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    Técnica de Colinesterasa en Sangre

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    QUIMICO CLINICO WILLIANS SANCHEZ
    catalítica se determina a partir de la velocidad de desaparición del hexacianoferrato (III), medida a 405 nm por medio de las siguientes reacciones1,2,3. Butiriltiocolina + H2O Tiocolina + Acido butírico 2 Tiocolina + 2 OH- + 2 Hexacianoferrato (III)+ O2 Ditiobis(colina) + 2 Hexacianoferrato (II) + H2O El isoenzima atípico de la colinesterasa (AA) puede ser estimado mediante el “número de dibucaína”, que indica el porcentaje de inhibición de la actividad enzimática en presencia de dibucaína

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    Técnica de Colinesterasa en Sangre

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    catalítica se determina a partir de la velocidad de desaparición del hexacianoferrato (III), medida a 405 nm por medio de las siguientes reacciones1,2,3. Butiriltiocolina + H2O Tiocolina + Acido butírico 2 Tiocolina + 2 OH- + 2 Hexacianoferrato (III)+ O2 Ditiobis(colina) + 2 Hexacianoferrato (II) + H2O El isoenzima atípico de la colinesterasa (AA) puede ser estimado mediante el “número de dibucaína”, que indica el porcentaje de inhibición de la actividad enzimática en presencia de dibucaína

    Título original

    Técnica de colinesterasa en sangre

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    catalítica se determina a partir de la velocidad de desaparición del hexacianoferrato (III), medida a 405 nm por medio de las siguientes reacciones1,2,3. Butiriltiocolina + H2O Tiocolina + Acido butírico 2 Tiocolina + 2 OH- + 2 Hexacianoferrato (III)+ O2 Ditiobis(colina) + 2 Hexacianoferrato (II) + H2O El isoenzima atípico de la colinesterasa (AA) puede ser estimado mediante el “número de dibucaína”, que indica el porcentaje de inhibición de la actividad enzimática en presencia de dibucaína

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    QUIMICO CLINICO WILLIANS SANCHEZ
    catalítica se determina a partir de la velocidad de desaparición del hexacianoferrato (III), medida a 405 nm por medio de las siguientes reacciones1,2,3. Butiriltiocolina + H2O Tiocolina + Acido butírico 2 Tiocolina + 2 OH- + 2 Hexacianoferrato (III)+ O2 Ditiobis(colina) + 2 Hexacianoferrato (II) + H2O El isoenzima atípico de la colinesterasa (AA) puede ser estimado mediante el “número de dibucaína”, que indica el porcentaje de inhibición de la actividad enzimática en presencia de dibucaína

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    COD 11588 COD 11589 CHOLINESTERASE (CHE)

    1 x 50 mL 4 x 50 mL
    CONSERVAR A 2-8ºC COLINESTERASA (CHE)
    Reactivos para medir la concentración de colinesterasa BUTIRILTIOCOLINA
    Sólo para uso in vitro en el laboratorio clínico

    FUNDAMENTO DEL MÉTODO Número de dibucaína (%)2:

    La colinesterasa cataliza la hidrólisis de la butiriltiocolina en tiocolina y ácido butírico. La concentración Homozigotos normales: > 75%
    catalítica se determina a partir de la velocidad de desaparición del hexacianoferrato (III), medida a 405 nm por Heterozigotos intermedios: 45-72 %
    medio de las siguientes reacciones1,2,3.
    Homozigotos atípicos: < 30 %
    CHE
    Butiriltiocolina + H2O Tiocolina + Acido butírico Estos valores se dan únicamente a título orientativo; es recomendable que cada laboratorio establezca sus
    propios intervalos de referencia.
    2 Tiocolina + 2 OH- + 2 Hexacianoferrato (III)+ O2 Ditiobis(colina) + 2 Hexacianoferrato (II) +
    H2O CONTROL DE CALIDAD
    El isoenzima atípico de la colinesterasa (AA) puede ser estimado mediante el “número de dibucaína”, que Cada laboratorio debe establecer su propio programa de Control de Calidad interno, así como procedimientos
    indica el porcentaje de inhibición de la actividad enzimática en presencia de dibucaína2,3. de corrección en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias aceptables.

    CONTENIDO CARACTERÍSTICAS METROLÓGICAS


    COD 11588 COD 11589
    − Límite de detección: 123 U/L = 2,05 µkat/L.
    A. Reactivo 1 x 40 mL 4 x 40 mL − Límite de linealidad: 25000 U/L = 417 µkat/L. Cuando se obtengan valores superiores, diluir la muestra 1/2
    B. Reactivo 1 x 10 mL 4 x 10 mL con agua destilada y repetir la medición.
    − Repetibilidad (intraserie):
    COMPOSICIÓN Concentración media CV n
    A. Reactivo. Pirofosfato 95 mmol/L, Hexacianoferrato (III) 2,5 mmol/L, pH 7,6. 5416 U/L = 90,27 µkat/L 1,0 % 20
    B. Reactivo. Butiriltiocolina 60 mmol/L. 11279 U/L = 188,0 µkat/L 0,7 % 20

    CONSERVACIÓN − Reproducibilidad (interserie):


