FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

GUÍA DE LABORATORIO CIENCIAS BÁSICAS

Práctica Nro. Asignatura Bioquímica

09 Nombre de la Práctica Determinación de glucosa en sangre
1 Objetivos del experimento
• Realizar el proceso de venopunción mediante el uso del simulador para obtener muestras de sangre.
• Obtener una muestra de sangre óptima para el análisis en plasma y suero mediante el uso de vacutainer.
• Evaluar y determinar la concentración de glucosa en plasma, suero y capilar en muestras de sangre.
• Correlacionar los valores de glucosa plasmática, sérica y capilar con sus valores con los valores referenciales y
su relación con la Diabetes Mellitus.
2 Fundamento

Los hidratos de carbono se encuentran ampliamente en la naturaleza y cumplen diversas funciones. Son cruciales
en el metabolismo energético, por ejemplo, la glucosa es la principal fuente de combustible para todos los tejidos
y órganos. En particular, el cerebro, la médula espinal, los nervios periféricos y los eritrocitos dependen casi
exclusivamente de la glucosa para su energía (Puri, 2010).

El metabolismo de los hidratos de carbono, luego de su proceso de digestión y absorción finalmente se centra en
el hígado. El mismo que capta y convierte la fructosa (de la sacarosa alimentaria) y la galactosa (de la lactosa
alimentaria) en glucosa, mientras que el almidón (proveniente del pan, pasta, arroz) proporciona glucosa
directamente. La Figura 1 muestra los diferentes procesos metabólicos que regulan la concentración de glucosa
en sangre, que es el resultado de un equilibrio entre varios procesos anabólicos y el catabólicos (Gaw et al., 2013).

Figura 1. Homeostasis de la glucosa.

Fuente: (Gaw et al., 2013).

Los niveles de azúcar en sangre, denominados glucemia (glicemia), se cuantifican en mmol/L o mg/dL. Aunque
valores elevados son característicos de la diabetes, otras condiciones pueden alterar la glucemia sin indicar
necesariamente esta enfermedad. Entre ellas se encuentran el estrés por padecimientos agudos graves, el uso de
soluciones intravenosas con azúcar, cafeína, nicotina, el embarazo y la ingesta de ciertos fármacos como
antidepresivos, antihipertensivos, antiinflamatorios no esteroidales y hormonas. Por lo tanto, niveles de glucosa
fuera del rango normal no siempre implican diabetes, requiriendo un análisis integral para un diagnóstico preciso
(Deska Pagana et al., 2022).

Para determinar glucosa capilar, que principalmente se usa para automonitoreo de los niveles de glucosa en
pacientes con diabetes mellitus se emplea medidores manuales computarizados. Los cuales son instrumentos de

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fácil manejo que vienen con un chip codificador y con tiras reactivas que habitualmente necesitan de una pequeña
gota sangre para su medición (Figura 2A). Por otro lado, para medir la glucosa en plasma, mismo que sirve como
criterio para diagnóstico inicial de diabetes mellitus se utiliza un método enzimático colorimétrico (Figura 2B), el
cual ayuda a definir valores de glucosa de manera mucho más precisa. Este tipo de pruebas son importantes para
indicar y descartar que una persona no tenga alteraciones en el metabolismo de la glucosa.

A B

Figura 2. Medición de glucosa en sangre. A) Medición de glucosa capilar con medidor manual computarizado. B)
Medición de glucosa en plasma mediante espectrofotometría. C) Principio de la reacción de Trinder

En el análisis enzimático colorimétrico se puede emplear la técnica de glucosa oxidasa o hexoquinasa. Por ejemplo,
la reacción enzimática de oxidación de Trinder catalizada por la glucosa oxidasa (GOD) genera peróxido de
hidrógeno, el cual reacciona en presencia de la enzima peroxidasa (POD) con fenol y 4-aminofenazona (4-AA),
formando un complejo coloreado rojo de quinoneimina que actúa como indicador y permite determinar la
concentración de glucosa presente (Figura 2C) (Linear Chemicals, 2024).

