Proyecto de caracterización de la leche cruda identificando la

presencia del Glicomacropéptido de Caseína c-GMP.

ARTÍCULO CIENTÍFICO

Anexo 2 - 2020

ARTÍCULO CIENTÍFICO 1
Presidente
Camilo Fernández de Soto

Vicepresidente de Agroindustria
Amira del Pilar Ortiz Olaya

Gerente de Agroindustria
Fabián Camilo Acosta Puentes

Profesional Senior
Sector Agroindustria
Jenifer Yaneth Guzmán Gualteros

Operador Técnico
Consorcio Consultoría PTP (Biotrends Laboratorios S.A.S y RyG Asesorías).

Murcia F., Prieto P., Ávila O., Bernal O.,

Murcia A., Amaya C., Morales M., Arias W

Edición
Jenifer Guzmán
Profesional Lácteo

Diseño
Leonardo Pérez
Profesional comunicaciones

Colombia Productiva
2020
Anexo 2 – Artículo científico
Revisión y validación de método por medio de cromatografía
liquida de alta eficacia para identificar el contenido
de glicomacropéptido de caseína en leche cruda de bovino.

Bogotá, Colombia
www.colombiaproductiva.com

2 ARTÍCULO CIENTÍFICO
Revisión y validación de método
por medio de cromatografía liquida
de alta eficacia para identificar el contenido
de glicomacropéptido de caseína en leche
cruda de bovino.

Murcia F., Prieto P., Ávila O., Bernal O., Murcia A., Amaya C., Morales M., Arias W., y Guzman J.

Consorcio consultoría PTP, Biotrends laboratorios SAS, R y G Asesorías S.A.S, Colombia Produc-
tiva cuya vocera y administradora es la Fiduciaria Colombiana de Comercio Exterior Fiducoldex
S.A, Bogotá Colombia.

Resumen
En Colombia la información de dominio público respecto a las metodologías de caracteriza-
ción del lactosuero es limitada, restringiendo la posibilidad de acceder a ellas por diferentes
actores de la cadena quienes buscan implementar técnicas de control para disminuir el
riesgo de fraude alimentario. Se realiza la revisión y validación del método de cromatografía
de alta eficacia con detector UV para determinar el glicomacropéptido de caseína (GMP) en
leche cruda de bovino, proteína usada como indicador de adulteración en países como Bra-
sil1 y Ecuador2. Una muestra de 10mL de leche cruda es precipitada por medio de ácido
tricloroacético (TCA) al 24%, empleando para ello ultrasonido por un tiempo de 20 minutos,
proceso seguido por filtración. La fracción recolectada aseguró la separación del GMP de la
caseína para luego inyectar una cantidad suficiente de manera directa al cromatógrafo lí-
quido.

La determinación cromatográfica permitió el análisis en un tiempo de 30 minutos iden-

tificando la presencia de la proteína en un tiempo de retención de 12,9 ± 0,5 minutos. Las
características de desempeño del método se obtuvieron a través de ejercicio de validación

1
Instrução Normativa SDA nº 69 de 13/12/2006 criterios para evaluar la calidad de la leche fresca, concentrada y en polvo,
reconstituida, con base en el método analítico fisicoquímico oficial denominado "Índice CMP".
2
NTE INEN 2401:2014 Determinación de suero de quesería en leche mediante el análisis de glicomacropéptidos por croma-
tografía líquida de alta presión.

3
del mismo, obteniendo los siguientes resultados: un porcentaje de recuperación de 99,97%,
la linealidad evaluada por mínimos cuadrados, obtuvo resultados satisfactorios (R2>0,95)
para todo el rango de trabajo determinado; la precisión fue evaluada sobre réplicas, anali-
zadas de manera independiente desde la preparación de la muestra hasta la lectura de re-
sultados; el análisis de los valores para la precisión arrojó una desviación relativa porcen-
tual %RSD menor a 5,3%. Se concluye que el método al final del ejercicio exhibe atributos
para el fin previsto.

