M Bintou Coulibaly

Ministère de l’Enseignement Supérieur République du Mali
et de la Recherche Scientifique Un Peuple-Un But-Une Foi
Université des Sciences, des Techniques et des Technologies

de Bamako (USTTB)
Faculté de Pharmacie
Année Universitaire :2022-2023 N°……………

THÈSE
Étude de la Fragmentation de l’ADN Spermatique
par la Technique de Dispersion de la Chromatine des
Spermatozoïdes Chez les Hommes Consultant pour
une Infertilité au Mali
Présentée et soutenue publiquement le ...…/……/2023 devant la
Faculté de Pharmacie par
Mlle BINTOU COULIBALY
Pour obtenir le grade de Docteur en Pharmacie
(Diplôme d’État)
JURY
Président: Pr. Mahamadou TRAORE
Membre: Pr. Guida Landouré
Membre: Pr. Mamadou Sima
Membre : Pr. Sékou Bah
Co-directrice: Pr. Djénèba Dabitao
Directeur: Pr. Oumar Samassekou
DEDICACES ET
REMERCIEMENTS
THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

i
DEDICACES
Je dédie ce travail à :
La mémoire de mon merveilleux père Issa Coulibaly décédé en 2014 et qui de là où
il est, continu de veiller sur moi. Merci d’avoir pris soin de moi tout au long de ma
vie, de m’avoir encouragé, soutenu et protégé. Je suis très fière d’être ta fille et de
pouvoir enfin réaliser ce que tu as tant espéré et attendu de moi. Ce travail est le fruit
de tout tes sacrifices pour mon éducation et ma formation. Puisse Allah t’accorder
le paradis. Amen
À ma mère Mariam Doumbia
Ma petite maman que j’aime de tout mon cœur, aucun mot n’est assez fort pour te
remercier de m’avoir donné la vie. Une vie que tu as su remplir d’amour, de joie et
de tendresse. Tes prières et tes bénédictions m’ont été d’un grand secours pour
terminer mes études, merci d’être toujours à mes côtés. Tu es simplement la femme
de ma vie. Puisse le tout puissant te préserver et t’accorder santé, longue vie et
bonheur. Je t’aime.
À ma mamie adorée Doussou Doumbia ma vie et mon bonheur que Dieu te protège
et te garde longtemps auprès de nous.
À la mémoire de mon grand-père Abdourahmane Doumbia que Dieu le garde dans
son vaste paradis
À mon fils Mohamed Yahya Arby
Mon petit sang, tu es mon bonheur et ma plus grande chance au monde. Merci de
m’avoir redonné le sourire et l’envie de vivre, merci pour toutes ces larmes de joie
versées pour toi. Je te souhaite toutes les bénédictions du monde, une mer d’amour,
beaucoup de bonheur. Je t’aime de tout mon cœur.
À mon incroyable oncle et mentor Dr. Ousmane Coulibaly (OCB)

ii
Tu es un père et une source d’inspiration pour moi. Merci d’avoir accepté de me
soutenir et de m’accompagner dans cette aventure. Merci d’avoir eu un impact
positif sur mon parcours. Je tiens à t’exprimer ma gratitude pour tes encouragements
constants.
À mon oncle Moussa Konate
Mon précieux oncle, nous sommes chanceuses de t’avoir. Tu nous as toujours
guidées sur le bon chemin. Merci de toujours nous soutenir, merci pour tout.
À mes frères et sœurs : Soungalo Coulibaly, Sira Coulibaly, Aminata Coulibaly,
Mariama Coulibaly, Habiba Coulibaly, Kadiatou Coulibaly, Moussa
Coulibaly, Fatoumata Coulibaly,
Être frères et sœurs signifie être là les uns pour les autres, vous m’avez tous toujours
soutenus, réconfortés et encouragés. Pour tout l’amour que vous me réservez je vous
souhaite une vie pleine de bonheur et de succès.
À toute ma famille
Je vous dédie ce travail en reconnaissance de l’amour que vous m’offrez. Que Dieu
vous garde et vous accorde santé et bonheur.

iii
REMERCIEMENTS
Merci ALLAH de m’aider à réaliser ce grand objectif de ma vie, merci pour tous tes
bienfaits dans ma vie, tu as été là pour moi chaque instant ; tu as écouté mon angoisse
et tu m’as rempli de courage, de force et de patience pour finir avec succès.
Au Docteur Abdourahamane Haidara
Je tiens à vous exprimer ma plus profonde gratitude pour m’avoir formé pendant ma
période d’apprentissage à l’INSP. Vous m’avez accueilli avec beaucoup de
gentillesse au sein de votre équipe, c’est grâce à vous que j’ai pu allier théorie et
pratique. Ce fut un honneur pour moi de bénéficier de votre soutien et de votre
dynamisme tout au long de ce travail.
Je remercie également Dr Cheick O Sidibé, Mr Salia Bamba, Dr Modibo Goita,
Dr Ousmane Doumbia, Dr Christine Ongoiba qui m’ont apporté leur aide lors de
l’élaboration de cette thèse. Je vous exprime toute ma reconnaissance pour votre
disponibilité et votre efficacité.
Un grand merci à toute la famille Coulibaly particulièrement à Dr Ousmane
Coulibaly, Dr Aminata Coulibaly, Lalla Sadessy pour leurs accueils chaleureux,
leurs amours, leurs conseils ainsi que leurs soutiens inconditionnel, à la fois moraux
et financiers, qui m’ont permis de réaliser mes études par conséquent cette thèse.
Soyez assuré de ma reconnaissance la plus sincère.
À mes ami(e)s : Ramata Bengaly, Bintou Moustapha, Dr Rokiatou Diallo, Dr
Bintou Kanouté, Dr Mariam Diawara, Dr Aissata Sangare, Coumba N’daou,
Salihou Saidou, Khadidja Abdallah, Pevetmi Abdel Malick, Mahamadou
Traoré (Matrao), Dr Aboubacar Cissouma, Dr Ousmane Doumbia, Djiguiba
Toure, Dr Abdel Kader Cissé, Fatoumata Nientao, Dr Fatoumata Ina Traoré,
Awa Diallo, Dr Fatoumata Tininko Diallo, Dr Fanta Kouyaté, Sherif Haidara,

iv
Dr Gbessemehlan Jeanine Damienne, Dr Kanté LH, Bana Konaré, Fatima
Sidibé , Demba Dembélé, Demba Dicko, Wandji Grace chanel.
Les amis sont comme des membres de la famille que nous choisissons par nous-
même, j’ai eu de la chance de rencontrer des personnes comme vous. Je vous suis
reconnaissante pour la sincérité de notre amitié et pour l’influence positive que vous
apportez dans ma vie.
À notre équipe de recherche: Pr Mahamadou Traoré, Pr Guida Landouré, Pr
Oumar Samassekou, Dr Mamadou Keita, Pr Guinto Cheick Oumar, Dr Cisse
Abdel Kader, Dr. Yalcouye Abdoulaye, Dr. Bocoum Abdoulaye, Dr. Dembele
Mohamed Emile, Dr. Fousseyni Kané , Dr. Alassane Baneye Maiga, Dr. Oumou
Traore, Dr Cheick O Sidibe, Salia Bamba, Dr Amoro Traore, Demba Samake,
Dr Christine Ongoiba, Dr Ousmane Doumbia, Dr Modibo K Goita, Dr Moussa
Aly Sangare, Dr Aïssata Toure, Dr Mahamadou Kotioumbe, Kadidiatou Diallo,
Issouf Ballo.
À la famille Maguiraga
Je vous remercie pour votre sympathie et pour l’attention que vous m’avez portée
durant mon séjour en Afrique du Sud.
Je remercie également Mahamadou Sadikou Gassama, tu as été aux petits soins
avec moi. Merci pour ta gentillesse, ta bonne humeur, ta compassion et ta patience.
Je remercie Dr Etienne Algiman, Directeur du laboratoire ALGI pour m’avoir
accepté au sein de son laboratoire
Je remercie également tout le personnel du laboratoire ALGI particulièrement Sitan
Keita et Tidiane Tall merci pour la bonne humeur que vous faites régner dans le
laboratoire. Je vous remercie également pour toute l’aide que vous m’avez apporté
lors de ces années de travail.

v
À tout le personnel de l’unité de cytogénétique et de biologie de la reproduction de
l’Institut National de Santé Publique INSP trouvez ici l’expression de mon profond
respect.
Je tiens à remercier tous les membres de l’Amicale des Étudiants en Pharmacie
(AEP) pour leur sympathie, j’ai passé de bons moments en votre compagnie.
À tout le personnel de la pharmacie Bougie BA ainsi que celui de la pharmacie
BADIALLO trouvez ici l’expression de ma reconnaissance pour tous vos différents
soutiens.
À tous mes camarades de la promotion 12 du Numerus Clausus merci pour tous
ces beaux moments partagés.
Je tiens à adresser mes remerciements aux patients qui ont été intégrés dans cette
étude sans qui cette thèse n’aurait pas pu avoir lieu.
En fin de compte, un immense merci à tous ceux et celles qui ont participé de loin
ou de près à la réalisation de ce modeste travail.

