Ce document contient plusieurs exercices sur l'utilisation d'enzymes de restriction pour digérer de l'ADN et analyser les fragments obtenus. Les exercices portent sur la reconstitution de cartes de restriction, l'analyse de profils de digestion et l'identification de mutations.
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TD N°02 Les enzymes de restriction
Exercice 01 :
Supposez qu’un ADN circulaire contient 1000pb. Il est coupé par trois enzymes de restriction différentes, à la fois séparément et par paires, on obtient les résultats suivants :
Enzyme(s) de restriction Longueur de fragment(s)
A 1000 B 100 ,300,600 C 200,800 A+B 50,100,300,550 A+C 200,375,425 B+C 75,100,125,225,475
Reconstituez l’ADN en indiquant l’endroit ou coupe chaque enzyme et les distances entre tous les points de coupures.
Exercice 02 :
Un fragment d’ADN linéaire est coupé par BamHI, PstI et EcoRI. Après séparation , les fragments obtenus ont la taille suivante : BamHI : 5Kb et 10Kb PstI : 4Kb et 11 K BamHI et PstI : 4Kb, 5Kb et 6Kb BamHI, PstI et EcoRI : 3Kb, 4Kb et 5Kb
Dessinez la carte de restriction de ce fragment
Exercice 03 :
Soit un ADN non circulaire de 300.000pb
La digestion de cet ADN par une enzyme de restriction à donné les résultats suivants sur gel d’éléctrophorèse 1. Quelle conclusion peut-on tirer à partir de la figure ci-dessous
Dr A.ABBAS Exercice 04 :
MspI et HpaII sont deux enzymes de restriction qui clivent le meme motif palindromique CCGG/GGCC
Il est démontré que la méthylation des cytosines qui précède les guanosines protège les sites CCGG/GGCC de l’attaque de HpaII et non de celle de MspI L’étude de 2 fragments d’ADN (A) et (B) isolés à partir de deux tissus différents est réalisée à l’aide de ces deux enzymes et à donné les résultats suivants
Que peut-on dire des ADN A et B
Exercice 05 :
Pour rechercher une mutation chez les membres d’une
famille, une étude par PCR-RFLP a été pratiquée. L’amplification par PCR de l’exon concerné du gène conduit à l’obtention d’un fragment de 504 paires de bases. Ce fragment est soumis ensuite à une digestion par une enzyme E qui génère différents types de fragments 1/- Lesquels de ces sujets présentent la mutation ? (justifiez votre réponse) 2/- Quel serait le profil de bandes sur gel d’agarose pour un organisme porteur pour un organisme normal, hétérozygote et homozygote muté ?
Exercice 06 :
Un croisement entre deux organismes donne un descendant malade. Pour savoir si le futur descendant sera également atteint de cette maladie l'ADN des parents, et des descendants est prélevé, une séquence de 1.4 kb est amplifiée et coupée par l'enzyme MstII. Une électrophorèse est réalisée pour séparer les différents fragments obtenus.
Dr A.ABBAS En utilisant l'ensemble de ces données répondez tout en justifiant vos réponses
La mutation aboli ou crée un site de restriction
Quels sont les génotypes des parents et des descendants (homozygotes normales, homozygotes mutés ou hétérozygotes)
