Módulo 2, unidad 1: Replicación.

MÓDULO 2 UNIDAD 1: FLUJO DE LA INFORMACION

GENÉTICA Y REPLICACIÓN DEL ADN.
Prof. Julio Escribano
Facultad de Medicina.
Universidad de Castilla-La Mancha

Contenidos:
1. El dogma central de la Biología Molecular.
2. Replicación en procariotas.
2.1. ADN polimerasas procariotas.
2.2. Helicasas topoisomerasas y proteínas de unión a ADN de cadena sencilla (SSB).
2.3. Comienzo de la síntesis de ADN.
2.4. Cadena líder y cadena retrasada.
2.5. Fidelidad de la replicación del ADN.
3. Replicación en eucariotas.
3.1. ADN polimerasas eucariotas.
3.2. Replicación de los extremos de los cromosomas
3.3. Orígenes de replicación en los cromosomas eucariotas y regulación de la replicación. El
replisoma.
3.4. La replicación del ADN en relación con el ciclo celular.
4. Aplicaciones del conocimiento de la replicación en la actividad clínica.

Objetivos:

1. Realizar un esquema indicado el flujo de la información genética según el dogma central

de la Biología Molecular.
2. Analizar la replicación del ADN en procariotas y eucariotas, explicando el concepto de
replisoma e indicando la función de las moléculas implicadas en el proceso (ADN
polimerasas, primasa, helicasa, topoisomerasa, proteínas de unión a ADN de cadena
sencilla (SSB) y telomerasa).
3. Explicar la replicación del ADN en relación con el ciclo celular.
4. Conocer algunos ejemplos de aplicación del conocimiento de la replicación en la
actividad clínica.

1.- FLUJO DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA: EL DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGÍA

MOLECULAR.

El modelo de Watson y Crick sobre la estructura del DNA suscitó un gran entusiasmo entre la
comunidad científica de la época por dos razones fundamentales:

1. Sugería una forma obvia para la duplicación o replicación de cada molécula, ya que cada base
determina a su complementaria mediante puentes de hidrógeno. Hasta entonces este mecanismo
había sido un misterio.
2. Permitía pensar que la secuencia de nucleótidos determina la secuencia de aminoácidos de la
proteína codificada por un gen gracias a la existencia de algún código (genético) que relaciona
ambas secuencias.

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

En aquel momento estas ideas abrían las puertas para explicar dos de los grandes enigmas de
la vida, cómo se replica el material hereditario y cómo se sintetizan las proteínas.
Comenzó de esta manera a madurar lo que más tarde se llamaría el Dogma Central de la
Biología Molecular, formulado por Crick, en el que se establece la dirección del flujo de la información
genética. En su planteamiento inicial establecía que la información genética fluía desde el ADN a las
proteínas a través de un mensajero y que el flujo de información desde las proteínas al ADN no era
posible. Esta idea fue completada posteriormente y se resume en el siguiente esquema:

2. REPLICACIÓN EN PROCARIOTAS

La fidelidad de la replicación del ADN está asegurada por el principio de complementariedad

del apareamiento de las bases, es decir, cada base en la cadena molde determina la cadena
complementaria en la nueva cadena. En conjunto el proceso de replicación es muy complejo y en él
participan muchas moléculas, que estudiaremos por partes.

2.1. ADN polimerasas procariotas.

A finales de los años 50 Arthur Kornberg consiguió identificar y purificar la primera

polimerasa de ADN a partir de E. coli. Esta enzima cataliza la siguiente reacción:

dATP
dGTP ADN polimerasa ADN
ADN parental cebado +
dTTP ---------------------------> descendiente
dCTP

Como indica el esquema, esta reacción necesita de la presencia de los 4

desoxiribonucleótidos trifosfato. La reacción de polimerización está catalizada por una enzima
denominada ADN polimerasa. Esta primera ADN polimerasa aislada se denominó ADN pol I. En E.
coli existen tres ADN polimerasas, denominadas I, II y III:

Actividad Estructura Nº
Enzima Función
exonucleasa moléculas/célula
Reparación y replicación Monómero 400
3'→5'
ADN pol I (eliminación de los
5'→3'
cebadores de RNA).
ADN pol II Repara el ADN dañado. Monómero 100

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ADN pol III Replicación. 3'→5' Dímero 10-20

La ADN pol I posee tres actividades, localizadas en diferentes partes de la molécula:

