PROFESSIONAL STANDARD

OF THE PEOPLE’S REPUBLIC OF CHINA

NY/T 1331-2007
Enumeration of Colony of Psychrotrophic
Microorganisms, Total Aerobic Bacterial Spores
and Thermophilic Aerobic Bacterial Spores in
Milk and Dairy Products

Determinación de bacterias psicrófilas, brotes aeróbicos y brotes aeróbicos termófilos en leche y

productos lácteos
Primera parte Parte 1: Determinación de bacterias psicrófilas en la leche
1 Alcance
Esta sección especifica el método para determinar el número de bacterias psicrófilas en la leche.
Esta sección se aplica a la determinación del número de bacterias psicrófilas en la leche cruda y la
leche pasteurizada.

2 referencias normativas
Las cláusulas en los siguientes documentos se convierten en los términos de esta sección a través
de las referencias en esta sección. Para su referencia, con documentos, todas las modificaciones
posteriores (excluyendo correcciones) o revisiones no se aplican a esta sección, sin embargo,
anima a si las últimas versiones de estos documentos son parte de las partes de este acuerdo .
Para referencias sin fecha, la última versión se aplica a esta sección.
GB / T 4789. 1 Principios generales del examen microbiológico de la higiene de los alimentos
GB / T 4789.28-2003 Higiene de los alimentos - Exámenes microbiológicos - Métodos de tinción,
medios de cultivo y reactivos

3 Términos y Definiciones
Los siguientes términos y definiciones se aplican a esta sección.
3.1 Microorganismos psicrotróficos de bacterias psicotrópicas
Se refiere al cultivo aeróbico a 6.5 ° C durante 10 días, formando colonias contables de bacterias,
levaduras y mohos en placas de agar MPC.
Agar de placa de leche de agar 3.2 MPC agar
La placa de leche cuenta el agar.
4 Principio
Las muestras se incubaron en agar MPC a 6,5 ° C durante 10 días. Se contaron las colonias y se
calculó el número de bacterias psicrófilas por ml de muestra.
5 Diluyentes y medios de cultivo
5.1 Solución salina proteica de la rodilla
5.1.1 Composición
Enzima hidrolizada de caseína vena 1.0 g
Cloruro de sodio 8.5 g
Agua destilada 1000 ML
5.1.2 Método de fabricación
Los delfines hidrolizados enzimáticamente y el cloruro de sodio se disolvieron en agua destilada, y
el pH se ajustó a 7,0 ± 0,1 con una fracción másica de solución de hidróxido de sodio al 15%.
Alícuotas de tubos de ensayo y matraces, cada tubo de 9 ml, cada botella de 90 ml o 225 ml, el
error relativo no supera el 2%. Después del sellado, esterilice en autoclave a 121 ° C durante 15
min.
5.2 tampón de fosfato: Según GB / T 4789-28-2003 3.22 disposiciones preparadas.
Medio de agar 5.3 MPC
5.3.1 Composición
Tryptone 5.0 g
Extracto de levadura 2.59
Glucosa 1.0 g
Leche en polvo descremada 1.0 g
Agar 10 g-15 g
Agua destilada 1000 ML
Nota 1: La leche desnatada en polvo no debe contener sustancias antibióticas.
Nota 2: La cantidad de agar depende del grado de solidificación.
5.3.2 Método de fabricación
Los ingredientes en 5.3.1 excepto el agar fueron disueltos en agua destilada y el pH fue ajustado a
7.0 ± 0.1 con una fracción masiva de solución de hidróxido de sodio. Agregue agar y caliente a
ebullición para disolver el agar. Si es necesario, use dos capas de gasa intercaladas entre filtros de
algodón absorbente y dispense el matraz. Después de sellar, autoclave a 121 ° C y 1 ° C durante 15
min. Si este medio se usa inmediatamente, se enfría a 45 ° C en un baño de agua (6.3), de lo
contrario, el medio esterilizado se almacena a una temperatura entre 0 ° C y 5 ° C en la oscuridad
durante no más de 30 días. Para evitar retrasar el tiempo de vertido del medio, caliente el medio
de descongelación antes de la prueba microbiológica. Luego, se enfrió a 45 ° C en un baño de agua
(6.3).
6 Equipos y materiales
6.1 Equipos y materiales de laboratorio de microbiología.
6.2 Incubadora bioquímica: 6.5 ° C inhabilidades 0. 5C.
6.3 baño de agua: 45 ° C inhabilidades 1 ° C.
6.4 placas de Petri estériles: diámetro 90 mm.
6.5 Pajuelas estériles.
7 muestreo
Muestras tomadas de acuerdo con GB / T 4789. 1 implementación.
8 procedimientos de prueba
El procedimiento de prueba de recuento de psicrófilos se muestra en la Figura I.

