Principales grupos de Bacilos Gram positivos aerobios

Bacilos Gram Positivos

Comprende un amplio conjunto de bacterias agrupadas por sus caractersticas morfolgicas y tintoriales. Caractersticamente, dentro de este grupo se encuentran bacterias capaces de esporular. Clostridium spp y Bacillus spp son capaces de sobrevivir en medios hostiles mediante la formacin de una estructura muy resistente, la endospora (tambin llamada espora o sporo

Si bien dentro de los bacilos Gram positivos (BGP) se encuentran algunos de los patgenos ms agresivos para el ser humano, la gran mayora de las especies bacterianas de este grupo no son patgenos primarios. Muchos forman parte de la flora normal del cuerpo humano (piel, tracto gastrointestinal, cavidad oral) y se encuentran ampliamente distribuidos en el ambiente. Por este motivo, se debe ser cuidadoso en la interpretacin del hallazgo de un BGP en un estudio microbiolgico, ya que frecuentemente se trata de contaminantes.

De acuerdo a su comportamiento frente al oxigeno los BGP se dividen en:

a) aerobios: Bacillus spp, Listeria spp, Corynebacterium spp, Erysipelothrix spp, etc. b) anaerobios: Clostridium spp, Eubacterium spp, Propionibacterium spp, Lactobacillus spp,Bifidobacterium spp, Mobiluncus spp, etc.

En este captulo nos referiremos nicamente a los BGP aerobios de importancia mdica.

stos pueden ser clasificados segn su morfologa en:

1. Esporulados: Bacillus spp 2. No esporulados: a. regulares: Listeria spp.; Erisipelothrix spp. b. irregulares: Corynebacterium spp.; Nocardia spp.

BACTERIAS PATOGENAS

Corynebacterium diphtheriae

La difteria es una enfermedad causada por los efectos locales y sistmicos de la toxina difterica. El local de la enfermedad es una faringitis severa normalmente acompaado de una placa pseudomembranosa en la garganta y trquea. Los aspectos que amenazan la vida de la difteria se deben a la absorcin de los la toxina a travs de la mucosa de la faringe y su circulacin en el torrente sanguneo. Afecta mltiples rganos, pero el ms importante es el corazn, donde la toxina produce una miocarditis aguda.

 El agente etiolgico de la enfermedad es el Corynebacterium diphtheriae Bacilo aerbico Gram positivo cuyo poder patognico es debido a una sustancia extracelular (exotoxina) Existen cuatro biotipos: mitis, intermedius, gravis y belfanti

Complicaciones:
La difteria larngea y la aspiracin de la membrana (o parte de ella) pueden conducir a una obstruccin respiratoria Cuando la membrana se extiende hacia abajo, puede causar neumona y obstruccin respiratoria La sinusitis y la otitis media estn asociadas generalmente con la difteria nasofarngea, como consecuencia del edema de las vas respiratorias superiores.

 Morfologa: Bacilo de 0.5 a1 um , aspecto de maza, clava o letras chinas Se desarrolla in vitro en un medio diseado por Leffler. 0tra alternativa la constituyen los medios que contienen telurito de potasio, que presentan 2 ventajas comparativas: inhiben flora comensal bucofaringea e identifica crecimiento de cepas de C. diphtheriae por su color negro-grisaceo debido al telurito reducido, su crecimiento es aerbico, produce cido pero no gas

 Fisiopatologa: Para que las bacterias produzcan esta exotoxina, deben estar infectadas por un virus el corinebacterifago que contiene el gen tox.

 MEDIOS DE CULTIVO
Medio Agar Sangre Cistina Telurito (ASCT) Medio Leffler (ML). Se aconseja para la observacin de la morfologa bacteriana. Agar Sangre Caldo Todd Hewitt (CTH) con 3 % de sangre.