1. Polimerasa 5'→3'. Responsable del crecimiento de la cadena.

2. Exonucleasa 3'→5'. Elimina las bases mal apareadas.
3. Exonucleasa 5'→3'. Permite eliminar los cebadores.

La ADN pol III, la principal en la replicación procariota, está formada por 17 subunidades
distintas, agrupadas formando 3 complejos, el conjunto de los cuales se denomina holoenzima. El
complejo catalítico está formado por sólo tres subunidades, alfa (), épsilon () y teta (Ѳ). El
complejo pinza deslizante está formado por dos subunidades beta () formando una pinza circular
que fija al resto de las subunidades a la molécula molde de ADN, siendo esta la razón de su gran
procesividad. La procesividad es la capacidad de sintetizar nuevas hebras de ADN de manera
ininterrumpida. Existe un complejo que carga o acopla la pinza deslizante a la subunidad catalítica
y por último una subunidad tau (τ), responsable de la dimerización de dos complejos catalíticos, de
la que existen dos moléculas en el dímero.

Complejo pinza deslizante Complejo cargador de la pinza

Complejo core

Estructura de la ADN pol III procariota. El

esquema muestra un dímero que se unirá a
las dos hebras del ADN a través de las
subunidades beta (Igor V. Shevelev & Ulrich
Hübscher. Nature Reviews Molecular Cell
Biology. (2002) 3, 364-376).
Dimerización

En general, para que cualquier ADN polimerasa pueda iniciar la síntesis de ADN requiere:

1. Una molécula de ADN molde que le dicte el orden de los nucleótidos.

2. Un conjunto de dNTPs libres que le sirven como unidades para la síntesis de las nuevas
moléculas de ADN.
3. Un cebador o fragmento corto de ADN o ARN con un extremo 3'-OH al que poder añadir los
dNTPs. En inglés se denomina primer.

2.2. Helicasas, topoisomerasas y proteínas de unión a ADN de cadena sencilla (SSB).

Las helicasas son enzimas que rompen los puentes de hidrógeno del ADN, empleando la
energía del ATP, dando lugar a la separación de las hebras de ADN y al desenrollamiento de la doble
hélice. E. coli posee varias helicasas. El desenrollamiento producido por la acción de las helicasas
genera torsiones en el ADN circular que deben ser eliminadas, por acción de las topoisomerasas,
entre las que se encuentran las girasas, para que la replicación continúe. Las girasas tipo I producen

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

una rotura en una de las dos cadenas del ADN y las de tipo II rompen ambas cadenas. Tanto la rotura
de una como de las dos cadenas de ADN permite la eliminación del superenrollamiento.

Las proteínas de unión a ADN de cadena sencilla o SSB se unen a este ADN estabilizándolo.
Se unen a la parte externa, al esqueleto de azúcar-fosfato, dejando las bases nitrogenadas accesibles
a la ADN polimerasa. Se evita de esta forma que el ADN de cadena sencilla adopte estructuras
secundarias que dificultarían la acción de la polimerasa. La unión de estas proteínas al ADN es
cooperativa, lo que quiere decir que la unión de una molécula al ADN facilita la unión de las
siguientes.

2.3. Comienzo de la síntesis de ADN.

En E.coli la replicación se inicia a partir de un único origen de localización fija, y progresa

luego de manera bidireccional, terminando en un lugar denominado final de replicación. En otros
procariotas el avance de la replicación es unidireccional. El origen de replicación en E. coli se
denomina OriC, y está formado por unos 245 pares de bases, donde se distinguen dos conjuntos de
repeticiones:

1. Tres repeticiones orientadas en la misma dirección, denominadas repeticiones directas, de

pocos nucleótidos, ricas en A y T, por lo que las hebras se separan con facilidad.
2. Cuatro repeticiones de una secuencia también de pocos pares de bases, donde se une la proteína
de iniciación DnaA.

La siguiente figura muestra la estructura del origen de replicación de E. coli.

Iniciación de la replicación en
procariotas. Fig. 25. 37. Christopher K.
Mathews, Kensal E. van Holde, Dean R.
Appling, Spencer J. Anthony-Cahill.
Biochemistry. Pearson. 2012).

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

En el inicio de la replicación múltiples monómeros (10-20 moléculas) de la proteína

denominada DnaA se une a las repeticiones anteriormente indicadas, junto con ATP. Otras proteínas
básicas como HU e IHF (Integration Host Factor) también se unen en esta región, facilitando que la
doble hélice se arquee, induciendo la aparición de un superenrollamiento negativo (contrario a la
dirección de enrollamiento del ADN), cuya consecuencia es el desenrollamiento del ADN en la región
de las repeticiones de 13 pb, ricas en A y T.