Palabras claves: Glicomacropéptido de caseína c-GMP, Cromatografía liquida de alta

eficacia, lactosuero, fraude alimentario, contenido basal.

Abstract

In Colombia, information in the public domain regarding the whey characterization meth-
odologies is limited, restricting the possibility of accessing them by different actors in the
chain that seek to implement control techniques to reduce the food fraud risk. This research
used high efficiency chromatography with a UV detector as a method to characterize casein
glycomacropeptide in raw bovine milk, a protein used as an indicator of adulteration in
countries such as Brazil and Ecuador. A 10mL sample of raw milk is precipitated by means of
24% trichloroacetic acid (TCA), using ultrasound for a period of 20 minutes, a process fol-
lowed by filtration. The collected fraction ensured the separation of c-GMP from casein to
then inject a sufficient amount directly into the liquid chromatograph.

The chromatographic determination will reach the analysis in a time of 30 minutes, iden-
tifying the presence of the protein in a retention time of 12.9 ± 0.5 minutes. The performance
characteristics of the method were obtained through the method validation exercise obtain-
ing the following results: a recovery percentage of 99.97%, the linearity evalued by “least
squares" obtained satisfactory results (R2>0,95) for the entire determined working range;
the precision was put into service on replicas, analyzed independently from the preparation
of the sample to the reading of the results, the values analyzed for the precision obtained
values of percentage relative deviation% RSD to 5.3%. It is concluded that the method at the
end of the exercise exhibits attributes for the intended purpose.

Keywords: Casein glycomacropeptide GMP, High Pressure Liquid Cromatographic,

Whey milk, Fraud food.

4
Introducción En los últimos años se ha podido evi-
denciar la posible adición de lactosuero
como adulterante en leche principalmente
usado para aumentar el volumen y así
La cadena láctea en Colombia atraviesa di- mismo la ganancia económica. Al ser el
ferentes problemas que no han podido ser suero un componente natural de la leche
resueltos, existiendo aun vacíos normati- éste se mezcla con facilidad gracias a sus
vos que limitan el control de prácticas no propiedades coligativas y no puede ser di-
permitidas, como la adulteración de la le- ferenciado fácilmente con pruebas básicas
che con lactosuero, promoviendo así la de control (Galindo et al, 2006). Dicho uso
competencia desleal que conlleva a dife- presenta varios inconvenientes, entre los
rencias no solo en la calidad del producto, principales se encuentra el hecho de que
sino en la variación del precio, por lo que no se conocen las características de pro-
se hace necesario reglamentar las especi- ducción de lactosuero, comprometiendo
ficaciones técnicas de la leche en relación así la calidad microbiológica e higiénica
a la adición de lactosuero y establecer mé- del producto al no contar con evidencias
todos efectivos de medición. claras, que permita establecer si ese lacto-
suero tuvo alguna higienización, las pro-
En Colombia el Decreto 616 de 2006 piedades tecnológicas de las proteínas del
establece los requisitos que debe cumplir lactosuero no permiten tener los mismos
la leche para el consumo humano que se rendimientos en la obtención de produc-
obtenga, procese, envase, transporte, co- tos lácteos, y también promueve una com-
mercialice, expenda, importe o exporte en petencia desleal en precios y un engaño
Colombia; en su capítulo IV, articulo 14 se finalmente al consumidor al no ser un pro-
indica taxativamente la prohibición de adi- ducto acorde con la definición de leche se-
ción de lactosueros a la leche en todas las gún el Decreto 616.
etapas de la cadena productiva y la comer-
cialización en el territorio nacional de pro- Una de las proteínas que se presenta
ductos destinados al consumo humano de forma soluble en el lactosuero es el Gli-
con la denominación “leche”, cuando pre- comacropéptido de caseína (CMP o c-
senten modificaciones en su composición GMP) el cual corresponde del 15-20% de
natural o adición de sustancias no autori- las proteínas de suero (Sharma, 2019). Es
zadas como sueros lácteos, (Minsalud, un péptido hidrofílico (contiene alrededor
2006). Sin embargo, en este no se esta- de 102-169 residuos de aminoácidos) de
blecen límites, cantidades o concentracio- kapa-caseína que brinda estabilidad a las
nes de lactosuero que permitan establecer micelas de caseína en la leche; se produce
la adulteración de la leche para dar cum- por acción del cuajo sobre la kapa-caseína
plimiento al mismo. en la elaboración del suero, liberando el c-