vi
HOMMAGES AUX MEMBRES DU
JURY

vii
A notre Maitre et Président du jury
Professeur Mahamadou TRAORE
➢ Professeur Honoraire de génétique à la Faculté de Pharmacie de

l’USTTB
➢ Co-investigateur de l’étude sur les pathologies neurologiques
héréditaires au Mali
➢ Président et membre fondateur de la Société Malienne de Génétique
Humaine
➢ Membre du Consortium Human Heredity and Health in Africa
(H3Africa)
➢ Membre de la Société Africaine de Génétique Humaine
➢ Membre de la Société Malienne de Neurosciences
➢ Co-investigateur de l’étude sur la génétique de l’épilepsie au Mali
Cher Maitre,
C’est un grand plaisir et un honneur que vous nous faites en acceptant de présider ce
jury de thèse malgré vos différentes occupations. Nous avons été profondément
émerveillés par votre gentillesse, votre humilité, votre simplicité et votre
disponibilité permanente. Je vous remercie grandement de m’avoir accompagnée et
de m’avoir appris à être plus autonome tout au long de ce travail de recherche. Je
suis ravie d’avoir travaillé en votre compagnie car outre votre appui scientifique, vos
enseignements et votre aide vous m’avez soutenu et conseillé.
Votre expérience et votre appétence pour le domaine ont fortement contribués à la

réussite de cette thèse. Soyez assuré de ma très haute considération.

viii
A notre Maitre et juge
Professeur Guida Landouré
➢ Spécialiste en Neuro génétique (MD, PhD)

➢ Praticien hospitalier au CHU du Point G
➢ Maitre de conférences à la FMOS
➢ Investigateur principal de l’étude sur les pathologies héréditaires au Mali
➢ Secrétaire général de la Société Malienne de Génétique Humaine
➢ Membre de la Société Malienne de Neurosciences
➢ Membre de la Société Américaine de Génétique Humaine
➢ Membre du consortium Human Heredity and Health in Africa
(H3Africa)
➢ Membre du Réseau International des Maladies Rares
Cher maitre,
Vous nous faites un grand honneur en acceptant de juger ce travail malgré vos
multiples engagements. Nous avons bénéficié de votre expertise et de vos conseils
éclairés. Vos suggestions ont été très pertinentes pour l’amélioration de ce travail.
Votre abord facile, votre disponibilité, votre humanisme et votre modestie forcent
respect et admiration.
Je vous prie d’agréer mes respectueux hommages.

ix
A notre Maître et juge
Professeur Mamadou SIMA
➢ Gynécologue obstétricien
➢ Maitre de conférences à la FMOS
➢ Chargé de cours à la FMOS
➢ Praticien hospitalier au CHU du Point G
➢ Chargé de cours à l’institut national de formation en science de la santé
(INFSS)
Cher Maître,
Je tiens tout d’abord à vous remercier pour l’intérêt que vous avez porté à mon travail
en acceptant de faire partie de ce jury. Nul doute que vous êtes un excellent clinicien.
Votre maitrise de la gynécologie et votre intérêt pour la recherche sont
incontestables. Merci d’offrir vos connaissances à notre étude. Veuillez croire à
l’expression de ma profonde reconnaissance et de mon respect.

x
A notre maitre et juge
Pr Sékou Bah
➢ Vice doyen de la faculté de Pharmacie

➢ Maitre de conférences en pharmacologie à la FMOS/FAPH
➢ Membre du comité technique de pharmacovigilance
➢ Chef de service de la pharmacie hospitalière du CHU point G
Cher Maître,
Vous nous faites un grand honneur en acceptant de juger ce travail malgré

occupations professionnelles. Votre amabilité et vos qualités humaines nous ont
fortement marqués.
Veuillez agréer l’expression de mon estime et de mon plus grand respect.

xi
A notre Maitre
Professeur Djénéba Koumba Dabitao
➢ Spécialiste en Biologie Moléculaire et en Immunologie

➢ Maitre de conférences à la faculté de Pharmacie
➢ Cheffe du Laboratoire ImmunoCore du Centre Universitaire de
Recherche Clinique (UCRC) de l’USTTB.
Chère maitre,
C’est un très grand privilège que de vous compter dans notre jury de thèse. Vos
qualités scientifiques indiscutables et votre simplicité forcent admiration. Les
femmes étant sous représentées dans le domaine de la science vous êtes un modèle
pour nous toutes. Je vous remercie aussi d’avoir accepté de co-diriger ce travail.
Veuillez trouver ici l’expression de nos sincères remerciements et de notre profond
respect.

xii
A notre Maitre et directeur de Thèse
Professeur Oumar SAMASSEKOU
➢ Spécialiste en génétique médicale et pathologie moléculaire
➢ Maitre de Conférence en génétique et génomique à la FMOS de
l’USTTB
➢ Membre fondateur de la Société Malienne de Génétique Humaine
➢ Membre du Consortium Human Heredity and Health in Africa
(H3Africa)
Cher maitre,
Je vous remercie infiniment d’avoir accepté d’encadrer ce travail avec rigueur

scientifique. Je suis très reconnaissante pour la confiance que vous avez eue en moi
et pour le temps que vous avez consacré à l’élaboration de ce travail malgré vos
multiples occupations. Cette thèse doit beaucoup à vos observations avisées et vos
précieux conseils. Votre écoute attentive m’a permis de retrouver la patience perdue
dans les moments difficiles. Votre immense savoir pluridisciplinaire, votre
gentillesse, votre humilité et votre humour impose respect et admiration. J’espère
que mon travail aura été à la hauteur de vos attentes.
Recevez le témoignage de ma profonde reconnaissance.

xiii
TABLE DES MATIÈRES
1. INTRODUCTION 2
2. OBJECTIFS 5
2.1 Objectif général 4
2.2 Objectifs spécifiques 4
3. GENERALITES 6
3.1. Rappel anatomique du système reproducteur male 6
3.2. Spermatogenèse 8
3.3. Contrôle hormonal de la spermatogenèse 12
3.4. Structure et morphologie du spermatozoïde 13
3.5. Sperme 14
3.6. Structure de l’ADN des spermatozoïdes 1415
3.7. Fragmentation de l’ADN spermatique 15
3.7.1. Causes de la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes 16
3.7.1.1. Apoptose 15
3.7.1.2. Stress oxydatif 16
3.7.1.3. Maturation défectueuse 17
3.7.1.4. Age avancé 18
3.7.1.5. Varicocèle 18
3.7.1.6. Infections génitaux-urinaires 18

xiv
3.7.1.7. Pollution 18
3.7.1.8. Tabagisme 19
3.7.1.9. Obésité 19
3.7.1.10. Diabète 19
3.7.11. Rayonnements ionisants 19
3.7.2. Analyse de la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes 20
3.7.2.1. SCSA (Sperm Chromatin Structure Assay) 20
3.7.2.2. TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl-transferase-mediated dUTP Nick

End Labelling) 20
3.7.2.3. Technique single cell electrophoresis (COMET) 21
3.7.2.4. SCD (Sperm Chromatin Dispersion) 22
3.7.3. Dans quels cas pratiquer le test 2523
4. METHODOLOGIE 2725
4.1. Cadre et lieu d’étude 2725
4.2. Types d’étude et période de l’étude 2725
4.3. Population d’étude 2725
4.3.1. Critères d'inclusion 25
4.3.2. Critères de non-inclusion 26
4.4. Considérations éthiques 2826
4.5. Collècte des données 2826

xv
4.5.1. Collècte des échantillons 2826
4.5.2. Données cliniques 2927
4.6. Méthodes 2927
4.6.1. Spermogramme 2927
4.6.3. Technique de fragmentation 3533
5. RESULTATS 39
5.1. Données cliniques 39
5.1.1. Age 37
5.1.2. Indications cliniques 38
5.1.3. Lieu de prélèvement 39
5.1.4. Durée d'abstinence 40
5.2. Données du spermogramme 38
5.2.1. Volume du sperme 38
5.2.2. Concentration des spermatozoïdes 44
5.2.3. Mobilité 43
5.2.4. Cellules rondes 44
5.2.5. Vitalité 45
5.2.6. Morphologie 47
5.2.7. Anomalies du Spermogramme 51
5.3. Données sur la fragmentation de l’ADN 53
5.3.1. Indice de fragmentation 51
5.3.2. Fragmentation spermogramme normaux 54

xvi
5.3.3. Fragmentation spermogramme anormal 56
5.4. Tableaux croisés 60
5.4.1. Vitalité et Fragmentation 58
5.4.2. Mobilité et fragmentation 59
5.4.3. Concentration et fragmentation 60
5.4.4. Morphologie et fragmentation 61
5.4.5. Spermogramme et fragmentation 62
6. COMMENTAIRES ET DISCUSSION 66
7. CONCLUSION 72
8. RECOMMANDATIONS 74
10. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 77
10. ANNEXES 89

xvii
LISTE DES TABLEAUX
Tableau I: Répartition des individus en fonction de la durée d’abstinence. 42
Tableau II: Répartition des individus en fonction du volume du sperme 43
Tableau III: Répartition des individus en fonction des anomalies du spermogramme

