Producción de Trichoderma 04
Producción de Trichoderma 04
Producción de Trichoderma 04
se almacenan. Para reactivar los indefinida. Se debe utilizar un las conidias) se coloca 1,8 ml de
bulbos liofilizados se les añade agente crioprotector par evitar ella en tubos de vidrio borosi-
suero fisiológico al 0,9 % o agua el daño de las conidias durante licatado, (criotubos), estos son
con Tween- 80 al 0,1 %. el proceso de congelamiento y llevados a -20 ºC por 2 horas
descongelado del antagonista. para una preadaptación al frío
d) Cepario en La mezcla crioprotectora esta y permitir que el crioprotector
Nitrógeno líquido. compuesta por agua destilada penetre y envuelva al microor-
En nitrógeno líquido se alcanzan estéril, 10 % de glicerol o 15 % ganismo. Posteriormente son
temperaturas de -196 ºC, lo de sulfato de dimetila, en la cual llevados a los recipientes con
que permite conservar los se suspenden las conidias. Nitrógeno líquido.
08 Preparación
del sustrato y cultivo
Entre los sustratos naturales crecimiento óptimo del hongo, lidad de los sustratos, los que
para la producción de inóculo y como este es un proceso de durante el proceso de auto-
de hongos antagonistas se fermentación estática, el con- claveado no sufren de la gran
encuentran granos de trigo, tenido de oxígeno es menor lo compactación que ocurre en
avena, cebada, centeno, arroz, que afecta la fermentación. las bolsas, Se debe disponer
maiz, soya, cabecilla de arroz de botellas con un diámetro de
y salvado de trigo. La a) Cultivo en frascos: abertura que facilite el vacia-
fermentación en estado sólido La mayor ventaja de este miento de los sustratos que ya
no requiere de procedimien- método, es el mejor control han esporulado.
tos sofisticados de formulación de la contaminación y de la ca-
previo a su uso. Los granos
o cualquier otro tipo de mate-
rial sobre el que saeha desar-
rollado el hongo pueden ser
secados moloidos y aplicados.
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b) Cultivo en bolsas:
El cultivo en bolsas tiene varias
ventajas entre las que están:
Mayor volumen de
producción en un solo lote,
con el consiguiente ahorro de
energía eléctrica y humana. c) Proceso inoculación de los sustratos, en
de esterilización. frascos o en bolsas, debe
Posibilidad de remover Se utiliza calor húmedo en reunir los requisitos mínimos
el contenido de la bolsa cada autoclave y es una de las etapas para esta función y estar total-
cierto tiempo. cruciales en la producción mente aislado del resto de la
masiva. En este proceso se instalación. Lo más conveni-
Más económico el proceso incorporan los sustratos en ente es realizar la inoculación
productivo. los envases elegidos, frascos o en una cámara de flujo lami-
bolsas, para frascos se ocupan nar.
Manipulación más sencilla 100 grs. de sustrato y en bolsas Para la inoculación se prepara
en el momento de cosechar el 300 grs. la humedad de este una suspensión de inóculo
producto. debe ser de aproximadamente con una concentración de
un 25%. Tanto las bolsas como 108-1010 conidias /ml. De esta
Si embargo, en nuestra las botellas deben resistir la suspensión se emplean aproxi-
experiencia este método temperatura del autoclave. madamente 10 ml para inocu-
siempre presentó nayor nivel de El proceso de autoclaveado lar cada uno de los frascos o
contaminación, por otra parte se realiza a una presión de 2 10 ml por cada 100 grs. de
la manipulación debe ser muy atmósferas, por 45 minutos a sustrato.
cuidadosa ya que es muy facil 121°C Los frascos o bolsas inocula-
la ruptura de los envases y la dos y convenientemente ro-
pérdida del contenido. d) Inoculación tulados se llevan a la sala de
e Incubación incubación a una temperatura
El lugar donde se realiza la de 27 ± 1ºC por 15 días.
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09 Producto
final
Las bolsas o frascos con el ino- esto se requiere la utilización necesite aplicar. Entre las venta-
culo esporulado se trasladan a de un molino que garantice un jas que tiene esta nueva forma
una sala donde se realizará la adecuado tamaño de partícu- de presentación están:
cosecha, y según la formulación las adecuado (criba de 0,8mm).
que se escoja se realizará el Previo al proceso de molienda, Se elimina el inconveniente
proceso de envasado o se lle- el sustrato, granos de cereales, de pérdida de viabilidad de los
vará al secado para la posterior donde ha estado creciendo el conidios debido a la humedad.