Posteriormente se incorpora a este complejo otra proteína de iniciación denominada DnaC,

la cual facilita la unión de la helicasa, denominada DnaB en bacterias, que se une a las dos horquillas
que se han formado al separarse las hebras de ADN, contribuyendo a desenrollar el ADN por delante
de las horquillas. Seguidamente se une a la helicasa la enzima una primasa, denominada DnaG en
E. coli, formando el primosoma [(helicasa (DnaB)+primasa (DnaG)], que sintetizará los cebadores de
RNA. Los fragmentos de ADN monocatenario son estabilizados por las proteínas de unión a ADN de
cadena sencilla o SSB (del inglés Single-Strand Binding). Si no se produjera esta estabilización las
cadenas sencillas podrían aparear consigo mismas en regiones autocomplementarias, dificultando
la replicación. El desenrollamiento catalizado por la helicasa precisa de la energía procedente de la
hidrólisis del ATP.

La primasa se encarga de sintetizar un fragmento corto de ARN (aproximadamente 30

nucleótidos) complementario del ADN, que actúa como cebador de la nueva cadena de ADN. A
continuación la cadena de ARN es alargada por la ADN polimerasa III. La primasa de E. coli forma un
complejo con el ADN molde y con otras proteínas. Todo este proceso está regulado y coordinado
con el ciclo celular.

2.4. Cadena líder y cadena retrasada.

La ADN polimerasa III sintetiza las cadenas nuevas en dirección 5'→3' debido a que las ADN
polimerasas solo pueden avanzar o leer la cadena molde en dirección 3'→5'. La naturaleza
antiparalela de las dos hebras del ADN determina que una de las cadenas hijas, la cadena líder, se
sintetice de forma continua, mientras que otra, la cadena retrasada, se sintetiza discontinuamente.
La adición de nucleótidos para alargar la cadena retrasada debe avanzar hacia la dirección 5' de la
cadena molde, mientras que la horquilla de replicación siempre se mueve en dirección al extremo
3' de la cadena molde de la hebra retrasada. Es decir, una de las cadenas, la retrasada, debe crecer
en dirección opuesta al movimiento de la horquilla de replicación. A medida que el movimiento de
la horquilla expone una nueva zona de la cadena molde de la cadena retrasada, se puede iniciar la
síntesis de un nuevo fragmento de esta cadena, el cual se aleja de la horquilla hasta que se
encuentra con el fragmento producido con anterioridad. Los segmentos de ADN de la cadena
discontinua se denominan fragmentos de Okazaki, en honor al bioquímico japonés que aportó los
primeros datos de su existencia. Un fragmento de Okazaki consta por tanto del RNA cebador unido
al fragmento de ADN correspondiente. Cuando la ADN pol III en la hebra retrasada se encuentra con
el extremo 5' del primer ribonucleótido del fragmento de Okazaki precedente se detiene y se suelta
de la hebra molde, ya que carece de actividad exonucleasa para eliminar el ARN cebador. Interviene
entonces la ADN pol I con su actividad exonucleasa 5'→3', eliminando los cebadores y rellenando
los huecos con ADN gracias a su actividad polimerasa 5'→3'. Una vez eliminado y sustituido por ADN
el hueco ocupado por el cebador, la ADN ligasa se encarga de unir los fragmentos recién
sintetizados, mediante la formación de un enlace fosfodiéster. Como acabamos de ver, en E. coli la
ADN polimerasa III realiza la mayor parte de la síntesis de las dos cadenas, mientras que la

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

polimerasa I rellena los huecos dejados por la cadena retrasada. La procesividad de la ADN
polimerasa I es baja, por lo que una vez eliminados y reemplazados unos pocos nucleótidos, ésta se
suelta. De no ser así, resintetizaría la cadena completa de ADN, con el consiguiente derroche de
energía. Las ADN polimerasas tienden a liberarse del ADN después de haber sintetizado fragmentos
de cierta longitud, ello en el caso de la hebra retrasada permite reciclar la enzima para producir un
nuevo segmento; sin embargo, en el caso de la hebra líder se dificultaría la síntesis de fragmentos
largos de ADN. Por este motivo la ADN pol III se ancla firmemente a la hebra molde gracias a su
subunidad anular , que actúa como una pinza molecular, confiriendo a la enzima una gran
procesividad que libera la enzima cuando se detiene. El primosoma está impulsado por la ADN
helicasa y se desplaza a medida que la horquilla de replicación avanza, sintetizando los cebadores
de ARN. El carácter circular del cromosoma bacteriano determina la aparición de tensiones por
superenrollamiento como consecuencia de la separación de las dos hebras parentales y del avance
de la burbuja de replicación. Las topoisomerasas se encargan de eliminar estas tensiones como se
ha comentado anteriormente. En el cromosoma eucariota, que es lineal, también se generan estas
tensiones debido a la "inmovilización" del ADN a las proteínas cromosómicas. Se supone que la
formación de un bucle en la cadena molde de la hebra discontinua podría permitir que las dos
moléculas de holoenzima de ADN pol sintetizasen las dos cadenas hijas en la misma dirección.
Después de avanzar aproximadamente 1000 pb la polimerasa III liberaría el segmento de doble
hebra de la cadena retrasada permitiendo que se forme un nuevo bucle (ver figura).

