Chapitre II

Production industrielle des médicaments issus de la biotechnologie

I- Généralités
II- Production de bio médicaments issus des biotechnologies
III. Particularités des biomédicaments
IV- Principaux biomédicaments.

I- Généralités &Définitions
I.1.Les biotechnologies
C’est l’ingénieur hongrois Károly EREKY qui inventa le mot « biotechnologie » en 1913.

Il est composé de « bio » du grec bios, vie, et de « technologie » qui désigne les études des outils
et des techniques (du grec techné, art manuel). Les biotechnologies correspondent donc aux
techniques qui utilisent le vivant.

C’est réellement avec les débuts de l'agriculture et les premiers produits fermentés comme le
pain et le fromage que vont naître les biotechnologies dites « traditionnelles » et dont les
procédés n’étaient pas compris.

On peut notamment citer Pasteur et ses travaux sur la fermentation dans les années 1850 qui
permirent de démontrer l’existence de microorganismes. C’est à partir de la seconde guerre
mondiale que l’utilisation les biotechnologies modernes se répand avec notamment la
production à grande échelle du premier antibiotique, la pénicilline, grâce à la fermentation d’un
champignon.

La découverte de la structure en double hélice de l’ADN par Watson et Crick en 1953 a permis à
de nombreuses disciplines telles que la biologie cellulaire, la biologie moléculaire, et la biochimie
de prendre leur essor. Cette découverte est le point de départ du génie génétique.

Donc, en bref et selon l’OCDE (Organisation de Coopération et de Développement

Economique) :
« Les biotechnologies se définissent comme les applications des sciences et techniques à des
organismes vivants, qu’il s’agisse d’éléments, de produits ou d’échantillons, pour transformer les
matériaux vivants ou non, dans le but de produire des connaissances, des biens et des services »
• Ensemble des méthodes utilisant des éléments du vivant (organismes, cellules, éléments
subcellulaires ou moléculaires) pour rechercher, produire ou modifier des éléments ou
organismes d’origine végétale ou animale (ou non).

• Les biotechnologies concernent donc des procédures qui peuvent contribuer au

développement de nouveaux produits ou de services et des produits déterminés.

• Elles regroupent les méthodes traditionnelles (fabrication du pain, de la bière, du vinaigre, etc.)
et les biotechnologies modernes fondées sur la génétique moléculaire et le génie génétique.

I.1.1. Histoire des biotechnologies

 Biotechnologies anciennes ou de premières générations

La biotechnologie est un processus multidisciplinaire, l’homme s’est intéressé à la transformation
des produits de sa production «agricole » en transformant :

 Le lait en lait caillé en l’exposant aux bactéries.

 La farine en pain en ajoutant de la levure.
 Les transformations, par fermentation. Les applications liées à la fermentation ont évolué
progressivement.
 Biotechnologie de seconde génération
L’évolution de la biotechnologie et l’élargissement de ces champs d’application sont fortement
liés :

 D’une part à la découverte de nouveaux concepts biologiques et de biologie moléculaire,

l’ADN, le gène et leur fonctionnent.
 D’autre part avec le perfectionnement des procèdes techniques qui informatisés
(numérisés).

La production en masse des produits de qualité est possible grâce à 3 outils de base :

• La maitrise des techniques de culture cellulaire, qui permet de maintenir longtemps des
cultures cellulaires de caractéristiques constantes.

• Le génie génétique qui permet de modifier de façon contrôlée le génome d’un organisme.

• L’informatique sans laquelle il est impossible de traiter et d’exploiter l’information génétique.

I.1.2. Principales applications de la biotechnologie utilisant le code des couleurs.

 Domaine Application
- Production de vaccin et d’antibiotique
Biotechnologie Rouge /Médecine - Techniques de diagnostic moléculaire
- Industrie pharmaceutique et cosmétique
- Production de variétés végétales modifiées
Biotechnologie Verte / Agriculture - Production de races animales modifiées
- Production de biofertilisants et de biopesticides.
- Agroalimentaire
Biotechnologie jaune /Environnement - Entretient de la biodiversité. -
Dépollution.
-Procédés industrielles (conception et production
de nouveaux matériaux à usage quotidien comme
les matières plastiques, textiles, …) non polluants.
Biotechnologie blanche /industrie - Développement de nouvelles sources d’énergie
durable comme les biocarburants.

- Exploitation des ressources maritimes pour

Biotechnologie bleu /Mer créer de nouveaux produits.
- Production de biomatériaux et agents
pharmacologiques régénératifs.