52
Tableau IV: Répartition des individus selon l’indice de fragmentation de l’ADN

(DFI) 54
Tableau V: Corrélation entre la vitalité et le taux de fragmentation 60
Tableau VI : Corrélation entre la motilité et le taux de fragmentation 61
Tableau VII: Corrélation entre la concentration et le taux de fragmentation 62
Tableau VIII: Corrélation entre la morphologie et le taux de fragmentation 63
Tableau IX: Corrélation entre le spermogramme et le taux de fragmentation 64

xviii
LISTE DES FIGURES
Figure 1: Appareil génital masculin .........................................................................6
Figure 2: Spermatogenèse .........................................................................................9
Figure 3: Etapes de la Technique SCD 23
Figure 4: SCA-SCOPE 24
Figure 5: Répartition des individus en fonction de l’âge........................................39
Figure 6: Répartition des individus en fonction de l’indication clinique ...............40
Figure 7: Répartition des individus en fonction du lieu de prélèvement ................41
Figure 8: Répartition des individus selon la numération des spermatozoïdes .......44
Figure 9: Répartition des individus en fonction de la mobilité ..............................45
Figure 10: Répartition des individus en fonction de la concentration des cellules
rondes .......................................................................................................................46
Figure 11: Image de spermatozoides .....................................................................47
Figure 12: Répartition des individus en fonction de la vitalité 48
Figure 13: Morphologie des spermatozoïdes 49
Figure 14: Répartition des individus en fonction de la morphologie .....................50
Figure 15: Répartition des individus en fonction du résulat du spermogramme....51
Figure 16: Fragmentation de l’ADN des spermatozoides ......................................53

xix
Figure 17: Distribution des valeurs de la fragmentation de l’ADN après le test de
dispersion de la chromatine de la population d’étude. ............................................55
Figure 18 : Distribution du taux de fragmentation d’ADN chez les individus
présentant un spermogramme normal. .....................................................................56
Figure 19 : Distribution des valeurs de la fragmentation d’ADN des individus avec
spermogrammes normaux. .......................................................................................57
Figure 20: répartition en pourcentage de la fragmentation d’ADN des individus
présentant spermogrammes anormaux.....................................................................58
Figure 21: Distribution des résultats des fragmentations des individus avec
spermogramme anormaux. .......................................................................................59

xx
LISTE DES ABREVIATIONS
8OHdG : 8-Hydroxy-2-deoxyguanosine
ADN: Acide Désoxyribonucléique
DAPI: 4’,6-diamidino-2-phenylindole
DFI: DNA Fragmentation Index
DRO: Dérivés Réactifs de l’oxygène
FIV: Fecondation In Vitro
ICSI: Intracytoplasmic Sperm Injection
MDA: Malondialdehyde
OATS: Oligo-Asthéno-Tératozoospermie
OMS: Organisation mondiale de la santé
PBS: Phosphate Buffer Saline
PH: Potentiel d’hydrogène
PMA: Procréation médicalement assistée
SA: Spermogramme Anormal
SCD: Sperm Chromatin Dispersion
SCSA: Sperm Chromatin Structure Assay
SDF: Sperm DNA Fragmentation
SN: Spermogramme Normal

xxi
TdT: Terminal desoxynucleotidyl Transferase
TNF: Tumor Necrosis Factors
TUNEL: Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated d’UTP Nick End

Labelling

xxii
INTRODUCTION
1
1. INTRODUCTION
L’infertilité est définie par l’Organisation Mondiale de la Santé (OMS)
comme l’incapacité d’un couple à obtenir une grossesse évolutive après plus d’une
année de rapports sexuels réguliers, non protégés et sans contraception. L’infertilité
est un problème majeur de santé publique car elle touche environ 48 millions de
couples et 186 millions de personnes dans le monde (1).
L'Afrique est le continent le plus touché par l'infertilité. En effet,15 à 30% des
couples africains rencontrent des difficultés à concevoir (contre 5 à 10% pour le reste
du monde) (1). Dans un continent où la virilité de l'homme est souvent confondue
avec la capacité à faire des enfants, l’infertilité masculine reste un sujet tabou.
Longtemps considérée comme un problème purement féminin, aujourd’hui, il a été
démontré que l’infertilité masculine se révèle être la cause d’un tiers de celle du
couple (1).
Les causes de l’infertilité masculine sont multiples, et la fragmentation de

l’ADN spermatique est considérée comme l’une des plus fréquentes. De multiples
études portant sur l’intégrité de l’ADN des spermatozoïdes ont mis en évidence un
taux d’ADN fragmenté plus élevé dans les spermatozoïdes d’hommes infertiles
(2,3). En outre, il a été rapporté qu’un niveau élevé de fragmentation de l’ADN
spermatique peut compromettre la conception (naturelle ou par les techniques de
procréation médicalement assistée) (4). Les dommages à l’ADN spermatique
peuvent entrainer des fragmentations et sont associés à plusieurs facteurs,
notamment les facteurs extrinsèques tels que l’exposition à la chaleur, le tabagisme,
les infections urogénitales, une inflammation, la varicocèle, la cryptorchidie, les
radiations ionisantes, les polluants environnementaux, et la chimiothérapie. Et les
facteurs intrinsèques comme une maturation défectueuse des cellules germinales, le

2
stress oxydatif, un excès de stress au quotidien et des carences micro-nutritionnelles
peuvent aussi être associés à une fragmentation de l’ADN spermatique (5).
L’exploration de l’infertilité masculine reste avant tout basée sur l’analyse

conventionnelle du sperme : le spermogramme et le spermocytogramme. Toutefois,
l’évaluation de la concentration, la motilité, la vitalité et la morphologie des
spermatozoïdes ne peut pas refléter l’intégrité de l’ADN des spermatozoïdes. C’est
ainsi qu’on retrouve chez 15% des individus infertiles une analyse normale du
sperme (6). Par conséquent, l’analyse conventionnelle du sperme ne peut pas prédire
avec précision le potentiel de la fertilité masculine. Pour combler cette limite du
spermogramme, on a recours à d’autres techniques qui évaluent le nombre de
chromosomes et l’intégrité de l’ADN des spermatozoïdes (7).
La technique de dispersion de la chromatine des spermatozoïdes (SCD) est

l’une des approches les plus utilisées dans la pratique clinique pour évaluer la
fragmentation de l’ADN spermatique. En effet, les spermatozoïdes ayant de l’ADN
fragmenté à plus de 30%, mesuré par la technique SCD, ont très peu de pouvoir
fécondant et conduisent à des avortements spontanés (8). Malgré sa place
prépondérante dans l’évaluation du pouvoir fécondant des spermatozoïdes et du
bilan de l’infertilité masculine, la technique SCD n’est pas encore pratiquée au Mali.
La présente étude consiste à d’abord faire la mise au point de la technique du test de
dispersion de la chromatine des spermatozoïdes (SCD) et ensuite d’évaluer le taux
de la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes au Mali. Cette étude nous
permettra donc de mesurer, pour la première fois au Mali, le taux de fragmentation
de l’ADN spermatique des hommes consultant pour une infertilité afin d’améliorer
leur prise en charge.

3
OBJECTIFS

4
2. OBJECTIFS
2.1 Objectif général
Déterminer le taux de fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes chez les hommes

consultant pour une infertilité.
2.2 Objectifs spécifiques
➢ Effectuer la mise au point de la technique SCD au laboratoire au Mali.

➢ Appliquer la technique de dispersion de la chromatine spermatique (SCD) sur
les spermatozoïdes des hommes consultant pour une infertilité.
➢ Évaluer la fréquence de la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes.
➢ Corréler les données de fragmentation de l’ADN à celles du spermogramme.

5
3. GENERALITES
3.1. Rappel anatomique du système reproducteur male
L’appareil génital de l’homme comprend différents organes.
3.1.1. Testicules
Ils sont situés dans les bourses droite et gauche, coiffés par l’épididyme. Ils
sont divisés en lobules et contiennent des canalicules, des tubes séminifères et des
cellules de Sertoli. Les testicules ont une fonction endocrine qui se traduit par la
sécrétion d’hormones sexuelles, essentiellement la testostérone, et une fonction
exocrine qui se manifeste par la production des spermatozoïdes (9).
Figure 1: Coupe transversale de l’appareil génital masculin. Vue distale

Cette figure a été tirée et modifiée de la référence (10).

