para calcular la actividad enzimática se aplica la fórmula:

Actividad (en UI/L) = ∆A · 1000 · VF

min  · b VI
• ∆A = incremento de la absorbancia
• = coeficiente de extinción molar. Se mide en L/mol · cm.
• b = anchura de la cubeta de medida (longitud de la trayectoria luminosa en centímetros).
• VF = volumen total de mezcla
• VI = volumen de la muestra que se quiere analizar
Para unas determinadas condiciones del test, los factores , b, volumen de reactivo y volumen de muestra son constantes y, por tanto, se
resumen en un factor válido para cada técnica (siempre que se mantengan las mismas condiciones). La fórmula queda entonces así:
Actividad enzimática (en U/L) = A x factor
Hoy en día, los aparatos destinados a la medida de actividad enzimática son capaces de conservar en memoria los factores correspondientes
a cada técnica que realizan. Miden el incremento de absorbancia y lo multiplican por el factor.
Además, también señalan si ha existido algún problema en la cinética de la reacción (generalmente esto ocurre porque se ha agotado el
sustrato y se pierde entonces la linealidad de la reacción o cinética de orden cero).
Si no aparece ningún producto coloreado en la reacción indicadora, puede calcularse la actividad enzimática con una solución patrón (NO SE
APLICA LA MISMA ECUACION Y HABRIA QUE INTRODUCIR LA ABSORBANCIA DEL PATRON)

10. ENXIMAS CON INTERES CLINICO

Todas las enzimas se sintetizan en el interior de las células (en los ribosomas) y la mayor parte de ellas realizan sus funciones intracelularmente.
Sin embargo, en sangre se puede detectar la actividad de diversas enzimas que, para su estudio, se clasifican en 3 grupos:
 - Enzimas plasma-específicas: cumplen su función en sangre. Son producidos en el hígado y se secretan a la circulación en forma
inactiva. Un ejemplo de enzimas de este tipo son las que intervienen en la coagulación y en la fibrinolisis.
- Enzimas secretados: realizan su función en líquidos extracelulares, como los jugos digestivos. Ejemplos de enzimas de este tipo
son las enzimas digestivas (amilasa, tripsina, etc.). Una pequeña parte puede pasar a sangre.
- Enzimas intracelulares “escapados”: en condiciones normales se encuentran en la sangre en muy pequeña cantidad y en niveles
constantes. Proceden de la renovación de los tejidos.
Este último grupo es el que más interesa desde el punto de vista diagnóstico ya que, en determinadas situaciones patológicas, su actividad
aumenta o disminuye. Entre otros casos cuando hay rotura de la membrana celular (muerte tisular) o aumento de las células productoras
(tumor).

10.1 FOSFATASAS ALCALINAS (ALP)

Pertenecen a la clase de las hidrolasas.
- Fuentes tisulares: Tiene 5 isoenzimas diferentes, que en conjunto forman el total de la fosfatasa alcalina sérica. Provienen de diversos
tejidos siendo los más importantes:
o Hígado.
o Osteoblastos (en el tejido óseo).
- Significado clínico: Un aumento sérico puede deberse a:
o Enfermedades de hígado:
- Colestasis intrahepáticas, ya que la enzima se encuentra en la membrana de los canalículos biliares y regurgita a sangre
cuando la excreción de bilis está dificultada.
- Otras afecciones, como obstrucción biliar extrahepática, cáncer o cirrosis.
o Enfermedades óseas con actividad aumentada de los osteoblastos:
- Enfermedad de Paget, osteomalacia por falta de vitamina D, hiperparatiroidismo, etc.
Un aumento sérico puede ser fisiológico: Desarrollo óseo durante el crecimiento o tras una fractura (en niños y adolescentes es normal un
nivel de fosfatasas alcalinas doble o triple al de los adultos)

10.2 FOSFATASAS ACIDAS (ACP)

Pertenecen a la clase de las hidrolasas.

- Fuentes tisulares:
o Próstata (es la principal).
o Otros tejidos: Hígado, riñón, eritrocitos, plaquetas, osteoclastos, etc.
- Isoenzimas: Se puede detectar sólo la isoenzima prostática en vez de la fosfatasa ácida total.
- Significado clínico: Se eleva en sangre en enfermedades prostáticas, sobre todo en el carcinoma prostático. Se eleva aún más si el
carcinoma prostático ha dado metástasis en huesos, ya que entonces aumenta la actividad de los osteoclastos.

