Techniques d’identification fine des huiles

Identification des constituants dans un mélange complexe

Introduction

Les produits naturels d’origine végétale -extraits, huiles essentielles, résines- sont de nos
jours très recherchés. Ils se présentent pratiquement toujours sous forme d’un mélange
complexe constitué de plusieurs dizaines -voire d’une centaine et plus- de composés en
proportions variables. Ces produits naturels présentent un grand intérêt comme matière
première destinée à différents secteurs d’activité tels que la pharmacie, le cosmétique, la
parfumerie et l’agro-alimentaire. De plus, dans le domaine industriel, les molécules qui peuvent
en être isolées, dans la plupart des cas optiquement actives, constituent des substrats intéressants
pour l’hémi-synthèse de produits pharmaceutiques, de vitamines, de substances odorantes, etc.
Cependant, l’identification et la quantification des constituants d’un mélange naturel
demeurent toujours des opérations délicates qui nécessitent souvent l’utilisation conjointe de
plusieurs techniques analytiques. L’analyse de la composition chimique d’un mélange naturel,
telle qu’une huile essentielle s’effectue de manière conventionnelle selon les voies A ou B
(Figure 3).

CPG : Chromatographie en Phase Gazeuse ; SM : Spectrométrie de Masse ; IRTF : Infra -Rouge à Transformée de Fourier ;
CLHP : Chromatographie Liquide à Haute Performance ; RMN : Résonance Magnétique Nucléaire ; CCM :
Chromatographie sur Couche Mince ; CC : Chromatographie sur Colonne ; CPGP : Chromatographie en Phase Gazeuse

1
 Techniques d’identification fine des huiles

Préparative ; HPTLC : Chromatographie sur Couche Mince Haute Performance.

Figure 3 : Méthodes d’analyse d’un mélange complexe (adaptée de Nam, 2014)

L’analyse peut également être menée selon la voie C (Figure 3) qui met en œuvre la
Résonance Magnétique Nucléaire du carbone-13 (RMN 13C) pour l’identification des composés
en mélange sans séparation préalable ou précédée d’une étape de fractionnement réduite au
minimum. Cette technique peut en outre être employée pour la quantification des constituants
si nécessaire.

1. Analyse par des couplages « en ligne » : Voie A

La voie A met en œuvre le couplage « en ligne » des techniques chromatographiques et

spectroscopiques.

1.1. La chromatographie en phase gazeuse (CPG)

La chromatographie en phase gazeuse (CPG) est une technique très répandue, dont les
premières applications sont maintenant vieilles de plus de 60 ans. Son développement qui n’a
cessé depuis, est dû à son extrême sensibilité, à sa polyvalence, à la rapidité de mise au point
des analyses nouvelles et aux possibilités d’automatisation, qui augmentent encore plus son
intérêt. La séparation sur la colonne se faisant sur des composés qui doivent être à l’état gazeux,
l’analyse des liquides ou solides impose de pouvoir les transformer à l’état de vapeur par
chauffage. C’est sans doute la principale contrainte à laquelle il faut penser avant de choisir
cette technique, puisqu’elle limite son emploi à l’étude des composés moléculaires
thermostables et suffisamment volatils. La très grande sensibilité des détecteurs permet de
déceler des quantités de l’ordre du picogramme pour certains composés.

Un appareil de CPG réunit dans un bâti unique, outre les trois modules classiques, injecteur,
colonne et détecteur, un four qui permet de porter, si nécessaire, la colonne à une température
élevée. La phase mobile qui entraîne l’échantillon dans la colonne est un gaz, appelé gaz
vecteur. Les débits, contrôlés avec précision, permettent une grande répétabilité des temps de
rétention. L’analyse débute à l’instant où on introduit une très petite quantité de l’échantillon,
sous forme liquide ou gazeuse, dans l’injecteur, qui a la double fonction de le porter à l’état de
vapeur et de l’amener dans le flux gazeux en tête de la colonne. Celle-ci se présente comme un
tube de faible section enroulé sur lui-même, de 1 à plus de 100 m de longueur suivant les cas et
contenant la phase stationnaire. Cette colonne est placée dans une enceinte à température

2
 Techniques d’identification fine des huiles

régulée. Elle peut servir pour des milliers d’injections successives. La phase gazeuse qui a
traversé la colonne passe dans un détecteur avant de sortir à l’air libre.