Modelo de la horquilla
de replicación procariota.
(Fig. 7.10. Cooper y
Hausman. La Célula. 8ª
Edición. 2021. Editorial
Marbán.)

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

2.5. Fidelidad de la replicación del DNA.

La replicación del DNA es el proceso enzimático más preciso de los conocidos en la

actualidad. Se ha estimado que la probabilidad de que un nucleótido determinado se copie
incorrectamente es aproximadamente de 10-9 a 10-10 por par de bases y por ciclo de replicación.
Esta frecuencia de errores tan extremadamente baja se debe a la actividad exonucleasa 3'→5' de
las ADN pol I y III, que les permite una acción de "corrección de pruebas", eliminando las bases mal
apareadas que pudieran ser introducidas erróneamente durante la polimerización. Esta actividad
de la pol III reside en la subunidad , que debe unirse a la subunidad  para ser completamente
funcional.

3. REPLICACIÓN EN EUCARIOTAS

3. 1 ADN polimerasas eucariotas.

El mecanismo de replicación posee muchas similitudes en procariotas y eucariotas, no

obstante existen algunas peculiaridades que dan respuesta a los problemas específicos que
representa la replicación en eucariotas. En eucariotas existen al menos 14 tipos de ADN polimerasas.
Entre las nucleares las más importantes son las denominadas , ,  y . Además, hay una ADN
polimerasa mitocondrial llamada . Las características de las principales ADN polimerasas se
resumen en la siguiente tabla:

    
Compartimento Núcleo Núcleo Núcleo Núcleo Mitocondria
celular
Función biológica Primasa Reparación Replicación Replicación Replicación
del DNA. hebra de la hebra DNA
retardada líder mitocondrial
Número de 4 1 4 4 4 (idénticas)
subunidades
Actividad No No Sí Sí Sí
exonucleasa 3'→5'
Actividad No Si No No No
exonucleasa 5'→3'
Equivalencia con Primasa ADN pol III ADN pol III
ADN polimerasas
procariotas

Las polimerasas , ,  y  se localizan en el núcleo celular y poseen un papel equivalente a

las polimerasas de E. coli. La polimerasa  se encarga de la síntesis del cebador (equivalente a la
primasa procariota) y la  de la síntesis de la cadena retrasada, mientras que la  sintetiza la hebra
líder (ambas equivalentes a la ADN pol III de E. coli). Las polimerasas ,  y  están formadas por
cuatro subunidades. Una de las subunidades de la polimerasa  es responsable de la actividad
primasa, encargada de sintetizar el cebador de ARN de unos 10 nucleótidos, para posteriormente

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

sintetizar un corto fragmento de ADN (20-30 nucleótidos), gracias a la acción de otras subunidades.
La polimerasa  precisa para su función una proteína adicional denominada antígeno nuclear de
células en proliferación (PCNA, Proliferating Cell Nuclear Antigen). Esta proteína podría
desempeñar un papel similar al de la subunidad  de la ADN pol III de E. coli. La polimerasa  también
interviene en la reparación del ADN. La eliminación del cebador de ARN del fragmento de Okazaki
es realizada por una enzima denominada ribonucleasa de solapa o flap ribonuclease en inglés. La
polimerasa  se encuentra en las mitocondrias, por lo que interviene en la replicación del ADN de
este orgánulo.

La maquinaria molecular encargada de la replicación debe contactar con el ADN, para ello
las histonas deben ser desplazadas. La modificación química de las histonas y la remodelación de la
cromatina intervienen en este proceso. Una hipótesis supone que cada nucleosoma es capaz de
desplegarse transitoriamente en dos mitades, desenrollando el ADN. El ADN recién sintetizado es
vuelto a empaquetar rápidamente en nuevos nucleosomas. Se necesita una gran cantidad de
histonas para empaquetar las nuevas moléculas de ADN, por ello los genes de estas proteínas están
repetidos en tándem. Las histonas se producen fundamentalmente durante la fase S.

