Université Mustapha Stambouli de Mascara

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie

Spécialité ANP Niveau : L3
Module Technologie et techniques d'analyses physico-chimiques et biochimiques
Enseignants de TP : M. SACI Ahmed & M. BENCHOHRA Mokhtar
Chargé de module : Mlle. KIARI Fatima

Chromatographie planaire

La chromatographie Type de support :

La chromatographie est une technique séparative  Chromatographie sur colonne.

analytique et/ou préparative. Elle consiste à faire  Chromatographie planaire.
migrer les constituants à séparer sur une phase
stationnaire immobile, à l’aide d’une phase La chromatographie planaire
mobile, liquide ou gazeuse, de nature différente.
La chromatographie planaire, chromatographie
Chaque molécule sera plus ou moins rapidement
sur couche plane, chromatographie sur papier, ou
entraînée selon son affinité pour, respectivement,
chromatographie sur couche mince (CCM), est
la phase stationnaire et la phase mobile,
une technique rapide, sensible et peu coûteuse
permettant la séparation des différents
utilisée pour déterminer le nombre de
constituants présents.
composants dans un mélange, vérifier l'identité
Types et classification et la pureté d'un composé, surveiller la
progression d'une réaction, déterminer la
En fonction de la nature de la phase stationnaire, composition du solvant pour les séparations
la nature de la phase mobile, le type de support préparatives, et analyser les fractions obtenues
et de la nature des interactions entre ces phases par chromatographie sur colonne.
et les molécules à purifier, il existe de nombreux
types de chromatographie. Principe de la chromatographie planaire

Nature des phases : Au cours du développement, les molécules

effectuent un va-et-vient continu entre les états
 Chromatographie en phase liquide. libre et adsorbé (Figure 1.A). Un équilibre des
 Chromatographie en phase gazeuse. forces intermoléculaires détermine la position
 Chromatographie en phase supercritique. d'équilibre et donc la capacité du solvant à
déplacer le soluté vers le haut de la plaque. Cet
Nature des interactions :
équilibre dépend de
 Chromatographie d’adsorption.
 Chromatographie de partage. 1. La polarité du matériau de revêtement
 Chromatographie d’échange d’ions. (phase stationnaire).
2. La polarité du solvant de développement.
 Chromatographie d’exclusion.
3. La polarité de la ou des molécules de
l'échantillon.

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Par exemple : avec un échantillon constitué de 2. Phase mobile (système du solvant) :
deux composés A et B comme illustré dans la
Figure 1.B, si les molécules A passent plus de Trouver un système de solvant approprié est
temps dans la phase mobile, elles seront généralement la partie la plus difficile des
transportées plus rapidement dans la phase expériences CCM, le système de solvant est le
stationnaire et se déplaceront plus loin dans un facteur ayant la plus grande influence sur la
certain temps. Alors que les molécules B sont CCM. Ce n'est que dans quelques cas que le
plus adsorbées sur la phase stationnaire que A, solvant est constitué d'un seul composant, des
les molécules B passent moins de temps dans la mélanges comprenant jusqu'à cinq composants
phase mobile et se déplacent donc plus lentement sont couramment utilisés. Quel que soit le
dans la phase stationnaire et ne se déplacent pas nombre de composants présents, le système de
aussi loin dans le même laps de temps. La solvant préparé doit être un système homogène
conséquence est que A se sépare sans signe de trouble. Trois critères sont
progressivement de B au fur et à mesure que la généralement pris en compte pour choisir un
phase mobile monte. système de solvants : la solubilité, l'affinité et la
résolution.

La première étape de la sélection d’un solvant

consiste à déterminer la solubilité de
l’échantillon. La phase mobile souhaitée sera
capable de fournir la plus grande solubilité tout
en équilibrant l’affinité de l’échantillon pour le
solvant et la phase stationnaire pour réaliser la
séparation. La résolution est améliorée en
Figure 1 : A : Mélange de A et B adsorbés sur la phase
stationnaire et libres en phase mobile ; B : représentations optimisant l'affinité entre l'échantillon, le solvant
du principe de séparation. et la phase stationnaire. La plupart des systèmes
de solvants CCM contiennent un solvant polaire
Le choix des systèmes phases mobile et
et un solvant moins polaire. La figure 2 illustre
stationnaire
certains solvants courants en phase mobile en
1. Phase stationnaire : fonction de leurs polarités avec la silice 60
comme phase stationnaire.
Pour la sélection d'un adsorbant, on considère les
propriétés des composés à séparer :
premièrement, la solubilité des composés
échantillonnés (hydrophiles ou hydrophobes) ;
ensuite, si les composés peuvent réagir
chimiquement avec l'adsorbant ou l'éluant. Sur la
base de ces considérations, il est recommandé
que :

 Pour les substances lipophiles : il

convient d'utiliser de la silice, de l'oxyde
d'aluminium, de la cellulose acétylée, du
polyamide.
 Pour les substances hydrophiles : il
convient d'utiliser de la cellulose, des
échangeurs d'ions cellulosiques, du
polyamide et de la silice.
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 NB : utiliser la Figure 2 pour plus de formules.

