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PRACTICA 1: ACCIÓN AMORTIGUADORA DE LAS PROTEÍNAS
PROGRAMA MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
NÚCLEO CIENTÍFICO BÁSICO MODULO MORFOFISIOLOGÍA Y METABOLISMO SEMESTRE 3 CRÉDITOS ACADÉMICOS 9 HORAS DE TRABAJO 240 DEPENDIENTE HORAS DE TRABAJO 480 INDEPENDIENTE DOCENTE (S) NESTOR FABIO HOLGUIN OSORIO E. MAIL DEL DOCENTE (S) Nestor.holguín@sanmartin.edu.co
PRESENTACIÓN El laboratorio de bioquímica pretende que el estudiante pueda aplicar los conceptos teóricos y experimente una serie de procesos bioquímicos. Conozca las técnicas básicas de laboratorio y desarrolle habilidad y destreza para futuras prácticas.
COMPETENCIAS Aplicar en el laboratorio la secuencia básica de operaciones que intervienen en la identificación de proteínas, carbohidratos y lípidos. Así, esta práctica permite desarrollar las siguientes habilidades:
COMUNICATIVA
El alumno presenta de forma lógica, clara y concisa los resultados
obtenidos. De modo tal que, la información sea comprensible para otras personas.
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PAGE COGNITIVA
El alumno utiliza adecuadamente instrumentos y aplica técnicas de
laboratorio
CONTEXTUAL
El estudiante desarrolla trabajos de índole grupal en el desarrollo del
El estudiante recoge los datos de forma ordenada y rigurosa
INTRODUCCIÓN La fermentación es:
Cualquier descomposición de los alimentos producida por microorganismos
Cualquier proceso que genere bebidas alcohólicas o productos lácteos ácido Cualquier proceso microbiano a gran escala en condiciones aerobias o anaerobias Cualquier proceso metabólico liberador de energía que tenga lugar exclusivamente en condiciones anaerobias Cualquier proceso metabólico que libere energía a partir de un azúcar u otra molécula orgánica, no necesite la presencia de oxígeno ni de una cadena transportadora de electrones y utilice una molécula orgánica como aceptor final de electrones
La fermentación se compone de la glucólisis más las reacciones que regeneran
NAD+. Hay muchos tipos de fermentación que difieren en los productos finales que se forman a partir del piruvato: por ejemplo, fermentación alcohólica y fermentación ácida láctica.
La primera etapa del metabolismo de la glucosa en levadura es la producción de
piruvato. Este proceso, que se efectúa mediante una serie de reacciones qué involucran un número considerable de intermediarios, se conoce como glucolisis.
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PAGE La reacción total podría considerarse como la transferencia de dos pares de átomos de hidrogeno de la glucosa al NAD+. Puesto que la coenzima se encuentra sólo en cantidades catalíticas, es necesario reoxidarla para que el proceso no se suspenda, y así, el NADH + H+ formado es reconvertido a NAD+ por el oxígeno molecular a través de la cadena respiratoria. Esto no es posible en condiciones anaeróbicas, en este caso la r oxidación se efectúa cuando el piruvato se convierte en acetaldehído, y luego en alcohol tal como se muestra en la siguiente figura
DEMOSTRACIÓN DE LOS INTERMEDIARIOS METABÓLICOS.
Los metabolitos de piruvato y acetaldehído se encuentran presentes normalmente
en muy bajas concentraciones, por tanto, para demostrar su existencia como intermediario en el proceso metabólico, es necesario impedir que sean transformados en otros compuestos. Este procedimiento se usa mucho cuando se investigan caminos metabólicos y se hace bloqueando la enzima qué cataliza la conversión del compuesto, que se está investigando mediante inhibidores. También se pueden cambiar las condiciones fisiológicas para que la enzima funcione a una velocidad muy por debajo de su actividad máxima, o se puede usar
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PAGE un agente que atrape al metabolito intermediario y que forme un compuesto que no pueda metabolizarse.
PIRUVATO
La piruvato descarboxilasa (EC: 4.1.1.1) no es activa en soluciones ligeramente
alcalinas de manera que el piruvato se acumula y su presencia puede mostrarse por la reacción con nitroprusiato de sodio.