Muestra
Haga varias diluciones apropiadas
Seleccione tres diluciones apropiadas cada una con 1 ml cada una y agréguelo a una placa de Petri
estéril
Cantidad apropiada de medio de agar MPC por plato
6.5 ° C ± 0.5 ° C del suelo 10d
Conteo de colonias
Informes
9 pasos de operación
9.1 Procesamiento de muestras
9.1.1 Gire rápidamente el recipiente de la muestra a analizar 25 veces para mezclar la muestra de
manera uniforme y evitar la formación de espuma. A continuación, abra el contenedor de muestra
de embalaje con procesamiento aséptico.
9.1.2 con una pipeta estéril (6,5) se aplicó al tubo de succión sujeto 1 ml que contiene 9 ml de
diluyente estéril (5.1 o 5.2) en (o sujeto a la muestra ML que contiene 90 ML matraz diluyente
estéril, o Se colocó una muestra de 25 ml en un matraz que contenía 225 ml de diluyente estéril y
se agitó por completo para obtener 10-1 diluciones uniformes.
9.1.3 Use una pipeta IML estéril para aspirar 10-1 y diluir 1 ml. Agregar a un tubo de ensayo que
contenga 9 ml de diluyente estéril. Agite el tubo y mezcle bien para obtener una dilución 10-2. Siga
el procedimiento anterior y realice una dilución incremental de 10 veces. Para cada dilución
incremental, reemplace con una pipeta estéril de 1 ml.
9.2 Inoculación y cultivo
9.2.1 La estimación de la contaminación de bacterias psychrotrophic muestra de elegir tres
diluciones adecuadas se hicieron en incrementos de 10 veces, mientras que la dilución, es decir, la
dilución cambio 1ML pipeta de aspiración de la solución diluida en placas de Petri estériles Dentro
de (6.4), inocular dos platos en cada dilución.
9.2.2 Verifique que la temperatura del medio (5.3) no exceda los 46 ° C. Luego, vierta de inmediato
12 ml - 15 ml de medio de cultivo en cada plato.
9.2.3 Gire con cuidado la placa de cultivo de modo que la muestra de inóculo y el medio de cultivo
se mezclen uniformemente y se coloquen en una posición horizontal para coagular la mezcla. El
tiempo desde la preparación de la primera dilución hasta la mezcla del inóculo y el medio de
cultivo no debe exceder los 15 minutos.
9.2.4 Al mismo tiempo que la inoculación, se realizó una prueba en blanco con la dilución IML.
9.2.5 Después de fraguar el agar, las placas de Petri se apilan, se invierten en la incubadora (6.2),
se incuban a 6.5 ° C ± 0.5 ° C durante 10 días y no se apilan más de 6 placas de Petri.
9.3 Conteo de colonias
9.3.1 Cuando se cuentan las colonias de placas, se pueden observar a simple vista y se deben
contar pequeñas colonias. Use una lupa si es necesario.
9.3.2 Las colonias contagiosas se consideran colonias únicas. Si las colonias cubiertas son menos
de 1/4 del área de la placa, cuente las colonias de las secciones de la placa no afectadas y calcule
la cantidad relativa de la placa completa, si las colonias cubiertas cubren más de 1/1 del área de la
placa 4, no debe contar.
Cálculo de 10 resultados
10.1 Mantenga la placa de Petri que contiene de 10 a 300 colonias.
Use la fórmula (1) para calcular el número de bacterias psicrófilas por mililitro de muestra:
Arts. (ni + 0.ln2 + O.Oln3) d (1)
En la fórmula:
N-la cantidad de bacterias psicrofílicas en la muestra, ufc / ml;
) III c - el número total de colonias contadas en todos los platos retenidos;
Ni: el número de platos en la primera dilución en una placa de Petri que contiene 10-300 colonias;
N2: el número de platos de la segunda dilución en el plato que contiene de 10 a 300 colonias;
N3: el número de platos en la tercera dilución de la placa de Petri retenida que contiene 10 - 300
colonias;
Factor de dilución D para la primera dilución.
El resultado conserva dos cifras significativas.
Ejemplo: El número de colonias de bacterias psicrofílicas da los siguientes resultados (2 platos por
dilución):
- 168 y 215 colonias en la primera dilución (10-2);
- 14 y 25 colonias en la segunda dilución (10-3);
- Menos de 10 colonias en la tercera dilución (10-4).
(n, + O.1n2 + O.Otn3) d 168 + 215 + 14 + 25 (2 + 0.1 x 2) X 10-2 422 2 19182 U. ULL
Para los resultados anteriores, se informó que el número de bacterias psicrofílicas en la muestra
era de 19,000 o 1. 9 X 104CfU / ML.
10.2 Si el número de colonias en todas las placas de dilución es inferior a 10, el resultado se
informa como "El número de psicrófilos en la muestra es inferior a 10 X 1 / d ufc / ml", donde d es
la dilución de la dilución más baja.
10.3 Si el número de colonias en todas las placas de dilución es más de 300, se calcula una
estimación a partir de la placa más cercana a 300 colonias por el recíproco de la dilución más alta
correspondiente. Los resultados se informan como "estimaciones de bacterias psicrofílicas por
mililitro de muestra".
11 Repetibilidad
La diferencia absoluta entre los resultados de dos pruebas independientes en condiciones
repetitivas no es mayor al 30% del resultado más bajo, y la premisa es que el caso de más del 3%
del resultado más bajo no es más del 5%.