10.3 TRANSAMINASAS O AMINOTRANSFERASAS

Pertenecen a la clase de las transferasas. Hay 2 tipos:

AMINOTRANSFERASA ASPÁRTICA (AST) O TRANSAMINASA GLUTÁMICOOXALACÉTICA (GOT).

AST=GOT. Necesita una coenzima llamada pridoxal-5-fosfato.
- Fuentes tisulares:
o Citoplasma de las células miocárdicas (corazón).
o Mitocondrias de los hepatocitos (hígado).
o Citoplasma de las células musculares esqueléticas.
o Riñón, etc.
- Significado clínico:
o Aumenta en suero en:
▪ Infarto de miocardios.
▪ Hepatitis viruica (se eleva proporcionalmente menos AST que la ALT).
▪ Necrosisi hepáticas.
▪ Cirrosis hepáticas (se eleva más AST que la ALT).
▪ Mononucleosis infecciosa (por la alteración del hígado).
▪ Distrofias musculares.

En general, una elevación sérica de una enzima mitocondrial supone mayor daño celular que el de una enzima citoplasmática. El hepatocito
está más dañado cuando libera AST que cuando libera ALT.
En el infarto de miocardio se eleva en sangre a las pocas horas (pero después que la enzima creatinquinasa), alcanza su pico máximo a las 36
horas y se normaliza al 5º día. La enzima no se eleva tanto en otras afecciones cardíacas con síntomas similares, por lo que sirve para el
diagnóstico diferencial.

ALANINA AMINOTRANSFERASA (ALT) O TRANSAMINASA GLUTÁMICOPIRÚVICA (GPT)

ALT=GTP.
- Fuentes tisulares:
o Citoplasma de las células hepáticas.
o Citoplasma de las células del miocardio.
o Riñón.
- Significado clínico: generalmente, los aumentos séricos de GPT son paralelos a los de GOT (se elevan las dos juntas). Sin embargo, hay
que resaltar que en las hepatitis víricas se eleva más la GPT que la GOT, mientras que, en las cirrosis, en las que el daño celular es más
grave, se eleva más la GOT.

10.4 CREATINA QUINASA (CK).

Pertenece a la clase de las transferasas. Necesita al Mg como cofactor. Cataliza la reacción: Creatina + ATP Fosfato
de creatina + ADP
Esta reacción es muy importante para las células, sobre todo las musculares, porque los productos que se forman son la fuente de energía
para ellas.
- Fuentes tisulares: Está en las mitocondrias y citoplasmas de muchas células, pero es más abundante en músculo esquelético,
miocardio y cerebro.
- Isoenzimas: Cada enzima CK está formada por 2 subunidades, que pueden ser del tipo M (inicial de músculo) o B (inicial de
"brain"). Estas subunidades se pueden combinar de 3 formas distintas, por lo que hay 3 isoenzimas, que son:
o CK-BB (o CK-1): está sobre todo en cerebro.
o CK-MB (o CK-2): está sobre todo en el miocardio.
o CK-MM (o CK-3): está en músculo esquelético y también en miocardio.
- Significado clínico: La separación y análisis de las isoenzimas tiene mayor significado clínico que la determinación de niveles
totales de CK.
La CK total se eleva en el infarto de miocardio, enfermedades musculares y después de un shock circulatorio.
La isoenzima CK-BB sólo se encuentra en suero si está alterada la barrera hematoencefálica. Si está indica mal pronóstico de ciertos tumores.
La isoenzima CK-MM es la más abundante en suero (alrededor del 94% de la CK total en individuos sanos). Se eleva por problemas musculares,
como traumatismos, y también en el infarto de miocardio.
Marcador enzimático más precoz del perfil cardiaco: La isoenzima CK-MB es el 6% de la CK total sérica. Es muy útil para detectar precozmente
un infarto de miocardio, porque se eleva a las 4 o 6 horas tras el infarto, alcanza su punto máximo a las 24 horas y se normaliza en sangre a las
72 horas. Se analiza de rutina en enfermos con sospecha de infarto de miocardio, ya que es el marcador enzimático más precoz.

Actualmente se conocen otros marcadores de isquemia cardíaca

más precoces, pero no son enzimas: son las troponinas y la mioglobina.
La mioglobina es el marcador más sensible en las primeras 6 horas y se
considera de elección en la detección precoz de la necrosis.
Las troponinas son de 2 tipos: I y T. La I es más precoz y la T es de elección
para los infartos de larga evolución, en los que han transcurrido más de 48
horas desde su inicio. Aunque es de más tardía aparición, esta troponina tiene
la ventaja de que tiene una gran ventana diagnóstica (permanece elevada
mucho tiempo en suero).