5
GMP al suero. El c-GMP es único dentro de analítico fisicoquímico oficial de Brasil pu-
las proteínas solubles del suero, esto de- blicado en la Instrucción Normativa N° 68
bido a que tiene dentro de su estructura, de 2006 “Indice CMP”.
un oligosacárido atado a la cadena del
péptido, así como un aporte significativo Finalmente hay que indicar que este
de fenilalanina, triptófano y serina. Tam- proyecto fue cofinanciado con recursos de
bién tiene altos niveles de aminoácidos de la Unión Europea operados por el Patri-
cadena ramificada como los son leucina, monio Autónomo Colombia Productiva
isoleucina y valina (Sharma, 2019), es por cuya vocera y administradora es la Fidu-
ello que diversos autores sugieren el c- ciaria Colombiana de Comercio Exterior Fi-
GMP como marcador e indicador de adi- ducoldex S.A, entidades adscritas al Minis-
ción de lactosuero en leche, y los métodos terio de Comercio, Industria Turismo en el
analíticos se han basado en determinar la marco del contrato 0302019 y bajo la con-
concentración de esta proteína. Para ello vocatoria 566 de 2019.
se han empleado métodos como la elec-
troforesis en gel y la cromatografía líquida
de alta eficacia.

La puesta en marcha de la técnica por

cromatografía de alta eficacia para la de-
Materiales
terminación de c-GMP, resulta relevante y métodos
para identificar la concentración de la pro-
teína en su estado natural dentro de la le-
che cruda, debido a que una fracción es li- Reactivos
berada por procesos naturales de degra-
dación relacionadas con actividad bacte- Los reactivos empleados en la determina-
riana o por procesos enzimáticos desenca- ción analítica fueron Ácido tricloroacético
denados por las practicas asociadas a la (TCA) p.a., fosfato de potasio diácido
manipulación y almacenamiento. Con esta (KH2PO4) p.a., fosfato de potasio dibásico
metodología de base se buscará estable- (K2HPO4) p.a., sulfato de sodio anhidro
cer valores de referencia iniciales que (Na2SO4) p.a con pureza no menor a 98%.
constituyan un punto de partida para dar Adicionalmente se empleó agua grado
un marco de referencia respecto al análisis tipo 1 para HPLC, Lacprodan concentrado
del contenido de c-GMP en la leche cruda proteico (fig.1) Lote 4J1493. Marca: Da-
de bovino. El método de referencia usado visco Foods, Arla Foods, cuyo certificado
para este análisis fue basado en el método de análisis indica pureza: 76%.

6
Figura 1. Cromatograma típico de estándar Lacprodan empleado en la cuantificación
de c-GMP.

Toma de muestras para análisis mL, posteriormente se adicionó al tubo

que contenía la leche, 5 mL de TCA al 24%.
Cada muestra fue tomada de una cantina La mezcla fue sometida a ultrasonido por
de leche fresca y recién ordeñada, em- un tiempo de 20 minutos. Transcurrido
pleando para ello envase estéril y poste- este tiempo, se realizó el filtrado a través
rior conservación con peróxido de hidró- de papel de filtro cuantitativo y se aseguró
geno al 0,2%, la muestra una vez recolec- la recolección de 3 mL de muestra, luego
tada se aseguró mediante la condición de se transfirió una cantidad suficiente a un
refrigeración (4°C +/- 2°C) hasta el tras- vial para la inyección directa al cromató-
lado y llegada de la muestra a las instala- grafo y posterior cuantificación (fig.2).
ciones de Biotrends Laboratorios S.A.S, lu-
gar donde fueron realizados los ensayos.
Análisis por cromatografía
liquida de alta Eficacia
Método de precipitación (HPLC-DAD)