Équipement de chromatographie en phase gazeuse avec passeur d'échantillons robotisé.

La CPG permet aussi, grâce à la comparaison des aires des pics, de fournir une
quantification relative des constituants. L’identification d’un composé ne peut être basée
uniquement sur la connaissance de son temps de rétention (tr). En effet, cette valeur dépend
fortement de plusieurs paramètres concernant la phase stationnaire (nature, vieillissement) et
les conditions expérimentales (programmation de température). Aussi, dans le domaine des
huiles essentielles, les constituants sont caractérisés par un couple d’indices de rétention (Ir)
(plus fiables que les temps de rétention), l’un obtenu sur colonne apolaire, l’autre sur colonne
polaire (colonnes capillaires). Ceux-ci sont calculés à partir des temps de rétention d’une
gamme d’étalon d’alcanes linéaires à température constante (Indice de Kováts, IK) ou en
programmation de température (Indices de rétention, Ir). Ils sont ensuite comparés avec ceux
de composés de référence, mesurés au laboratoire ou décrits dans la littérature.

Cependant, des informations supplémentaires sont nécessaires pour établir la structure

chimique de ces composés séparés et quantifiés. Cette information est fournie par des détecteurs
dont le signal est lié à la structure chimique, qui sont des détecteurs spectroscopiques ou
spectrométriques. Parmi eux, le plus utilisé, est le détecteur spectrométrique de masse (SM).

3
 Techniques d’identification fine des huiles

1.2. Couplage d’une technique chromatographique avec une technique spectroscopique

Spectrométrie de masse

La spectrométrie de masse est une technique physique d'analyse permettant de détecter et

d'identifier des molécules d’intérêt par mesure de leur masse, et de caractériser leur structure
chimique. Son principe réside dans la séparation en phase gazeuse de molécules chargées (ions)
en fonction de leur rapport masse/charge (m/z). Elle est utilisée dans pratiquement tous les
domaines scientifiques : physique, astrophysique, chimie en phase gazeuse, chimie organique,
dosages, biologie, médecine... le temps de détection est très rapide.

Spectromètre de masse

1.2.1. Les couplages CPG-SM, CPG-SM(ICP) et CPG-SM(ICN)

Le couplage de la CPG avec la spectrométrie de masse (SM) en mode impact électronique

(IE) est probablement le plus répandu dans les laboratoires d’analyses. Ce couplage a
l’avantage, dans la majorité des cas, de fournir des informations concernant la masse molaire
d’un composé et d’autre part d’identifier un composé en comparant son spectre à ceux contenus
dans des bibliothèques informatisées ou sous format papier construites au laboratoire ou

4
 Techniques d’identification fine des huiles

commerciales. En règle générale, l’utilisation de la bibliothèque de spectres réalisée au sein du

laboratoire permet d’obtenir des résultats plus fiables, ceci est particulièrement vrai pour
l’analyse des huiles essentielles comprenant un grand nombre de sesquiterpènes, qui, construits
à partir d’un même synthon isoprénique, présentent des spectres de masse souvent identiques
ou insuffisamment différenciés. Des informations complémentaires peuvent être obtenues avec
des techniques « d’ionisation douce » telles que l’ionisation chimique positive (ICP) ou
l’ionisation chimique négative (ICN). L’ICP et l’ICN produisent des ions quasi-moléculaires
dont l’observation donne accès à la masse molaire des composés. Ainsi, la SM-ICP a permis de
différencier les quatre stéréo-isomères de l’isopulégol. Toutefois, cette technique a montré ses
limites pour l’identification de molécules possédant des structures très proches. C’est le cas par
exemple du géraniol et du nérol, qui ne diffèrent que par la stéréochimie d’une des doubles
liaisons. En effet, ils possèdent des spectres de masse ICN identiques. Il faut également prendre
en compte la difficulté d’obtenir des spectres, en SM (ICN) ou en SM (ICP), reproductibles
d’un laboratoire à l’autre. C’est pourquoi, cette technique doit surtout être considérée comme
une technique complémentaire de la SM(IE) pour l’identification des constituants des huiles
essentielles.