Segunda parte
Parte II: Determinación del número total de brotes aeróbicos
Alcance
Esta sección especifica el método para determinar el número total de brotes aeróbicos en leche y
productos lácteos.
Esta sección se aplica a la determinación del número total de brotes aeróbicos en leche cruda y sus
productos.
2 referencias normativas
Las cláusulas en los siguientes documentos se convierten en los términos de esta sección a través
de las referencias en esta sección. Para su referencia, con documentos, todas las modificaciones
posteriores (excluyendo correcciones) o revisiones no se aplican a esta sección, sin embargo,
anima a si las últimas versiones de estos documentos son parte de las partes de este acuerdo .
Para referencias sin fecha, la última versión se aplica a esta sección.
GB / T 4789.1 Reglas generales para el examen microbiológico de la higiene de los alimentos
GB / T 4789.28-2003 Higiene de los alimentos - Exámenes microbiológicos - Métodos de tinción,
medios de cultivo y reactivos
3 Términos y Definiciones
Los siguientes términos y definiciones se aplican a esta sección.
3.1 Número total de brotes aeróbicos esporas bacterianas aeróbicas totales

sobreviven y se cultivaron a 36 ℃ 48h número total de colonias contadas puede formarse sobre
Esto significa que en condiciones aeróbicas, el tratamiento térmico fue de 80 °.] C 10 min,

las placas de agar MPC.

Agar de placa de leche de agar 3.2 MPC agar
La placa de leche cuenta el agar.
4 Principio

se calentó a 80 ℃ 10 min, en el cultivo de agar MPC 48 h, se contaron las colonias en las

Una cierta cantidad de muestra de espécimen líquido o de dilución principal muestra similar, que
condiciones de 36 ° C, calculado por mililitro (g) sujeto borrador La cantidad de brotes aeróbicos
en el total.