Medio Agar Tinsdale

Este medio de cultivo se utiliza para la deteccin de la enzima cistinasa y es de utilidad para la identificacin presuntiva de C. diphtheriae.
Corynebacterium diphtheriae,reaccin positiva, hay formacin de halo marrn alrededor de las colonias.
Corynebacterium xerosis, reaccin negativa, no hay formacin dehalo marrn alrededor de las colonias

Bacillus anthracis

Antrax
El carbunco o ntrax fue una de las primeras infecciones bacterianas dio lugar al desarrollo de la primera vacuna bacteriana que fue desarrollada por Louis Pasteur. Por producir endosporas altamente resistentes y ser capaz de producir infecciones respiratorias graves, es un arma biolgica potencial.

Bacillus anthracis
Bacilos gram positivos esporulado (1x3x8 um) Anaerobios facultativos catalasa-positivo, capaz de formar esporas centrales o subterminales no es exigente nutricionalmente desarrolla bien entre 25-37C. Cuando desarrolla in vivo presenta cpsula, pero para demostrarla in vitro debe cultivarse en medios especiales (por ej. medios con bicarbonato e incubacin a 6% de CO2). Las colonias son grandes, rugosas, grisceas y de bordes irregulares. Las esporas son altamente resistentes y pueden persistir incluso por dcadas en los suelos bajo condiciones ptimas.

Factores de virulencia
LA CAPSULA confiere resistencia contra la fagocitosis (tres genes: capA, capB y capC,codificados en un plsmido de 110 kb denominado pXO2.

Conjunto toxina ntrax Los otros dos factores de virulencia son la

toxina letal y la toxina edematizante El plsmido pXO1 de 181 kb codifica las siguientes exotoxinas: antgeno protector, factor de edema y factor letal. TOXINA DE EDEMA Es responsable del edema en los sitios de infeccin, la inhibicin de la funcin de los neutrfilos y obstaculiza la produccin de factor de necrosis tumoral (TNF) e interleuquina 6 (IL-6) por parte de los monocitos. TOXINA LETAL Estimula la liberacin de TNF e IL-1 por parte de los macrfagos; este mecanismo parece contribuir a la muerte por bacteriemia

Epidemiologa
Infecta fundamentalmente a los hervboros Humanos son huspedes
accidentales Prevalente en zonas pobres Contacto con animales infectados o tierras contaminadas confiere riesgo Bioterrorismo

ntrax cutneo
Ms del 95% Frecuentemente por exposicin laboral. El carbunco cutneo se produce por contacto de la piel con material infectado. Los sporos ingresan a travs de una lesin de la piel. Al ser ingeridos por los macrfagos en el sitio de entrada, los sporos germinan y las clulas se multiplican produciendo cpsula y toxinas.

ntrax gastrointestinal y orofarngeo

Esta infeccin se presenta cuando los individuos ingieren carne contaminada que no ha sido bien cocinada. Infrecuente. Luego del perodo de incubacin, que puede ser de dos a cinco das, los pacientes con infeccin orofarngea desarrollan una faringitis intensa o una lcera oral o tonsilar, usualmente asociada a fiebre y un proceso inflamatorio a nivel de cuello debido a edema y linfadenitis cervical o submandibular. La infeccin gastrointestinal se inicia con sntomas inespecficos como nuseas, vmito y fiebre, seguidos de un intenso dolor abdominal. El signo presente de abdomen agudo se asocia a hematemesis, ascitis masiva y diarrea. La mortalidad en ambos casos puede ser hasta de un 60%, pero tiende a ser mayor en la infeccin gastrointestinal.

ntrax por inhalacin

Esta infeccin se presenta cuando el individuo es expuesto a altas concentraciones de esporas (8,000 - 15,000 esporas), las cuales son inhaladas hasta el parnquima pulmonar. El perodo de incubacin es de uno a seis das y la infeccin se manifiesta con sntomas inespecficos como fatiga, malestar general, mialgia y fiebre, que pueden estar asociados a una tos no productiva y dolor moderado a nivel de trax. Estos sntomas persisten usualmente por dos o tres das y en algunos casos el paciente parece mejorar su estado clnico. Sin embargo, esta situacin se contina con un abrupto sndrome respiratorio con disnea, estridor, cianosis, intenso dolor torcico y diaforesis. Puede haber edema de trax y cuello y la evaluacin radiolgica manifiesta un caracterstico ensanchamiento del mediastino que puede estar asociado con efusiones pleurales.