6
3.1.2. Épididyme (organe paire)
Elle coiffe le testicule et est constituée d’une tête, à la partie supérieure un

corps qui commence à s’éloigner et d’une queue détachée du testicule. L’épididyme
sert de lieu de maturation des spermatozoïdes.
3.1.3. Conduit déférent
Il mesure environ 40 cm et possède un diamètre de 2 à 3m. Il part du pole

inferieur du testicule et se termine par un renflement (l’ampoule déférentielle) sur
lequel s’abouche la vésicule séminale. C’est la voie par laquelle les spermatozoïdes
quittent l’épididyme pour rejoindre les vésicules séminales.
3.1.4. Vésicules séminales
Elles sont situées à l’arrière de la vessie et au-dessus de la prostate et

interviennent dans la production du liquide séminal qui est le composant majoritaire
du sperme.
3.1.5. Prostate
Elle est localisée sous la vessie et entoure le carrefour uro-génital. La prostate

sécrète un liquide acide (le liquide prostatique) qui joue un rôle complémentaire en
modifiant le pH des sécrétions séminales.
3.1.6. Canal éjaculateur
Il se situe dans la partie supérieure de la prostate. Au cours de l’éjaculation,

le sperme passe par ce conduit pour ensuite emprunter l’urètre et finalement sortir
par l’extrémité distale du pénis.
3.1.7. Pénis
Le pénis est l’organe de la copulation chez l’homme, il est situé en avant de

7
la symphyse pubienne et au-dessus des bourses. Il est constitué de trois corps
érectiles dont deux corps caverneux et un corps spongieux dans lequel se trouve
l’urètre. Le corps spongieux se dilate à son extrémité formant ainsi le gland du pénis
qui est recouvert d’une peau fine et mobile appelé le prépuce.
3.2. Spermatogenèse
La spermatogenèse est le processus biologique par lequel les cellules

germinales appelées spermatogonies se transforment progressivement en
spermatozoïdes. Chez l’homme, elle débute à partir de la puberté et se poursuit toute
la vie. La spermatogénèse se déroule principalement à l’intérieur des tubes
séminifères des testicules. Elle se déroule en trois phases : la phase de prolifération
des spermatogonies, la phase méiotique ou phase de maturation et la phase de
différenciation ou spermiogénèse.
3.2.1. Phase de prolifération des spermatogonies

Les spermatogonies A sont les cellules souches diploïdes situées à la base de
l’épithélium séminifère, elles subissent une succession de mitoses dont la première
aboutit à la formation des spermatocytes I. Elles s’auto-renouvellent également et
assurent le maintien des cellules germinales. Sur le plan morphologique on distingue
trois types de spermatogonies (9 ,11) :
-Les spermatogonies A (ou poussiéreuses), à noyau homogène et finement granuleux
sont de deux sortes : les spermatogonies Ap (pale) à noyau claire et les
spermatogonies Ad (dark) à noyau plus dense.
-Les spermatogonies de type B appelées croutelleuses à noyau pourvu de
chromocentres très nets qui se multiplient par mitose en spermatocyte I. Cette phase
dure environ 27 jours.

8
La phase de multiplication a donc deux objectifs. D’une part, elle assure le
maintien d’un pool de spermatogonies souches et d’autre part, elle entretient le
développement de la lignée germinale grâce aux divisions.
Figure 2: Spermatogénèse
Cette figure a été tirée et modifiée du site web ayant la référence (12).

9
3.2.2. Phase de maturation
C’est la phase durant la laquelle les spermatocytes subissent la méiose c’est-

à-dire deux divisions successives qui vont entrainer la réduction de moitié du nombre
de chromosomes et la quantité d’ADN.
3.2.2.1. Première division de méiose
La première division méiotique est une division réductionnelle. Chaque

spermatocyte I (46 chromosomes, deux chromatides) se divise pour donner deux
spermatocytes II (23 chromosomes, deux chromatides) et cette première division
dure environ 22 jours. Elle est caractérisée par une prophase longue qui comprend
cinq stades successifs : les stades leptotène, zygotène, pachytène, diplotène et
diacinèse (9,11).
Au stade leptotène, les chromosomes s’individualisent et forme de longs
filaments. Chaque chromosome est répliqué et donc constitué de deux chromatides
sœurs attachées par un centromère. Au stade zygotène, les chromosomes
homologues forment des paires. Chaque paire d’homologue appariée forme un
bivalent composé de quatre chromatides entrainant la formation des complexes
synaptonémaux. Au stade pachytène, les chromosomes se raccourcissent et
s’épaississent. C’est à ce stade que débute les échanges de matériel génétique entre
chromatides homologues (ou recombinaison, ou crossing over). Au stade diplotène
les homologues de chaque bivalent commencent à se séparer tout en restant collés à
certains endroits appelés chiasma. Au stade de la diacinèse, la condensation des
chromosomes devient maximale permettant ainsi l’identification des quatre
chromatides, des centromères et des chiasmas.
La métaphase I fait suite à cette étape. Au cours de celle-ci, l’enveloppe
nucléaire disparait et le fuseau se forme. Les centromères homologues de chaque

10
bivalent se disposent de part et d’autre du plan équatorial. A l’anaphase I les
centromères homologues migrent vers les deux pôles opposés et les couples de
chromosomes homologues sont disjoints. A la télophase I les enveloppes nucléaires
se reconstituent autour des noyaux des cellules filles et une cytodiérèse se suit. Les
cellules filles contiennent 23 chromosomes, un de chaque paire. Chaque
chromosome est dupliqué et constitué de deux chromatides sœurs.
3.2.2.2. Deuxième division de méiose
La deuxième division méiotique est de type équationnel. C ’est la phase au

cours de laquelle les spermatocytes II se divisent et forment chacun deux
spermatides (23 chromosomes, une chromatide). Cette phase est très rapide d’autant
qu’elle dure moins de 48 heures. Par conséquent, elle explique le fait que les
spermatocytes II soit très rarement observés sur les coupes histologiques. A la
prophase II, le fuseau se reforme et les chromosomes se disposent sur la plaque
équatoriale. A l’anaphase II, les centromères se divisent et les chromatides sœurs se
séparent. La membrane cellulaire se reconstitue autour des cellules filles. Ainsi, chez
l’homme une spermatogonie conduit à la formation de 4 spermatozoïdes.
Les anomalies de la répartition des chromosomes telles que les non-
disjonctions peuvent survenir au cours de la méiose. La méiose crée une très grande
diversité génétique par la répartition au hasard des chromosomes.
3.2.3. Phase de différenciation ou spermiogénèse

C’est le processus par lequel les spermatides se transforment en
spermatozoïdes capables de se déplacer et de féconder. Au cours de ce processus,
les spermatides subissent plusieurs changements notamment (9,11).
⮚ La condensation de la chromatine nucléaire avec des protéines du noyau forment

la tête du spermatozoïde.

11
⮚ La formation du flagelle qui permet la mobilité du spermatozoïde.
⮚ La formation de l’acrosome qui est très riche en enzymes hydrolytiques

indispensables aux spermatozoïdes pendant leurs interactions avec l’ovocyte lors
de la fécondation.
⮚ L’élimination de l’excès de cytoplasme des spermatides qui est versé comme

corps résiduel et phagocyté par les cellules de Sertoli.
⮚ La formation du manchon mitochondrial de la pièce intermédiaire. Les

mitochondries d’abord dispersées dans le cytoplasme se regroupent pour former
un manchon.
⮚ Les modifications membranaires et la synthèse des protéines cytoplasmiques

indispensable au déroulement de la fécondation.
Après ces changements morphologiques, les spermatozoïdes, pas encore
mobiles, quittent l’épithélium séminifère pour achever leur maturation dans
l’épididyme. On parle de maturation épididymaire. L’ensemble de toutes ces phases
dure environ 74 jours, c’est pourquoi il est recommandé d’espacer les
spermogrammes de trois mois chez le même sujet.
3.3. Contrôle hormonal de la spermatogenèse
Le contrôle de la fonction reproductive masculine est assuré par plusieurs

hormones dont la sécrétion est régulée par des boucles de rétrocontrôle négatif.
L’hypothalamus synthétise la GnRH (Gonadotropin-releasing Hormone) qui gagne
l’antéhypophyse par le système porte hypophysaire. Cette hormone stimule la
libération des gonadotrophines FSH (hormone folliculostimulante) et LH (hormone
lutéinisante) qui agissent sur leurs sites testiculaires. La LH a des récepteurs sur les
cellules de Leydig et induit la synthèse d’hormones stéroïdes, d’androgènes en
particulier la testostérone. La FSH induit la spermatogénèse par ses effets sur les

12
cellules de Sertoli. Elle induit également la synthèse d’inhibine, d’une protéine
transporteuse de testostérone, ABP (Androgen Binding Protein) et de nombreuses
autres substances. Ainsi, la concentration de testostérone dans les testicules est
élevée, condition nécessaire à la spermatogénèse. La testostérone circulante exerce
un rétrocontrôle négatif en inhibant la sécrétion hypothalamique et antéhypophysaire
(9,11).
3.4. Structure et morphologie du spermatozoïde
Le spermatozoïde est une petite cellule mesurant 3µm de large et 60 µm de long,

formés de trois parties principalement : la tête, le col et le flagelle.
3.4.1. Tête
Elle est constituée d’un noyau et d’un acrosome. Le noyau occupe la majeure
partie de la tête et il contient le matériel génétique extrêmement condensé. Il est
recouvert sur ses deux tiers antérieurs par l’acrosome. L’acrosome est une vésicule
aplatie qui recouvre les 2/3 supérieurs du noyau. Il contient de nombreuses enzymes
hydrolytiques comme la glucuronidase, hyaluronidase, phosphatase acide, N-
acetylglycosaminidase, protéinases neutres etc. Ces enzymes permettront aux
spermatozoïdes de traverser les enveloppes de l’ovocyte.
3.4.2. Col
Il est la zone de jonction entre la tête et le flagelle, composé d’un appareil

centriolaire et d’une pièce connective.
3.4.3. Flagelle
A partir du col, on distingue sur sa longueur trois parties notamment la pièce

intermédiaire, la pièce principale et la pièce terminale. Le flagelle grâce à ses
mouvements ondulatoires permet aux spermatozoïdes de se déplacer.