3.2. Orígenes de replicación en los cromosomas eucariotas y regulación de la replicación. El

replisoma.

La replicación de los cromosomas eucariotas representa mayor complejidad que la de los

procariotas debido a que:

1. Los eucariotas poseen más de un cromosoma (46 los humanos).

2. La longitud de cada cromosoma es mucho mayor que la del cromosoma bacteriano.
3. La replicación de los cromosomas debe producirse de manera simultánea, coordinada y una
única vez durante la fase S de cada división celular.
4. Los orígenes de replicación se agrupan formando las denominadas factorías de replicación,
formadas por decenas o centenares de estos orígenes.

Los sitios de origen de replicación eucariotas son peor conocidos que los correspondientes
procariotas. Sin embargo, el mecanismo general de iniciación es parecido al descrito para E. coli:
determinadas regiones de cada cromosoma son reconocidas por un conjunto de proteínas que
producen la separación de las hebras y permiten el ensamblaje de la maquinaria replicativa y el
inicio de la replicación. Como se ha comentado anteriormente, en eucariotas el proceso se inicia
con la liberación de los orígenes de replicación por parte de las histonas. El primer paso de este
proceso consiste en el reconocimiento y la unión al origen de replicación de un conjunto de
proteínas que forman el denominado complejo de reconocimiento del origen de replicación u ORC
(del inglés, Origin Recognition Complex) durante la fase G1 del ciclo celular. Seguidamente se unen
a los ORC las helicasas, denominadas en eucariotas proteínas MCM (Mini Chromosome Maintenance
protein), dando lugar al denominado complejo pre-replicativo. Las proteínas MCM para activarse
han de ser fosforiladas por la acción de la proteína Cdk2 (Cyclin-dependent kinase 2), la proteína
quinasa 2 dependiente de ciclina. Tanto la división celular como la síntesis de ADN en la fase S del
ciclo celular, están controlados por la fosforilación de proteínas nucleares específicas, realizadas por
proteínas denominadas quinasas (las quinasas son enzimas que fosforilan, es decir añaden grupos
fosfato a otras proteínas). La actividad de estas quinasas que intervienen en distintas fases del ciclo
celular, depende de otras proteínas denominadas ciclinas. Por ello este tipo de quinasas se llaman
CDKs (cyclin-dependent kinases). Las CDKs están presentes en la célula en su forma inactiva, y no
son activadas hasta que interaccionan con las ciclinas, proteínas que se destruyen cíclicamente tras

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

llevar a cabo su función de activación, de ahí su nombre de ciclinas. Hay distintos tipos de Cdks y de
ciclinas. La Cdk2, forma un complejo para ser activada con la ciclina E. Al entrar en la fase S se eleva
la cantidad de ciclina E, formando el complejo Cdk2/ciclina E, que activa a Cdk2, la cual fosforila a
varias proteínas que son incorporadas al complejo pre-replicativo. Además, el complejo Cdk2/ciclina
E activa a otra proteína quinasa denominada DDK, encargada de fosforilar a las proteínas MCM,
activándolas y permitiendo la separación de las hebras y con ello el inicio de la replicación. Por otra
parte, las proteínas MCM fosforiladas no pueden unirse al complejo ORC. Las proteínas MCM
vuelven a estar desfosforiladas en la fase G1, lo que garantiza que la replicación se produce
solamente una vez en cada ciclo celular.

Iniciación de la replicación
en eucariotas. Fig. 17.18.
Cooper y Hausman. La
Célula. 8ª Edición. 2021.
Editorial Marbán.

Después de la separación de las hebras por las helicasas MCM y la formación de las horquillas
de replicación, se forman super-enrollamientos que son resueltos por las topoisomerasas I y II. Se
produce ahora la entrada de la primasa (ADNpol α) y finalmente las polimerasas δ y ε con sus
correspondientes pinzas (PCNA), como se observa en la siguiente figura.

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

Iniciación de la
replicación en
eucariotas. Fig. 6.7.
Allison.
Fundamental
Molecular Biology.
2007. Blackwell
Publishing.

El conjunto de moléculas formado por las proteínas implicadas en el proceso de iniciación y

replicación recibe el nombre de replisoma. Las ADNpol eucariotas delta y épsilon también se asocian
formando un dímero, como en el caso de la ADNpol III procariota, a través del factor replicativo C
(RFC, Replicative Factor C). En eucariotas la helicasa MCM se asocia con otro conjunto de proteínas
que la unen fuertemente al ADN, formando el denominado complejo de progresión del replisoma o
RPC, del inglés replisome progression complex.