Microcolonias de B anthracis, Coloracin Giemsa del mediastino

www.phil.cdc.gov/

Anthrax: Seleccin de especmen

Inhalatorio: Esputo y Sangre

Cutneo: Vesculas y Escaras

Gastrointestinal: Heces y Sangre

Bacillus anthracis Pruebas de laboratorio

Coloracin Gram Caractersticas de crecimiento en agar Esporulacin, en presencia de aire Inmviles Inhibido por la Penicillina Formacin de cpsula

B. anthracis Colonias en Agar sangre

agar bicarbonato, formacin de cpsula

Consistencia viscosa de colonias de B. anthracis en agar sangre

B. anthracis, coloracin Gram demostracin de esporas

 Fenotpicamente, esta bacteria es muy similar a otras dos especies de Bacillus: B. cereus, ampliamente distribuida en los suelos alrededor del mundo y que se asocia con intoxicaciones alimentarias e infecciones en pacientes con algn grado de compromiso inmunolgico, y B thuringiensis., un patgeno de larvas de lepidpteros que es utilizado como control biolgico.

Bacillus cereus
Bacilo gram positivo esporulado Anaerobio facultativo No exigente en cuanto a sus requerimientos nutricionales

Factores de virulencia
Enterotoxina termoestable Forma emtica Toxina termolbil Forma diarreica

En infecciones oculares: TOXINA NECROTICA Enterotoxina termolbil CEREOLISINA Hemolisina FOSFOLIPASA C Lecitinasa

Intoxicacin alimentaria
Alimento implicado Perodo de incubac. Sntomas Duracin Enterotoxina Forma emtica Arroz < 6 hrs. Vmitos, nuseas espasmos abdom. 8 a 10 hrs. Termoestable Forma diarreica Carne, vegetales > 6 hrs. Diarrea, nuseas Espasmos abdom. 20 a 36 hrs. Termolbil

 infecciones oculares tras lesin penetrante y traumtica del ojo con objetos contaminados (panoftalmitis). Infecciones diseminadas en inmunosuprimidos.

Caracterstica
Hemlisis en agar sangre Requerimiento de tiamina para crecer Formacin de cpsula

B. anthracis
+ +

B. cereus
+ -

Lisis por bacterifago g

Movilidad

+
-

Otros:
B. stearothermophilus: se utiliza como control biolgico en el autoclave. B. subtilis: presente en el aire y polvo, es un contaminante del laboratorio pero puede producir enfermedad en inmunodeprimidos. Se utiliza como control biolgico en el horno B. thuringiensis: es utilizado como pesticida por producir una toxina letal para ciertos insectos.

Gardnerella vaginalis

Gardnerella Vaginalis
Antes llamada Haemophilus vaginalis Corynebacterium vaginalis Gardnerella vaginalis es un bacilo gram positivo inmvil no encapsulado de 0.5 por 1.5 a 3 um, anaerobio facultativo catalasa y oxidasa negativo

Sadhu y cols. concluyeron que aunque el nivel ultraestructural de la pared celular de Gardnerella vaginalis muestra organizacin de gram positiva, su pared celular es inusualmente delgada en la mayora de las clulas contribuyendo al misterio del porqu se tien como gram variables

Resultados de la pruebas bioqumicas para los biotipos ms frecuentes de Gardnerella vaginalis

Biotipo

1 4 5

bHidrlisis galactosida del hipurato sa + + + +

Lipasa

+ + -

factores de virulencia
Toxina citoltica, capaz de lisar especficamente los eritrocitos de humanos, pero no los de otras especies. Esta toxina ha sido considerada una "protena similar a una perforina" y que adems de los eritrocitos, rompe las clulas epiteliales. En la superficie celular presenta una glicoprotena que posee una elevada afinidad por la lactoferrina humana presente en la mucosa vaginal. Existen diferentes biotipos de G. vaginalis, los cuales en algunos casos estn asociados o no a vaginosis bacteriana.

Patogenia
La produccin de la citotoxina hemoltica contribuye a la lesin e inflamacin de las clulas husped. La actividad de la fosfolipasa A2 contribuye a la rotura prematura de membranas durante el trabajo de parto.

