COPROCULTIVO

El coprocultivo es un estudio clnico que pertenece al rea de bacteriologa y que consiste en hacer un cultivo de heces fecales de los pacientes que presenten alguna infeccin en el tracto gastrointestinal. Las principal utilidad que tiene este estudio, es la identificacin de enterobacterias ( E. Coli, Vibrio cholerae, shigella, salmonella, campylobacter jejuni, Yersinia enterolitica), que son siempre las principales causantes de una enfermedad gastrointestinal.

TOMA DE MUESTRA.
La muestra del coprocultivo ser tomada en un vaso especial para recolectar muestra que el paciente puede conseguir en la farmacia, es un frasco de boca ancha que debe de estar estril. La muestra se tomara en el momento en el que el paciente este defecando, se colocara el vaso debajo del ano y se depositara una muestra de heces del tamao aproximado de una nuez, (5 a 10 ml en caso de que el paciente defeque liquido).

No se requiere ayuno ni dieta especial No se debe de estar ingiriendo antibiticos En adultos mayores y nios la toma se muestra con un hisopo. Enviar al alboratorio en no ms de dos horas para su procesamiento, o refrigerar, por no ms de 4 horas

La flora intestinal es numerosa. Esta integrada principalmente por bacterias entricas, clostridiales, levaduras, lactobacilos y otras. Frecuentemente pueden originarse desequilibrios por la presencia de microorganismos patgenos. El cultivo de las heces es de gran ayuda en la determinacin del agente etiolgico de la diarrea, asi como el estado de portador (Salmonella, Shigella y Arizona). La identificacin final puede realizarse por mtodos bioqumicos y serolgicos. El coprocultivo se fundamenta en el equilibrio del aparato gastrointestinal (diarrea, moco y sangre en las heces) ocasionado por las bacterias mencionadas.

MEDIOS
Medios para aislamiento -Agar eosina y azul de metileno (EMB) -Agar de Salmonella y Shigella (S.S) -Agar Mac Conkey -Agar verde brillante (VBA)

EMB

S.S.

McConkey

Verde Brillante

Medios de enriquecimiento -Caldo selenito -Caldo tetrationato

tetrationato

selenito

Medios para identificacin (pruebas bioqumicas)

-Kligler -Caldo urea -Descarboxilacin de la lisina (LIA) -Citrato de Simmons
LIA

Kligler

Caldo urea

Citrato de Simmons

Identificacin serolgica Antisueros para identificar escheriachia coli (polivalente I, II, III) Antisueros para identificar salmonella del subgrupo I Antisuero para identificar shigellas (A, B, C y D) Antisuero para identificar vibrio cholerae

DESARROLLO Inocular directamente la muestra en una serie de las placas de agar proporcionadas. Incubar a 37C de 24 a 48 horas. Inocular la muestra en un tubo con caldo de enriquecimiento. Incubar a 37C durante 18 a 24 horas. Subcultivar una serie de placas de agar. Observar las caractersticas ms relevantes de la morfologa colonial en cada uno de los medios inoculados, a fin de seleccionar el crecimiento del posible patgeno. Describir la morfologa colonial del posible patgeno y realizar la inoculacin a las pruebas bioqumicas.

Materia

fecal

Agua peptonada

Campy-Bap

McConkey o EMB

Caldo tetrationato

Pruebas rpidas

Tincin de Kinyoun

Coproparistoscpico

TCBS

Seleccionar colonias amarillas y sembrar en TSI, LIA, MIO, caldo peptonado y arginina

Seleccionar colonias y sembrar en TSI, Hacer pruebas de acetato de plomo y de hidrlisis de hipurato

Seleccionar colonias y sembrar TSI, LIA y MIO

Sulfito de bismuto, SS Verde Brillante

Reacciones de aglutinacin con sueros anti A, B, C y D de Shigella Escherichia coli Tipificar con antisueros