La CPG bidimensionnelle (CPG x CPG ou CPG-2D) est également une technique

particulièrement intéressante. En effet, l’utilisation de deux séparations consécutives sur deux
colonnes de natures différentes, entraîne une diminution, voir une suppression, des coélutions
contrairement à la CPG-1D. Grâce à cette technique chromatographique, ont pu identifier 135
composés dans l’huile essentielle de vétiver, réputée pour être l’une des plus complexes d’un
point de vue analytique.

1.2.2. Les couplages CPG-IRTF et CPG-IRTF-SM

En complément de l’utilisation de la CPG-SM, un spectrophotomètre Infra Rouge par
Transformée de Fourier (IRTF) peut également être couplé à la CPG. La spectroscopie
infrarouge renseigne sur les fonctions chimiques présentes dans les molécules et permet
également de différencier les isomères par l’examen de la partie de spectre dite « des empreintes
digitales ». Le spectre obtenu peut être comparé à ceux contenus dans une bibliothèque
informatisée de spectres Infrarouge. Le couplage CPG-IRTF peut s’appliquer à l’analyse de
diverses familles de composés : les produits pétroliers et leurs additifs, les arômes, les essences
naturelles, les produits de synthèse. Son efficacité a été démontrée notamment pour l’étude de
molécules présentant des spectres de masse superposables tels que les stéréo-isomères du
farnésol et du menthol. Par exemple, le couplage CPG-IRFT a permis l’identification du

5
 Techniques d’identification fine des huiles

germacrène B qui se transforme partiellement en γ-élémène dans les huiles essentielles d’orange
et de pamplemousse. Ainsi, la CPG permet dans la grande majorité des cas une individualisation
des constituants nécessaire pour une bonne identification. Cependant, de nombreux métabolites
secondaires de masse élevée donc peu volatils nécessitent l’utilisation d’une technique
chromatographique en phase liquide.
1.2.3. Le couplage CLHP-SM et CLHP-SM-SM
La Chromatographie Liquide à Haute Performance (CLHP) est une technique d’analyse
et de quantification d’un grand nombre de molécules, polyvalentes et très répandues. De par la
nature des constituants des huiles essentielles, la CLHP est utilisée dans de très rares cas. Il
s’agit généralement de l’analyse de composés thermolabiles et/ou très polaires ou de composés
peu volatils dans les essences de Citrus. Dans le cas d’extraits végétaux complexes, les temps
nécessaires à la séparation des composés peuvent être très longs, il est alors intéressant d’utiliser
une Chromatographie Ultra Haute Performance (UCLHP) plutôt qu’une CLHP. Le couplage
CLHP-SM a été utilisé pour l’identification d’esters sesquiterpèniques, d’alcaloïdes, des
xanthones, des séco-iridoïdes, dans des extraits méthanoliques mais aussi des psoralènes et des
flavones à partir d’huiles essentielles. Il est cependant, à noter que l’utilisation de conditions
opératoires très variées surtout concernant les colonnes ne permet pas des comparaisons faciles.
Par exemple, la séparation par CLHP, de deux alcaloïdes : hyoscyamine et scopolamine a fait
l’objet depuis le premier article publié en 1976 de plus d’une centaine de publications. Aucune
standardisation n’a été proposée ou ne s’est imposée. Il s’avère donc difficile de choisir les
conditions opératoires, que ce soit en laboratoire ou dans l’industrie.
1.2.4. Le couplage CLHP-CPG-SM
De manière simplifiée, on peut considérer que le couplage CLHP-CPG-SM permet une
séparation préalable des constituants du mélange en fonction de la famille à laquelle ils
appartiennent (CLHP), puis l’individualisation des constituants d’une même famille (CPG), et
l’identification étant réalisée par SM. Ce dispositif a permis l’identification de constituants
présents à l’état de traces dans les huiles essentielles d’agrumes avec une grande fiabilité.
1.2.5. Le couplage CLHP-RMN 1H
La RMN du 1H apporte des informations extrêmement précieuses sur la structure des
molécules, mais présente l’inconvénient d’être beaucoup moins sensible que les techniques
spectroscopiques décrites précédemment (IR et surtout SM).
Néanmoins, la mise en œuvre de couplage CLHP-RMN 1H a été rendu possible grâce au
développement d’aimants supraconducteurs de plus en plus puissants (jusqu’à 23,5 Tesla),
permettant ainsi d’abaisser le seuil de détection pour les composés à des valeurs de l’ordre du