Para una adecuada interpretación de los valores de glucosa en sangre se debe tener en cuenta el estado del
paciente en el cual se realizó la medición. Es esencial especificar si la medición de los niveles de glucosa se realizó
de forma aleatoria o después de un período de ayuno. Este último implica la abstención de consumir cualquier
alimento, con excepción del agua, durante un mínimo de 8 horas previas al análisis sanguíneo. Es así como, la
glicemia basal se refiere a los niveles de azúcar en sangre en ayunas, luego del reposo nocturno. Por otro lado, la
glicemia postprandial representa la cantidad de glucosa presente después de consumir alimentos, especialmente
los ricos en carbohidratos. En individuos sin diabetes, los picos de azúcar postprandiales se normalizan alrededor
de dos horas posteriores a la ingesta (Gardner & Shoback, 2012).

Existen rangos establecidos para interpretar los resultados de glucosa en sangre. En condiciones de ayuno, los
valores normales oscilan entre 70-110 mg/dL o <6,1 mmol/L y en cualquier momento independientemente de la
ingesta de alimentos <200 mg/dL (11,1 mmol/L). Después de una prueba de tolerancia a la glucosa, donde se
ingieren 75 g de glucosa, el nivel a las 2 horas debe ser menor a 140 mg/dL. Para diagnosticar diabetes en adultos
se consideran valores anormales si la glucosa al azar es ≥200 mg/dL, en ayunas ≥126 mg/dL (requiriendo
confirmación), o ≥200 mg/dL en la curva de tolerancia. Estos criterios permiten detectar niveles de glucosa
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indicativos de esta enfermedad (Deska Pagana et al., 2022).

Esta guía de laboratorio se centrará en la glucosa, su determinación en sangre, su función en el metabolismo y su

importancia en la salud humana, proporcionando un entendimiento más profundo de este carbohidrato esencial.

3 Seguridad
• Instructivo de uso de guantes
• Manual de seguridad en el laboratorio

4 Equipamiento
SUSTANCIAS MATERIALES EQUIPOS/SIMULADOR
a. SUSTANCIAS b. CANTIDAD a. MATERIALES b. CANTIDAD a. EQUIPO b. CANTIDAD
Kit de venopunción
Etanol 70% 100 ml 6 Espectrofotómetro 1
con vacutainer
Estándar de
60 uL Tubos lila 3 Centrífuga 1
glucosa Cromatest
Baño María con
Reactivo Cromatest 6 mL Tubos rojos 3 1
agitación
Simulador de
Torundas de algodón 15 3
venopunción
Analizador
Curitas 15 1
AccuCheck
Cubetas de
3
espectrofotómetro
Micropipetas 1000 uL 3
Puntas 1000 uL 15
Tubos ependorf 2 mL 6
Tirillas AccuCheck 6
Lancetas 6
5 Procedimiento experimental

Primera Parte: Determinación de glucosa capilar

1. Antes de introducir la tira reactiva de papel asegúrese de que las tiras tienen el mismo código que aquel
que aparece en la pantalla, extraiga una tira reactiva del envase y ciérrelo herméticamente.
2. Introduciendo la tira reactiva en la ranura del ACCU CHEK el aparato se enciende automáticamente.
3. Compruebe que aparezcan en la pantalla tres dígitos 888. Son indicadores de que el codificador y la
memoria están funcionando bien.
4. También debe aparecer a la derecha de los tres dígitos la unidad de medida seleccionada para trabajar
mg/dl o mmol/L.
5. Una vez que esto acontece aparece en la pantalla una gota titilando indicando que debe hacer caer una

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gota de sangre en el indicador de la tira reactiva de papel que simultáneamente aparecerá un punto de
color rojo en la guía de la tira parpadeando intermitentemente. En adelante tiene solamente 90 segundos
para proceder, si se excede, el medidor se apagará automáticamente.
6. Tome la lanceta, puncione la parte lateral de la yema de preferencia del dedo anular de la mano izquierda.
7. Forme una pequeña gota de sangre y deposítela directamente en la zona reactiva de la tira (cuadrado de
color rojo), de modo tal que la sangre cubra todo el cuadrado. En unos segundos aparecerá el resultado en
la pantalla. El medidor mide valores de glicemia entre 10 y 600 mg/dl (0,6 a 0,33 mmol/L).
8. Si la sangre examinada tiene más glucosa aparecerá HI y si es menos LO, y si realiza mal el procedimiento
aparecerá ERROR.
9. Extraiga la tira del medidor y deseche, el medidor se apagará automáticamente.
10. Repita las mediciones según el diseño experimental.

