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    Galerie API20 E

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    Le document décrit le fonctionnement de la galerie API 20E utilisée pour identifier les bactéries à Gram négatif. La galerie contient 20 tests biochimiques sous forme de microtubes permettant de déterminer les caractéristiques métaboliques d'un isolat bactérien inoculé. Les résultats des tests permettent d'identifier la bactérie grâce à des tableaux de correspondance.

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    FICHE TECHNIQUE

    GALERIE API 20E

    MICRO-GALERIE

    PRINCIPE :
    Le systme API BioMrieux (Appareillage et Procd dIdentification) est une version miniaturise et standardise
    des techniques biochimiques conventionnelles pour lidentification des bactries.
    Lorquune suspension bactrienne de densit convenable est rpartie dans les diffrentes alvoles qui composent la
    microgalerie (contenant de substrats dshydrats), les mtabolites produits durant la priode dincubation se
    traduisent par des changements de couleur spontans ou rvls par addition de ractifs.
    Elle permet lidentification dune centaine de bacilles Gram ngatif dont les Entrobactries.
    Elle comprend 20 tests biochimiques.
    TECHNIQUE :
    Prparation de la galerie
    Runir fond et couvercle dune bote dincubation et rpartir de leau dans les alvoles pour crer une
    atmosphre humide.
    Dposer strilement la galerie dans la bote dincubation
    Prparation de linoculum
    Ouvrir une ampoule de Suspension Medium (ou un tube deau distille strile)
    Prlever une seule colonie bien isole sur milieu glos
    Raliser une suspension bactrienne faible (opacit 0,5 sur lchelle Mc Farland)
    Inoculation de la galerie
    Remplissage des tubes :
    Remplir les tubules et les cupules des tests du type CIT
    Remplir les tubules des tests du type ADH et remplir la cupule
    avec de lhuile de paraffine, pour crer lanarobiose.

    Pipette Pasteur
    Cupule

    Tubule

    Remplir uniquement les tubules des tests restants

    Remplir en posant la pipette


    contre la paroi de la cupule.

    Remarque : il est important de veiller ne pas crer de bulles lors de linoculation qui pourraient fausser le
    rsultat. De plus lapparition de bulles aprs incubation apportera un caractre didentification supplmentaire
    (GAZ+)
    RESULTATS :
    Noter sur la fiche de rsultats toutes les ractions spontanes.
    Raliser les tests ncessitant laddition de ractifs : Test VP, TDA, IND, Nitrate rductase
    IDENTIFICATION :
    Avec le tableau didentification : comparer les ractions notes sur la fiche de rsultats avec celle du
    tableau : chaque cellule de ce tableau contient les pourcentages de positivit
    Avec le catalogue analytique : Les tests sont regroups en groupe de 3, et une valeur (1, 2 ou 4) est
    indique pour chacun. Additionner lintrieur de chaque groupe les nombres correspondants aux tests positifs.
    On obtient un nombre 7 chiffres qui sert de code didentification
    Avec un logiciel didentification

    TABLEAU DE LECTURE DE LA GALERIE MINIATURISEE API 20E


    Microtube

    Substrat

    Caractre recherch

    Lecture directe ou indirecte (Test si ncessaire)

    ONPG

    Ortho-Nitro-Phnyl-Galactoside -galactosidase

    Lecture directe

    ADH
    LDC
    ODH

    Arginine
    Lysine
    Ornithine

    Arginine dihydrolase
    Lysine dcarboxylase
    Ornithine dcarboxylase

    Lecture directe

    CIT

    Citrate

    Utilisation du citrate

    Lecture directe

    H2S

    Thiosulfate de sodium

    Production dH2S

    Lecture directe

    URE

    Ure

    Urase

    Lecture directe

    TDA

    Tryptophane

    Tryptophane dsaminase

    Lecture indirecte
    Test : ajouter 1 goutte de Perchlorure de Fer

    IND

    Tryptophane

    Production dindole

    Lecture indirecte
    Test : ajouter 1 goutte de ractif de Kovacs

    VP

    Pyruvate de sodium

    Production dactone

    Lecture indirecte (Attendre 10 minutes)


    Test : ajouter 1 goutte de KOH et d-napthol

    GEL

    Glatine emprisonnant
    particules de charbon

    Glatinase

    Lecture directe

    Utilisation de substrat carbon

    Lecture directe

    Nitrate rductase

    Lecture indirecte dans la cupule GLU


    Test : ajouter 1 goutte de ractif de Griess
    Ajouter de la poudre zinc en cas de rsultat ngatif

    GLU ARA Substrat carbon


    -/

    NO2 N2

    Nitrates (NO3)

    des

    Rsultat +

    Rsultat -

    TABLEAU DE LECTURE DE LA GALERIE MINIATURISEE API 20E


    Microtube
    ONPG

    Substrat

    Caractre recherch

    Lecture directe ou indirecte (Test si ncessaire)

    Ortho-Nitro-Phnyl-Galactoside -galactosidase

    Lecture directe

    ADH
    LDC
    ODH

    Arginine
    Lysine
    Ornithine

    Arginine dihydrolase
    Lysine dcarboxylase
    Ornithine dcarboxylase

    Lecture directe

    CIT

    Citrate

    Utilisation du citrate

    Lecture directe

    H2S

    Thiosulfate de sodium

    Production dH2S

    Lecture directe

    URE

    Ure

    Urase

    Lecture directe

    TDA

    Tryptophane

    Tryptophane dsaminase

    Lecture indirecte
    Test : ajouter 1 goutte de Perchlorure de Fer

    IND

    Tryptophane

    Production dindole

    Lecture indirecte
    Test : ajouter 1 goutte de ractif de Kovacs

    VP

    Pyruvate de sodium

    Production dactone

    Lecture indirecte (Attendre 10 minutes)


    Test : ajouter 1 goutte de KOH et d-napthol

    Glatinase

    Lecture directe

    Utilisation de substrat carbon

    Lecture directe

    Nitrate rductase

    Lecture indirecte dans la cupule GLU


    Test : ajouter 1 goutte de ractif de Griess
    Ajouter de la poudre zinc en cas de rsultat ngatif

    GEL

    Glatine emprisonnant
    particules de charbon

    GLU ARA Substrat carbon

    -/

    NO2 N2

    Nitrates (NO3)

    des

    Rsultat +

    Rsultat -

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