6
 Techniques d’identification fine des huiles

nanogramme. Ce couplage a aussi été rendu possible grâce au développement de colonnes

capillaires dont la faible consommation en éluant permet d’employer des solvants deutérés,
évitant ainsi d’avoir recours à des techniques d’irradiations sélectives.
1.2.6. Le couplage CLHP-RMN 1H-SM
Ce couplage permet de détecter et d’identifier des composés présents dans des échantillons
biologiques complexes, dans des extraits de plantes ou encore de détecter des impuretés dans
un médicament.
Même si ce couplage présente quelques inconvénients (utilisation de solvants deutérés comme
D2O, CD3CN, CD3OD par exemple), l’utilisation conjointe des deux techniques
spectroscopiques facilite toutefois l’identification de composés.
Les solvants deutérés sont différents des solvants non deutérés, car un ou plusieurs de leurs
atomes d’hydrogène ordinaires (protons) sont remplacés par l’isotope stable du deutérium. Cela ne
modifie pas les propriétés chimiques des solvants, mais leur confère des caractéristiques physiques
différentes.
Face à la complexité de certains mélanges, il est nécessaire de procéder en deux étapes :
la purification des constituants de mélanges particulièrement complexes puis leur identification,
illustrée par la voie B ci-dessous.
2. Identification des constituants après purification : Voie B

La voie B est constituée principalement de deux étapes. Le mélange est d’abord fractionné
à l’aide de différentes techniques chromatographiques, telles que la chromatographie sur
colonne (CC), la chromatographie sur couche mince (CCM) ou la chromatographie sur couche
mince haute performance (HPTLC), la CLHP et la CPG préparative (CPGP), précédées ou non
d’une distillation fractionnée ou d’une cristallisation.

Les différents constituants isolés dans des fractions enrichies sont ensuite identifiés par
comparaison de leurs données spectrales avec celles des composés de référence (spectre de
masse, spectre IR, spectres de RMN 1H ou 13C, éventuellement RMN bidimensionnelle).
Cette voie se révèle extrêmement fiable mais elle peut s’avérer coûteuse en temps
particulièrement lorsque les molécules isolées sont déjà décrites dans la littérature. Cette voie
d’analyse en deux étapes (purification-identification) a été la première à être utilisée dans le
domaine des huiles essentielles. L’analyse par les couplages en ligne (voie A), plus rapide, s’est
ensuite imposée. Cette voie est néanmoins toujours utilisée dans le cas d’huiles essentielles
complexes car sa grande fiabilité compense l’investissement en temps qu’elle requiert. Les
travaux de Weyerstahl et al., 1996 illustrent parfaitement l’intérêt pour cette séquence à travers