Segunda parte: Simulación de obtención de sangre por venopunción.

1. Colocar el simulador de venopunción sobre una superficie plana y estable.
2. Asegurarse de que el simulador esté correctamente ensamblado y que la piel artificial esté colocada
adecuadamente.
3. Verificar que el sistema de circulación artificial esté lleno con el líquido simulador de sangre.
4. Reunir todo el material necesario: tubos de recolección de muestra con sus respectivos aditivos, agujas de
venopunción, torniquete, algodón, curita, bandeja para colocar el material y recipiente para desechos.
5. Asegurarse de que todo el material esté debidamente etiquetado y organizado.
6. Lavarse las manos con agua y jabón o utiliza un desinfectante de manos.
7. Colocarse guantes de protección.
8. Palpa suavemente el área del simulador donde se encuentra la vena artificial.
9. Aplicar el torniquete aproximadamente 10 cm por encima del área de venopunción.
10. Limpiar el área de venopunción con una torunda de algodón impregnada con alcohol.
11. Permitir que el área se seque completamente.
12. Tomar la aguja de venopunción y retirar el protector de la aguja.
13. Con una mano, inmovilizar la piel artificial del simulador y, con la otra mano, inserta la aguja en la vena
artificial con un ángulo de 30 a 45°.
14. Una vez que veas la sangre simulada fluir hacia la cámara de la aguja, retira el torniquete.
15. Colocar el tubo de recolección en el vacutainer y permitir que la sangre simulada fluya hacia el tubo.
16. Cuando el tubo esté lleno, retíralo suavemente de la aguja.
17. Repite el proceso con los tubos adicionales que necesites llenar.
18. Una vez que hayas recolectado todas las muestras necesarias, retirar la aguja de la vena artificial en un
movimiento suave.
19. Aplicar una torunda de algodón en el sitio de venopunción y presionar suavemente.
20. Colocar una curita sobre el sitio de venopunción.
21. Descartar los materiales utilizados en los recipientes correspondientes.
22. Limpiar y desinfecta el simulador de venopunción siguiendo las instrucciones del docente a cargo.
23. Asegurarse de que el simulador esté listo para su próximo uso.

Tercera parte: Determinación de glucosa en plasma

1. Presentarse al paciente y explicar el por qué y el procedimiento de la extracción
2. Rotule previamente el tubo donde va a recolectar la muestra obtenida en el que debe constar: nombre,
edad, sexo, fecha, número de historia clínica, etc.
3. Elija una vena de buen calibre, mire y verifique al tacto. De preferencia se utilizan las venas del pliegue del
codo y en especial la mediana cefálica en los adultos. En los niños en el dorso del pie o de la mano.
4. Desinfectar la zona con torunda algodón-alcohol para lo cual se emplean dos métodos: el circular y el
perpendicular.
5. Aplique un torniquete con nudo corredizo a una distancia de 8 a 10 cm del codo. Concomitantemente se
pide al paciente realice puño de su mano.
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6. Verificado el funcionamiento adecuado de la jeringuilla, tome la misma con los dedos índice y pulgar
descansando el dedo medio en el antebrazo del paciente. Forme un ángulo de 45 grados con la horizontal.
7. Retire el protector de la aguja.
8. Atraviese firmemente la piel e introduzca la aguja una distancia aproximada de 1 a centímetros con el bisel
hacia arriba dentro del lumen de la vena. En este instante fluye espontáneamente la sangre.
9. Ayúdese con el émbolo para extraer la cantidad deseada de sangre; retire el torniquete y pida que abra el
puño.
10. Coloque una torunda de algodón - alcohol en el sitio de la extracción y retire lentamente la jeringuilla.
Realice una ligera presión para favorecer la hemostasia.
11. Retire la aguja de la jeringuilla.
12. En el tubo de recolección de la muestra, forme un ángulo de 30 grados con la jeringuilla; deslice
lentamente la sangre por las paredes laterales del tubo, con una presión constante para evitar hemólisis
13. Mezcle por inversión tres veces, y llevar la muestra (sangre total), a la centrífuga: 3 minutos a 3000 rpm, se
obtiene dos fracciones, plasma como sobrenadante y elementos figurados. Con el plasma sobrenadante
proceda al esquema del pipeteo como se recomienda en el diseño experimental (Tabla 1).
14. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
15. Con pipeta automática tomar 10 uL de plasma obtenido y poner en el tubo que contiene el reactivo
enzimático.
16. Mezclar, incubar por 10 minutos de 20 a 25°C o 5 minutos a 37°C.
17. Traspasar la muestra a la cubeta del colorímetro o espectrofotómetro.
18. Leer la absorbancia (A) de la muestra y el patrón a 500 nm frente al blanco de reactivo.