Esquema de la replicación bidireccional

y del replisoma en eucariotas. FEN1,
flap endonuclease 1. RPC, replisome
progression complex o complejo de
progresión del replisoma.
Alabert & Groth. Chromatin replication and
epigenome maintenance. Nature Reviews
Molecular Cell Biology 13, 153-167 (2012).

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

Las cromátidas hermanas quedan unidas inmediatamente después de la replicación gracias a un

complejo de proteínas denominado cohesina. Se han propuesto dos modelos para esta unión. El
primero de ellos supone que el replisoma pasa a través del anillo de cohesina quedando unidas las
dos cromátidas hermanas. El segundo propone que las cohesinas se une por delante de la horquilla
de replicación y desde aquí salta a la parte posterior de esta horquilla para unir a las dos cromátidas
hermanas. La cohesina es un miembro del grupo de proteínas encargado del mantenimiento
estructural de cromosomas denominadas SMC en inglés (Structural Maintenance Proteins). La
cohesina está formada por un heterodímero compuesto por las proteínas Smc1 y Smc3, junto con
otras proteínas. Desempeña papeles críticos en la cohesión de las cromátidas hermanas, la
reparación del ADN y en la regulación de la expresión génica. Durante la mitosis las cohesinas son
sustituidas a lo largo de las cromátidas, excepto en el centrómero, por proteínas relacionadas,
denominadas condensinas, que como su nombre indica, son responsables de la condensación de la
cromatina para formar los cromosomas metafásicos. Las condensinas incrementan los bucles del
ADN y se activan mediante fosforilación que depende de una serie de quinasas entre las que se
encuentran el complejo Cdk1/ciclinaB, Aurora quinasas y quinasas similares a Polo (Polo-like). El
complejo Cdk1/ciclina B es un regulador clave de la mitosis.

Las principales características de la replicación eucariota se pueden resumir en los siguientes

puntos:

1. Cada cromosoma eucariota posee varios orígenes de replicación, para acortar el tiempo total del
proceso.
2. La horquilla de replicación avanza hacia los dos extremos opuestos, igual que en el caso de los
procariotas.
3. Determinadas regiones cromosómicas contienen varios orígenes de replicación contiguos,
mientras que otras no contienen ninguno.
4. Los orígenes de replicación pueden ser activados en grupos, cada uno de los cuales se denomina
unidad de replicación o replicón, que comprende entre 3 y 4 orígenes de replicación, de los que
se activa solamente 1
5. Los replicones se agrupan de forma que los orígenes activos de cada replicón quedan juntos,
dando lugar a focos de replicación que puedes ser detectados con el microscopio óptico.
6. No todas las unidades de replicación se activan al mismo tiempo, conforme avanza la etapa S del
ciclo celular se activan nuevas unidades de replicación. En un cromosoma dado, las regiones de
heterocromatina (cromatina altamente condensada, constituida por genes que no se expresan)
se replican más tarde que las regiones de eucromatina (cromatina menos condensada, donde se
localizan genes que se expresan activamente en la célula en cuestión).
7. Puesto que la replicación no se produce de manera simultánea en todas las regiones de un
cromosoma, existe un mecanismo que garantiza que una vez que una región ha sido replicada no
vuelva a serlo, durante el tiempo en que otras zonas aún están sintetizando nuevas copias de
ADN.

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

Organización de los orígenes de replicación en el núcleo celular. El esquema muestra una región cromosómica que
contiene cuatro unidades de replicación (replicones) consecutivas (mostradas en diferentes colores). Cada replicón
contiene en promedio de tres a cuatro orígenes potenciales (círculos azules). Los replicones interactúan formando
grupos en los que los orígenes activos (uno por unidad de replicación; círculos verdes) se juntan dentro del grupo
(cluster en inglés). La imagen de la derecha muestra los focos de replicación identificados en el núcleo mediante
microscopia óptica por el marcaje de biotina-dUTP durante la síntesis de ADN (Fragkos et al. DNA replication origin
activation in space and time. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 2015. 16, 360-374).