El acondicionamiento de la leche refrige- Se empleó cromatógrafo líquido detector

rada se realizó sumergiendo la muestra en UV de arreglo de diodos capaz de operar
baño maría a 30°C por un tiempo de 10 a 205nm, con automuestreador que in-
minutos, se agitó ocasionalmente el reci- yecta entre 20-100 microlitros. La columna
piente (invirtiendo 5 o 6 veces de manera de exclusión por tamaño fue una columna
suave). Se pesaron 10,0 mL de leche acon- Zorbax GF-250 Analytical 9.4 x 250mm 4-
dicionada en un tubo con capacidad de 50 Micron. La fase móvil empleada fue una

ARTÍCULO CIENTÍFICO 7
solución tampón pH 6,0 la cual fue reali- El software Chemstation B 03.01 fue la he-
zada disolviendo 1,74 g de fosfato de po- rramienta empleada para el tratamiento
tasio dibásico (K2HPO4), 12,37 g de fos- de datos y el cálculo de los parámetros de
fato de potasio diácido (KH2PO4) y 21,41 integración.
g de sulfato de sodio anhidro (Na2SO4),
en 700 ml de agua grado HPLC, posterior- Procedimiento de validación del
mente se ajustó el pH a 6,0 usando solu- método
ción de K2HPO4 0,1M, se completó a 1L
con agua tipo 1 y por último se filtró la so- La validación del método de análisis para
lución por una membrana de 0,45µm. Para la determinación del glicomacropéptido
la detección de la molécula, se empleó un de caseína (c-GMP) en leche por cromato-
detector de arreglo de diodos en una lon- grafía líquida de alta eficacia (HPLC) se
gitud de onda de 205nm. En la siguiente basó en la recomendaciones del ICH To-
tabla se observan las condiciones de las pic Q 2 (R1) Validation of Analytical Proce-
corridas dures: Text and Methodology. Los criterios
establecidos para dar cumplimiento a los
Tabla 1. Condiciones de la cromatografía diferentes parámetros evaluados, fueron
por exclusión por tamaño tomados del Official Methods of Analysis
AOAC, los cuales corresponden para la
Condición Parámetro precisión un RSD menor o igual a 5,3%
Volumen de 50 µL para estándares y muestras preparadas in-
inyección dependientemente, para la exactitud un
Flujo de la fase 1 mL/min porcentaje de recuperación entre 80 y
Temperatura del 20°C 110%. Los parámetros aplicados para la
horno validación del método fueron, linealidad,
Tiempo de 12,9 ± 0,5 límite de detección, límite de cuantifica-
retención minutos ción, precisión del sistema instrumental,
Tiempo total de 30 minutos precisión del método, precisión interme-
análisis dia, veracidad, robustez, intervalo de tra-
bajo e incertidumbre.

8
Figura 2. Cromatograma típico de muestra determinada por método de precipitación ultra-
sonido.

Resultados y =0,98 (fig.4); por lo tanto se demostró que

existe una alta correlación entre la concen-
discusión tración del c-GMP y el área del pico cro-
matográfico, se afirma que de esta manera
la ecuación de la curva de calibración del
Linealidad método fue capaz de explicar la respuesta
instrumental a partir del de la concentra-
Se realizó una curva de calibración con las ción de c-GMP en los estándares trabaja-
concentraciones 0, 10, 30, 50, 70, 100, 200 dos.
mg/L de c-GMP (rango bajo) y 100, 700,
1.000, 2.000, 3.000, 5.000 mg/L de c-GMP
(rango alto) se evaluó cada punto de la Límite de cuantificación
curva con dos réplicas por punto. Para
cada uno de los rangos trabajados se pre- El límite de cuantificación se estableció a
sentó un coeficiente de determinación li- una concentración de 20 mg/L debido a
neal mayor o igual a 0,95, de esta forma que a 10 mg/L en un primer análisis, no se
para rango bajo se obtuvo un R2 = 0,99 obtuvo una adecuada repetibilidad (el %
(fig.3) y para rango alto el valor fue de R2 de RSD fue de 54,7%).