5 Diluyentes y medios de cultivo

5.1 Solución salina de proteínas
5.1.1 Composición
Enzima hidrolizada de caseína vena 1.0 g
Cloruro de sodio 8.5 g
Agua destilada 1000 ML
5.1.2 Método de fabricación
La hidrólisis enzimática de peptona de caseína y cloruro de sodio se disuelven en agua destilada,
con una proporción en masa de solución de hidróxido de sodio al 15% se corrigió a pH 7,0 0,1 con
discapacidades. Alícuotas de tubos de ensayo y matraces, cada tubo de 9 ml, 90 n botellas o 225
ml, el error relativo no supera el 2%. Después de sellar, autoclave a 121 ° C y 1 ° C durante 15 min.
5.2 tampón de fosfato: Según GB / T 4789.28-2003 3.22 disposiciones para la preparación.
Medio de agar 5.3 MPC
5.3.1 Composición
Tryptone 5.0 g
Extracto de levadura 2.5 g
Glucosa 1.0 g
Leche en polvo descremada 1.0 g
Agar 10 g-15 g
Agua destilada 1000 ML
Nota 1: La leche desnatada en polvo no debe contener sustancias antibióticas.
Nota 2: La cantidad de agar depende del grado de solidificación.
5.3.2 Método de fabricación
Los componentes distintos de agar en 5.3.1 se disolvieron en agua destilada y el pH se ajustó a 7,0
± 0,1 con una fracción másica de solución de hidróxido de sodio al 15%. Agregue agar y caliente a
ebullición para derretir el agar. Si es necesario, use dos capas de gasa intercaladas entre filtros de
algodón absorbente y dispense el matraz. Después de sellar, autoclave a 121 ° C y 1 ° C durante 15
min. Si este medio se usa inmediatamente, se enfría a 45 ° C en un baño de agua (6.3). De lo
contrario, el medio esterilizado se almacena a una temperatura de 0 ° C a -5 ° C en un lugar oscuro
durante un período de no más de 30 días. Para evitar retrasar el tiempo de vertido del medio,
caliente el medio de descongelación antes de la prueba microbiológica. Luego enfríe a 45 ° C en un
baño de agua (6.3).
6 Equipos y materiales
6.1 Equipos y materiales comunes para laboratorios de microbiología.
6.2 incubadora: 36 ° C suelo 1 ° C.
6.3 Baño de agua: 1 ° C a 45 ° C del suelo.
6.4 baño de agua: 80 ° C ° C suelo 1 ° C.
6.5 Placas de Petri: Diámetro 90 nun.
6.6 pajas estériles.
6.7 Tubos de ensayo estériles.
7 muestreo
Muestras tomadas de acuerdo con GB / T 4789. 1 implementación.
8 procedimientos de prueba
El procedimiento de detección de brotes aeróbicos totales se muestra en la Figura 2.
Muestra
Muestra sólida 10 g + dilución 90 ML
Muestra líquida
80 ° C, calentando 10 min
Haga varias diluciones apropiadas
Seleccione la dilución adecuada para tomar IML por separado y agregue a la placa de Petri estéril
Cantidad apropiada de medio de agar MPC por plato
36 ° C suelo 1 ° C 48 h suelo 2 h
Conteo de colonias
Informes
Figura 2

