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    UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONIA

    PRACTICA DE BIOTECNOLOGIA AGROINDUSTRIAL

    DETERMINACIÓN DE PROTEINAS UTILIZANDO LA VECERSAS DE


    PESCADO BOKICHICO (grupo N°4)
    FUNDAMENTO TEORICO
    Fundamento Las proteínas presentan un amplio rango de comportamiento
    químico debido a la propiedad de los aminoácidos de tener diferentes tipos de
    grupos funcionales, a las reacciones químicas de estos grupos y a los enlaces
    peptídicos. Consideraciones en la aplicación de los métodos químicos:

    Método de Bradford
    Método por unión de colorantes En condiciones adecuadas los grupos ácidos o
    básicos de las proteínas pueden interaccionar con grupos orgánicos
    de determinados colorantes para dar lugar
    a precipitados con un color característico. Para el ensayo de Bradford se utiliza el
    coloranteCoomassie Brillant Blue G250. Se basa en la conversión de la forma
    leuco del colorante (marrón-naranja) a una de color intensamente azul cuando los
    grupos aniónicos del colorante interaccionancon los grupos amino de las
    proteínas. Dicha reacción se mide por absorbancia a 595nm y tambiénexiste una
    relación lineal dentro de determinadas concentraciones de proteínas (peña, 2004)

    MATERIALES Y METODOS
     Tubos de ensayo
     Matraz de 500 ml
     Micro pipetas
     Papel filtro

    REACTIVOS
     Azul de coma sin
     Etanol de 90°c
     Ácido fosfórico
     Aspecto fotómetro

    METODOLOGIA
    : Llena la solución resultante 9.5
    : Hidróxido de sodio 2 normal
    : Colocar en baño María 60°c y 2 horas
    Proceso de extracción
    : Centrifugar a 6000 ml rpm x 20 minutos
    : Filtrar base de papel Word con pase lenta
    : Determinar el contenido de la solución proteínas sobre nadante el método Bradford

    Para la realización de la práctica se utilizaron gr.

    A). preparación estándar para a la muestra de 5 a 100 mililitros de proteínas


    1). preparar de 5 a 8 soluciones de estándar de proteínas (BSA)con un rango de
    5 a 100 micro litros de proteínas
    2). Diluir la muestra de proteínas de condiciones hasta obtener 5 a 100
    miligramos de proteínas en 30 militros
    3). Adición de 30 militros de solución estándar de la muestra desconocida en un
    tubo.
    4). prepara 2 tubos de blanco para curva estándar 30 militros de agua en lugar
    de la solución de estándar.
    Para la muestra de proteína desconocida adicionar 30 micro litros de bafer de
    recuperación de la proteína.
    Las soluciones de proteína por triplicado
    5). Adicionar 1.5 militros de reactivo de factor de cada tuvo y mezclar bien.

    6). incubar temperatura ambiente a menores 5 minutos la absorbancia


    aumentara con el tiempo el siempre máximo de incubación de las muestras a
    temperatura ambiente .no debe ser a mayor de 1 hora.

    Enseguida quedo se le agregaron 50 ml de alcohol, nuevamente se vacío en 4


    tubos con 10 gramos cada uno, para volverlos a introducir a la centrifuga
    durante 15 minutos, una vez pasado este tiempo se separó nuevamente el
    líquido del sólido para introducirlo nuevamente a la estufa de secado para que
    se evapore y pesar.

    Por último, se vació en 4 tubos con 10 gramos cada uno, para colocarlos en la
    centrifuga durante 15 minutos, al pasar los 15 minutos se sacaron para
    nuevamente separar los sólidos y los líquidos para introducirlos de nuevo a la
    estufa de secado para evaporar y volver a pesar.
    Figura 1. Pesar
    los tubos con la misma cantidad.

    Figura 2. Colocar los 4 tubos en la centrifugas.


    Figura 3. Separar el sólido y el líquido.

    Figura 5. Introducir líquido a la estufa de secado por 15 minutos

    BIBLIOGRAFIA

     berg, j. (2003). metodos de proteinas. quito : acribia .


     peña, a. (2004).bioquimica analítica . mexico : acribia .
     Romero, N. (2004). METODOS DE ANALISIS DE DETERMINACION. 165-170.
     thryr, l. (2002). bioquímica. México: acribia

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