    Conservar a 2-8ºC. Concentración media CV n
    Los Reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserve bien
    5416 U/L = 90,27 µkat/L 1,0 % 25
    cerrado y se evite la contaminación durante su uso.
    Indicaciones de deterioro: 11279 U/L = 188,0 µkat/L 0,6 % 25
    − Reactivos: Presencia de partículas, turbidez, absorbancia del blanco inferior a 1,300 a 405 nm (cubeta de 1 − Sensibilidad: 0,015 ∆mA⋅L/U⋅min = 0,91 ∆mA ⋅L/µkat⋅min.
    cm).
    − Veracidad: Los resultados obtenidos con estos reactivos no muestran diferencias sistemáticas significativas
    al ser comparados con reactivos de referencia. Los detalles del estudio comparativo están disponibles bajo
    REACTIVOS AUXILIARES solicitud.
    C. Reactivo (cod 11578): Dibucaína 0,3 mmol/L, una vez reconstituido. 10 x 15 mL. − Interferencias: La lipemia (triglicéridos 10 g/L) y la bilirrubina (20 mg/dL) no interfieren. La hemólisis puede
    afectar a los resultados. Otros medicamentos y sustancias pueden interferir5.
    PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Estos datos han sido obtenidos utilizando un analizador. Los resultados pueden variar al cambiar de
    Reactivo de trabajo para colinesterasa total: vaciar el contenido del Reactivo B en el frasco de Reactivo A. instrumento o realizar el procedimiento manualmente.
    Agitar suavemente. Si se desea preparar otros volúmenes, mezclar en la proporción: 4 mL de Reactivo A + 1
    mL de Reactivo B. Estable 3 días a 2-8ºC. CARACTERÍSTICAS DIAGNÓSTICAS
    Reactivo de trabajo con dibucaína (Nota 1): reconstituir el contenido de un vial de Reactivo C con 15 mL del La colinesterasa sérica es también denominada pseudocolinesterasa para diferenciarla de la colinesterasa
    Reactivo de trabajo para colinesterasa total. Agitar suavemente. Estable 3 días a 2-8ºC. presente en los eritrocitos y en las terminaciones nerviosas. Es sintetizada en el hígado, por lo que su medición
    puede usarse como test de función hepática. Una disminución en su actividad refleja una síntesis alterada.
    MATERIAL ADICIONAL Su determinación es de gran valor en el diagnóstico de pacientes con la forma atípica de la enzima y en
    − Analizador, espectrofotómetro o fotómetro con cubeta termostatizable a 37ºC para lecturas a 405 nm. intoxicaciones por insecticidas organofosforados. Los pacientes con la forma atípica del enzima presentan
    elevada sensibilidad frente al suxametonio, un fármaco usado como relajante muscular en cirugia. Su
    − Cubetas de 1 cm de paso de luz. identificación, mediante el número de dibucaína, es importante para prevenir la apnea prolongada causada por
    1 la administración de dicho medicamento4,6.
    MUESTRAS También pueden darse cambios en la concentración sérica de colinesterasa en otras condiciones. Está
    Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estándar. Se recomienda usar EDTA o heparina como disminuida en infecciones agudas, embolismo pulmonar, distrofia muscular e infarto de miocardio4,6.
    anticoagulantes. El diagnóstico clínico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un único ensayo, sino que debe
    La colinesterasa en suero o plasma es estable durante 14 días a 2-8ºC. integrar los datos clínicos y de laboratorio.

    PROCEDIMIENTO NOTAS
    1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a la temperatura de reacción. 1. El reactivo de trabajo con dibucaína es necesario sólo para determinar el número de dibucaína.
    2. Pipetear en una cubeta (Nota 2): 2. Estos reactivos pueden utilizarse en la mayoría de analizadores automáticos. Solicite información a su
    distribuidor.
    Reactivo de Trabajo (Nota 3) 1,5 mL 3. Utilizar el reactivo sin dibucaína para medir la colinesterasa total y el reactivo de trabajo con dibucaína para
    Muestra 25 µL medir la colinesterasa no inhibida.

    3. Mezclar e insertar la cubeta en el fotómetro. Poner el cronómetro en marcha. BIBLIOGRAFÍA


    4. A los 90 segundos, anotar la absorbancia inicial y efectuar nuevas lecturas cada 30 segundos durante 90
    1. DGKC. Proposal of standard methods for the determination of enzyme catalytic concentrations in serum and
    segundos.
    plasma at 37ºC. II Cholinesterase. Eur J Clin Chem Chim Biochem 1992; 30: 163-170.
    5. Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio (∆A/min).
    2. Panteghini M and Bonora R. Evaluation of a new continuous colorimetric method for determination of serum
    CÁLCULOS pseudo-cholinesterase catalytic activity and its application to a centrifugal fast analyser. J Clin Chem Clin
    Biochem 1984; 22: 671-676.
    La concentración de colinesterasa en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula general:
    3. Whittaker M, Britten JJ and Dawson PJ. Comparison of a commercially available assay system with two
    6 reference methods for the determination of plasma cholinesterase variants. Clin Chem 1983; 29: 1746-
    Vt × 10 1751.
    ∆A/min × = U/L
    ε × l × Vs 4. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 2nd edition. Burtis CA, Ashwood ER. WB Saunders Co., 1994.
    El coeficiente de absorción molar (ε) del cromógeno a 405 nm es 927, el paso de luz (l) es 1 cm, el volumen 5. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 3th ed. AACC Press, 1997.
    total de reacción (Vt) es 1,525, el volumen de muestra (Vs) es 0,025, y 1 U/L equivale a 0,0166 µkat/L. Se 6. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th ed. AACC Press, 1997.
    deducen los siguientes factores para calcular la concentración catalítica:

    x 65804 = U/L
    ∆A/min
    x 1097 = µkat/L

    Número de dibucaína (%) = 100 – (100 x CHE no inhibida / CHE total)

    VALORES DE REFERENCIA
    Colinesterasa (37ºC):

    Hombres 4620-11500 U/L = 76,9-191 µkat/L


    Mujeres 3930-10800 U/L = 65,5-180 µkat/L

    M11588c-0501

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