9 pasos de operación
9 .1 Procesamiento de muestra
9.1.1 Abra el contenedor de muestra para ser probado mediante manipulación aséptica. Las
muestras líquidas deben protegerse de la formación de espuma.
9.1.2 Pesar asépticamente el registro de muestras sólidas o semisólidas (o 25 g) en un matraz
cónico que contiene 90 ml (o 225 ml) de diluyente estéril (5.1 o 5.2) precalentado a 45 ° C ( Se
coloca la cantidad adecuada de perlas de vidrio en el vial y se hacen 10-1 diluciones primarias
sacudiendo bien (si es necesario con un homogeneizador homogeneizador o mortero estéril).
9.2 Tratamiento térmico
9.2.1 con una pipeta estéril (6,6) para dibujar muestra líquida como, semi-sólido o sólido-como
dilución principal médica 5 ml- tubos de 10 ml estériles (6.7), se observa que la muestra no fue
expuesto a la superficie y más allá La pared interna del tubo de ensayo se encuentra a 2 cm por
debajo de la superficie del agua.
9.2.2 Coloque inmediatamente el tubo de ensayo anterior en un baño de agua (6.4) a 80 ° C y 1 ° C,
de forma que el nivel de líquido en el tubo de ensayo esté al menos 4 cm por debajo de la
superficie del agua.
9.2.3 Tratamiento térmico 10 minutos suelo 1min. Coloque un termómetro en el tubo de control
para determinar la temperatura. El tiempo de calentamiento de la solución de muestra en el tubo
de ensayo no debe exceder los 5 minutos.
9.2.4 Retire el tubo con tratamiento térmico y colóquelo inmediatamente en agua corriente a
menos de 20 ° C para enfriarlo.
9.3 Preparación de otros diluyentes
Usando una pipeta estéril de 1 ml (6.6), pipetee 1 ml de muestra tratada con calor en un tubo de
ensayo que contenga 9 ml de diluyente estéril, agite el tubo y mezcle bien para obtener una
dilución de 10 veces (detección de líquido). Muestra 10-1 dilución o muestra sólida 10-2 dilución).
De acuerdo con el método anterior, realice una dilución incremental de 10 veces, de modo que
una vez cada incremento, use una pipeta estéril de 1 ml.
9.4 Inoculación y cultura
9.4.1 Con base en la estimación de la cantidad de yemas en la muestra, seleccione la dilución
apropiada, es decir, al seleccionarla correctamente, haga al menos una - 150 colonias crecen en al
menos un plato después de que se complete el cultivo. Al mismo tiempo que se realizó la dilución
incremental de 10 veces, se extrajo una pipeta de 1 ml a la solución de dilución y la solución
diluida se colocó en una placa de Petri estéril, y se inocularon dos placas en cada dilución. 9.4.2
Verter inmediatamente 12 ml - 15 ml de medio de agar MPC que se ha descongelado y enfriado a
45 ° C y 1 ° C en cada placa de Petri.
9.4.3 Gire con cuidado la placa de cultivo de modo que la muestra de inóculo y el medio de cultivo
se mezclen uniformemente y se coloquen en posición horizontal para coagular la mezcla. El
tiempo desde el final del tratamiento térmico hasta la mezcla de la muestra de inóculo y el medio
de cultivo no debe exceder los 15 min.
9.4.4 Mientras se inocula la solución de muestra, use una dilución de 1 ml para la prueba en
blanco.
9.4.5 Una vez que se ha fijado el agar, las placas se apilan, se invierten en la incubadora (6.2) y se
incuban a 36 ° C, 1 ° C durante 48 hy 2 h.
Nota: Para evitar la propagación de bacterias que no se pueden contar, se pueden tomar las
siguientes medidas:
- Después de que la mezcla en la placa de Petri se ha solidificado, una capa (aproximadamente 5
ml) del medio también se mantiene en estado líquido;
- Después de que la mezcla en la placa de Petri se haya solidificado, voltee la placa de Petri
Coloque un trozo de papel de filtro en la tapa de la placa de Petri y coloque unas gotas de glicerol
en el papel de filtro.
9.5 Conteo de colonias
9.5.1 Al contar las colonias de placas, observe a simple vista y, si es necesario, use una lupa.
9.5.2 Las colonias contagiosas se consideran colonias únicas. Si la porción cubierta por las colonias
contaminadas es menor que 1/4 del área de la placa, se cuentan las colonias de la porción de placa
no afectada y se calcula la cantidad relativa de la placa completa. Si la parte cubierta de la colonia
es más de 1/4 del área de la placa, no debe contarse.

Cálculo de 10 resultados
10.1 Mantenga el plato de cultivo que contiene 10 - 150 colonias.
Calcule el número total de brotes aeróbicos por mililitro o por gramo de muestra usando la
ecuación (2):
Arts. (ni + 0.in2) d (2)
Donde: N-el número total de brotes aeróbicos en la muestra, cfu / niL (g);
Aprender c: el número total de colonias contadas en las placas de Petri retenidas;
N1: el número de platos en la primera dilución en una placa de Petri que contiene de 10 a 150
colonias;
N2: el número de platos de la segunda dilución en la placa de cultivo que contiene 10-150
colonias;
Factor de dilución D para la primera dilución.
El resultado conserva dos cifras significativas.
Ejemplo:
El recuento total de brotes aeróbicos arroja los siguientes resultados (2 platos por dilución):
- 86 y 101 colonias en la primera dilución (100);
- 8 y 12 colonias en la segunda dilución (10-1).
E. 86+ lot + 12 (nl + O.ln2) d- (2 + 0.1 x 1) x loo 199 - = dos más =, piezas. 6 B. Yo
Para los resultados anteriores, el número total de yemas en la muestra se informa como 95 o 9.5 x
101 ufc / ml.
10.2 Si todas las diluciones fueron menos que el número de colonias en la placa de Petri 10, los
resultados se informaron como "muestra mantenga menor que el número total de brote aeróbico
10 X L1d ufc / ml (g)", donde d es la dilución mínima dilución.
10.3 "brotes el número total de la muestra mantenga aeróbicas más grandes que 150 x L1d ufc /
ml (g)" Si el número de colonias en la placa de Petri todas las diluciones son más de 150, los
resultados son reportados como, donde d es la dilución de la dilución más alta .

