REPASO

4. Observación de las bacterias. Examen microscópico

 Métodos microscópicos de observación de las bacterias:
 Examen en fresco: sin tinción
 Tinciones:
– Simples: 1 colorante
– Diferenciales o compuestas:
 Tinción de Gram
 Tinción de Ziehl-Neelsen o de ácido-alcohol resistencia
– Tinciones específicas: revelan estructuras bacterianas Ej:
endosporas
– Tinciones fluorescentes: Auramina (micobacterias) y otras
– Otras tinciones: Giemsa y otras
 Exámenes especiales (en microscopio electrónico)
4. Observación de las bacterias. Examen microscópico

TINCIÓN DE GRAM
• Tinción diferencial o compuesta
• Diferencias en estructura y/o composición química de la pared
bacteriana
• Gran utilidad: identificación y clasificación bacterias
• Pasos de la tinción de Gram:

1. Primer colorante, colorante principal: CRISTAL VIOLETA

2. Mordiente: incrementa afinidad. LUGOL (solución de yodo)

3. Decolorante: elimina el primer colorante en algunas bacterias.

ALCOHOL-ACETONA

4. Colorante de contraste: SAFRANINA, tiñe sólo las bacterias que

se han decolorado.
4. Observación de las bacterias. Examen microscópico

TINCIÓN DE GRAM
• Gran utilidad: identificación y clasificación bacterias
 Bacterias grampositivas, G(+): color azul-violeta
 Bacterias gramnegativas, G(-): color rosa-rojizo

Tinción de Gram:
1. Cristal violeta

2. Mordiente

3. Decolorante

4. Safranina

grampositiva gramnegativa
Observación de las bacterias. Examen microscópico

Cocos grampositivos en racimos (izq.) y cadenas (dcha.)

Observación de las bacterias. Examen microscópico

Cocos gramnegativos
Estructuras obligatorias, constantes
Pared celular de MICOBACTERIAS
 Micobacterias
Tinción de Ziehl-Neelsen
1. Fucsina fenicada (calentar 3 veces)
2. HCl + alcohol (1 minuto)
3. Azul de metileno (1 minuto)
BAAR: no se decoloran y quedan teñidas de fucsia, rosa-rojo. El
resto de componentes de la preparación queda teñido de azul.
 Micobacterias. Características generales

 Género Mycobacterium
 Aerobias estrictas
 Patógenos intracelulares facultativos
 Bacterias ácido-alcohol resistentes (BAAR), tinción de Ziehl-Neelsen
 Crecimiento muy lento (hasta 8 semanas), existen excepciones
(micobacterias de crecimiento rápido)
 Necesitan medios de cultivo con hierro y lípidos
 Se utilizan medios con huevo (Lowenstein-Jensen)
 En medios líquidos se detectan más rápidamente

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 Mycobacterium tuberculosis

Epidemiología

 1/4 de la población mundial está infectada

 Importante causa de mortalidad en países en vías de desarrollo

 Asociada a mala situación socioeconómica y hacinamiento

 El SIDA favorece su reactivación y evolución rápida: en los últimos

años ha aumentado su frecuencia también en países desarrollados

 Transmisión: gotas de Pflügge (enfermedad pulmonar activa,

pacientes bacilíferos)

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 Estructuras facultativas
• Cápsula

 Protege del sistema inmune (dificulta la fagocitosis, Tinción con tinta china
 confiere virulencia, antigenicidad…)
 Dificulta la acción de algunos antimicrobianos
 Participa en la adherencia
 Evita deshidratación
 Impide entrada de detergentes
Los hongos son eucariotas (uni o pluricelulares)
Diferencias con bacterias:
Núcleo con cromosomas
Pared celular de los hongos
Membrana nuclear
Nucleolo rico en ARN
Mitocondrias
Aparato de Golgi
Essentials of
Retículo endoplásmico Glycobiology
Second Edition

Ribosomas 80S
 Hifas ramificadas
Blanco calcofluor

Aspergillus fumigatus. Colonia

Micelio: conjunto de hifas

Aspergillus fumigatus.
Micelio. Conidioforo
 Cultivo de
Candida albicans

Candida albicans, Gram

de cultivo
Candida (Candida albicans y otras especies)
Candida en al menos un cuarto de bocas sanas
Candida en equilibrio dentro de microbiota oral
Patología por alteración de mecanismos defensivos
• Cantidad y tipo de saliva
• pH
• Presencia de prótesis dental
• Tratamiento antibiótico
• Tratamiento con corticoides
• Inmunodepresión
También influyen factores de patogenicidad de la
levadura
  Diagnóstico
• Observación microscópica
 En fresco
 Tinciones
• Cultivo
• Identificación

Test de filamentación
El test de filamentación sirve para poder detectar
el tubo germinal de C.albicans. El tubo germinal es una
extensión filamentosa de la levadura, sin
estrechamiento en su origen, cuyo ancho suele ser la
mitad de la célula progenitora y su longitud tres o
cuatro veces mayor que la célula madre.
Esta prueba es útil para diferenciar C. albicans del resto
de las especies de Candida
3. Observación microscópica de hongos filamentosos
con azul de lactofenol
 CRECIMIENTO BACTERIANO EN EL LABORATORIO

• En el laboratorio tenemos que:

1. Reproducir las condiciones óptimas de crecimiento: T, O 2, H2O, pH y

presión osmótica.
2. Suministrar nutrientes
• Para ello disponemos de:
 Medios de cultivo: sólidos, semisólidos, líquidos. Pueden ser de
origen natural o sintético, también semisintético.
 Estufas de incubación:
• Temperatura

• Atmósfera: aerobiosis, anaerobiosis, enriquecimiento con CO 2,

microaerofilia.
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 CRECIMIENTO BACTERIANO EN EL LABORATORIO

 Medios de cultivo:
 Sólidos,
 Semisólidos,
 Líquidos.