7
 Techniques d’identification fine des huiles

l’étude de la composition chimique de diverses huiles essentielles très complexes. C’est le cas
de l’huile essentielle de vétiver d’Haïti, qui est composée de nombreux sesquiterpènes aux
propriétés physicochimiques et spectroscopiques voisines. Une partition acido-basique a alors
été réalisée. La partie neutre a été soumise à une distillation fractionnée qui a permis de séparer
les produits lourds des produits légers, puis les différents constituants ont été séparés par CC
répétitives, puis éventuellement par CCM. Ces constituants ont ensuite été analysés par CPG-
SM, RMN 1H et parfois par RMN 13C. La partie acide a été soumise à une réaction
d’estérification ou de réduction avant la séparation des constituants. Près de 170 composés
sesquiterpéniques (mono ou poly-fonctionnalisés) ont ainsi été identifiés. Certains de ces
composés possèdent des squelettes originaux et rares tels que prézizaane, zizaane, khusiane,
cyclopacamphane, spirovétivane, épi-, séco- et nor-eudesmanes, oppositane, etc. (Weyerstahl
et al., 2000).

Parmi les travaux récents, Delort et Jacquier (2009) ont analysé par CPG-SM et par
RMN 13 C chaque fraction obtenue après séparation par chromatographies répétitives de l’huile
essentielle de fruits de Citrus australasica. Les auteurs ont identifié 195 composés
(majoritairement le limonène et l’isomenthone) dont 4 nouveaux esters menthaniques.
Si la voie A, grâce à sa rapidité, est particulièrement adaptée aux analyses de routine, la
voie B garantit l’identification des composés. Cependant, les diverses étapes de fractionnement
et de purification demandent souvent un important investissement en temps. Une troisième voie,
la voie C, intermédiaire par rapport aux précédentes, puisqu’elle est basée sur l’identification
et/ou la quantification par RMN 13C des principaux composés des mélanges naturels (huiles
essentielles, extraits végétaux, résines, huiles végétales, etc.), sans séparation préalable.

3. Analyse par RMN du 13C sans séparation préalable : Voie C

Les premiers travaux relatifs à l’utilisation de la RMN 13C en tant qu’outil analytique des
mélanges naturels ont été réalisés par Formàcek et Kubeczka (1982). En général, la RMN 13C
a été utilisée pour confirmer l’identification des constituants préalablement identifiés par une
autre technique analytique, la CPG-SM usuellement. Dans ce contexte, dès le début des années
80, l’équipe « Chimie et Biomasse » de l’université de Corse a initié, puis a mis au point et
développé, une véritable méthode d’analyse des mélanges complexes naturels par RMN 13C

impliquant inévitablement une informatisation de la recherche. Cette méthode est efficace,

fiable et complémentaire des techniques conventionnelles.

8
 Techniques d’identification fine des huiles

Figure 4 : Identification des constituants d’un mélange complexe par RMN du 13 C

(adaptée de Nam, 2014)

3.1. Intérêt de la RMN du 13C

En dépit de sa faible abondance isotopique naturelle (1,1%) et d’un rapport

gyromagnétique 5700 fois moins sensible que celui du proton, le 13 C est malgré tout préféré
aux autres noyaux dans le domaine de l’analyse des mélanges complexes car il présente les
avantages suivants :

 Le carbone constitue le squelette de toutes les molécules organiques et les différents

atomes présents sont, à quelques exceptions près, magnétiquement non équivalents. Donc, on
observe en général dans un spectre de RMN du 13C autant de raies de résonance qu’il y a de
carbones dans la molécule ;

 Les spectres de RMN du 13 C peuvent être simplifiés par irradiation par découplage total
des noyaux d’hydrogène, ce qui permet de n’observer dans le spectre qu’une seule raie de
résonance par carbone. En plus l’effet NOE (Nuclear Overhauser Enhancement) résultant
de ce découplage des protons produit une augmentation d’intensité du signal ;

 Le domaine de résonance du carbone s’étend sur une plage beaucoup plus vaste que celle
du proton (schématiquement, 240 ppm par rapport à 12 ppm), ce qui améliore notablement la
résolution effective c’est-à-dire la dispersion spectrale (Tomi et al., 1995) ;

9
 Techniques d’identification fine des huiles

 L’enregistrement des spectres de RMN du 13C est réalisé à température ambiante. Cela
évite la dégradation ou la transformation éventuelle des molécules thermosensibles ;
 La RMN étant une technique non destructive, l’échantillon peut être récupéré et soumis à
d’autres analyses.
3.2. Identification des constituants en mélange par RMN du 13C

L’identification des constituants d’un mélange par RMN 13C est réalisée par comparaison
des déplacements chimiques des carbones du mélange avec ceux des composés de référence
contenus dans une ou plusieurs bibliothèques de spectres.