Tercera parte
Parte III: Determinación de brotes aeróbicos termófilos
1 Alcance
Esta sección especifica el método para la determinación de brotes aeróbicos termófilos en leche y
productos lácteos.
Esta sección se aplica a la determinación de brotes aeróbicos termófilos en leche cruda y sus
productos.
2 referencias normativas
Las cláusulas en los siguientes documentos se convierten en los términos de esta sección a través
de las referencias en esta sección. Para los documentos de referencia con fecha, todas las
modificaciones posteriores (sin incluir contenido de erratas) o revisiones no se aplican a esta
sección, sin embargo, aliente a las partes a llegar a un acuerdo de acuerdo con esta sección para
estudiar si se puede usar la última versión de estos documentos. . Para referencias sin fecha, la
última versión se aplica a esta sección.
GB / T 4789.1 Reglas generales para el examen microbiológico de la higiene de los alimentos
GB / T 4789.28-2003 Higiene de los alimentos - Exámenes microbiológicos - Métodos de tinción,
medios de cultivo y reactivos

3 Términos y Definiciones
Los siguientes términos y definiciones se aplican a esta sección.
3.1 Brotes aeróbicos termófilos que contienen las esporas bacterianas aerobias inofílicas
Se refiere a las condiciones aeróbicas, el tratamiento térmico a 100 ° C durante 30 minutos, puede
sobrevivir y cultivarse a 55 ° C durante 48 horas en la placa DTA para formar colonias contables de
microorganismos.
3.2
IYFA-dextrose tryptone agar
Glucosa Trypticase Chen agar.

4 Principio

calentó a 100 ℃ 30 min, en el medio de DTA y cultivadas 48 h, se contaron las colonias con la
Una cierta cantidad de muestra líquida o dilución de la muestra primaria muestra similar, que se

condición de 55'C, se calculan por mililitro (g) El número de brotes aeróbicos termófilos en la
muestra.

5 Diluyentes y medios de cultivo

5.1 Solución salina de proteínas
5.1.1 Composición
Caseína hidrolizada enzimáticamente 1,0 g
Cloruro de sodio 8.59
1000 ml de agua destilada
5.1.2 Método de fabricación
La caseína hidrolizada enzimáticamente y el cloruro de sodio se disolvieron en agua destilada y el
pH se ajustó a 7,0 ± 0,1 con una fracción másica de solución de hidróxido de sodio al 15%.
Alícuotas de tubos de ensayo y matraces, cada uno con 9 ml, 90 ml o 225 ml cada uno, tienen un
error relativo de no más de ± 2%. Después de sellar, autoclave a 121 ° C y 1 ° C durante 15 min.
5.2 Tampón de fosfato: Preparar según 3.22 de GB / T 4789.28-2003.
5.3 medio DTA
5.3.1 Composición
Trypticase 10-Og
Glucosa 5.0 g
2% solución de etanol violeta de orociana 2 ml
Agar 10 g-15 g
Agua destilada 1000 ML
Nota: La cantidad de agar depende del grado de solidificación.
5.3.2 Método de fabricación
Los componentes distintos de agar en 5.3.1 se disolvieron en agua destilada, y el pH se ajustó a 6.9
de suelo 0.1 usando una fracción de masa de solución de hidróxido de sodio al 15%. Agregar agar,
calentar a ebullición, disolver el agar y alicuotar el matraz. Después de sellar 121 suelo 1 ° C
autoclave 15 min. Si uso inmediato de este medio, en un baño de agua (6.3) que se enfrió a 45'c,

oscuridad entre 0 ℃ -5 ℃, no más de 30 d . Para evitar retrasar el tiempo de vertido del medio,
de lo contrario, el medio esterilizado se coloca en las temperaturas de almacenamiento en la

caliente el medio de descongelación antes de la prueba microbiológica. Luego, se enfrió a 45 ºC en

un baño de agua (6.3).