Medios de cultivo:
No selectivos: contienen suficientes nutrientes como para soportar el
crecimiento de gran variedad de microorganismos.
Selectivos: permiten el crecimiento de sólo un tipo de microorganismo.
Enriquecido: son medios no selectivos que se le agrega sustancias como
sangre, suero, albúmina, etc
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 CRECIMIENTO BACTERIANO EN EL LABORATORIO

Medios de cultivo. Ejemplos:

 Generales, no selectivos: agar sangre.
 Selectivos: agar Sabouraud (crecimiento de hongos).
 Selectivos y diferenciales: agar MacConkey (crecimiento de enterobacterias,
diferenciación según fermentación de la lactosa).
 Enriquecidos: caldo tioglicolato (aerobios y anaerobios).

Agar:
 Consistencia al medio de cultivo
Imagen: Stefan Walkowski. Aeromonas
 No consumido por las bacterias
Imagen: Dr David Midgley . Aspergillus fumigatus.
hydrophila colonies 01. 2015. Disponible en:  No altera crecimiento bacterias 2006. Disponible en:
https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Aerom https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Aspergillus
onas_hydrophila_colonies_01.jpg?uselang=es _fumigatus.jpg?uselang=es 20
 CRECIMIENTO BACTERIANO EN EL LABORATORIO

 Medios de cultivo:

Agar Müeller Hinton es un medio nutritivo sólido, no selectivo, que está

compuesto por infusión de carne, peptona ácida de caseína, almidón, agar.
Este medio permite un excelente desarrollo microbiano de la mayoría de
las bacterias de crecimiento rápido.

El agar Müeller Hinton es el medio de cultivo aceptado para la ejecución de

la prueba de susceptibilidad antimicrobiana por el método de difusión en
disco.

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¿Qué es la microbiota?
¿Dónde se encuentra la microbiota?
 Funciones
La microbiota promueve el aprovechamiento de nutrientes no digeribles,
genera nutrientes esenciales y modifica la actividad de alimentos y
fármacos.

La microbiota es esencial para el correcto desarrollo del sistema

gastrointestinal y del sistema nervioso.

Las bacteriocinas, ácidos y otros compuestos antimicrobianos producidos

por la
microbiota nos protegen contra los microorganismos patógenos.

La microbiota contribuye de forma decisiva al correcto funcionamiento de

nuestro sistema inmunitario.
Intervenciones sobre la microbiota

Existe base racional para considerar el intento de reparación

experimental de la microbiota intestinal como herramienta con
aplicabilidad clínica para el tratamiento de distintas entidades
relacionadas con la microbiota intestinal (disbiosis)

 Probióticos
 Prebióticos
 Simbióticos
 Trasplante fecal
 Probióticos

Los probióticos más usados son especies de Lactobacillus y Bifidobacterium

 ¿Desde cuando se conocen?

Elie Metchnikoff
1910
 IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA DE BACTERIAS

• El conocimiento del metabolismo bacteriano es una de las bases del diagnóstico

microbiológico.
• Mediante la realización de pruebas bioquímicas en el laboratorio podemos
determinar las características metabólicas de una bacteria. Detectamos las
enzimas que produce.
• Las diferentes especies bacterianas producen distintas enzimas. Conociendo las
enzimas que produce una bacteria podemos identificarla.
• El perfil enzimático de una bacteria está codificado genéticamente.
• IDENTIFICAR una bacteria = establecer el género y la especie.

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 IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA DE BACTERIAS

• Algunas pruebas bioquímicas utilizadas en diagnóstico microbiológico:

1. Pruebas basadas en presencia de enzimas:

 Prueba de la catalasa
 Prueba de la ureasa
 …

2. Pruebas para evidenciar vías metabólicas:

 Pruebas de oxidación y fermentación
 Degradación de aminoácidos
 Utilización de un sustrato
 …

3. Capacidad de sobrevivir en presencia de inhibidores: toxinas, antibióticos…

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METABOLISMO BACTERIANO
–La vía AEROBIA produce 2 moléculas tóxicas
(oxidantes):

H2O2

O-2 (anión superóxido)

–Algunas bacterias tienen mecanismos antioxidantes para

eliminar estos productos:

 Catalasa: trasforma H2O2 en H2O y O2

 Superóxido dismutasa: transforma O- en H O

Reacción de la Catalasa

Agua oxigenada: H2O2

Catalasa

H2O + O-

Burbujas
 GÉNERO ESPECIE COAGULASA
Staphylococcus aureus Positivo
Staphylococcus epidermidis Negativo
saprophyticus (SCN)
Coagulasa
 Staphylococus coagulasa
negativos

No posee enzima coagulasa (coagulasa -)  diferencia

con Staphylococcus aureus.
Posee enzima catalasa (catalasa +)  diferencia con los
Streptococcus.