13
3.5. Sperme
Le sperme est un liquide blanchâtre, d’aspect gélatineux, produit par

l’appareil génital masculin lors de l’éjaculation et contenant les spermatozoïdes en
suspension dans un liquide qui est un mélange des secrétions des différentes glandes
génitales male. Il contient également de nombreuses cellules souches, cellules
épithéliales, macrophages, polynucléaires, hormones de croissance, sucres (fructose
et sorbitol), protéines, et oligoéléments. Le sperme est normalement stérile, c'est-à-
dire sans germes. Selon l’OMS, le volume normal du sperme est compris entre 1,5-
7 ml. Ce volume avec une densité en spermatozoïdes supérieure à 15 millions de
spermatozoïdes par millilitre est considéré comme normalement fécondant. Par
conséquent, des valeurs inferieures à la norme ne sont pas toujours synonymes de
stérilité. De nombreuses pathologies peuvent atteindre la qualité du sperme, dont la
conséquence principale est un risque de stérilité. Les examens permettant d'étudier
la qualité du sperme sont le spermogramme et le spermocytogramme (9,11).
3.6.Structure de l’ADN des spermatozoïdes
L’ADN du gamète mâle, est une longue molécule fortement compactée.

L’ADN des spermatozoïdes est le plus densément compacté connu chez les
eucaryotes pouvant être plus de six fois plus condensé que celui des cellules
somatiques. Au cours de la spermiogénèse, les nucléoprotéines de types histones
sont remplacées par des protamines. La condensation de l’ADN est assurée par ces
dernières qui sont des protéines nucléaires se trouvant dans les petits sillons de la
double hélice de l’ADN. Deux protamines successives sont unies par des ponts
disulfures. Ce processus permet au noyau des spermatozoïdes de se condenser et de
devenir mature. Cette compaction très importante correspond à la mise en place
d’une protection du noyau du gamète aux différentes agressions auxquelles il va être

14
soumis tout au long de son trajet, du tube séminifère jusqu’au cytoplasme ovocytaire.
Elles permettent aussi une augmentation de la vitesse de déplacement des
spermatozoïdes à travers les liquides et diminuent l’apparition des dommages à
l’ADN. En effet, l’altération de la quantité des protamines provoque une
condensation incomplète de la chromatine spermatique capable d’induire des
dommages à l’ADN qui pourront ensuite être à l’origine des avortements spontanés
ou des échecs du développement embryonnaire à la suite d’une ICSI (13,14).
3.7. Fragmentation de l’ADN spermatique
L’évaluation des hommes infertiles repose toujours sur l’analyse

conventionnelle du sperme, bien qu’elle ne prédise pas à elle seule avec précision le
potentiel de fertilité masculine et le succès des techniques de procréation assistée
(14). Ces dernières années, il est devenu clair que le sperme des hommes rencontrant
des difficultés à concevoir peut avoir des niveaux élevés de spermatozoïdes avec un
ADN endommagé ou fragmenté (16-19). La fragmentation de l’ADN des
spermatozoïdes désigne les cassures simple brin ou double brin dans le génome des
spermatozoïdes. Les dommages à l’ADN des spermatozoïdes sont associés à une
infertilité masculine et diminuent les probabilités de conception à la fois naturelle
qu’assistée (20-22). En outre, la fragmentation de l’ADN peut être associée à des
résultats de spermogramme et spermocytogramme normaux. Environ 15% des
patients infertiles ont un spermogramme normal (23). Il a été suggéré que l’intégrité
de l’ADN des spermatozoïdes est un marqueur plus objectif de la fonction de ceux-
ci par opposition aux paramètres standards tels que leur motilité (24,25). Des études
ont également montré une relation entre les dommages à l’ADN des spermatozoïdes
et le taux de réussite des fécondations in vitro (26). De plus, un rapport a indiqué
que les niveaux de dommages à l’ADN des spermatozoïdes ≥30% sont
incompatibles avec la réalisation d’une grossesse naturelle (27).

15
3.7.1. Causes de la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes
L’intégrité de l’ADN des spermatozoïdes peut être affectée au cours de la

spermatogenèse. Habituellement, le taux de fragmentation est faible dans les
spermatozoïdes, mais pour des raisons diverses les brins d’ADN spermatique
présentent des cassures excessives. Plusieurs facteurs intrinsèques (maturation
défectueuse des cellules germinales, apoptose abortive, stress oxydatif) et
extrinsèques (exposition à la chaleur, tabagisme, polluants environnementaux,
produits chimio thérapeutiques) peuvent entrainer la fragmentation de l’ADN des
spermatozoïdes.
3.7.1.1. Apoptose abortive pendant la spermatogenèse
L’homéostasie cellulaire est régulée par le développement et la différenciation

des cellules mais également par la mort cellulaire programmée : l’apoptose.
L’apoptose est indispensable lors d’une spermatogenèse fonctionnelle dans le
testicule. Elle intervient dans le maintien du nombre de cellules germinales par
rapport au nombre de cellules de Sertoli. L’apoptose extrinsèque est déclenchée par
la liaison du ligand FAS à un récepteur FAS activant ainsi la caspase 8 ou 10 (28).
Il en résulte alors une cascade d’activation protéiques aboutissant à la mort cellulaire
et la fragmentation de l’ADN. FAS est une protéine transmembranaire appartenant
à la super famille des récepteurs TNF et le système FAS-FAS Ligand joue un rôle
important dans l’élimination des cellules germinales apoptotiques dans les testicules
humains. L’apoptose garantie donc qu’aucune cellule germinale défectueuse ne se
différencie en spermatozoïde, mais l’échec de ce processus peut entrainer
l’accumulation des spermatozoïdes exprimant des marqueurs apoptotiques dans le
sperme éjaculé. La présence des spermatozoïdes présentant des traits apoptotiques

16
et une fragmentation de l’ADN suggèrerait alors qu’un processus d’apoptose a été
déclenché mais qu’il n’a pas atteint son but ultime.
3.7.1.2. Stress oxydatif
Il entraine la production des dérivés réactifs de l'oxygène (DRO) encore

appelés radicaux libres oxygénés. Ce sont des molécules très instables. On distingue
les DRO sous forme ionique (l’ion hydroxyle OH-, l’ion superoxyde O2-), et sous
formes de molécules (le peroxyde d’hydrogène-H2O2, l’acide hypochlorique-HOCL,
le peroxyde de lipides-LOOH et l’ozone-O3). Ce sont des produits du métabolisme
cellulaire qui joueraient un rôle important dans le processus physiologique des
spermatozoïdes. Lorsqu’ils sont présents à des concentrations élevées, ils sont
capables d’entrainer des altérations au niveau de la membrane des spermatozoïdes
qui est très riche en acide gras polyinsaturés, très vulnérable à l’oxydation et à la
peroxydation lipidique (29). Les DRO dans le plasma séminal proviennent de
diverses sources notamment les leucocytes (une leucospermie c’est à dire la présence
de plus de 1 millions de cellules à peroxydase positive par ml de sperme génère un
DRO capable d’endommager les spermatozoïdes), les cellules germinales
immatures, le tabagisme, l’alcool et les polluants environnementaux (30). De plus,
la fragmentation peut être provoquée par des DRO indirectement par l’intermédiaire
de sous-produits lipidiques tel que le 4-hydroxynonenol (4HNE) et le
malondialdehyde (MDA), qui produisent des adduits d’ADN tels que le 8-hydroxy-
2’-deoxyguanosine (8OHdG) entrainant des dommages à l’ADN en particulier sur
les sites ou la protamination est faible. Il est important de noter que la plupart des
dommages de l’ADN spermatique est induite par le stress oxydatif (31, 32).

17
3.7.1.3. Maturation défectueuse
Au cours du processus normal de compactage de la chromatine des

spermatozoïdes, les cassures d’ADN qui ne sont pas réparées entrainent la formation
d’ADN moins compact qui est susceptible d’être endommagé par des facteurs
exogènes. Au cours de la spermatogenèse, la chromatine est compactée par échange
d’histones avec des protéines de transition et des protamines (30). Ceci est facilité
par la nucléase endogène topoisomérase II qui créent des cassures d’ADN pour
réduire le stress de torsion afin d’assurer le désassemblage des histones et
l’emballage de la chromatine (31,32). Si ces cassures ne sont pas réparées, une
altération de l’emballage de la chromatine peut entraîner une maturation défectueuse
et l’apparition de spermatozoïdes avec un taux de fragmentation élevé dans l’éjaculat
(33,34).
3.7.1.4. Âge avancé
La fragmentation augmente avec l’âge. Commençant en âge de procréer et

doublant entre 20 et 60 ans (35). Ceci serait causé par une exposition élevée au stress
oxydatif, une maturation défectueuse et l’apoptose qui se produisent avec le
vieillissement
3.7.1.5. Varicocèle
Elle induit des lésions testiculaires par la dilatation des veines. La

fragmentation de l’ADN est la résultante de l’augmentation de la température intra-
testiculaire et le flux rétrograde des métabolites rénaux et surrénaliens, ce qui
entraine le stress oxydatif et l’apoptose (36).