Tabla 1. Diseño Experimental elemental

Notas
Esta prueba no es influenciada por ácido úrico, ácido ascórbico, glutatión, anticoagulantes, bilirrubina y
creatinina en concentraciones fisiológicas.

Tab Registro de observaciones y resultados

Tabla 2. Observaciones
Parte Ensayo Observaciones

Glucosa
Primera
capilar

Simulador
Segunda de
venopunción

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Glucosa en
Tercera
plasma

Cálculos

Muestras con concentraciones superiores a 500 mg/dL deben diluirse 1:4 con solución salina y repetir el ensayo.
Multiplicar los resultados por 4.
Para expresar los resultados en unidades SI aplicar: mg/dL x 0,0555 = mmol/L

Discusión de resultados

• ¿Cuál es el valor de la prueba de Glicemia basal para diagnosticar prediabetes?

• ¿Cuáles son las complicaciones agudas de la diabetes mellitus?
• ¿En qué consiste la PTOG?
• ¿Cuáles fueron las diferencias observadas entre los valores de glucosa capilar y glucosa en plasma?
¿A qué factores podrían atribuirse estas diferencias?
• ¿Los valores de glucosa capilar y glucosa en plasma se encontraban dentro de los rangos
normales establecidos? En caso de haber valores fuera de rango, ¿cuáles podrían ser las posibles causas
o condiciones que pudieron influir en estos resultados?
• ¿Qué tipo de interferencias o fuentes de error podrían haber afectado la precisión y exactitud de
las mediciones de glucosa capilar y glucosa en plasma?
• ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de utilizar la determinación de glucosa capilar en comparación con
la determinación de glucosa en plasma?
• ¿Qué importancia clínica tienen las diferencias observadas entre los valores de glucosa capilar y glucosa
en plasma?
• ¿Cómo podrían estas diferencias influir en el diagnóstico y el manejo de pacientes con
trastornos relacionados con la glucosa, como la diabetes mellitus?

7 Referencias

Deska Pagana, K., Pagana, T. J., & Pagana, T. N. (2022). Manual of Diagnostic and Laboratory Tests. In Mosby’s®
Manual of Diagnostic and Laboratory Tests (Seventh). Elsevier. http://evolve.elsevier.com/Pagana/manual/
Gardner, D. G., & Shoback, Dolores. (2012). Greenspan Endocrinología básica y clínica. McGraw-Hill.
Gaw, A., Murphy, M. J., Srivastava, R., Cowan, R. A., & O’Reilly, D. St. (2013). Clinical Biochemistry (Fifth). Elsevier.
Linear Chemicals. (2024). GLUCOSE MR. https://www.linear.es/en/portfolio_page/glucose-mr/
Puri, D. (2010). MEDICAL BIOCHEMISTRY (Third). Elsevier.

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