UNIVERSITE CHEIKH ANTA DIOP DE DAKAR (UCAD)

Ecole Inter-Etats des Sciences et Médecine Vétérinaires

E.I.S.M.V./Dakar
Département des Santé Publique-Environnement

Service de Parasitologie-Maladies parasitaire-Zoologie

appliquée

Semestre 4

Rapport des travaux pratiques

de biochimie clinique
Date: Lundi 08 Mars 2021

Membres du groupe  Encadreurs

BAMA Bali Joël Wilfried (S7) Dr MIGUIRI Kalandi

LALLOGO Guesrim (S9) Mme EGUE Camille-Aude

Année universitaire 2020-2021

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 Introduction
Les travaux pratiques de biochimie clinique se sont déroulés dans la journée du jeudi 20 mars
2021. Durant cette journée, nous avons effectué dans un premier temps une révision (généralité)
sur les prélèvements sanguins, la conservation des échantillons et le contrôle de qualité intra
laboratoire. Dans un second temps, nous avons effectué le dosage colorimétrique du glucose.

1. Généralité
1.1. Définition
Le sang est défini comme un tissu liquide circulant dans le cœur, les artères, les veines et les
capillaires constitué du plasma et d’éléments figurés. Le plasma sanguin est le composant liquide
du sang. Il constitue 55 % du volume total du sang et sert à transporter les cellules sanguines et
les hormones à travers le corps. Les éléments figurés correspondent à 45 % du sang et sont
constitués des globules rouges, globules blancs et des plaquettes sanguines.

1.2. Prélèvement sanguin

Les prélèvements sont réalisés dans des tubes dont le choix dépend de l’analyse à effectuer. Ces
tubes peuvent être avec ou sans anticoagulant. Chaque tube est identifiable par la couleur de son
bouchon.
 Le tube à bouchon rouge (tube sec) à usage général,
 Le tube à bouchon jaune (tube simple) avec gel SST à usage général,
 Les tubes à bouchon violet : Contenant de l’EDTA comme anticoagulant utilisé pour les
analyses sur sang total, numération des hématies, dosage des lipides et lipoprotéines,
 Les tubes à bouchon vert contenant de l’héparine lithium comme anticoagulant à usage
général,
 Le tube à bouchon gris : contenant du fluorure /Oxalate et utilisé pour le dosage du
glucose, du lactate ou de l’alcool,
 Le tube à bouchon bleu contenant des Oligo-éléments et utilisés pour le dosage du cuivre
et du zinc.

1.3. Conservation
Après l’identification des tubes et le prélèvement, le sang doit être conservé à 4°C pendant 2 à 3h.
Eviter de congeler l’échantillon afin d’éviter l’hémolyse.
Dans le cas d’un prélèvement sur le terrain, il est conseillé de recueillir le sérum ou le plasma (sur
le terrain) avant le transport au laboratoire d’analyse particulièrement dans le cas du dosage du
glucose afin de limiter l’utilisation du glucose par les cellules mais également l’hémolyse lors du
déplacement.

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1.4. Contrôle de qualité
Définition
Action de mesurer, examiner, essayer, passer au calibre une ou plusieurs caractéristiques d’un
produit ou service et les comparer aux exigences spécifiées en vue d’établir leur conformité. Il
porte à la fois sur l’exactitude et la reproductibilité. Le dosage se fait sur le sérum de contrôle qui
peut être acheter ou préparer par le laboratoire.
De manière concrète, il est réalisé comme suit :

Blanc Etalon E1 S1 E2 S2 E3 S’1 E4 S’2

S 1+ S ' 1
S 1=
2

Exactitude : Vérifier l’accord avec la valeur vraie du sérum de contrôle.

Précision : Comparé l’écart entre la valeur de S1 et celle de S’1

2. Dosage colorimétrique
2.1. Définition et principe
Le dosage colorimétrique. est un type de dosage basé sur la mesure de la colorotion qui est
proportionnelle à la concentration de la substance.L’outil principal utilisé est le
spectrophotomètre qui mesure la densité optique.

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Principe des dosages
Le principe est basé sur la loi de BEER- LAMBERT selon laquelle lorsqu’une fraction
lumineuse traverse une solution, une partie de la lumière est absorbée et l’autre transmise.

Cette loi a permi d’établir la relation suivante 

DO= lC avec DO=densité optique

=coefficient d’extinction moléculaire
L=longueur parcourue
C= concentration de la substance
Par ailleurs, on a :
DO échantillon=LC échantillon (1)
DO étalon= =LC étalon (2)
De (1) /(2) : DO étalon/DO échantillon= C étalon/ C échantillon
DO étalon
D’où  C échantillon=Cétalon
DO échantillon

Paramètres nutritionnels concernés sont protéines, l’urée, les minéraux, le glucose (énergie), les
triglycérides …
Dans le cas du glucose, il s’agit d’une méthode de dosage indirecte à point final utilisant deux
(02) enzymes ; la glucose oxydase et la peroxydase. Le principe est basé sur des réactions
couplées produisant un complexe coloré quantifiable par spectrophotométrie.