Avec cette méthode, les composés ne sont pas préalablement purifiés, contrairement aux
précédentes techniques de couplage entre un chromatographe et un spectromètre. Pour identifier
un composé au sein d’un mélange, il faut donc être à même de pouvoir observer les signaux qui
lui appartiennent et de les individualiser, puis d’attribuer les déplacements chimiques à une
molécule donnée. Pour cela, les conditions expérimentales d’enregistrement des spectres
doivent être optimisées et standardisées de façon à permettre une bonne reproductibilité des
résultats obtenus. Il est également important de savoir apprécier la concentration minimale d’un
produit minoritaire dans le mélange, permettant l’observation de ses signaux dans le spectre.

3.2.1. Observation des signaux

L’observation des raies de résonance des carbones d’une molécule dans le spectre d’un
mélange dépend de la quantité de produit disponible, de sa solubilité et de sa viscosité dans un
solvant choisi, de la sensibilité de l’appareil qui s’exprime par le rapport signal sur bruit (S/B).

Le manque de sensibilité (S/B) peut être pallié par :

 L’utilisation d’une cryosonde (sonde à antennes refroidies) reliée à une unité cryogénique
à l’hélium. Elle permet de multiplier par 4 la sensibilité et donc de diminuer d’un facteur
16 la durée des expériences ;
 De spectromètres à haut champ puisque sa sensibilité des aimants augmente avec le
champ
magnétique (23,5 Tesla pour les plus performants) ;
 De convertisseurs numériques performants qui améliorent le traitement des données et de
fonctions mathématiques (exponentielle) effectuées directement sur le signal de la FID
(Free Induction Decay ou décroissance libre d’induction) avant la transformée de Fourrier
(Williamson et Neuhaus, 1989).

10
 Techniques d’identification fine des huiles

3.2.2. Individualisation des signaux

L’individualisation des signaux dépend de la résolution de l’appareil de RMN, elle-même

fonction de la puissance de l’aimant et des caractéristiques du système informatique
permettant l’acquisition du signal. De la même manière que pour la sensibilité, la résolution
est meilleure quand on utilise un appareil à haut champ.

3.2.3. Attribution des signaux

La RMN procure trois types de données spectrales qui sont : le déplacement chimique
(δ), la multiplicité (J) et l’intensité des signaux (aire des signaux). Son intérêt réside dans sa
faculté à reconnaître un noyau par rapport à son environnement dans la molécule. La fréquence
de résonance des carbones et donc le déplacement chimique est très sensible à l’environnement
stérique et électronique. La moindre modification structurale se traduit par des variations plus
au moins importantes, mais mesurables, des déplacements chimiques de pratiquement tous les
carbones de la molécule. Contrairement à la majorité des autres techniques, il est très peu
probable que deux composés même s’ils possèdent des structures identiques ou très proches
présentent des spectres de RMN du 13C superposables ou insuffisamment différenciés. Il en
résulte que le déplacement chimique constitue la donnée spectroscopique la plus utilisée pour
identifier un composé connu dans un mélange.

Ainsi, chaque molécule sera définie par une série de déplacements chimiques qui
constituera son spectre, et en quelque sorte son empreinte digitale, à partir duquel elle pourra
être identifiée. La valeur d’un déplacement chimique peut varier de manière plus au moins
importante en fonction du type de solvant, de la concentration des composés et de la
température. L’utilisation des spectres décrits dans la littérature récente comme données de
référence pour l’identification des composés en mélange est possible. Néanmoins, afin
d’obtenir une meilleure reproductibilité des déplacements chimiques, il faudrait que les
conditions d’analyse des spectres des mélanges soient identiques à celles des composés de
référence.