6 Equipos y materiales
6.1 Equipos y materiales comunes para laboratorios de microbiología.
6.2 Incubadora: 55 ° C ± 1 ° C.
6.3 baño de agua: 45 ° C inhabilidades 1 ° C.
6.4 placas de Petri estériles: diámetro 90 mm.
6.5 Pajuelas estériles.
6.6 Tubos de ensayo estériles.

7 muestreo
La muestra se tomó de acuerdo con GB / T 4789.1.
8 procedimientos de prueba
El procedimiento de prueba de yema aeróbica termófila se muestra en la Figura 3.

Muestra
Muestra sólida 10 g + dilución 90 ml
Muestra líquida
100 ° C, calentando 30 min
Haga varias diluciones apropiadas
Seleccione la dilución adecuada para tomar 1 ml cada uno y agréguelos a una placa de Petri estéril
Cantidad apropiada de medio DTA por plato
55 ° C 1 ° C 48 h ± 2 h
Conteo de colonias
Informes
Figura 3

9 pasos de operación
9.1 procesamiento de muestra
9.1.1 Abra el contenedor de muestra para ser probado mediante manipulación aséptica. Las
muestras líquidas deben protegerse de la formación de espuma.

ml (o 225 ml) precalentado a 45 ℃ diluyente estéril (5.1 o 5.2) matraz Erlenmeyer (Prepare la
9.1.2 asépticamente pesan física muestra de 10 g de sólido o semi-sólido (o 25 g) que contiene 90