separación de los conidios. hongo será secado en estufa
con aire forzado a 60ºC por 24 Los conidios del hongo
a) Producto hrs. Alcanzando una humedad se aplican junto con el sustrato
final en polvo. de 5-7 %. Una vez obtenido donde estuvo creciendo, lo
En la presentación en polvo, el el polvo se envasará en con- que garantiza una fuente de
propio sustrato que se utiliza tenedores herméticos con la nutrientes segura en un
para la producción masiva será cantidad adecuada para una ambiente hostil dada la
el vehículo portador de los coni- superficie determinada, de acu- intensidad de la competencia.
dios de Trichoderma spp. Para erdo al cultivo donde se Para las aplicaciones foliares
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esto es muy importante, pues conidios sin formular. Entre los seco en el primero de ellos y
la capacidad para competir es portadores inertes que pueden sometiéndose al vibrado y gol-
esencial para el establecimiento ser usados en estas formula- peado de la máquina, durante
del antagonista en la filosfera. ciones están: attapulgita, mont- el tiempo necesario para sepa-
morillonita, kaolinita, diatomita, rar y tamizar las esporas. Pos-
El período de talco y polvos orgánicos. teriormente estas se pueden
almacenamiento puede separar en ambiente limpio y
prolongarse por un tiempo Otra forma de obtener el polvo formular con dextrosa anhidra
superior a los 6 meses, siempre es por medio de la agitación del para su envasado al vacio. Estos
que se conserve en un local sustrato seco sobre una batería envases contienen el inóculo
con un ambiente fresco y seco. de tamices a los cuales se les suficiente para tratar una hec-
han agregado esferas de cristal, tárea de cultivo y se han llevado
La ventaja más notable de para lo cual se utiliza un ROTAP, a un kilogramo de formulación.
todas las enumeradas es que en el cual estan sobrepuestos
en las formulaciones en polvo, los tamices de mayor a menor
se mantiene la viabilidad de los calibre, ubicándose el sustrato
10 Control de calidad de
Trichoderma spp.
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conidios, ese será el periodo Como se indicó, la viabilidad es meses si el contenido de hume-
óptimo de incubación, para una de las pruebas de control dad es menor del 10%.
conocer este se precisa hacer de calidad esenciales. Por lo que
una dinámica de esporulación. es necesario conocer cuales son Temperatura:
Este recuento se efectua en los factores que pueden afec- La temperatura es un factor
cámara de Neubauer. tarla. Entre estos están que influye significativamente
sobre la viabilidad de los coni-
Comprobación de la viabi- Exposición a la luz solar: dios. Las temperaturas bajas son
lidad a través de pruebas de la vida media de los conidios apli- más favorables para mantener
germinación conidial: cados sobre las hojas expuestas niveles de viabilidad adecuados
deben obtenerse valores entre a la radiación solar es de 5-10 en condiciones de almace-
85 y 100% de viabilidad. Para dias, dependiendo de las condi- namiento.
el caso de los biopreparados ciones ambientales. Razón por
que tengan como destino la la cual es muy importante que Metodología para la
aplicación para el control de un las aplicaciónes se realicen tem- realización de las
patógeno foliar son deseables prano en la mañana o por la pruebas de control de
calidad
los valores mas altos de viabili- tarde.
dad, dado que el ambiente de 01 Viabilidad
la filosfera no es óptimo para la Contenido de humedad: de los conidios
acción del antagonista y mien- La humedad es un factor deter- Para biopreparados obtenidos en
tras mayor sea la viabilidad de minante en la supervivencia medio sólido, utilizando granos
los conidios mayores probabi- de los conidios. Cuando estos de cereales como sustrato para
lidades de éxito pueden espe- están secos, pueden mantener el crecimiento.
rarse. un nivel de germinación alto
durante meses. La viabilidad de Preparar slides con
Pureza: los conidios sin secar, aunque medios nutritivos como papa
con esta prueba se determina estén almacenados a bajas tem- dextrosa agar (PDA), Saboraud
la proporción del agente de peraturas se reduce a porcen- dextrosa agar extracto de
control microbial en relación tajes muy bajos. Por el contrario levadura (SDAY), Sabo-raud.
con los posibles contami- si los conidios se mantienen Tratar de que quede una
nantes. Conocer si existen secos la viabilidad permanece película muy delgada que
otros microorganismos como alta durante meses. El polvo facilite el conteo de conidios.
posibles contaminantes es puro de conidios sin formular
esencial para mejorar el puede almacenarse en recipien- Preparar cámaras húmedas.
proceso de producción y tes herméticos a 4 ºC y man- Los slides deben colocarse
formulación. tener una viabilidad alta durante en cámara húmeda, pues la
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