ARTÍCULO CIENTÍFICO 9
Figura 3. Linealidad, ecuación de la recta y coeficiente de correlación para rango bajo.

Figura 4. Linealidad, ecuación de la recta y coeficiente de correlación para rango alto.

Este estándar a concentración de 20 mg/L, Para la concentración analizada del límite

fue preparado e inyectado 10 veces para de cuantificación se obtuvo un % de recu-
obtener resultados independientes bajo peración de 103,2% y un RSD de 4,0%,
condiciones de repetibilidad (mismo ana- cumpliendo con los criterios de acepta-
lista, mismo día). Se evaluó que los resul- ción establecidos por el método (AOAC
tados tuvieran una repetibilidad adecuada 2019 apéndice F), por lo que se establece
(RSD menor o igual al 5,3% y un porcen- como límite de cuantificación la concen-
taje de recuperación entre 80 y 110%, de tración de 20,0 mg/L.
acuerdo a la referencia tomada como base
AOAC 2019)

10 ARTÍCULO CIENTÍFICO
Precisión En la precisión intermedia se evaluó el
cambio de analista. Se trabajó según el
Se analizaron los criterios de precisión modelo presentado en ICH Q2 (R1)3
del sistema instrumental, precisión del donde se analizaron 6 réplicas de mues-
método (bajo condiciones de repetibilidad tras y estándares. Con los resultados obte-
mismo analista mismo día) y precisión in- nidos de la precisión del sistema instru-
termedia (bajo condiciones de reproduci- mental y precisión del se encontró que el
bilidad) (tabla 2). La precisión del sistema método es repetible ya que los valores de
instrumental se determinó analizando es- RSD fueron menores a 5,3% para todo el
tándar bajo (60,0 mg/L), estándar medio rango y la muestra evaluada. Para la preci-
(500 mg/L), estándar alto (4.000 mg/L). La sión intermedia se realizó una compara-
precisión del método e intermedia incluyo ción estadística por medio de un Análisis
los estándares bajo, medio y alto y una de Varianza (Anova) con el fin de evaluar
muestra de leche cruda (matriz) sin em- si existían diferencias significativas aún
bargo las muestras se analizaron sobre ré- cuando se cambiara el analista; para cada
plicas, es decir la muestra o estándar se grupo de datos evaluados se obtuvo que
analizó de manera independiente desde el el F calculado en todos los casos, fue me-
principio (preparación de la muestra) nor al F crítico, por lo tanto, se concluye
hasta el final (lectura de resultados). que el método utilizado es repetible para
ambos analistas (tabla 2)

Tabla 2. Resultados del ejercicio de precisión intermedia. Las unidades de los valores obte-
nidos son en mg/L de c-GMP.

ESTÁNDAR BAJO ESTÁNDAR MEDIO ESTÁNDAR ALTO MUESTRA

60 mg/L 500 mg/L 4000 mg/L
Analista 1 Analista 2 Analista 1 Analista 2 Analista 1 Analista 2 Analista 1 Analista 2
58,37 63,31 536,20 480,44 4000,52 4214,97 153,29 151,93
60,51 56,31 481,07 484,22 4188,64 3937,48 157,09 166,49
60,66 58,74 485,93 468,63 4055,55 4092,76 150,03 151,17
57,28 65,14 493,16 472,96 4024,72 3934,81 157,00 167,45
61,83 63,76 501,51 468,31 4059,59 3949,70 152,85 143,79
63,93 63,07 493,70 507,76 4186,84 3969,42 158,10 146,35

3
Europeans medicine Agency, ICH Topic Q 2 (R1) OF ANALYTICAL PROCEDURES: TEXT AND METH-
Validation of Analytical Procedures: Text and Meth- ODOLOGY
odology, NOTE FOR GUIDANCE ON VALIDATION