3.3. Replicación de los extremos de los cromosomas.

Cada cromosoma en eucariotas está formado por una única molécula lineal de ADN, por lo
que en sus extremos o telómeros se plantean un problema especial de replicación, ya que la hebra
RETRASADA en cada replicación sería acortada si no existiese un mecanismo especial que lo evitase.
Este problema se debe a que la primasa necesita unirse inicialmente al ADN para actuar y el lugar al
que se une no puede ser utilizado como molde, por lo tanto, deja un “hueco” en el ADN que no ha
sido copiado. Ello conduciría a la pérdida de genes y finalmente a la muerte celular. Los telómeros
están formados por secuencias cortas repetidas ricas en G. La enzima telomerasa es capaz de añadir
estas repeticiones en el extremo 3’ de la cadena molde de la hebra retrasada, empleando como
molde un fragmento de ARN que forma parte de su estructura, por tanto, esta enzima es una
ribonucleoproteína con actividad transcriptasa inversa, similar a la que tienen los retrovirus. Una
vez alargada la cadena líder, la primasa puede unirse de nuevo a ella para sintetizar un cebador y la
polimerasa rellena el hueco.

Replicación del extremo de un cromosoma

por la telomerasa. La telomerasa utiliza un
molde interno de ARN para sintetizar
fragmentos cortos de ADN, complementarios
de dicho molde (nótese que el molde forma
parte de la estructura de la telomerasa). Tras
múltiples repeticiones del proceso aumenta
la longitud del extremo del cromosoma,
apareciendo las secuencias repetidas
características del telómero. Nótese que la
telomerasa alarga la hebra molde de la hebra
retrasada dejando espacio para que se una la
ADNpol alfa con actividad primasa y sintetice
un nuevo cebador que permitirá rellenar el
hueco de la hebra retrasada. Al final del
proceso siempre quedará un trozo de ADN
monocatenario en el extremo 3’ de la hebra
molde de la hebra retrasada (Fig. 2.14. Strachan
and Read. Human Molecular Genetics. 1996).

Cuando finaliza el proceso, siempre queda la hebra retrasada más corta que su hebra molde
y por lo tanto hay una región de ADN monocatenario, que adopta una estructura circular, como se
muestra en el esquema inferior, para evitar su degradación al ser confundida por los mecanismos
de reparación del ADN con una zona lesionada del ADN. Esta estructura se denomina “loop” o lazo

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

telomérico, “T-loop” o lazo T, en español. La unión del extremo monocatenario a una secuencia
interna complementaria desplaza a la hebra complementario que inicialmente estaba unida,
creando un segundo lazo, denominado lazo de desplazamiento, lazo D o “D-loop”. Además, la
estructura es estabilizada por distintas proteínas teloméricas denominadas en conjunto complejo
protector, telosoma o shelterin (del inglés shelter, refugio).

Estructura de los telomeros. (A) El

ADN telomérico termina en un
segmento de ADN monocatenario. (B)
el T-loop se forma cuando el extremo
monocatenario se une a una secuencia
interna complementaria, desplazando
a la hebra que estaba unida, la cual da
lugar al D-loop. El complejo queda
estabilizado por un conjunto de
proteínas (shelterin) que forman el
telosoma. (Fig. 6.24. Cooper y
Hausman. La Célula. 8ª Edición. 2021.
Editorial
Esta enzima ha despertado un gran interés en los últimos Marbán.)
años ya que se ha relacionado tanto
con el envejecimiento como con el cáncer. Se ha comprobado que en muchas células adultas el gen
que codifica la telomerasa se inactiva, de forma que las células pueden dividirse sin perder
información genética un número determinado de veces, superado el cual la célula muere. Por otra
parte, las células tumorales expresan esta enzima por lo que inhibidores de la telomerasa podrían
emplearse como compuestos antitumorales. La telomerasa en la actualidad está siendo objeto de
intensa investigación y es de esperar que ello permita obtener resultados aplicables a la clínica en
los próximos años.

3.4. La replicación en relación con el ciclo celular.

Aunque ya hemos hablado de las fases del ciclo celular que guardan relación con la
replicación, conviene recapitular para aclarar los conceptos. El ciclo celular es el conjunto de
acontecimientos ordenados que conducen a la replicación del ADN y posteriormente a la división
de la célula. Estos acontecimientos se producen de manera cíclica, de aquí el nombre de ciclo celular.
Por tanto, la replicación del ADN debe tener lugar antes de que la célula se divida. Conviene que el
alumno tenga presente en qué momento se inicia la replicación del ADN y como se encuentran los
cromosomas dentro de las distintas fases del ciclo celular. Aunque el ciclo celular será estudiado en
otro tema, veremos aquí algunas de sus características que nos permitirán enmarcar el proceso de
la replicación.

