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    Coleraciones Microbianas Ultimo

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    Este documento describe diferentes métodos de tinción para visualizar microorganismos al microscopio. Explica cómo se pueden teñir los microbios de dos formas, sin teñir o teñidos con colorantes. Luego detalla diversas técnicas de tinción como la tinción simple, tinción negativa, tinción de Gram, tinción de Ziehl-Neelsen y coloraciones especiales para estructuras como cápsulas, flagelos y endosporas.

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    Coleraciones Microbianas Ultimo

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    Este documento describe diferentes métodos de tinción para visualizar microorganismos al microscopio. Explica cómo se pueden teñir los microbios de dos formas, sin teñir o teñidos con colorantes. Luego detalla diversas técnicas de tinción como la tinción simple, tinción negativa, tinción de Gram, tinción de Ziehl-Neelsen y coloraciones especiales para estructuras como cápsulas, flagelos y endosporas.

    Descripción original:

    microbiolgia

    Título original

    Coleraciones Microbianas Ultimo (2)

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    Este documento describe diferentes métodos de tinción para visualizar microorganismos al microscopio. Explica cómo se pueden teñir los microbios de dos formas, sin teñir o teñidos con colorantes. Luego detalla diversas técnicas de tinción como la tinción simple, tinción negativa, tinción de Gram, tinción de Ziehl-Neelsen y coloraciones especiales para estructuras como cápsulas, flagelos y endosporas.

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    Este documento describe diferentes métodos de tinción para visualizar microorganismos al microscopio. Explica cómo se pueden teñir los microbios de dos formas, sin teñir o teñidos con colorantes. Luego detalla diversas técnicas de tinción como la tinción simple, tinción negativa, tinción de Gram, tinción de Ziehl-Neelsen y coloraciones especiales para estructuras como cápsulas, flagelos y endosporas.

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    de 31

    S

    E
    N
    O
    I
    C
    A
    R
    O
    S
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    A
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    N
    C
    A
    I
    B
    O
    R
    C
    I
    M

    Los microorganismos pueden


    ser observados de dos formas:

    Sin teir

    Candida sp

    Teidos mediante colorantes

    COLORANTES

    Compuestos orgnicos e inorgnicos con carcter coloreado.


    Benceno + G. Cromforos + G. Auxcromos

    G.C.: G. Nitroso, amido, azo, alqueno, ciano, tiociano.


    G.A.: Hidroxilo, amino, metilo

    C. CIDOS ()

    EOSINATO
    AZUL DE
    METILENO

    C. NEUTROS (0)

    EOSINAS,
    AURAMINAS

    FUCSINA
    BSICA,
    AZUL DE
    METILENO

    C
    I
    F
    I
    S
    A
    L

    I
    AC

    C. BSICOS (+)

    NEGRO
    SUDN
    (LIPDICOS)

    C. INDIFERENTES

    T. Gram, t.
    Zhiel
    neelsen
    Visualizar
    diferentes
    tipos
    bacteriano
    s

    I
    C
    A
    R
    O
    L
    CO
    A
    N
    A
    I
    R
    E
    T
    BAC

    Morfologa
    bacteriana

    Tinciones Diferenciales (2 o
    +)

    Tincin Negativa (1)

    Morfologa
    bacteriana,
    presencia de
    cpsulas

    Tincin simple (1)

    T. De
    flagelos, t.
    De cilios, t.
    Esporas, etc.
    Tinciones Especiales
    (Selectivas)

    TINCIN SIMPLE
    PROTOCOLO
    1.

    Colocar mediante un asa


    previamente esterilizada
    una cantidad de muestra
    en un portaobjetos limpio
    (con gota de agua)

    2.

    Dejar secar al aire y/o fijar


    con calor

    3.

    Agregarle azul de
    metileno

    4.

    Agregar agua

    5.

    Dejar secar al aire

    6.

    Observar en el microscopio.

    TINCIN
    NEGATIVA
    PROTOCOLO
    1.

    Colocar mediante un asa


    previamente
    esterilizada
    una cantidad de muestra
    en un portaobjetos limpio.

    2.