18
3.7.1.6. Infections génitaux urinaires
Les infections génito-urinaires et la leucocytospermie subséquente entrainent

la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes.
3.7.1.7. Pollution
Certains produits chimiques peuvent endommager l’ADN des

spermatozoïdes. Certaines études démontrent une augmentation du SDF avec la
pollution atmosphérique (37). L’exposition à des métaux lourds tels que le plomb,
le cadmium (38), le fenvalérate (insecticide synthétique) (39) et les pesticides
organophosphorés (40) peuvent causer des dommages à l’ADN des spermatozoïdes.
Le bisphénol A et le styrène présent dans le caoutchouc synthétique ou les polyesters
altèrent également l’intégrité de l’ADN des spermatozoïdes (41).
3.7.1.8. Tabagisme
Les hommes fumeurs ont un sperme de moins bonne qualité. Le tabagisme a

un impact négatif sur l’intégrité de l’ADN en raison des métabolites du tabac, tels
que la nicotine, le cadmium, le plomb et le benzopyrène (42).
3.7.1.9. Obésité
Les hommes obèses ont des niveaux plus élevés de stress oxydatif et de
fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes par rapport aux hommes de poids
normal ou en surpoids (43). L’augmentation de la température du scrotum et les
troubles endocriniens sont considérés comme les mécanismes liant l’obésité à
l’altération de la fonction des spermatozoïdes et la fertilité.
3.7.1.10. Diabète
Les hommes atteints de diabète présentent des niveaux plus élevés de

fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes à cause des DRO en association avec

19
les produits finaux de glycation avancée qui sont des substances issues en générale
de la réaction entre un sucre et des résidus de protéines (44).
3.7.1.11. Rayonnements ionisants
Les produits chimiques génotoxiques, les médicaments radiomimétiques

peuvent également conduire à une fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes. Les
ondes électromagnétiques, en particulier celles des téléphones cellulaires,
augmentent la production des substances oxygénées réactives mitochondriaux et la
formation d’adduits à l’ADN, causant des dommages à l’ADN (45).
3.7.2. Analyse de la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes
Différentes techniques peuvent être utilisées pour évaluer la fragmentation de

l’ADN des spermatozoïdes.
3.7.2.1. Sperm Chromatin Structure Assay (SCSA)
Le SCSA est une technique de cryométrie de flux qui permet la quantification

de la fluorescence émise par les brins d’ADN (21). En effet, la chromatine
spermatique fragmentée est susceptible de se dénaturer après un traitement par une
solution acide ou par la chaleur, tandis qu’une chromatine normale reste intacte. La
chromatine pourrait être colorée avec de l’acridine orange qui possède des propriétés
métachromatiques. Ainsi, l’ADN double brin produit une fluorescence verte, l’ADN
simple brin dénaturé produit une fluorescence rouge. La cytomètre de flux permet
de mesurer la fluorescence dans environ 5000 spermatozoïdes et de déterminer le «
DNA Fragmentation Index » ou l’index de fragmentation de l’ADN (DFI) (46).

20
3.7.2.2. Test de TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated
dUTP Nick End Labelling)
Le principe de cette technique repose sur la liaison spécifique de TdT

(Terminal desoxynucleotidyl-transférase) aux extrémités 3-OH de l’ADN suivie de
la synthèse d’une molécule polydesoxynucleotidique marquée. L’ADN est d’abord
dénaturé par un traitement protéolytique, puis la TdT est utilisée pour incorporer les
nucléotides triphosphates aux sites de cassures de l’ADN permettant ainsi de
quantifier les niveaux de cassures. Des nucléotides sont couplés à la digoxygénine
et un anticorps antidigoxygénine couplé à un fluorochrome qui permet l’observation
au microscope. L’analyse peut se faire à l’aide d’un microscope à épifluorescence
ou par cyrtométrie de flux (si la concentration spermatique n’est pas trop faible)
(47,48)
3.7.2.3. « Technique Single Cell Gel Electrophoresis COMET » ou Test de

COMET
Cette méthode est capable de mesurer à la fois les cassures simples et doubles
brins d’ADN des spermatozoïdes. Le sperme est mélangé avec de l’agarose
légèrement chauffé, le tout est déposé sur une lame. Les cellules sont ensuite lysées
afin de dissoudre la membrane cellulaire pour rendre la chromatine accessible.
Ensuite, la lame est trempée successivement dans deux solutions enzymatiques. Ces
deux étapes sont cruciales car elles permettent la décondensation de la chromatine
des spermatozoïdes. Après ces étapes, les gamètes sont soumis à une électrophorèse.
Le spermatozoïde est soumis à un champ électrique, l’ADN sans cassure reste dans
la tête spermatique intacte et super enroulé. Au contraire, si l’ADN a des cassures,
il migre et sort petit à petit de la tête spermatique et donne ainsi l’aspect d’une
comète (d’où le nom de la technique). Le test combine l'analyse de l'échantillon de

21
sperme dans des conditions de pH neutre et de pH alcalin (pH> 10). Le test alcalin
des comètes visualise les cassures simples et double brin de l'ADN cellulaire, tandis
que le test neutre des comètes révèle principalement les cassures double brin. Enfin,
même si cette technique détecte les cassures de l’ADN spermatique il n’a pas été
établi de seuil à partir duquel un impact clinique existe (49).
3.7.2.4. Test SCD (Sperm Chromatin Dispersion)
Le test SCD a été utilisé pour la première fois en 2003 par l’équipe de
Fernandez (50). Le test de dispersion de la chromatine des spermatozoïdes (SCD),
ou test "halo" évalue le pourcentage des spermatozoïdes ayant de l’ADN fragmenté
à l’aide de la microscopie (à fluorescente ou fond clair). Les spermatozoïdes sont
immergés dans une matrice d'agarose et lysés pour éliminer la membrane cellulaire,
le cytoplasme et le nucléoplasme. Les cellules sont ensuite traitées avec une solution
d’acide pour solubiliser les protéines de l'emballage nucléaire, ce qui permet à l'ADN
intact qui est étroitement compacté de jaillir vers l'extérieur, ressemblant à une
structure en forme de halo autour du noyau. L'ADN est ensuite coloré avec un
marqueur nucléaire (4′,6-diamindino-2-phénylindole-DAPI ou DIff-Quick) pour
l’observation microscopique. Les spermatozoïdes sont évalués et classés en fonction
de la taille du halo (50,51). Les spermatozoïdes avec un ADN intact forment de
grands halos de dispersion autour du noyau, par contre les spermatozoïdes avec un
ADN fragmenté ne produisent pas de halos ou forme de petits halos de dispersion.
Le DFI (DNA Fragmentation Index) est par la suite évalué. Un échantillon de sperme
normal possède un DFI inférieur à 15%. Un DFI compris entre 15-30% est considéré
comme modéré, et les hommes qui ont un DFI dans cette fourchette nécessitent un
avis spécialisé pour comprendre comment améliorer la qualité du sperme. Un DFI
supérieur ou égale à 30% a un impact négatif sur le potentiel de fertilité des
spermatozoïdes (50,5).

22
Figure 3: Etape de la Technique SCD

23
Figure 4: SCA-SCOPE
Le SCA SCOPE est un équipement de laboratoire de la société MICROPTIC SL

située à Barcelone (Espagne) pour l’analyse du sperme et qui comprend à la fois
une partie logicielle et une partie matérielle (microscope et caméra). Ainsi,
l’analyse peut être effectuée de manière autonome, automatique et rapide.

24
3.7.3. Dans quels cas pratiquer le test
Le test de fragmentation de l’ADN spermatique est préconisé dans les cas

suivants :
➢ Absence de grossesse après 1 an de rapports sexuels non protégés

➢ Échecs répétés d’implantation en FIV ou en ICSI
➢ Fausses couches à répétition
➢ Infertilité masculine inexpliquée
➢ Varicocèle
➢ Infections génito-urinaires
➢ Patients âgés de plus de 45 ans
➢ Patients fumeurs ou exposés à des substances toxiques
➢ Exposition à de hautes température

25
METHODOLOGIE

26
4. METHODOLOGIE
4.1. Cadre et lieu d’étude
Le but de cette étude était de démontrer l’intérêt de l’utilisation de la technique

de fragmentation Sperm Chromatin Dispersion (SCD) comme technique
complémentaire aux analyses de spermogramme et spermocytogramme, et permettre
une meilleure appréciation de la qualité des gamètes mâles même lorsque les
résultats du spermogramme et du spermocytogramme semblent normaux.
Tous les patients ont été recrutés dans le laboratoire ALGI, lors de l’analyse
de leur spermogramme. Le laboratoire ALGI est une structure privée située à
Bamako. A notre connaissance, c’était cette seule structure qui disposait de
l’appareillage pour mesurer la fragmentation de l’ADN spermatique par la technique
SCD.
4.2. Type d’étude et période de l’étude
Il s’agissait d’une étude prospective et descriptive qui s’est déroulée sur une
période de dix-huit mois allant du 1er juillet 2021 au 31 Décembre 2022.
4.3. Population d’étude
La population d’étude était constituée des patients se présentant au laboratoire

pour un bilan d’infertilité masculine avec une demande d’examen de spermogramme
et spermocytogramme.
4.3.1 Critères d’inclusions
Nous avons inclus dans l’étude des patients qui présentaient des
spermogramme et spermocytogramme normaux et aussi des patients avec des
spermogramme et spermocytogramme anormaux.