11
Veracidad análisis de veracidad un total de 12 datos
analizados.
Para la evaluación de la veracidad se La veracidad se evaluó como porcentaje
realizó el análisis sobre réplicas de un es- de recuperación hallado en cada réplica
tándar bajo (60,0 mg/L), estándar medio analizada.
(500 mg/L) y del estándar alto (4.000
mg/L) (tabla 3). Se analizaron 6 réplicas Como criterio de aceptación el por-
por cada analista que participó en el ejer- centaje de recuperación debía encontrarse
cicio de validación, obteniendo para el entre el 80 y 110 %.

Tabla 3. Resultados de la evaluación de veracidad. Para cada conjunto de datos se obtuvo

un porcentaje de recuperación entre 80 a 110% por lo tanto el método utilizado ensayo de
c-GMP para el intervalo trabajado, cumple con la veracidad requerida por el método bajo
las condiciones del laboratorio. Las unidades de los valores obtenidos son en porcentaje
relativo (%).

ESTÁNDAR BAJO ESTÁNDAR MEDIO ESTÁNDAR ALTO

60 mg/L 500 mg/L 4000 mg/L
RESULTADO Recupera- RESULTADO Recuperación RESULTADO Recupera-
(mg/L) ción (%) (mg/L) (%) (mg/L) ción (%)
58,37 97,3% 536,20 107,2% 4000,52 100,0%
60,51 100,9% 481,07 96,2% 4188,64 104,7%
60,66 101,1% 485,93 97,2% 4055,55 101,4%
57,28 95,5% 493,16 98,6% 4024,72 100,6%
61,83 103,1% 501,51 100,3% 4059,59 101,5%
63,93 106,6% 493,70 98,7% 4186,84 104,7%
63,31 105,5% 480,44 96,1% 4214,97 105,4%
56,31 93,8% 484,22 96,8% 3937,48 98,4%
58,74 97,9% 468,63 93,7% 4092,76 102,3%
65,14 108,6% 472,96 94,6% 3934,81 98,4%
63,76 106,3% 468,31 93,7% 3949,70 98,7%
63,07 105,1% 507,76 101,6% 3969,42 99,2%

12 ARTÍCULO CIENTÍFICO
 De acuerdo con los resultados obte- Intervalo de trabajo
nidos (tabla 3), para las concentraciones
evaluadas, el porcentaje de recuperación El intervalo se define entre el límite de
estuvo dentro del criterio de aceptación. cuantificación hallado experimentalmente
Por lo tanto, el método de ensayo para la en el ejercicio de la validación hasta la
determinación de c-GMP en leche cruda, muestra o estándar más alto trabajado du-
arroja resultados veraces en todo el rango rante el proceso.
trabajado.
De acuerdo con los resultados obte-
nidos, se establece que el intervalo de tra-
Robustez bajo para el ensayo de c-GMP y teniendo
en cuenta la pureza del estándar utilizado
Para evaluar la robustez de la técnica se (76%) en leche líquida es de 15,2 mg/L a
realizó una comparación de los resultados 3.800 mg/L.
obtenidos en leche sin adición y con adi-
ción de preservante. El preservante utili-
zado fue peróxido de hidrógeno al 0,2% Incertidumbre
(0,67mL de H2O2 al 30% por cada 100 mL
de leche). Se realizó prueba F para estimar La incertidumbre fue estimada de acuerdo
si las varianzas de las curvas en las dos con lo establecido por la guía para la ex-
condiciones diferentes son homogéneas y presión de la incertidumbre de medida –
posteriormente se realizó una prueba t- GUM. Se calcularon de manera indepen-
student para evaluar si hay diferencias sig- diente la incertidumbre asociada de la
nificativas en las curvas obtenidas. curva de calibración que incluía el análisis
de residuales de la curva obtenido experi-
En la prueba F aplicada a las curvas mentalmente y el material de referencia
obtenidas, se obtuvo un Fcalculado (0,52) < (fig. 5) (µcombinada=2,0725), la incertidumbre
Fcrítico (2,47), por lo tanto, la varianza de las asociada a la preparación de la muestra
dos pendientes obtenidas es homogénea. (µcombinada=0,00014057), incertidumbre a
Para establecer si existía diferencia signifi- partir de los datos obtenidos de la valida-
cativa entre los dos tratamientos (con adi- ción (Repetibilidad instrumental µcombi-
ción y sin adición de preservante) se nada=0,012, precisión intermedia µcombi-