    Agregarle una gota de


    solucin de nigrosina al
    1% y mezclar.

    3.

    Agregar agua

    4.

    Dejar secar en el aire

    5.

    Observar
    microscopio.

    en

    el

    Cpsulas

    TINCIN DE GRAM
    PARED CELULAR BACTERIANA

    TINCIN DE
    GRAM
    PROTOCOLO
    1.

    Colocar mediante un asa previamente


    esterilizada una cantidad de muestra
    en un portaobjetos limpio (con gota
    de agua)

    2.

    Dejar secar al aire y/o fijar con calor

    3.

    Agregarle cristal de violeta

    4.

    Agregar agua

    5.

    Aadir un mordiente (Lugol) y lavar

    6.

    Decolorar con alcohol y lavar

    7.

    Agregar un segundo
    (Safranina) y lavar

    8.

    Dejar secar al aire

    9.

    Observar en el microscopio.

    colorante

    COLORACI
    ON
    DE
    ZIEHL-

    MICOBACTERI
    AS

    PARED
    CELULAR
    DIFERENTE

    IMPERMEABL
    E

    ACIDOS
    MICOLICOS

    CONSISTENCI
    A
    HIDROFOBICA

    ACIDOALCOHOL
    RESISTENTE
    Tincin muy
    til en
    laboratorios
    clnicos
    Prueba
    del BK

    FUCSINA
    FENICADA

    ALCOHOLACIDO

    ACIDOALCOHOL
    RESISTENTE
    BACILOS
    ACIDO ALCOHOL
    RESISTENTES
    (BAAR)

    COLORACIONES
    ESPECIALES

    METODO DE
    WRITZCONKLIN

    ENDOSPO
    RAS

    BACILLUS Y
    COLSTRIDIUM

    METODO DE
    LEIFSON

    FLAGELOS

    METODO DE
    WRITZCONKLIN
    VERDE
    MALAQUITA

    TIE LAS
    ESPORAS EN
    CALIENTE

    SAFRANINA

    DA CONTRASTE
    ROJO O
    ROSADO

    SE BASA EN
    EL
    ENGROSAMIE
    NTO
    SIRVE COMO

    METODO DE
    LEIFSON
    FUCSINA
    BASICA
    EN ETANOL

    ACIDO TANICO

    COLORANTE
    PRIMARIO

    ACTUA COMO
    MORDIENTE

    S
    E
    N
    O
    I
    C
    S
    E
    N
    L
    TI
    A
    R
    U
    T
    C
    U
    R
    T
    S
    E

    Tincin de
    Corpsculos
    Meta cromticos
    Caractersticas
    Un color diferente al del colorante
    primario
    Permite la deteccin de la bacteria
    Cornebacterium.
    Tienen alta afinidad por los colorantes
    catinicos

    acumulaciones de polifosfato
    que se encuentran dentro de
    la clula
    Almacena sustancias de
    reserva

    Se pueden observar con la ayuda de otros colorantes


    cuyo uso constituyen diferentes mtodos como:

    Ejemplo: Observacin de
    bacillos difteroides saprofitos

    Mtodo de Loeffer
    Se fija el frotis con calor
    1. Agregar
    muestra de
    sarro dental

    Se echa agua
    a la muestra.
    Se deja secar

    Se echa el colorante azul de


    metileno
    Se agrega agua destilada. Se deja
    secar.
    Se observa al microscopio

    3. Colocar el
    colorante azul
    de metileno

    Se lleva a
    observar al
    microscopio

    1
    2
    3
    4

    Mtodo de
    Albert

    Procedimiento

    Colorante de Albert

    Fijar el frotis con calor


    Contiene verde
    malaquita

    Echar colorante de Albert


    en la muestra. Agregar
    agua y dejar secar-

    Observar al microscopio

    Resultado

    la
    visualizacin
    de
    los
    corpsculos
    metacromticos de color caf verdoso oscuro.

    Echar colorante de Neisser


    en la muestra. Agregar agua
    y dejar secar-

    la
    visualizacin
    de
    los
    corpsculos
    metacromticos de color azul intenso
    mientras los dems se ven de color
    amarillo pardo.