10.5 LACTATO DESHIDROGENASA (LDH)

Pertenece a la clase de las oxidorreductasas.

- Fuentes tisulares: está en los citoplasmas de casi todas las células, sobre todo en miocardio, eritrocitos, músculo esquelético, hígado
y riñón.
- Isoenzimas: La LDH es la enzima en la que mayor importancia tiene la separación de sus isoenzimas, dada la variedad de fuentes
tisulares de la enzima total. La LDH está compuesta por 4 subunidades, que pueden ser del tipo H ("heart") o del tipo M (músculo). Las
combinaciones de estas subunidades dan lugar a 5 posibles isoenzimas:
o LDH-1 (HHHH): está presente sobre todo en corazón y eritrocitos.
 o LDH-2 (HHHM): está presente sobre todo en corazón y eritrocitos.
o LDH-3 (HHMM): muy distribuida por todo el organismo.
o LDH-4 (HMMM): abunda en músculo esquelético e hígado.
o LDH-5 (MMMM): abunda en músculo esquelético e hígado
La numeración va en el mismo orden que su velocidad de migración en la electroforesis (La LDH-1 es la más negativa y por tanto la que migra
antes, etc.).
- Significado clínico: La LDH total se eleva en el infarto de miocardio, en las anemias megaloblásticas y en enfermedades del hígado,
pero no permite hacer un diagnóstico definitivo de ninguna enfermedad.
La indicación más frecuente para medir la actividad de la LDH en el laboratorio es el infarto de miocardio. En este caso, se elevan sobre todo
las isoenzimas LDH-1 y LDH-2. Se elevan unas 8 o 12 horas después del infarto (después de la CK y de la GOT), y se mantienen altas durante 6
o más días (cuando el resto de enzimas ya se han normalizado).
En el suero normal hay más LDH-2 que LDH-1. En el infarto, esto se invierte y hay más LDH-1.
En enfermedades hepáticas se eleva la LDH-5 dando valores muy altos si son enfermedades graves como cáncer. Esta isoenzima también
aumenta mucho en patologías musculares.

10.6 GAMMA GLUTAMIL TRANSPEPTIDASA (-GT) O GGT

Pertenece a la clase de las transferasas.
- Fuentes tisulares: se encuentra en los microsomas y membranas de muchas células, sobre todo del riñón, hígado y páncreas. La
mayor parte de la actividad en suero se debe a la fracción producida en el hígado.
- Significado clínico: Su elevación en suero indica enfermedades hepatobiliares. Se eleva sobre todo en casos de obstrucción biliar
(colestasis). Se incluye en el perfil básico hepático, pues es bastante específica de este órgano.
El alcohol y algunos fármacos favorecen su síntesis, por lo que su elevación en suero puede servir de indicador del alcoholismo. Se puede
utilizar para vigilar la abstinencia de alcohol en alcohólicos que se están rehabilitando, porque los niveles de la enzima en suero se normalizan
unas 5 semanas después de haber dejado el alcohol, pero aumentan mucho en cuanto se vuelve a tomar.
La gamma-GT se ha asociado recientemente con un mayor riesgo de padecer diabetes tipo II, enfermedades vasculares y enfermedad renal
crónica.

10.7 ALFA-AMILASA
Pertenece a la clase de las hidrolasas. Necesita calcio como cofactor.

- Fuentes tisulares: Acinos de las glándulas salivares y del páncreas. Una pequeña parte de la amilasa puede
filtrarse en el riñón y aparecer en orina.
- Isoenzimas: Hay 2 isoenzimas: La P, que viene del páncreas, y la S, que viene de las glándulas salivares y otros tejidos.
- Significado clínico: Ayuda al diagnóstico de la pancreatitis aguda. Se eleva en suero y orina. Otras enfermedades
abdominales también pueden producir hiperamilasemia, por lo que a veces este dato no es suficiente para asegurar un
diagnóstico.

10.8 OTRAS ENZIMAS DE INTERES DIAGNOSTICO EN EL LABORATORIO

- Lipasa: aumenta en suero en las pancreatitis agudas.
- Aldolasa: entra en el perfil básico de patología muscular.
- Leucinaminopeptidasa: aumenta en enfermedades hepáticas. Se puede medir en orina de 24 horas. En suero se puede
pedir conjuntamente con la fosfatasa alcalina y 5´NT (5 nucleotidasa).