realizó una prueba t-student. Se encontró nada=0,0116). La incertidumbre expandida

que tcalculado (1,49) < tcrítico (2,02), por lo calculada considerando un nivel de con-
tanto, las curvas obtenidas (con adición y fianza del 95% y un factor de cobertura de
sin adición de preservante) no son diferen- K=2 fue de 4,1mg/L de c-GMP.
tes significativamente.

ARTÍCULO CIENTÍFICO 13
Figura 5. Identificación de las fuentes de incertidumbre por medio del diagrama causa –
efecto.

Conclusiones producción: como criterio de selección de

proveedores, seguimiento y verificación a
los mismos, verificación de la leche cruda
El método para la determinación de c- en el acopio. Aplica para leche cruda, sin
GMP en leche cruda fue revisado y vali- ningún tipo de higienización o adición de
dado por medio de cromatografía liquida estabilizantes.
de alta eficacia con detector UV y columna
de exclusión por tamaño. Los resultados
de la validación del método mostraron La cuantificación de c-GMP por medio de
que se cumplen con los criterios de linea- cromatografía liquida de alta eficacia por
lidad (R2 >0,95) para el rango alto y bajo, exclusión por tamaño es una metodología
precisión del sistema instrumental, preci- apropiada para las industrias, debido a su
sión del método (%RSD < 5,3%), límite de corto tiempo de análisis, facilidad en la
cuantificación y veracidad (porcentaje de preparación de estándares y muestras,
recuperación entre 80-110%), adicional- adecuada respuesta instrumental, así
mente se verificó cumplimento en el crite- como de las condiciones de precisión y
rio de robustez y precisión intermedia. reproducibilidad.

El método puede ser empleado para el se- La técnica de cromatografía revisada y va-
guimiento y control en toda la cadena de lidada, se convierte en una técnica que se

14 ARTÍCULO CIENTÍFICO
alinea con metodologías de control oficia- Text and Methodology, Note For Guid-
les en países como Brasil. Esta metodolo- ance On Validation Of Analytical Proce-
gía cuantifica c-GMP como indicador de dures: Text And Methodology
adulteración de lactosuero en concentra- (CPMP/ICH/381/95), recuperado desde
ciones entre 15,2 mg/L a 3.800 mg/L. https://www.ema.europa.eu/en/docu-
ments/scientific-guideline/ich-q-2-r1-val-
Los resultados del ejercicio de validación idation-analytical-procedures-text-meth-
logran demostrar que, en las condiciones odology-step-5_en.pdf.
específicas del laboratorio, se comporta
según las características para el uso pre- Instrucción normativa No 68 generada
visto y responde a las necesidades de de- por el Ministerio da Agricultura, Pecuária
terminación de c-GMP por medio de cro- e Abastecimento/Gabinete do Ministro,
matografía liquida de alta Eficacia con co- Brasil, 12 de diciembre de 2006.
lumna de exclusión por tamaño.
Instrucción normativa No 69 (Instrução

Bibliografía Normativa Nº 76) generada por el Minis-

terio da Agricultura, Pecuária e Abasteci-
mento/Gabinete do Ministro, Brasil, 13 de
Antonio, L., Rubio, S., Ortiz, R. B., & Mon- diciembre de 2006.
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Carvalho, F., Prazeres, A. R., & Rivas, J. Derivados Lácteos en Colombia (2008 –
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