    Resultado

    Teir con crisodina durante


    10 min. Echar agua y secar..
    Obsservar al microscopio

    Crisoidina
    Fijar el frotis con calor,
    colocando la muestra 10 min
    hasta la salida de vapores

    Colorante de Neisser

    Procedimiento

    MTODO DE
    NEISSER

    Tincin de Cpsulas
    Caractersticas
    Son consideradas como un factor
    de virulencia.
    Poseen un espesor variable
    Su composicin es de carcter
    proteico
    su teido es ms dificultoso

    Estructuras que se
    encuentran rodeando la
    pared bacteriana
    brindarle mayor resistencia

    Para la observacin de cpsulas se deber entonces encontrar un


    mtodo de tincin negativa como:

    Mtodo de
    Procedimiento
    La
    tinta
    SUSPENSIN DE KLEBSIELLA/ STREPTOCOCCUS CAPSULADOS
    chinaTinta China

    Resultado

    Se espera el
    secado para
    observar al
    microscopio
    con lente de
    inmersin.

    Se agrega
    tinta china.
    Con otra
    lmina
    portaobjetos
    se hace una
    extensin en
    forma de
    pelcula
    delgada

    Se coloca
    una gota de
    agua en el
    extremo de
    la lmina,

    la
    visualizacin
    de
    los
    corpsculos
    metacromticos de color caf verdoso oscuro.

    tinta china es una


    suspensin coloidal de
    carbn

    Procedimiento

    Mtodo de
    STREPTOCOCCUS CAPSULADOS
    Hiss
    CRISTAL VIOLETA

    Coloca una gota de agua en el


    extremo
    Esperar el secado y teir con el
    cristal violeta durante dos
    minutos
    Lavar con la solucin de sulfato
    cprico.
    debe dejar secar al aire y se coloca
    en el microscopio para observar

    Resultado

    la visualizacin cocos
    violetas con cpsulas
    tenues.

    o diplococos
    celestes muy

    Tincin de La Pared
    Celular
    Caractersticas
    Pueden destruirse o romperse en condiciones
    especiales.

    Tiene menos afinidad con los colorantes que el citoplasma

    Es importante encontrar un aumentar la afinidad y el grosor


    de la misma

    Es una estructura rgida que


    da forma a la clula.
    Brinda proteccin,
    flexibilidad

    Para realizar una identificacin de la pared celular por medio de


    tincin, se debe hacer:

    Procedimiento
    Se coloca en una lmina una fraccin de una
    colonia bacteriana

    MTODO DE
    TINCIN DE LA
    PARED CELULAR
    CRISTAL VIOLETA

    Agregar una gota de agua destilada . Dejar


    secar. Se deber fijar por medio del calor

    cubrir el frotis con el mordiente de cido


    tantnico por 30 minutos.

    Importancia
    lavar con agua para adicionar el cristal
    violeta.

    Luego de 2 o 3 minutos laver con agua.


    Esperar el secado. Observar al microscopio

    Permite la
    distincin entre
    las bacterias
    Gram negativas
    de la Gran
    positivas.

    Gram positivas

    Gram negativas

    TINCIONES ESPECIALES Se utilizan


    Tincin de Auramina

    utilizar colorantes
    fluorescentes especiales

    Es un colorante fluorescente
    Son colorantes
    fluorescentes especiales

    Se utiliza generalmente para


    teir micro bacterias cuando
    haya gran cantidad de muestras

    Ejemplo
    La tcnica de colorazcin es
    rpida y cmoda

    Se logra observar los bacilos de


    mycobacterium como bastoncillos
    luminiscentes de color amarillo dorado
    sobre un fondo oscuro negro violceo

    Tincin de naranjo de acridina


    esta tcnica se utiliza preferentemente
    en lugares donde haya menos cantidad
    de medios de cultivo
    Su funcionamiento se trata de la unin
    selectiva del naranja de acridina al
    ADN bacteriano
    se observar en el microscopio una
    parte de la bacteria del color amarillo
    fluorescente sobre los restos celulares

    Ejemplo

    Este puede ser el caso del


    hemocultivo, el LCR, etc.

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