27
4.3.2. Critères de non-inclusions
Tous les patients avec une azoospermie et ceux qui avaient des paramètres
spermatiques profondément effondrés (Oligo--asthénozoospermie sévère ou une
cryptozoospermie) n’ont pas été inclus dans l’étude.
Nous avons recruté 51 patients pour cette étude.
4.4. Considérations éthiques
Étant donné que nous devrions recueillir des données cliniques et génomiques
des patients, il était judicieux que ces derniers consentent à l’étude avant la collecte
des données. Par conséquent, chaque patient a bénéficié d’une explication de l’étude.
Le but de cette explication était de s’assurer que chaque patient ait compris les détails
et les points important qui sont : le caractère volontaire, la possibilité de se retirer de
l’étude à tout moment, le but, les critères de participation, les procédures et les
risques liés à la participation à l’étude.
4.5. Collecte des données
4.5.1. Collecte des échantillons
Nous avons collecté 1 ml de sperme à partir du sperme utilisé pour l’analyse

du spermogramme. Les échantillons ont été collectés chez les 51 individus inclus
dans cette. Le recueil du sperme a été réalisé par les patients eux-mêmes (certains
ont effectué le recueil au laboratoire et d’autres à la maison). Le recueil s’effectuait
par masturbation dans un réceptacle, à usage unique, stérile avec couvercle après une
abstinence sexuelle de 2 à 5 jours. Les patients devaient uriner avant de procéder au
recueil afin d’éliminer les germes présents dans le canal de l’urètre et aussi bien se
laver les mains et la verge. Une fois le recueil effectué l’éjaculat était placé à la

28
température de la pièce (20-25oC) pour liquéfaction (20 minutes). Après la
liquéfaction l’échantillon était rapidement analysé.
4.5.2. Données cliniques
Nous avons collecté les données cliniques de chaque patient et une base de
données Excel nous a permis de classer ces données.
4.6. Méthodes
4.6.1. Spermogramme
Le spermogramme est l’examen qualitatif et quantitatif du sperme et des

spermatozoïdes. C’est le premier examen pratiqué sur le sperme dans le cadre du
bilan d’infertilité masculine. Il permet de préciser différents paramètres dont les
principaux indicateurs de la fertilité masculine : la concentration, la motilité, la
vitalité des spermatozoïdes et également l’activité sécrétoire à travers le volume, le
pH et la viscosité du sperme. Le spermogramme a été effectué conformément aux
directives du manuel de l’OMS (52).
4.6.1.1. Conditions de recueil
Il est très important de transmettre aux patients des instructions claires avant
le recueil de l’échantillon pour garantir le bon déroulement de l’analyse. Il est
essentiel de s’assurer que le patient comprenne ces instructions. Si le patient
recueille son sperme à la maison il faut lui faire comprendre l’importance de faire
parvenir l’échantillon dans l’heure qui suit le prélèvement au laboratoire. Mais il
serait préférable d’encourager le patient à faire le recueil au laboratoire. Toutes
conditions susceptibles de modifier la qualité de l’échantillon doivent être
Consignées. Une abstinence comprise entre 2 à 5 jours est recommandée pour éviter
le recueil d’un faible volume d’éjaculat ou un volume contenant deux fois la

29
concentration normale de spermatozoïdes avec un pourcentage élevé de
spermatozoïdes morts due à une abstinence trop longue.
Le sujet doit être informé de l’importance du recueil de la totalité de l’éjaculat
car une fraction n’est pas représentative de l’ensemble de l’éjaculat. Directement
après l’éjaculation le sperme coagulé se liquéfie progressivement à (20-25oC). Après
liquéfaction le sperme est directement examiné.
4.6.1.2. Homogénéisation de l’éjaculat
L’homogénéisation doit être effectuée avant chacune des étapes de l’examen

de l’échantillon. Il faut éviter de mélanger trop vigoureusement afin de ne pas créer
des bulles. Le contenant est remué en décrivant des cercles avec le poignet pendant
15 à 20 secondes pour faire décoller le sperme des parois du contenant.
4.6.1.3. Examen macroscopique

4.6.1.3.1. Liquéfaction
Dès sa réception, l’échantillon de sperme est placé à la température de la pièce

(20-25oC) pendant 30 min à 60min pour assurer sa liquéfaction. Au terme de celle-
ci, l’examen est réalisé. Une liquéfaction prolongée doit être notée si l’éjaculat ne se
liquéfie pas après ce délai.
4.6.1.3.2. Aspect
L’échantillon liquéfié est normalement d’aspect laiteux. Il peut être plus

translucide s’il contient peu de spermatozoïdes. Si l’échantillon contient des
érythrocytes, il peut être de couleur rouge brunâtre. Il peut également avoir une
coloration plus jaunâtre si le patient souffre d’ictère ou prend certains suppléments
de vitamines ou médicaments.

30
4.6.1.3.3. Odeur
On utilise notre propre odorat pour déterminer ce paramètre. A l’état normal

le sperme a une légère odeur de chlore, alors qu’en cas d’infection l’odeur du sperme
peut devenir désagréable.
4.6.1.3.4. Viscosité
La viscosité devrait être examinée après liquéfaction spontanée de l’éjaculat.

Elle est appréciée en plongeant une pipette pasteur dans le sperme et en notant la
façon dont le sperme s’écoule. Elle est considérée élevée lorsque le sperme forme
des filaments de plus de 2 cm entre chaque goutte.
4.6.1.3.5. Volume
Le volume est mesuré en pesant le contenant après avoir calibré la machine.

Le volume normal est compris entre 1,5 ml et 6 ml. En deçà de 1,5 ml on note une
hypospermie et au-delà de 6ml on parle d’hyperspermie.
4.6.1.3.6. pH
Une goutte de sperme est déposée sur une bandelette de papier pH, la couleur
de la zone imprégnée est comparée à une échelle de lecture. Le pH est mesuré dans
l'heure qui suit l'éjaculation, les valeurs normales sont comprises entre 7,2 et 8.
4.6.1.4. Examen microscopique

L’analyse microscopique a été réalisée grâce à un équipement de laboratoire
(logiciel et matériel), nommé le SCA SCOPE (MICROPTIC SL, Barcelone,
Espagne). La préparation des échantillons se fait en fonction des paramètres à
évaluer. Il est doté d’un microscope biologique de type Nikon Ci-L composé de
plusieurs objectifs spécifiques de chaque analyse et d’une caméra de type Basler Ace

31
capable de prendre 200 images par seconde. Il est également muni d’un logiciel
capable d’analyser les images.
4.6.1.4.1. Mobilité et concentration
Nous avons utilisé les lames de comptages jetables de la même compagnie
MICROPTIC S.L qui permettent une analyse simultanée de la mobilité, de la
concentration et du pH du sperme.
Dans un premier temps l’échantillon est bien homogénéisé, puis 5 à 10 µl de
sperme sont déposés dans une chambre en prenant le soin d’éviter la formation des
bulles. Ensuite la lame est placée sur la platine du SCA SCOPE et l’analyse est
aussitôt lancée. Le mouvement de chaque spermatozoïde détecté est analysé puis
classé selon les 3 catégories de mouvement. La motilité est exprimée en pourcentage.
Les catégories de mouvement sont les suivantes :
A. Motilité progressive (PR)
Les spermatozoïdes se déplacent (en ligne droite, en zigzag ou en formant de

grands cercles) peu importe leur vitesse.
B. Motilité non progressive (NP)
Les spermatozoïdes qui bougent, mais dont les mouvements ne permettent pas
le déplacement (petits cercles, faibles battements déplaçant à peine la tête,
battements de flagelle seulement).
C. Immobiles (IM)
Les valeurs de référence pour la motilité : mobilité totale (PR+NP) ≥ 40 %,

motilité progressive (PR) ≥ 32 %. Ces valeurs correspondent au 5 e percentile établi
dans la cinquième édition du manuel de l’OMS (52). On parle d’asthénozoospermie

32
lorsque le pourcentage de la motilité des spermatozoïdes est inférieur aux valeurs de
référence.
Les valeurs de référence pour la concentration : la concentration désigne le nombre
de spermatozoïdes, exprimé en millions, dans un millilitre d’éjaculat. La valeur
absolue désigne le nombre de spermatozoïdes dans l’échantillon complet. La valeur
de référence quant à la concentration de spermatozoïdes est égale ou supérieure à 15
x 10⁶ /ml (correspond au 5e percentile établi dans la cinquième édition du manuel de
l’OMS). On parle d’oligozoospermie lorsque la concentration des spermatozoïdes
est en sous la limite inférieure de la référence. Dans le cas de la valeur absolue, la
valeur de référence est égale ou supérieure à 39 x 10⁶ /éjaculat (correspond au 5e
percentile établi dans la cinquième édition du manuel de l’OMS) (52).
4.6.1.4.2. Cellules rondes
À l’examen de la mobilité le SCA SCOPE peut également observer les

cellules rondes et les calculer. La concentration normale en cellules rondes d’un
éjaculat ne doit pas excéder 10⁶ cellules/ml.
4.6.1.4.3. Vitalité
La vitalité correspond au pourcentage des spermatozoïdes vivants dans

l’échantillon. Ce paramètre est évalué après coloration du sperme par un colorant
appelé BrighVit (coloration à base d’eosine-nigrosine) optimisé dans une technique
de coloration en une étape.
Préparation du frottis : Dans 40 µl de BrighVit au préalable traité à 37 ˚C dans
un bain marie, est ajouté 10 µl d’échantillon. Incubée pendant 5 à 10min à 37 ˚C, la
mixture est homogénéisée et 20 µl de cette mixture est mesuré sur la lame (vitalité
SCA). Une seconde lame est déposée sur la première sans presser et sont séparés par
un mouvement horizontal. On laisse les lames sécher à l’air libre.