Nous détaillerons ci-dessous, quelques exemples d’utilisation de la RMN du 13C pour

l’identification des constituants de mélanges complexes, dans les domaines des huiles
essentielles.

Ainsi, la RMN du 13C a permis l’identification des principaux composés de l’huile

essentielle de Echinophora sibthorpiana et de 12 sesquiterpènes présents dans une fraction

11
 Techniques d’identification fine des huiles

chromatographique de l’huile essentielle de bois de Guarea guidonia. Plus récemment, une

méthode d’identification des constituants d’un mélange complexe par RMN du 13C a été
développée par Ferreira et al. en 2001. Elle est basée sur la comparaison du spectre du mélange
avec des mono- et des sesquiterpènes décrits dans la littérature.

Références bibliographiques

Bruneton J. (1993) Pharmacognosie et phytochimie. Plantes médicinales. 2ème édition Tec &
Doc, Lavoisier, Paris, 916.

Joulain D. (1994) Methods for analyzing essential oils. Modern analysis methodologies: use
and abuse. Perfurmer & Flavorist, 19, 5-17.

Coleman WM, Lawrence BM. (1997) A comparison of selected analytical approaches to the
analysis of an essential oil. Flavour and Fragrance Journal, 12, 1-8.

Nam AM. (2014) Contribution de la RMN 13C à l’analyse des huiles végétales, huiles
essentielles et résines (Olea europaea, Pinus halepensis et Cedrus atlantica). Thèse de
Doctorat, Université de Corse Pascal-Paoli, France, 187.

Rouessac F, Rouessac A, Cruché D. (2004) Analyse Chimique -Méthodes et techniques

instrumentales modernes. 6ème édition, Dunod, Paris, 462.

Kováts E. (1965) Gas chromatographic characterization of organic substances in the retention

index system. Advances in Chromatography, 1, 229-247.

Van den Dool H, Kratz PD. (1963) A generalization of the retention index system including
linear temperature programmed gas-liquid partition chromatography. Journal of
Chromatography, 11, 463-471.

Jennings W, Shibamoto T. (1980) Qualitative analysis of flavor and fragrance volatiles by

glass capillary gas chromatography. 465 Seiten. Academic Press, New York, London, Sydney,
Toronto, San Francisco.

Masada Y. (1976) Analysis of essential oils by gas chromatography and mass spectrometry.
John Wiley & sons, New York.

Joulain D, König WA. (1998) The atlas of spectral data of sesquiterpene hydrocarbons. E.B.-
Verlag, Hamburg, 658.

12
 Techniques d’identification fine des huiles

Bruins AP. (1979) Negative ion chemical ionisation mass spectrometry in the determination
of components in essential oils. Analytical Chemistry, 51, 967-972.

Zupanc M, Prošek M, Dušan M. (1992) Combined CI and EI mass spectra in the analysis of
essential oils. Journal of High Resolution Chromatography, 15, 510-513.

Filippi JJ, Belhassen E, Baldovini N, Brevard H, Meierhenrich UJ. (2013) Qualitative and
quantitative analysis of Vetiver essential oils by comprehensive two-dimensional gas
chromatography and comprehensive two-dimensional gas chromatography/mass spectrometry.
Journal of Chromatography A, 1288, 127-148.

Iob A, Buenafe R, Abbas NM. (1998) Determination of oxygenates in gasoline by FTIR. Fuel
Journal, 77, 1861-1864.

Thomaidis NS, Georgiou CA. (1999) Edible oil analysis by flow injection. Laboratory
Automation & Information Management, 34, 101-114.

Coleman WM, Gordon BM, Lawrence BM. (1989) Examinations of the matrix isolation
Fourier transform infrared spectra of organic compounds: part XII. Journal of Applied
Spectroscopy, 43, 298-304.

Chamblee TS, Karelitz RL, Radford T, Clark BC. (1997) Identification of sesquiterpenes in
Citrus essential oil by cryofocusing GC/FT-IR. Journal of Essential Oil Research, 9, 127-132.