Préparation de la phase stationnaire :

 Découper une plaque CCM prêt à l’emploi

selon les dimensions des cuves
chromatographiques.

 Tracer au crayon, à environ 1,5 cm du bord

inférieur de la plaque, un trait qui constitue
la ligne de dépôt.

 Placer sur cette ligne des marques,

régulièrement espacées, dont le nombre est
égal à celui des échantillons à déposer.

Préparation des cuves CCM :

 Verser d'environ 0.5 à 01 cm d'hauteur

(10ml), du système éluant et fermer la cuve
jusqu’à ce qu’elle soit saturée.
Figure 2 : Quelques solvants courants en phase mobile
selon leur polarité. Dépôt des échantillons :

À l'aide d'un tube capillaire, déposer les

Matériel et réactifs
échantillons sur leurs marques respectives. La
 Cuves chromatographiques (cuves CCM). tache de dépôt ne doit pas dépasser 3 mm, et il
 Plaque CCM gel de silice 60. faut changer de capillaire pour chaque
 Papier buvard. échantillon.
 Pipettes pasteur en verre (03 pcs). Élution :
 Ciseaux.
 Pipettes graduées (10 et 01) ml.  Introduire la plaque verticalement dans la
 Hexane ou éther de pétrole (10 ml). cuve (la ligne de dépôt doit être au-dessus
 Acétone ou éthanol ou méthanol (10 ml). du niveau du solvant). Fermer la cuve.
 Eau distillée.  Le solvant contenu dans la cuve monte le
 Extrait de pigments chlorophylliens. long de la plaque (c'est l'étape d'élution).
Attendre que l'éluant arrive à environ 1 cm
Mode opératoire du haut de la plaque, puis retirer la plaque et
Préparation des systèmes solvants : repérer par un trait la hauteur maximale
atteinte par l’éluant (c'est la ligne de front).
En raison de la polarité élevée de la phase
Sécher la plaque.
stationnaire (gel de silice 60). La phase mobile
doit avoir des propriétés apolaires ou faiblement
polaires donc :

 Mélanger un volume 9/1 de :

hexane/acétone ; éther de pétrole/acétone ;
hexane/éthanol ou bien éther de
pétrole/éthanol.
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Révélation du chromatogramme : Travail personnel

Dans le cas des composés colorés, le

chromatogramme est directement exploitable.
Mais pour les composés incolores, il est  Quels sont les objectifs de ce TP ?
nécessaire de faire apparaître les taches (c'est
 Quel est le principe de la chromatographie
l'étape de révélation). On peut pour cela utiliser
planaire ?
une lampe à ultraviolet, des vapeurs de diiode ou
une solution de permanganate de potassium.  Quel est le principe de la migration de
l'éluant ?
Exploitation du chromatogramme :
 Quelles sont les limites d'utilisation de la
La distance parcourue entre la ligne de dépôt et
technique de chromatographie planaire ?
le centre de la tache dans des conditions données
(phase fixe et éluant connus) est caractéristique  Réaliser un rapport (compte-rendu) de TP
de l'espèce chimique : elle est identique que
selon la méthode IMRAD.
l'espèce soit pure ou dans un mélange.

Pour identifier une espèce d'un mélange, on peut

donc comparer la distance parcourue pour une
tache d'un mélange avec celle obtenue pour
l'espèce chimique pure. Les espèces qui ont
migré à des hauteurs identiques sont les mêmes.
On peut aussi calculer le rapport frontal (Rf)
pour chaque tache observée :

Rf¿ h ÷ H

h : la distance entre la ligne de dépôt et le centre

de la tache ; c’est la distance parcourue par
l’espèce chimique

H : la distance parcourue par l'éluant dans le

même temps ; c’est la distance entre la ligne de
dépôt et le front du solvant.

Remarque : h et H doivent être exprimées dans

la même unité. Donc Rf est sans unité.

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