Iso 7954 1987
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Microbiologie - Directives générales pour le
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dénombrement des levures et moisissures -
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Technique par comptage des colonies à 25 OC
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Microbiology - General guidance for enurneration of yeasts and moulds - Colony Count
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technique at 25 OC
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Numéro de référence
ISO 7954 : 1987 (F)
Avant-propos
L’ISO (Organisation internationale de normalisation) est une fédération mondiale
d’organismes nationaux de normalisation (comités membres de I’ISO). L’élaboration
des Normes internationales est normalement confiée aux comités techniques de I’ISO.
Chaque comité membre intéressé par une étude a le droit de faire partie du comité
technique créé à cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non
gouvernementales, .en liaison avec I’ISO participent également aux travaux.
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Les projets de Normes internationales adoptés par les comités techniques sont soumis
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aux comités membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter-
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nationales par le Conseil de I’ISO. Les Normes internationales sont approuvées confor-
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mément aux procédures de I’ISO qui requièrent l’approbation de 75 % au moins des 79 sis
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comités membres votants.
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La Norme internationale ISO 7954 a été élaborée par le comité technique ISO/TC 34,
Produits agricoles alimentaires.
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L’attention des utilisateurs est attirée sur le fait que toutes les Normes internationales
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sont de temps en temps soumises à révision et que toute référence faite à une autre
Norme internationale dans le présent document implique qu’il s’agit, sauf indication
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Imprimé en Suisse
NORME INTERNATIONALE ISO 7954 : 1987 (F)
0 Introduction 2 Références
La présente Norme internationale se propose de fournir des ISO 6887, Microbiologie - Directives générales pour la prépa-
directives générales pour l’examen microbiologique de produits ration des dilutions en vue de l’examen microbiologique.
alimentaires non concernés par les Normes internationales exis-
tant actuellement et pour être prises en considération par les ISO 7218, Microbiologie - Directives générales pour les exa-
organisations élaborant des méthodes d’essai microbiologiques mens microbiologiques.
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destinées à être appliquées à des produits alimentaires ou à des
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aliments pour animaux.
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3 Définition
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En raison de la grande diversité des produits entrant dans ce
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efforts seront faits pour appliquer, chaque fois qu’il sera possi-
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Lorsque la présente Norme internationale sera réexaminée, il 4.1 Ensemencement en profondeur d’un milieu de culture
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moment-là, à savoir dans quelle mesure les directives auront quantité définie de l’échantillon pour essai, si le produit est
tp
été suivies et les raisons pour lesquelles il aura été nécessaire liquide, ou de la suspension mère pour les autres produits.
ht
La présente Norme internationale donne des directives généra- 5.1 Composants de base
les pour le dénombrement des levures et moisissures revivifia-
bles dans les produits destinés à la consommation humaine ou Pour améliorer la reproductibilité des résultats, il est recom-
à l’alimentation animale, par comptage des colonies à 25 OC. mandé d’utiliser, pour la préparation du milieu de culture, des
composants de base déshydratés ou un milieu complet déshy-
NOTE - Du fait de la nature même des levures et des moisissures, le draté. Les prescriptions du fabricant doivent être suivies scru-
dénombrement sera sujet à certaines imprécisions. puleusement.
1
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Les produits ch imiques u tilisés doivent être de qualité analy- 6.1 Appareil pour la stérilisation en chaleur sèche (four)
tique reconnue. ou en chaleur humide (autoclave autonome ou
(autoclave)
faisant partie d’un ensemble pour la préparation et la répartition
L’eau utilisée doit être distillée ou déionisée, exempte de sub- des milieux.
stances susceptibles d’inhiber la croissance des levures et des
moisissures dans les conditions de l’essai. Le matériel destiné à entrer en contact avec le diluant, le milieu
de culture et l’échantillon, sauf s’il est livré stérile (particulière-
Les mesures du pH doivent être effectuées au moyen d’un ment le matériel en matière plastique), doit être stérilisé par
PH-,mètre à compensation de température (6.4). l’une des méthodes suivantes :
Si le diluant et le milieu ne sont pas utilisés extemporanément, a) au four (6.1), en le maintenant à une température de
ils doivent, sauf spécifications contraires, être conservés à 170 à 175 OC pendant au moins 1 h;
l’obscurité entre 0 et 5 OC pendant 1 mois au maximum, dans
des conditions évitant toute modification de leur composition. b) à l’autoclave (6.1), en le maintenant à une température
de 121 -+ 1 OC pendant au moins 20 min.
5.2 Diluant
6.2 Étuve, réglable à 25 +
- 1 OC,
Se reporter à I’ISO 6887 et à la Norme internationale spécifique
du produit à examiner. 6.3 Bain d’eau, réglable à 45 +
- 1 OC.
