Seminario 2. Frotis y Tinciones
Seminario 2. Frotis y Tinciones
Seminario 2. Frotis y Tinciones
HEMATOLOGÍA I
SEMINARIO 2.
FROTIS SANGUÍNEO Y FUNDAMENTO DE
TINCIONES HEMATOLÓGICAS
PRESENTA:
ANDRADE LÓPEZ ALEJANDRO
VÁZQUEZ TRINIDAD BYRON DAVID
VELÁZQUEZ FLORES ELSA ELIENAI
FROTIS SANGUÍNEO
7. Rotular correctamente
ZONAS DEL EXTENDIDO
Cabeza: Zona más proxima al punto de partida, y la
mas gruesa.
Cuerpo: Zona intermedia, la distribución de células
es la adecuada para el recuento.
Cola: Zona más alejada del inicio, suele acabar de
forma irregulas “barbas”
CRITERIOS DE UN BUEN FROTIS
No cubre toda la superficie del portaobjeto
Su espesor disminuye de principio a fin
La sangre quede repartida de forma que no existen
huecos blancos en mitad de la extensión
Las bandas laterales son lisas
COLORANTES
Las tinciones más utilizadas para teñir extensiones sanguíneas y de médula ósea
son las de Giemsa, May Grünwald-Giemsa, Wright y panóptico rápido.
• Estas tinciones son modificaciones de las tinciones de Romanowsky, las cuales contienen colorantes
ácidos (eosina) y colorantes básicos (azul de metileno y sus derivados, estos últimos corresponden a
los colorantes tipo azur)
La tinción de Giemsa es un tipo de coloración
de muestras clínicas, basada en la mezcla de
colorantes ácidos y básicos. Su creación estuvo
inspirada por el trabajo realizado por
Romanowsky, donde Gustav Giemsa, químico y
bacteriólogo originario de Alemania, la
perfeccionó agregando glicerol para estabilizar
los compuestos.
Los cambios generados a la técnica original de
Romanowsky permitieron mejorar
considerablemente las observaciones
microscópicas, por lo tanto la técnica fue
Diversas muestras teñidas con Tinción de Giemsa. A. Trypanosoma
evansi en sangre periférica. B. Células sanguíneas normales. C. bautizada con el nombre de tinción de Giemsa.
Borrelia theileri en sangre periférica. D. Linfoma de Burkitt.
Fundamento
• Los colorantes tipo Romanowsky tienen como
fundamento utilizar un contraste entre colorantes
ácidos y básicos, para lograr teñir las estructuras básicas
y ácidas respectivamente.
• El colorante básico utilizado es el azul de metileno y sus
derivados oxidados (Azure A y Azure B), mientras que el
colorante ácido es la eosina.
Las estructuras ácidas de las células son los ácidos nucleicos, los gránulos
de los segmentados basófilos, entre otras, por tanto serán teñidos con el
azul de metileno.
Las muestras pueden ser sangre, médula ósea, cortes de tejidos histológicos o
muestras cervico-vaginal. Se recomienda que los extendidos sean finos y tengan
1 o 2 horas de secado antes de colorearlos.
Sobre un puente de coloración se colocan todas las láminas que se tengan para
colorear. Se trabaja siempre en un mismo orden y se identifica bien cada lámina.
Colocar unas gotas de alcohol metílico al 100% (metanol) sobre el frotis y dejar
actuar por 3 a 5 minutos, con el fin de fijar y deshidratar la muestra.
• 3-Colocar el frotis seco sobre el puente de coloración o cubeta de tinción con el extendido de la muestra hacia arriba.
• 4-Cubrir la lámina con el colorante de Wright gota a gota hasta abarcar toda la superficie. Dejar actuar durante 5 – 8 minutos.
• 5-El colorante deberá cubrir completamente el portaobjeto, sin que se derrame por los bordes. Si durante el tiempo de coloración se comienza a
evaporar se deberán colocar unas gotas adicionales.
• 6-Posteriormente adicionar una cantidad igual del amortiguador, soplar un poco hasta que aparezca el característico brillo metálico. Cronometrar 10 a 15
minutos.
• 7-Lavar con agua de grifo, colocando el chorro suave hasta que la lámina se vea rosada.
• 8-Con una gasa impregnada de alcohol eliminar el colorante adherido en el dorso del portaobjetos.
• 9-Dejar secar muy bien el frotis antes de colocar el aceite de inmersión para visualizarlo en el microscopio.
T inc ión Panópt ico Ráp ido
Los colorantes que forman el Panóptico Rápido combinan
la policromía y calidad de los métodos clásicos de tinción
hematológica (May Grünwald, Giemsa, Wright). Se trata
de una técnica que se realiza por immersión en las
soluciones colorantes.
Como en el resto de tinciones de tipo Romanowsky, los
colorantes básicos se unen a los componentes ácidos de
las células, ácidos nucleicos, gránulos en neutrófilos y
proteínas ácidas que se tiñen de un color rojo púrpura
más o menos intenso, mientras que los colorantes ácidos
se une a la hemoglobina, componentes básicos de las
estructuras celulares y los gránulos de los eosinófilos.
Su utilización permite la tinción diferencial de las células sanguíneas de sangre periférica,
médula ósea y muestras de esperma.
BIBLIOGRAFÍA
Silva, G., C. & Garcia, B., J. (2004). Manual Del Técnico Superior de Laboratorio de Analisis Clinicos.
Modulo I. Editorial MAD S. L.
Carr, J. H., & Rodak, B. F. (2010). Atlas de hematología clínica. Argentina: Editorial Médica Panamericana
S.A.
Megías M, Molist P, Pombal MA. (2019). Atlas de histología vegetal y animal. Técnicas histológicas.
Recuperado 20/01/20 de: http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/1-introduccion.php
lifeder.com. (20 de enero de 2020). lifeder.com. Obtenido de https://www.lifeder.com/tincion-may-grunwald-
giemsa/
lifeder. (20 de enero de 2020). lifeder.com. Obtenido de https://www.lifeder.com/tincion-de-wright/
Óscar, S. (2014). Validación del extracto del exocarpo de Renealmia alpinia (kumpia) como colorante nuclear
tisular. Retrieved 21 January 2020, from
http://repositorio.uwiener.edu.pe/xmlui/bitstream/handle/123456789/96/061%20004%20EAP%20TECNOLO
GIA%20SANTA%20CRUZ%2Crev.LB.pdf?sequence=1&isAllowed=y
Tinciones Hematológicas. (2019). Retrieved 21 January 2020, from
http://www.euroveterinaria.com/img/cms/BOLETIN/NewsletterMayo%20_Tinciones.pdf
Gil, M. (2018). Tinción de Giemsa: fundamento, materiales, técnica y usos - Lifeder. Retrieved 21 January
2020, from https://www.lifeder.com/tincion-de-giemsa/#Fundamento_de_la_coloracion_de_Giemsa