Campylobacter

Seleccionar colonias y sembrar en TSI, LIA y MIO

Identificacin de Coccidias Deteccin de Rotavirus

Identificacin de quistes de protozoarios , huevecillos y larvas de helmintos

Reaccin de aglutinacin con suero anti Vibrio cholerae O1

Yersinia

Tipificacin de Salmonella con sueros anti A, B, C1, C2, D y E

AGAR EOSINA Y AZUL DE METILENO

El agar Eosina y azul de metileno es un medio utilizado para aislamiento y diferenciacin de vacilos entricos Gram negativos. Diferencia colonias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa Permite diferenciar al grupo Salmonella y otros organismos lactosa negativos de organismos coliformes
CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO Escherichia coli RESULTADO Colonias azul a moradas, con brillo metlico azul verdoso Inhibicin parcial Colonias incoloras, transparentes Colonias incoloras, transparentes Crecimiento parcialmente inhibido o colonias puntiformes (1) Colonias plumosas, rosa plido atpicas

Enterococcus faecalis Salmonella typhimurium Shigella flexneri Staphylococcus aureus

Candida albicans

AGAR SALMONELLA Y SHIGELLA

Las bacterias Gram positivas, algunas especies de Proteus y bacilos coliformes son inhibidos por las sales biliares, citrato de sodio y verde brillante. La diferenciacin de los microorganismos se logra por la lactosa.
CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO Escherichia coli RESULTADO Marcada inhibicin o colonias rosa intenso con halo de precipitacin Colonias medianas, incoloras transparentes con centro negro Colonias pequeas, incoloras transparentes Colonias pequeas, incoloras transparentes con o sin centro negro Crecimiento inhibido Crecimiento inhibido o colonias puntiformes, rosa opacas

Salmonella typhimurium

Shigella flexneri Salmonella typhi

Staphylococcus aureus Enterococcus faecalis

AGAR VERDE BRILLANTE

La selectividad de este medio, se basa en la concentracin del verde brillante, que inhibe bacterias Gram positivas y la mayora de los bacilos Gram negativos, permitiendo el empleo de inculos moderadamente abundantes La lactosa y la sacarosa permiten diferenciar la flora acompaante lactosa positiva y lactosa negativa-sacarosa positiva

CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO Escherichia coli Salmonella typhimurium RESULTADO Crecimiento inhibido Buen crecimiento, colonias rosa plido con halo rojo brillante Buen crecimiento, colonias rosa plido con halo brillante Crecimiento inhibido

Salmonella enteritidis

Proteus vulgaris

AGAR CITRATO DE SIMMONS

Para identificacin biqumica de Enterobacterias en base a la utilizacin del citrato como nica fuente de carbono. El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmtico del medio. Cuando las bacterias utilizan el citrato, el medio se alcaliniza y cambia el color inicial verde.

CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO Escherichia coli Enterobacter cloacae Klebsiella pneumoniae Salmonella typhi Serratia marcescens Shigella flexneri RESULTADO Negativo Positivo Positivo Negativo Positivo Negativo

AGAR DE HIERRO Y TRIPLE AZUCAR (AGAR TSI)

Para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa, lactosa y sacarosa, as como a su capacidad de producir cido sulfhdrico, lo cual permite el reconocimiento y exclusin del gnero Proteus. La fermentacin de lactosa y sacarosa se observa en la superficie y la de glucosa en el fondo del medio con formacin de cido, se manifiesta por cambio de color del Rojo de fenol que vira de anaranjado rojizo a amarillo. La combinacin de citrato frrico de amonio y tiosulfato de amonio permite la deteccin de sulfuro de hidrgeno por la formacin de un precipitado negro.