Fernandez X, Chemat F. (2012) La chimie des huiles essentielles. Tradition et innovation,

Vuibert, Paris, 288.

Cremin P, Donnelly DMX, Wolfender JL, Hostettmann K. (1995) Liquid

ChromatographicThermospray Mass Spectrometric Analysis of Sesquiterpenes of Armillaria
(Eumycota: Basidiomycotina) species. Journal of Chromatography A, 710, 273-285.

Dugo P, Mondello L, Dugo L, Stancanelli R, Dugo G. (2000) LC-MS for the identification
of oxygen heterocyclic compounds in Citrus essential oils. Journal of Pharmaceutical and
Biomedical Analysis, 24, 147-54.

Mroczek T, Ndjoko K, Glowniak K, Hostettmann K. (2004) On-line structure

characterization of pyrrolizidine alkaloids in Onosma stellulatum and Emilia coccinea by liquid
chromatography–iontrap mass spectrometry. Journal of Chromatography A, 1056, 91-97.

13
 Techniques d’identification fine des huiles

Verpoorte R, Choi YH, Kim HK. (2010) Metabolomics: will it stay?. Phytochemical Analysis,
21, 2-3.

Munari F, Dugo G, Cotroneo A. (1990) Automated On-line HPLC-HRGC with Gradient

Elution and Multiple GC Transfer Applied to the Characterization of Citrus Essential Oils.
Journal of High Resolution Chromatography, 13, 56-61.

Mondello L, Dugo P, Bartle KD. (1995) Automated HPLC-HRGC: A Powerful Method for
Essential Oil Analysis. Part V. Identification of Terpenes Hydrocarbons of Bergamot, Lemon,
Mandarin, Sweet Orange, Bitter Orange, Grapefruit, Clementine and Mexican Lime Oils by
Coupled HPLC-HRGC-MS (ITD). Flavour and Fragrance Journal, 1, 33-42.

Wolfender JL, Ndjoko K, Hostettmann K. (1998) LC/NMR in natural products chemistry.

Current Organic Chemistry, 2, 575-596.

Ahmad VU, Jassbi AR. (1999) Analysis of the essential oil of Echinophora sibthorpiana guss.
By means of GC, GC/MS and 13C-NMR techniques. Journal of Essential Oil Research, 11,
107-108.

Núñez CV, Roque NF. (1999) Sesquiterpenes from the stem bark of Guarea guidonia (L.)
sleumer (Meliaceae). Journal of Essential Oil Research, 11, 439-440.

Ferreira MJP, Costantin MB, Sartorelli P, Rodrigues GV, Limberger R, Henriques AT,
Kato MJ, Emerenciano VP. (2001) Computer-Aided method for identification of components
in essential oils by 13C NMR spectroscopy. Analytica Chimica Acta, 447, 125-134.

Weyerstahl P, Marschall H, Eckhardt A, Christiansen C. (1999b) Constituents of

commercial brazilian Lantana oil. Flavour and Fragrance Journal, 14, 15-28.

Weyerstahl P, Marschall H, Splittgerber U, Wolf D. (2000a) 1,7-Cyclogermacra-1(10),4-

dien-15-al, a sesquiterpene with a novel skeleton, and other sesquiterpenes from Haitian vetiver
oil. Flavour and Fragrance Journal, 15, 61-83.

Delort E, Jaquier A. (2009) Novel terpenyl esters from Australian finger lime (Citrus
australasica) peel extract. Flavour and Fragrance Journal, 24, 123-132.

Formácek V, Kubeczka KH. (1982) 13C NMR analysis of essential oils in aromatic plants :
basic and applied aspects. Margaris N, Koedam A, Vokou D. Edition Martinus Nijhoff, La Haye,
177-181.

14
 Techniques d’identification fine des huiles

Tomi F, Bradesi P, Bighelli A, Casanova J. (1995) Computer-aided identification of

individual components of essential oils using carbon-13 NMR spectroscopy. Journal of
Magnetic Resonance Analysis, 1, 25-34.

15