OBJETIVOS
Detectar la presencia de piruvato, acetaldehído y etanol, en el proceso de
fermentación de glucosa por levadura
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
Fosfato de sodio dibásico (0.5 mol/L) Fosfato de potasio monobásico (0.5 mol/L) Suspensión de levadura (100 g/l en Na2HPO4) Suspensión de levadura (100 g/l en KH2PO4) Suspensión de levadura (100 g/l en agua) Glucosa Nitroprusiato de sodio (50 g/L) Hidróxido de amonio Sulfato de amonio Piperidina (30 g/L en disolución acuosa) Sulfito de sodio
METODOLOGÍA
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PAGE FORMACIÓN DE PIRUVATO A PARTIR DE GLUCOSA
En dos tubos de ensayo pipetee 5 ml de solución de glucosa (A y B); al tubo a
agregue 5 ml de suspensión de levadura en solución ligeramente alcalina de Na2HPO4 y al tubo B añada 5 ml de la suspensión de levadura en solución ácida de KH2PO4. Coloque los tubos en un baño de agua a 37º °C durante una hora, luego añada a cada tubo 2 ml de la solución de ácido tricloroacético, mezcle vigorosamente y centrifugue durante 10 minutos a 2500 g. Separe el sobrenadante y úselo para la determinación del piruvato.
DETERMINACIÓN DEL PIRUVATO MEDIANTE NITROPRUSIATO DE SODIO
En un tubo de ensayo agregue 2 ml del sobrenadante hervido previamente a 1 g
de sulfato de amonio sólido. Agregue dos gotas de solución de nitroprusiato de sodio recién preparada, mezcle vigorosamente y deje deslizar cuidadosamente por las paredes del tubo amoniaco concentrado hasta que se formen dos capas. Si hay piruvato, se forma un anillo verde o azul en la interfase de los dos líquidos. La formación de un anillo rosado transitorio en la interfase indica la presencia de grupos tioles y con frecuencia se observa antes de la coloración azul o verdosa característica de la reacción con piruvato
FORMACIÓN DE ACETALDEHÍDO A PARTIR DE GLUCOSA
En dos tubos marcados A y B pipetee 5 mL de la solución de glucosa, agregue
a ambos tubos 5 ml de la suspensión de levadura en agua, al tubo D añada 0,5 gramos de sulfito de sodio. Mezcle vigorosamente e incube los dos tubos a 37º durante una hora. Centrifugue, separe el sobrenadante, mezcle 2 ml de sobrenadante con 0,5 mL de solución fresca de nitroprusiato de sodio y 2 mL de Piperidina acuosa y agite. Si hay acetaldehído presente, se observará una coloración azul.
OBTENCIÓN DE ALCOHOL
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PAGE Mezcle volúmenes iguales de la solución prueba con la suspensión y colóquela en un tubo de fermentación. Incubé el tubo en posición vertical a 37 ºC una hora y observé el desprendimiento de CO2
ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Explique el proceso de fermentación alcohólica y escriba las reacciones químicas involucradas en el proceso.
Evaluación En las Prácticas de Laboratorio se evaluará el trabajo realizado como preparación de la actividad (consultas preliminares y quiz) y el realizado durante y después de la actividad (diligenciamiento del formato, causas de error, observaciones y conclusiones), teniendo el primer componente una ponderación del 30% y el segundo del 70% de la nota del laboratorio.
Bibliografía 1. Atkins, P. W., & Jones, L. (2006). Principios de química: los caminos del descubrimiento. Ed. Médica Panamericana. 2. Brown, T. L., LeMay Jr, H. E., Bursten, B. E., & Burdge, J. R. (2009). Química. Prentice Hall. 3. Feduchi, E., Blasco, I., Romero, C. S., & Yáñez, E. (2011). Bioquímica. Conceptos esenciales. Panamericana. 4. Chang, R. (1997). QUÍMICA Edición breve. 5. Garzón, G. (1986). Fundamentos de química general: con manual de laboratorio. 6. Hicks Gómez, J. J. (2001). Bioquímica.
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PAGE 7. Laguna, J., & Piña Garza, E. (2002). Bioquímica de laguna. Universidad Nacional Autónoma de México. 8. Morrison, R. T., & Boyd, R. N. (1998). Química orgánica. Pearson educación. 9. Roskoski, R. (1998). Bioquímica. McGraw-Hill Interamericana, 10.Whitten, K. W., Gailey, K. D., Davis, R. E., de Sandoval, M. T. A. O., & Muradás, R. M. G. (1998). Química general. McGraw-Hill. 11.William, P., & ATKINS, L. (2012). Principios de química: los caminos del descubrimiento. Ed. Médica Panamericana. 12.Zumdahl, S. S. (2007). Fundamentos de química (No. 540 Z94f). McGraw-Hill, 13.Ayala S. et al., (2007). Manual de Laboratorio de Bioquímica. Universidad de Antioquia. 14.Barbosa E. et al., (2009). Escuela superior de Medicina. Manual de Laboratorio de Bioquímica Medica 1. 15.Mark et al., (2002). Biochemistry Laboratory Manual. Third edition. Calstate Fullerton. P1-142 16.Smith C. et al., (2009). Manual de prácticas Bioquímica clínica. Facultad de Medicina. Universidad Autónoma de México