 La presentacin ms frecuente es flujo maloliente, seguido de picor, sensacin de quemazn y ocasionalmente malestar abdominal. El flujo es homogneo y gris (89%), blanco (7%), verde-amarillento gris (8%), con un PH de 5 5,5. El olor caracterstico es de pescado en mal estado cuando se aade hidrxido de Potasio del 10%. La vulva puede presentar erosiones y hemorragia puntiforme.

 El perodo de incubacin de la infeccin es posiblemente entre 5 y 10 das despus de la inoculacin. Cuando la Gardnerella infecta la vagina, dominar sobre el resto de las bacterias y el lactobacilo ser eliminado en la primera semana

Epidemiologa
Gardnerella es habitual en mujeres (70 %) y nias (14 %) asintomticas y casi siempre se detecta en la VB. La uretra de la pareja sexual tambin puede estar colonizada y ser fuente de transmisin. La biotipificacin del microorganismo no es fiable para la identificacin de contactos se ha demostrado que en una misma persona pueden coexistir mltiples cepas .

Patogenia
G. vaginalis produce succinato el cual es necesario para la proliferacin de anaerobios, se multiplican y producen aminopeptidasas que liberan aminocidos los cuales a su vez son descarboxilados para producir diaminas.

Diagnstico

a) Cultivo del flujo vaginal en CO2 al 5 % para mostrar 1) colonias tpicas, 2) bacilos cortos anaerbicos facultativos, gram variables, hipurato+, catalasa-. a) Olor a pescado (trietilamina) del flujo cuando se aade KOH al 10 %. b) Presencia de clulas gua -clue- (clulas epiteliales eliminadas en el flujo que alojan los bacilos) .

Cultivo
Agar Sangre incubado en anaerobiosis o en una atmsfera de 5% de CO2, a 35C por 48 horas, y se originan colonias translcidas de 0,3 a 0,5 mm de dimetro, con hemlisis tipo beta. La hemlisis se presenta en agar sangre con eritrocitos de origen humano o de conejo, pero no de otros animales

IDENTIFICACION BIOQUMICA Oxidasa Catalasa Indol Glucosa + Maltosa + Lactosa d Sacarosa d Xilosa d Manitol Reduccin de Nitrato a nitritos -

Diagnstico de la vaginosis Bacteriana segn los Criterios de Asmel y Cols*

Sntomas Signos pH Flujo vaginal con mal olor Flujo vaginal adherente > 4,5

Test de Aminas
Microscopia salina

Positivo (~70%-80%)
PMN: Clulas Epiteliales <1; prdida de bacilos; incremento de cocobacilos, clulas clave (>90%) Positiva

Prueba del Hidrxido de Potasio al 10%

Miscelneos
Diagnstico Diferencial

El cultivo es de poca utilidad diagnstica

Otras vaginitis: candidiasis, tricomoniasis, y vaginitis atrfica.

*Se requiere de la presencia de tres de los cuatro signos clnicos establecidos dentro de los criterios de Amsel y cols., para diagnosticar vaginosis bacteriana: flujo homogneo, un test de animas positivo, un pH > 4,5 y la presencia de clulas clave.

Criterio de Nugent

En este mtodo se realiza recuento de los morfotipos correspondientes a bacilos Gram positivos (Lactobacillus spp.), bacilos Gram negativos pequeos (G. vaginalis, Porphyromonas spp/Prevotella spp) y bacilos pequeos curvos Gram variables (Mobiluncus spp). Este criterio permite catalogar las muestras con puntajes que oscilan entre 0 y 10 otorgndole mayor valor a un bajo recuento de bacilos Gram positivos y a un elevado recuento de bacilos pequeos Gram negativos y Gram variables. De esta manera, una muestra es diagnosticada con VB cuando el puntaje total obtenido es igual o superior a 7; corresponde a un estado intermedio cuando el puntaje total oscila entre 4 y 6 y una muestra es considerada normal al obtener un puntaje total de 0 a 3.

Tratamiento
Oral: Metronidazol (flagyl) Clindamicina (cleocin) Topico: Metronidazol 0.75% crema vaginal (metrogel) Clindamicina 2% crema vaginal