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I 6.4 pH-mètre à compensation de température, ayant
5.3 Gel ose à l’extra it de levure au dextrose
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une précision de réglage de k 0,l unité de pH à 25 OC.
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chl oram phénicol
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NOTE - Des flacons de culture munis de couvercles à vis en métal non
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Composant Quantité
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Extrait de levure 59
Dextrose ( CgH ,206) 6.6 Pipettes graduées, étalonnées spécialement pour
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Eau 1000 ml
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* Afin d’obtenir une concentration finale du milieu de 100 ug/ml. 6.7 Boîtes de Petri, d’un diamètre de 90 à 100 mm.
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7 Échantillonnage
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6 Appareillage et verrerie
9 Mode opératoire
NOTE - Le matériel à usage unique est acceptable au même titre que
la verrerie réutilisable, si ses spécifications sont similaires. 9.1 Prise d’essai, suspension mère et dilutions
Matériel courant de laboratoiru de microbiologie, et notam- Se reporter à I’ISO 6887 et à la Norme internationale spécifique
ment : du produit à examiner.
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ISO 7954 : 1987 (FI
S’il n’y a pas de Norme internationale spécifique disponible, il 10.1.2 Le nombre de levures et moisissures par gramme ou
est recommandé que les parties concernées se mettent par millilitre est égal à
d’accord à ce sujet.
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9.2 Ensemencement et incubation b-z, + 0,l n2) d
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9.2.3 Couler dans chaque boîte de Petri, environ 15 ml de la significatifs. Lorsque le nombre à arrondir est 5, sans autres
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chiffres significatifs, l’arrondir de manière que le chiffre immé-
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gélose à l’extrait de levure au dextrose et au chloramphénicol
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(5.3), provenant d’un fiacon de culture (6.5) fondue au préala- diatement à gauche soit pair, par exemple, 28 500 est arrondi à
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28 000; 11 500 est arrondi à 12 000.
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ble et maintenue à 45 + - 1 OC dans le bain d’eau (6.3). Le
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sion mère (ou de la dilution 10-l dans le cas d’un produit
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doit pas dépasser 15 min. entre 1,0 et 9,9 multiplié par lO/ x étant la puissance appro-
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priée de 10.
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difier en posant les boîtes de Petri sur une surface fraîche hori- S’il n’y a aucune colonie sur les boîtes au niveau de la suspen-
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contrôler sa stérilité.
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9.2.4 Retourner les boîtes et les placer à l’étuve (6.2) à levures et de moisissures par millilitre de produit sera rapporté
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Compter les colonies sur chaque boîte après 3, 4 et 5 jours Un dénombrement de levures et moisissures a donné les
d’incubation. Après 5 jours, retenir les boîtes contenant moins résultats suivants (deux boîtes de Petri par dilution furent incu-
de 150 colonies. Si des parties de boîtes sont envahies par des bées) :
moisissures ou s’il est difficile de compter des colonies bien iso-
lées, retenir les comptages obtenus après 4, ou même 3 jours
d’incubation. Dans ce cas, la durée d’incubation, de 3 ou 4 dilution 10 - 2 : 83 et 97 colonies
jours, doit être indiquée au procès-verbal d’essai.
dilution IO- 3 : 33 et 28 colonies
Si cela est nécessaire, procéder à un examen microscopique
pour distinguer, selon l’aspect morphologique, les colonies de CC 83 + 97 + 33 + 28 241
levures et moisissures des colonies de bactéries.
hz, + 0,l n2) d = [2 + (0,l x 211 x 10-2 = 0,022
= 10954
10 Expression des résultats
En arrondissant le résultat comme spécifié en 10.1.3, on obtient
10.1 Calcul 11000.
10.1 .l Utiliser les dénombrements à partir des boîtes conte- Le nombre estimé de levures et moisissures, par gramme ou par
nant moins de 150 colonies. millilitre, est donc de 1,l x 104.
ISO 7954 : 1987 IF)
10.3 Fidélité mentionner tous les détails opératoires non prévus dans la pré-
sente Norme internationale, ou facultatifs, ainsi que les inci-
Pour des raisons d’ordre statistique, dans 95 % des cas, les dents éventuels susceptibles d’avoir agi sur les résultats.
limites de confiance de cette méthode varient de + 16 % à
k 52 % [ll. En pratique, des variations plus importantes encore Le procès-verbal d’essai doit donner tous les renseignements
peuvent être observées et, en particulier, entre les résultats nécessaires à l’identification complète de l’échantillon.
obtenus par différents microbiologistes.
Le procès-verbal d’essai doit indiquer la méthode utilisée, la [Il COWELL et MORISETTI, J. Sd FoodAgric., 1969 (Vol. 20),
durée d’incubation et les résultats obtenus. II doit, en outre, p. 573.
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CDU
Descripteurs
agricole,
produit
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analyse
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