I.1.3. Biotechnologies rouges/ Médicale

(Médecine, santé humaine, médecine vétérinaire, cosmétologie, diagnostic, nouveaux procédés

thérapeutiques moléculaires ou cellulaires) :

La biotechnologie rouge rassemble toutes les utilisations de la biotechnologie liées à la médecine.

la production de vaccins et d'antibiotiques, le développement de nouveaux médicaments, les
techniques de diagnostic moléculaire, les thérapies de régénération et le développement du
génie génétique. Certains exemples pertinents de biotechnologie rouge sont la thérapie cellulaire
et la médecine régénérative, la thérapie génique et les médicaments à base de molécules
biologiques telles que les anticorps thérapeutiques.

 Biotechnologie pharmaceutique
Ensemble des procédés biotechnologiques utilisant des microorganismes, plantes et animaux ou
leurs constituants pour la production de produits pharmaceutiques

I.2.Biomédicaments (Médicament biologique)

 Les Biomédicaments sont des produits issus des biotechnologies : des protéines thérapeutiques
dont les anticorps monoclonaux représentent une grande part, les vaccins, les produits pour
thérapie génique et cellulaire, et les dérivés du sang ou du plasma humain.

un biomédicament est tout médicament dont la substance est produite à partir d’une source
biologique ou en est extraite et dont la caractérisation et la détermination de la qualité
nécessitent une combinaison d’essais physiques, chimiques et biologiques ainsi que la
connaissance de son procédé de fabrication et de son contrôle.

 Traditionnels : Extraction
– D'origine animale : produits sanguins, hormones, stéroïdes, catécholamines, prostaglandines,
anticorps, insuline, vaccins…
– D'origine microbienne : antibiotiques, enzymes, protéases, vaccins, …
– D'origine virale: vaccins
I.2.1. Historique supprime
I.2.2. Intérêt des Biomédicaments :
Les biomédicaments apportent des solutions dans des pathologies souvent mal connues ou des
domaines limites en termes de traitements. Parmi ceux-ci on trouve différents domaines, comme
la cancérologie et l’hématologie, l’endocrinologie, l’infectiologie, les troubles métaboliques
(diabète), etc.

I.2.3.Procédés Médicaments issus des biotechnologies :

Médicaments faisant appel à une des procédés biotechnologiques suivants :

 Technique de l’ADN recombinant.

 Expression contrôlée de gènes codant pour des protéines biologiquement actives dans
des procaryotes et eucaryotes, y compris des cellules transformées de mammifères.

 Méthodes à base d’hybridomes et d’anticorps monoclonaux.

II. Production des biomédicaments

Les médicaments dérivés du génie génétique sont fabriqués selon les étapes présentes :

La séquence codante pour la protéine désirée est insérée dans un vecteur d’expression qui sera
transféré dans une cellule hôte, issue d’une lignée cellulaire définie, afin de synthétiser la
protéine. Cette cellule hôte a pour la production de banques cellulaires. Les cellules seront
ensuite mises en culture dans des bioréacteurs de tailles croissantes pour accroître leur quantité
avant d’être cultivée dans le bioréacteur final (jusqu’à 20m3) qui se finalisera par la récolte de la
protéine désirée. Cette première phase qui correspond à la culture cellulaire est la phase « Up
Stream ». Elle est suivie de la phase « Down Stream » qui purifie la protéine. Ensuite formulée et
conditionnée.

 Principe :

Le principe de production se base sur la modification génétique des cellules

vivants(microorganismes), séparées et sélectionnées de leur milieu puis mises en culture ou
fermentation.

Les molécules produites présentent tous les caractéristiques de leur modèle humain dont les
ordres sont donnés à la cellule productrice sous forme d’ADN reconstitué(technique d’ADN
recombinant).

Exemples :

 Hormones, tels que l’insuline

 Anticorps monoclonaux contre le cancer.
 Interférons contre l’hépatite C.

 Etapes :
Les micro-organismes sont cultivés pour la production de molécules identiques à celles produites
par l’homme.

 Couper l’ADN (un gène humain codant par la protéine X) de manière définie et reproductible
à l’aide d’un enzyme de restriction.

 Insérer l’ADN dans un vecteur d’expression

 Introduire le vecteur d’expression dans un organisme hôte (bactérie, levure, ou une cellule
d’origine animale) qui assurera la synthèse de la protéine par transcription et traduction de
l’ADN. (Les cellules sont génétiquement modifiées)
 Mettre l’ensemble dans des conditions adéquates de croissance (fermentation et culture),
pour obtenir une grande quantité de gêne.
 Extraction et purification.
 Les cellules recombinantes (ADNr) ainsi sélectionnées sont analysées pour leurs propriétés
en termes de croissance, de productivité et de viabilité.

 Vecteurs :
ADN plasmidique :

 Les plasmides sont des petites molécules d’ADN bicatinaires, Circulaires,

extrachromosomiques, susceptibles de se répliquer de façon autonome.
 Ils sont présents dans le cytoplasme de nombreuse espèce.
 Ils peuvent porter des gènes de résistances aux antibiotiques ce qui permet la sélection
de bactéries possédants le plasmide.