cantidad adecuada de perlas de vidrio en el vial) y realice una dilución primaria 10-1 sacudiendo
bien (si es necesario con un homogeneizador o mortero estéril).
9.2 Tratamiento térmico
9.2.1 Use una pipeta estéril (6-5) para extraer una muestra líquida, una dilución primaria de la
muestra sólida o semisólida de 5 ml a 10 ml en un tubo estéril (6.6), teniendo cuidado de no
exponer la solución de muestra más allá La superficie del agua y la pared interna del tubo de
ensayo se encuentran dentro de los 2 cm por debajo de la superficie del agua.
9.2.2 Coloque inmediatamente el tubo de ensayo anterior en un baño de agua a 100 ° C de modo
que el nivel de líquido en el tubo de ensayo esté al menos 4 cm por debajo de la superficie del
agua.
9.2.3 Tratamiento térmico durante 30 min ± 1 min. Comience la prueba colocando el tubo de
ensayo en un baño de agua a 100 ° C.
9.2.4 Retire el tubo con tratamiento térmico y colóquelo inmediatamente en agua corriente a
menos de 20 ° C para enfriarlo.
9.3 Preparación de un diluyente adicional Si es necesario, tome una pipeta estéril de 1 ml y
pipetee 1 ml de muestra calentada en un tubo de ensayo que contenga 9 ml de diluyente estéril.
Agite el tubo y mezcle bien para obtener 10 Doble dilución (dilución 10-1 de muestra líquida o
dilución 10-2 de muestra sólida).
9.4 Inoculación y cultura
9.4.1 Con base en la estimación del contenido de brotes aeróbicos termófilos en la muestra,
seleccione la dilución apropiada, es decir, al seleccionar correctamente, al menos un plato de
cultivo crecerá de 10 a 150 colonias después de que se complete el cultivo. incrementos de 10
veces se realizaron en dilución simultáneamente, es decir, señalar a la dilución 1ML cambio pipeta
de la solución diluida en una placa de Petri estéril, se inocularon dos placas de Petri por dilución.
Nota: a menudo solo hay una pequeña cantidad de brotes aeróbicos termófilos por ml (gramos) de
leche o productos lácteos. Si quiere medir su cantidad, puede tomar las siguientes medidas:
- inocular una pluralidad de platos de cultivo con una cantidad suficiente de muestra líquida
tratada térmicamente o diluyente primario tratado térmicamente;
Use una placa de Petri más grande para poder inocular con más de 1 ml de muestra líquida tratada
con calor o dilución primaria tratada con calor.
Al informar los resultados, es necesario especificar los ajustes a los métodos de prueba.
9.4.2 Verter inmediatamente 12 ml de 15 ml de medio DTA que se ha descongelado y enfriado a
45 ° C y 1 ° C en cada placa de Petri.
9.4.3 Gire con cuidado la placa de cultivo de modo que la muestra de inóculo y el medio de cultivo
se mezclen uniformemente y se coloquen en posición horizontal para coagular la mezcla. El
tiempo desde el final del tratamiento térmico hasta la mezcla de la muestra de inóculo y el medio
de cultivo no debe exceder los 15 min.
9.4.4 Al mismo tiempo que la inoculación de la solución de muestra, se realizó una prueba en
blanco con la dilución IML.
9.4.5 Después de que el agar haya fraguado, apile los platos, inviértalos en una bolsa de plástico y
colóquelos en la incubadora (6.2). Incube a 55 ° C, 1 ° C durante 48 horas y 12 horas.
Nota: Para evitar la propagación de bacterias que no se pueden contar, se pueden tomar las
siguientes medidas:
- Después de la mezcla se solidifica en la placa de Petri, agujeros y una capa (aproximadamente 5
ml) en el mismo también permanecen líquido sobre el medio;
- Después de que la mezcla en la placa de Petri se haya solidificado, voltee la placa de Petri
Coloque un trozo de papel de filtro en la tapa de la placa de Petri y coloque unas gotas de glicerol
en el papel de filtro.
9.5 Conteo de colonias
9.5.1 Al contar las colonias de placas, observe a simple vista y, si es necesario, use una lupa.
9.5.2 Las colonias contagiosas se consideran colonias únicas. Si la porción cubierta por las colonias
contaminadas es menor que 1/4 del área de la placa, se cuentan las colonias de la porción de placa
no afectada y se calcula la cantidad relativa de la placa completa. Si la parte cubierta de la colonia
es más de 1/4 del área de la placa, no debe contarse.
Cálculo de 10 resultados
10.1 Sostenga una placa de Petri que contenga 10 - 150 colonias.
Use la ecuación (3) para calcular el número de brotes aeróbicos termófilos por mililitro o por
gramo de muestra:
N_lower red kni + U.ln2) a (3)

En la fórmula: N-El número de brotes aeróbicos termófilos en la muestra, ufc / ml (g);

EC: todas las colonias contadas se contaron en la placa de Petri;
N1-El número de platos en la primera dilución en una placa de Petri que contiene de 10 a 150
colonias;
N2: el número de platos de la segunda dilución en la placa de cultivo que contiene 10-150
colonias;
Factor de dilución D para la primera dilución.
El resultado conserva dos cifras significativas.
Ejemplo: la determinación del número de yemas aeróbicas termófilas da los siguientes resultados
(2 platos por dilución):
- 86 y 101 colonias en la primera dilución (100);
- 8 y 12 colonias en la segunda dilución (10-1).

Arts. N = la siguiente producción de 7z - a kni + U. I n2) 4 86 + 101 + 12 199 -. Veintidós, once D - D

sección de ciento once once - = más, Wan = cubo 0,6 (2 + 0,1 X 1) X 10- Z. I

Para los resultados anteriores, el número de brotes aeróbicos termófilos en la muestra se informó
como 95 o 9.5 X 10 'cfu / ml.
10.2 Si todas las diluciones fueron menos que el número de colonias en la placa de Petri 10, Los
resultados se presentan como "muestra termófila número esporas aerobias es menor que 10
veces 1 / d ufc / ml (g)", donde D es un más bajas diluciones Dilución.
10.3 Si el número de colonias en la placa de Petri todas las diluciones son más de 150, los
resultados son reportados como "muestra termófila número esporas aerobias es mayor que 150 x
1 Id ufc / ml (g)", donde d es la dilución más alta La dilución.