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    Ce document décrit une expérience visant à identifier les ganglions primaires et secondaires chez une souris BALB-C. Il détaille les étapes de la dissection pour identifier la rate, le thymus, la moelle osseuse, les amygdales et autres organes lymphoïdes. Le résumé comprend également les résultats de la pesée des organes et le calcul des indices thymique et splénique.

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    But:- determination de l`emplacement des gonglions primaires et secondaires chez une souris

    BALB-C
    -observation microscopiques des cellules lymphoides de la rate d`une souris BALB-C afin de
    detecter la viabilite lymphocytaire
    Principe:-dissection d`une souris BALB-C apres anasthesie
    - prelevement de la rate a partir du souris BALB-C avec ecrassement a l`aide de Pbs
    Manipulation:
    1-on epingle la souris sur une planche et on effectue une incision au niveau de l`abdomen depuis
    la mandibule jusqu`a l`appendice xiphoides afin d`ecater le revetement cutanee (PEAU) et par la
    suite on visualise :
    -les gonglions sous peau (gonglions axillaires +gonglions inguinaux) au niveau du carreffour des
    vaisseaux sanguins qui ont ume forme ovoides dont la taille varie entre 0.3 et 1 cm
    Caracterise par une intervention rapide contre les agents pathogenes
    - responsable des reactions immunitaires :
    -les amygdales: sont l`ensemble de gonglions lymphatiques situes a l`entree du pharynx juste
    derriere le voile du palais joue un role fondamental dans la defense contre les infections elles
    sont en effets un premier barrage a l`intrusion des microbes

    Les amygdales

    Gonglions
    axillaires

    Les gonglions
    inguinaux
    2-On effectue une incision au niveau de muscle abdominale
    -la rate:est de couleur rouge ou pourpre fonce organe profond
    situe dans l`hypocondre gauche accole a face laterale
    de l`estomac
    Elle fait partie des organes lymphoides secondaires
    La rate a deux roles:
    *Dans l`immunite notament l`immunite cellulaire : elle intervient dans
    le controle des infections a bacteries encapsulees en particulier les
    pneumocoques et les meningocoques
    *dans le renouvellement des cellules sanguins

    -l`appendice:encore qualifie d`appendice vermiforme ,est un prolongement de la partie droite


    et inferieur du colon,la caecum

    Cette organe contient des cellules immunitaires utiles


    pour la coordination de la reponse intestinale aux
    attaques de micro-organismes pathogenes

    -la plaque de peyer: l`un des nombreux amas de tissu lymphatique dans le revetement de l`ileon
    (derniere partie del`intestin grele)don’t la fonction tout comme celle d`un ganglion lymphatique
    est de reconnaitre et de combattre les infections intestinals
    3-afin de visualiser le thymus on a enlever la cage thoracique

    Le thymus:c`est un organe mou constitue de deux lobes le plus


    souvant de taille differente dont le gauche et plus developpe,il est
    rarement thoracique mais le souvant cdervicaux thoracique situe a la
    partie antero-inferieur du cou et dans le mediastat anterieur
    Il s`agit bien d`un organe lymphoide primaire car il est specialise
    dans la maturation des LT d`origine medulaire subissent ume
    differenciation cellulaire qui se fait par l`aquisition des recepteurs
    specifiques

    4-Afin de devoiler l`os long on elimine le muscle qui le recouvre(1) et on le preleve a partir du
    deux articulations(2) qui va etre par la suite hachurer au niveau de ces deux extrimites(3) et a
    l`aide d`une sureingue remplie de Pbs on fait sortir la moelle osseuse(4)
    5-

    2
    3

    1 4
    La moelle osseuse: est un tissu situe au centre des os il s`agit bien d`un organe lymphoide
    primaire,dans lequel il y`avait naissance des lymphocytes T et B ainsi que la maturation des LB

    6-note sourie est de poids=17.53(g)


    7-On effectue une thymectomie(prelevement de la thymus )afin de le peser et on obtient un
    poids =10.3(mg)
    8-On effectue une splenectomie (prelevement de la rate) afin de la peser et on obtient un
    poids=246(mg)
    Sourie1 Sourie2 Sourie3 Sourie4 Sourie5

    Poids(g) 17.53 19.27 29.88 26.88 18.64

    Poid de 0.0103 0.0212 0.0161 0.0935 0.0254


    thymus(g)
    Index thymique 0.587 1.1 0.53 3.48 1.36

    Poid de la 0.246 0.224 0.278 0.044 0.129


    rate(g)
    Index splenique 14.03 11.65 9.63 16.76 6.93

    Avec:

    courbe de l`index thymique en fonction de poids de souris


    4

    3.5

    2.5
    index thymique

    1.5

    L`index thymique=Poids de thymus(g)/poids de l`animal(g)*1000


    1

    L`index splenique=poids de la rete (g)/poids de l`animal(g)*1000


    0.5

    0
    16 18 20 22 poids de souris(g)
    24 26 28 30 32
    courbe del`index splenique en fonction de poids de souris
    18

    16

    14

    12
    index splenique

    10

    0
    16 18 20 22 24 26 28 30 32

    poids de souris (g)

    NB:l`Index thymique et splenique donnent une indication sur l`etat de l`animal


    9-apres splenectomie , on ecrase la rate en presence de 2 ml de Pbs
    10-On effectue une filtation a l`aide d`une bande a gaz
    11-On introduit dans un tube 1ml de ficoll paque et on lui ajoute en entourant delicatement sur
    la paroi du tube 2ml de note filtrat et on realise par la suite une centrifugation 2500 RPM
    pendant 20min afin d`obtenir des lymphocytes separes aux elements figures du sang : le ficoll-
    paque cree un gradient de densite et par consequence il y avait une agregation des erythrocytes
    et apres centrifugation elles sedimentent et un anneau jaunatre intermediaire entre le ficoll-
    paque et la suspension contenant les lumphocytes apparait
    12-on aspire l`anneau lymphocytaire a l`aide d`une micropipette ,on le met dans un tube
    eppendorf en lui ajouttant 1 a 2 gouttes de bleu Trypan (colorant vitale)
    Apres 1min de contact on dispose une goutte de suspension sur la cellule de Thoma et en
    assurant une observation microscopique on detecte la viabilite des lymphocytes
    SI:
    *la cellule est colore en bleu puisque sa membrane est permeable a ce colorant:il s`agit bien
    d`une cellule morte
    *la cellule est transparente puisque sa membrane est impermeable a ce colorant : il s`agit bien
    d`une cellule vivante
    Determination du pourcentage des cellules viables

    N=n/(a*v*Fd)
    Avec:
    N:nombre de cellules par unite de volume
    n:nombre de cellules comptees
    a:nombre d`unite de comptage denumbres(20 carreaux)
    V:volume d`une unite de comptage (0.01ul)
    Fd:facteur de dilution(10)
    Application numerique:
    N=19/(20*0.01*10)=9.5

    9.5****/*******0.01ul
    X************2ml=2000ul
    Donc X=(2000*9.5)/0.01=19 105
    CONCLUSION:
    -PAR ANALOGIE anatomique de l`organisation interne de la souris et l`homme on peutdeduire
    que le systeme immunitaire de l`homme est composee par des organes lymphoides
    primaires(thymus et moelle osseuse) et secondaires( rate,plaque de peyer, gonglions
    sous_peau,appendice…)
    -pour notre souris le poids de la rate=264mg qui semble unevaleur importante par rapport a son
    poids corporel ce qui indique que la rate est hyperactive( gonflee):declenchement de la reaction
    immunitaire contre une infection quelque part.

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