CALDO TETRATIONATO

El tetrationato formado por la adicin de yodoyodurado junto con el tiosulfato excedente inhiben a coliformes. Las bacterias reductoras de tetrationato como Salmonella y Proteus pueden multiplicarse con ms facilidad. Las sales biliares inhiben el desarrollo de microorganismos Gram positivos.
CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO RESULTADO CRECIMIENTO EN SUBCULTIVOS A las 6 horas Algunas colonias moderado A las 24 horas inhibido Bueno

Escherichia coli Salmonella typhimurium

CALDO UREA

Se emplea para la diferenciacin de bacterias por medio de la utilizacin de la urea como nica fuente de carbono.
CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO Escherichia coli Salmonella typhimurium Proteus vulgaris Proteus mirabilis Shigella flexneri Enterobacter aerogenes CRECIMIENTO (hidrolisis ) + + -

MEDIO MIO
Para la diferenciacin de Enterobacterias, basndose en las pruebas de movilidad, ornitina descarboxilasa y la produccin de indol. Las peptonas proporcionan las fuentes de nitrgeno y carbono, el extracto de levadura proporciona vitaminas y la dextrosa es la fuente de energa.

CONTROL DE ACTIVIDAD MICROORGANISMO

Ornitina RESULTADO

Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Proteus mirabilis Enterobacter aerogenes

Movilidad + + +

Indol + -

+ + +

MICROORGANISMOS PATGENOS CAUSANTES DE ENFERMEDADES ENTRICAS

ESCHERICHIA COLI.
Caractersticas: Especie recuperada con mayor frecuencia en el laboratorio Incriminada en enfermedades infecciosas que afectan casi cualquier tejido del cuerpo Microorganismo involucrado con mayor frecuencia en sepsis por gramnegativos y en el shock inducido por endotoxinas

VIBRIO CHOLERAE
Es el agente etiolgico del clera epidmico y endmico en los seres humanos . Es el prototipo de los sndromes diarreicos en los cuales la enfermedad no es causada por invasin tisular de los microorganismos sino a travs de la produccin de toxinas que afectan el intercambio intraintestinal normal de agua y electrolitos.

SHIGELLA
Carctersticas: Son no fermentadoras de la lactosa Tienden a ser bioqumicamente inertes En casos tpicos, producen gas a partir de hidratos de carbono,con excepcin de ciertos biogrupos de S. flexneri que son aergenos Pocas cepas de S. sonnei pueden fermentar lentamente la lactosa(2%), y la scaros(1%) y la mayora de las cepas pueden descarboxilar ornitina

CAMPYLBACTER JEJUNI

Es el patgeno humano ms importantes entre las campilobacterias. La enteritis con este microorganismo se caracteriza por dolor abdominal, clico, diarrea sanguinolenta, escalofros y fiebre

YERSINIA ENTEROCOLTICA

Aunque las especies de Yersinia califican desde el punto de vista bioqumico para la inclusin en las enterobacterias, las clulas parecen pequeas y cocobacilares en los frotis teidos con Gram y pueden ser pequeas y puntiformes luego de 24 hrs de incubacin en agar MacConkey.

SALMONELLA
Tienen antgenos somnticos (O) que son lipopolisacridos y antgenos flagelares (H) que son protenas. S. typhi tiene tambin un antgeno capsular o de virulencia (Vi) Sulen ser tanto lactosa negativas como sacarosa negativas.

BIBLIOGRAFIA
MANUAL DE MICROBIOLOGIA MDICA. QFB. GARCIA ARACELI. UNAM 9 SEMESTRE. MICROBIOS Y ENFERMEDADES. PEREZ TAMAYO. LA CIENCIA/169 PARA TODOS. 200 MEXICO. MANUAL DE BACTERIOLOGIA CLINICA. GERARDO CRUZ JIMENEZ. UNAM. MEXICO 1994. PP. 9-12.

INTEGRANTES
Basurto Cervantes Debanhi Garcia Lezama Victor Manuel Ibarra Ramirez Sergio Lopez Teofilo Alejandra Mayorga Ramos Cynthia Paulina Mondragn Ledezma Mnica Rivas Serrano Ana Karene Ramirez Cano Itzel Guadalupe