ADN phagique : Les phages sont des particules virales qui infectent les bactéries. Leur
multiplication est rapide .

Deux types de phages qui infectent E. coli : le phage Y et le phage M13.

o Phage Y

Constitué d’un ADN double brin linaire de 48,502 paires de bases.

Les extrémités appelées COS sont constituées par l’ADN sous forme simple brin sur une longueur
de 12 bases.

o Phage M13

Constitué d’une molécule d’un ADN circulaire monocaténaire de 6407 paires de bases.

Cosmides : Vecteurs hybrides constitués d’un plasmide classique auquel ont été ajoutées les
séquences COS du phage Y.

YAC : Chromosome artificiel de levure

 Cellules hôtes

La cellule hôte peut être : Une cellule bactérienne (E. coli, Bacillus subtilis , …etc.) ; Une levure ;
Un champignon filamenteux ; Une cellule végétale ; Une cellule de mammifères (CHO, …) ect.

Les cellules qui sont les plus utilisées sont répertoriées dans le tableau suivant :

Tableau 1 : Lignées cellulaires les plus utilisées

Cellule Origine Application courante

 Vero Cellules épithéliales du rein de singe vert Vaccins viraux humains et
vétérinaires
ST Cellules épithéliales de testicules de porc Vaccins viraux vétérinaires
MDCK et de rein de chien
CHO Cellules d’ovaire d’hamster chinois Protéines recombinantes
BHK Cellules de rein de bébé Hamster Facteur VIII, vaccins viraux et
vétérinaires
Sf9 High- Cellules d’insectes Protéines recombinantes
5
HEK293 Cellules épithéliales de rein humain Adénovirus
transformées
PER.C6 Cellules de rétine humaine Protéines recombinantes
NS0 Sp Cellules de myélome de souris Protéines recombinantes
2/0
Hybridomes Cellules murines hybridées Anticorps monoclonaux
utilisés pour le diagnostic

 La Récolte
Une fois que le temps de culture dans le bioréacteur final est atteint, il s’ensuit l’étape de récolte
ou « clarification primaire » où le produit d’intérêt est principalement séparé des cellules et de
diverses impuretés. Cependant, deux cas peuvent se présenter : soit la protéine d'intérêt reste
dans le milieu intracellulaire soit elle est secrétée dans le milieu extracellulaire.

1. Dans le premier cas, il faut d'abord récupérer toute la biomasse contenue dans le
bioréacteur et éliminer le milieu de culture. Les cellules sont ensuite lysées et la protéine
se retrouve alors dans un mélange constitué de débris cellulaires et du reste du contenu
intracellulaire.
2. Dans le deuxième cas, on doit séparer le milieu de culture, qui contient la biomolécule et
différentes impuretés, des cellules.

A l’issue de ces deux cas, la protéine devra être isolée avec d’opérations de centrifugation et de
filtration en profondeur. Une filtration tangentielle est pour concentrer le filtrat avant de passer
à la purification.
 Bioréacteurs : une production à grande échelle

Un bioréacteur est une enceinte de 2 à 100000 litres permettant la culture de tout type de cellule
(animale, végétale, levures, bactéries) et permettant d’influer efficacement sur la culture, de
contrôler et piloter les paramètres physiques et chimiques. Paramètre à maitriser :

III. Particularités des biomédicaments

Les médicaments classiques sont la plupart des petites molécules, synthétisées chimiquement
avec une structure bien définie et caractérisée, la plupart des produits biopharmaceutiques
présentent un poids moléculaire élevé avec des formes complexe.
[Les protéines, par exemple, sont constituées d'une séquence primaire (séquence d'acides
aminés), secondaire (par exemple des motifs structuraux sous la forme d'une hélice alpha et d'un
feuillet bêta) et d'une structure tertiaire (la forme globale d'une protéine). Elles présentent
parfois une structure qu’on appelle quaternaire, c'est-à-dire que plusieurs chaînes
polypeptidiques (sous-unités) forment un complexe protéique (par exemple, l’hémoglobine).]
Les produits biologiques peuvent être modifiés de manière imprévisible par le processus de
fabrication, ce qui peut entraîner une modification dans l’activité biologique ou l’induction d’une
immunogénicité du fait de leur présence.

Ils ont tendance à être sensibles à des facteurs environnementaux tels que les changements de
température, le cisaillement et l'oxydation.

Ils sont moins stables et se dégradent plus facilement que les médicaments chimiques.

Ils sont également sensibles aux contamination comme les virus, les bactéries, les endotoxines
bactériennes, les champignons, les levures et les mycoplasmes.

Dans un procédé de fabrication biotechnologique il doit être prouvé que les cellules utilisées
permettent de synthétiser un produit qui est sûr pour le patient.