2.2. Présentation du matériel

 Grand matériel : Réfrigérateur (conservation des réactifs), congélateur (conservation des
sérums et plasma), centrifugeuse, chaîne électrophorétique (cuve à migration, générateur
de courant continu, densitomètre …), étuve, spectrophotomètre.
 Petit matériel : Pipettes, verrerie, portoir, tubes à hémolyse…
 Identification des tubes

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 NOM (GLUCOSE) SYMBOLE NOM (PROTEINE) SYMBOLE
Blanc Bg Blanc Bp
Etalon glucose Eg Etalon Protéine Ep
Echantillon glucose G Echantillon protéine P

2.3. Préparation des échantillons

Pour le dosage du glucose, trois (03) tubes ont été utilisés. Dans tous les trois (03) tubes, 1mL de
réactif a été introduit. Dans le tube Etalon, 10µL de l’étalon ont été ajoutés et dans le tube
échantillon, 10 µL de l’échantillon. Le tube étalon et le tube échantillon ont ensuite été vortexés
puis incubés à température ambiante pendant 10 minutes avant lecture au spectrophotomètre.
Pour le dosage des protéines, le même procédé a été utilisé mais pour le tube étalon et le tube
échantillon, 20µL de la solution étalon et 20µL de l’échantillons ont été respectivement et
distinctement ajoutés.
Glucose DOSAGE DU GLUCOSE
Définition

Le glucose occupe une place centrale dans le métabolisme des oses. Stocké sous forme
polymérisée, il constitue alors une réserve énergétique car son catabolisme est à l’origine
d’une importante production d’énergie. Cependant il faut noter qu’il existe des espèces
incapables de valoriser le glucose alimentaire (ruminants).

Principe du dosage du glucose

Le principe du dosage de glucose repose sur une réaction d’oxydo-réduction présentée

comme suit :
Glucose oxydase
Glucose + ½ O2 + H2O Gluconate + H2O2

Peroxydase
2H2O2+ 4-Amino-antipyrine +Phénol Quinone-imine + 4H2O

Mode operatoire
Blanc Etalon Echantillon
Etalon 10µL
Echantillon 10µL
Réactif 1mL 1mL 1mL

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Calcul des concentration et interpretation
DO Blanc Do Etalon BAMA LALLOGO
Guesrim
DO échantillon DO échantillon
0,249 0,551 0,496

Concentration etalon 5,6mmol/l

DOECH −DObl
Cec h= × Cet
DOET −DObl

Interpretations
La concentration massique moyenne du glucose obtenue étant de g/L, alors que la
concentration normale chez les equidés est comprise entre 0,6 et 1g/L. On en déduit alors
une . cela peut être liée au
Les valeurs de concentration des deux sérums de contrô le sont sensiblement égales dont la
précision est respectée plus précisément la répétabilité.

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DOSAGEDES PROTEINES PLASMATIQUES TOTALES

Définition
Les proteins sont des macromolecules constituées d’acides aminés reliés par des liaisons
peptidiques. C’est donc l’association qui se fait par des liaisons peptidiques. Elles ont de
multiples fonctions à savoir le maintien de l’équilibre osmotique, le transport des
substances apolaires. Les protéines totales sont un mélange de substances hétérogènes
séparables par électrophorèse en albumine et en globulines. Chez la plupart des espèces la
concentration en protéine totales est comprise entre 60 et 90g/l.

Sur le terrain les protéines totales peuvent être dosées en utilisant un refractomètre.

Intérêt du dosage des protéines 

L’intérêt du dosage des protéines réside dans le diagnostic de pathologies liées aux
métabolismes des protéines. De ce fait la concentration des protéines en fonction des
pathologies :

 Les Hyper protéinémies : sont observées lors des phénomènes de déshydratations liées,
soit à une insuffisance d’apport d’eau, soit à une perte d’eau (diarrhée, vomissement,
parturition)

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  Les hypo protéinémies : peuvent être liée à un défaut de synthèse hépatique (cirrhose), à
des pertes protéiques (hémorragies, état de choc) ou à une insuffisance d’apport (sous-
alimentation) ou absorption

Principe du dosage des protéines totales

Le dosage des protéines totales du plasma ou du sérum se fait selon la réaction de BUIRET. Les
protéines présentent dans l’échantillon réagissent avec les ions cuivre (II) en milieu

alcalin pour donner un complexe de coloration violette quantifiable par spectrophotomètre.

Mode opératoire

Nous avons choisis 3 tubes à hémolyses que nous avons nommé respectivement : Blanc,
étalon puis échantillon et que nous avons disposé sur les portoirs. A l’aide des pipettes
automatiques, nous avons pipeté successivement les solutions tel que indiqué dans le
tableau suivant :

Blanc Etalon Echantillon

Etalon 20µL
Echantillon 20µL
Réactif 1mL 1mL 1mL

calculs des concentrations

DO Blanc Do Etalon BAMA LALLOGO
Guesrim
DO échantillon DO échantillon
0,111 0,489 0,496

Concentration etalon 63,3g /l

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 DOECH −DObl
Cec h= × Cet
DOET −DObl

Cech 1=52.50 mmol/ LCech 2=64.57 mmol/ L

Interprétations :

Chez toutes les espèces animales la norme de protéine dans le sang est de: 60 à 90 g/l.

Notre résultat Echantillon 1 (g/L) est à la norme ; donc On peut dire que l’animal est
en hyper protéinémie. Il va falloir pousser l’analyse jusqu’ à l’électrophorèse pour savoir si
c’est le taux d’albumine ou globuline qui est en hyper.

Conclusion
Ces travaux pratiques ont permis de renforcer certaines bases d’une analyse biochimique
(prélèvement sanguin, identification et conservation des échantillons ainsi que le contrôle de
qualité intra laboratoire). Dans la phase pratique, le dosage colorimétrique du glucose et des
protéines a permis de mettre en évidence hypoglycémie marquée et un taux de protéine faible
chez le cheval.

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