El ciclo celular puede dividirse en cuatro fases distintas:

1. Fase intermedia G1 (del inglés gap). Los hechos que determinan si el ADN se va a replicar o no
suceden en esta fase. En ella se sintetizan muchos de los factores y enzimas necesarias para la
replicación del ADN. Sobrepasado un punto de restricción existente en la fase G1, se
desencadenan una serie de acontecimientos que irreversiblemente conducen a la división
celular. Las células que se van a dividir alcanzan un tamaño determinado, las que no se dividen
entran en una fase quiescente, G0.

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

2. Fase de síntesis S. Se inicia la síntesis del ADN en muchos orígenes distintos, apareciendo
múltiples horquillas de replicación, sólo visibles con el microscopio electrónico.
3. Fase intermedia G2. La célula se prepara para entrar en mitosis. Ha concluido la síntesis de ADN
de cada uno de los cromosomas. Las dos copias de cada cromosoma aparecen unidas por el
centrómero, constituyendo cada una de ellas una cromátida. Los cromosomas se condensan, es
decir, la cromatina se empaqueta para facilitar su reparto equitativo entre las células hijas, y se
producen los factores necesarios para la mitosis.
4. Mitosis. Los cromosomas se distribuyen entre las células hijas.

El periodo de tiempo transcurrido entre dos mitosis se denomina interfase. Los cromosomas
no son visibles durante la interfase, debido a que la cromatina se desempaqueta para facilitar la
expresión de los genes y/o la replicación. El siguiente esquema representa los principales
acontecimientos del ciclo celular:

profase metafase anafase

(inicio condensación)

ADN replicado

División
Preparación celular
para mitosis
M
G2
Quiescencia
G0

S G1
ADN descondensado
Replicación
del ADN
Punto de restricción

M= mitosis
G1= gap 1
S= síntesis
horquillas de replicación G2= gap 2

Esquema del ciclo celular en relación con la replicación y

condensación del ADN en los cromosomas. Las líneas más
externas representan el ADN de un cromosoma y la
estructura circular junto a él, la célula con su núcleo.

1. APLICACIONES DEL CONOCIMIENTO DE LA REPLICACIÓN EN LA ACTIVIDAD

CLÍNICA.

Lupus eritematoso sistémico y PCNA.

El Lupus es una enfermedad autoinmune se manifiesta con pronóstico y tratamientos variables.

Frecuentemente aparece artritis o artralgia, fiebre, pérdida de peso, puede haber manifestaciones
que afectan prácticamente a cualquier órgano o tejido, incluyendo la sangre, el riñón, etc.

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 Módulo 2, unidad 1: Replicación.

Aproximadamente un 3% de los pacientes presentan anticuerpos anti-PCNA y su presencia es útil

para el diagnóstico de la enfermedad.

Helicasas y síndrome de Werner.

Las mutaciones del gen WRN causan el síndrome de Werner, una enfermedad poco frecuente que
se hereda de forma autosómica recesiva. Este gen codifica una helicasa que interviene tanto en la
replicación como en la reparación del ADN. Las alteraciones en pacientes con síndrome de Werner
suelen comenzar en la segunda década de la vida, muestran claros signos de envejecimiento
prematuro y presentan un elevado riesgo de enfermedades clínicamente importantes, asociadas a
la edad, como el cáncer, la enfermedad cardiovascular aterosclerótica, diabetes mellitus y
osteoporosis. Los pacientes pueden morir prematuramente a los 40 o 50 años de cáncer o
enfermedad cardiovascular.

La topoisomerasa bacteriana es una diana terapéutica.

La ADN girasa bacteriana (topoisomerasa) es la diana molecular de algunos antibióticos que inhiben
esta enzima mucho más que la eucariota. La novobiocina bloquea la unión del ATP a la girasa, por
lo que la girasa deja no pude eliminar el superenrollamiento que aparece en los extremos de la
horquilla de replicación. Como consecuencia de ello se bloquea la replicación del cromosoma
bacteriano y la célula no se puede dividir. Por otra parte, las quinolonas como el ácido nalidíxico y
la ciprofloxacina, bloquean la actividad ligasa pero no la nucleasa, por lo que originan roturas en el
ADN, también bloquean la replicación y producen la muerte de la bacteria. Estos antibióticos son
muy utilizados para tratar distintas infecciones entre las que se encentran las urinarias.

BIBIOGRAFÍA BÁSICA

-Cooper y Hausman. La Célula. Capítulo 7. Replicación, mantenimiento y reorganización del ADN

genómico. 8ª Edición. 2021. Editorial Marbán.

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