33
La lecture des lames se fait sous microscope au grossissement 100x à
immersion, ainsi les spermatozoïdes morts deviennent roses ou rouges quand on les
colorent à l’eosine-nigrosine, tandis que les spermatozoïdes vivants ne prennent pas
le colorant et reste blanc. Cent spermatozoïdes sont comptés par échantillon et le
pourcentage des spermatozoïdes morts ainsi que celui des spermatozoïdes vivants
sont déterminés. La vitalité est considérée normale si le pourcentage des
spermatozoïdes vivants est supérieur ou égal à 58 %. En dessous de cette valeur on
parle de nécrozoospermie (52).
Nous avons évalué la vitalité au microscope car le SCA SCOPE rencontrait
des difficultés à bien lire les lames.
Dans son manuel, l’OMS propose d’évaluer la vitalité lorsque la motilité des
spermatozoïdes progressifs est inférieure à 40% (52).
4.6.2. Spermocytogramme
Un spermocytogramme est un examen médical correspondant à l’analyse

cytologique et morphologique des spermatozoïdes. Pour réaliser cet examen nous
avons procédé comme suit. Dans un premier temps une quantité de l’échantillon est
lavé avec du PBS puis dilué de sorte à avoir 50 millions de spermatozoïdes par ml.
Les échantillons avec une concentration inférieur à 15 millions de spermatozoïdes
n’ont pas été dilué. Dans un deuxième temps, 10 µl d’échantillon dilué est déposé
sur la lame colorée et le frottis est effectué. On attend 20 à 30 secondes et on plonge
deux fois la lame dans l’eau distillée et on la laisse sécher à l’air libre.
Une fois que la lame est sèche on ajoute dessus 2 gouttes d’EUKITT (colle de
montage de la société MICROPTIC S.L, sans xylène) utilisée dans l’analyse des
échantillons de morphologie. Elle permet d’obtenir une image contrastée ce qui
facilite la mise au point de l’échantillon tout en améliorant la qualité de l’analyse) et

34
on dépose une lamelle dessus, on laisse sécher pendant 15 minutes. On place alors
la lame sur la platine du SCA SCOPE pour l’analyse de la morphologie. Cent
spermatozoïdes sont analysés et classés selon qu’ils sont normaux ou anormaux.
Les anomalies sont répertoriées en quatre classes selon la classification de
Kruger Tête, Pièce intermédiaire, flagelle, reste cytoplasmique. Une seule anomalie
dans une de ces quatre classes suffit à classer le spermatozoïde comme atypique. Au
moins 4% des spermatozoïdes doivent avoir une forme typique pour que le
spermocytogramme soit considéré comme normal. En deçà de cette valeur on parle
de tératozoospermie.
Le SCA a la particularité d’évaluer d’autres paramètres tels que l’index de
tératozoospermie, l’index d’anomalies multiples, et l’index de déformation.
4.6.3. Technique de fragmentation
L’étude de la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes a été réalisée à

l’aide du test de dispersion de la chromatine (SCD) et les résultats ont été exprimés
en %DFI.
La technique SCD a été effectuée avec le kit GoldCyto DNA de la compagnie
MICROPTIC S.L (Barcelone, Espagne). Le kit est composé de lames prétraitées,
des tubes Eppendorf contenant de l’agarose, une solution tampon de phosphate
saline (PBS), une solution des agents dénaturants, une solution de lyse, une solution
de colorant TA et une solution de colorant TB.
Protocole :
Nous avons suivi le protocole suivant pour réaliser la technique SCD (Sperm
Chromatin Dispersion) selon celui décrit par la procédure du kit.
a) Laver le sperme frais. Deux lavages sont faits en ajoutant la solution de PBS qui
doit être le double du volume de l’échantillon

35
b) Centrifuger pendant 10 min à 15000 tours/min, ensuite enlever le surnageant et
conserver le culot.
c) Diluer ou concentrer l’échantillon dans le PBS pour obtenir une concentration
moyenne de 10 millions de cellules par ml
d) Faire fondre l’agarose gélifié contenu dans des tubes Eppendorf en le plaçant
dans un four à 90˚C pendant 5 minutes.
e) Placé le tube Eppendorf dans un bain marie à 37˚C pendant 5 minutes pour
rééquilibrer la température.
f) Placer un plateau en métal, en verre ou plastique à 4˚C.
g) Ajouter 30 µl du sperme dilué dans le tube contenant l’agarose et mélanger
soigneusement pour éviter la formation de bulles.
h) Déposer 14 à 20 µl du mélange sur une lame prétraitée et recouvrer d’une
lamelle.
i) Déposer la lame sur la plaque froide et placer à 4˚C pendant 5 minutes afin que
le mélange se solidifie.
j) Retirer délicatement la lamelle et immerger immédiatement la lame
horizontalement dans la solution de dénaturation pendant 7 minutes à
température ambiante.
k) Immerger la lame dans la solution de lyse et laisser incuber pendant 25 minutes
à température ambiante (20-25oC).
l) Rincer la lame en l’incubant dans l’eau distillée pendant 5 minutes.
m) Déshydrater la lame dans des bains successifs d’alcool de 70%, 90%, 100%
pendant 2 minutes pour chaque bain.
n) Egoutter la lame en l’inclinant et la laisser sécher à l’air libre.

36
o) Placer la lame sur un flotteur dans une boite de pétri. À l’aide d’une pipette
pasteur appliquer 0.5ml-0.8ml de la solution TA sur la surface d’agarose, laisser
agir pendant 1 minute.
p) Ajouter la solution TB sur la solution TA, (2 à 3 fois le volume de TA). Souffler
doucement avec la bouche afin de mélanger les deux solutions et laisser agir
pendant 3 à 10 minutes.
q) Laver les lames à l’eau du robinet et laisser sécher à température ambiante(20-
25oC).
La lecture s’effectue dans la partie Hardware du SCA SCOPE, au moins 300
spermatozoïdes sont analysés et comptés et les pourcentages des spermatozoïdes
fragmentés et non fragmentés sont calculés. En l’absence de dommages dans
l’ADN, de grands halos apparaissent autour de la tête du spermatozoïde. Les
spermatozoïdes avec ADN fragmentés ne présentent aucune dispersion de
chromatine (halos petits ou absents).
4.6.4. Analyses statistiques
L’analyse des données a été effectuée à l’aide du logiciel SPSS statistics 27.0 (IBM,
USA) et Excel (Microsoft, USA). Nous avons utilisé le test de corrélation de
Spearman pour les analyses statistiques. Ainsi, le test est considéré comme
statistiquement significatif lorsque la valeur de p< 0.05.

37
RESULTATS

38
5. RESULTATS
Les patients que nous avons inclus dans cette étude sont des hommes référés
au laboratoire ALGI pour infertilité ou hypofertilité du couple. Nous avons analysé
les données de 51 individus inclus dans cette étude.
5.1. Données cliniques
5.1.1 Âge
40%
34% 35%
35%
29%
30%
Pourcentage
25%
20%
15%
10%
5% 2%
0%
20-30 31-40 41-50 51-60
Tranche d'âge
Figure 5: Répartition des individus en fonction de l’âge

L'âge moyen des participants était de 37 ans avec des extrêmes de 20 ans et 52 ans.
Les tranches d'âge les plus représentées sont de 41-50 ans (35%) et 31-40 ans (34%).

39
5.1.2. Indications cliniques
40 71%
35
30
Pourcentage
25
20
15 21%
10
5 6%
2%
0
1 2 3 4
Indications cliniques
Figure 6: Répartition des individus en fonction de l’indication clinique

Parmi les 51 Individus recrutés au cours de l’étude, 36 soit 71% ont été admis pour
un bilan de fertilité primaire.

40
5.1.3. Lieu de prélèvement
23
47%
27 53%
Maison
Laboratoire
Figure 7: Répartition des individus en fonction du lieu de prélèvement

Plus de la majorité des individus (27 sur 51) ont effectué leurs prélèvements au
laboratoire.

41
5.1.4. Durée d’abstinence
Tableau I: Répartition des individus en fonction de la durée d’abstinence
Durée d'abstinence (jours) Effectif Pourcentage
3 26 51
4-10 24 47
10-15 1 2
Total 51 100
Nous avons trouvé que 51% des Individus avaient observé une abstinence d’une
durée de 3 jours.

42
5.2. Données du spermogramme
5.2.1. Volume du sperme
Tableau II: Répartition des individus en fonction du volume du sperme
Volume Effectifs Pourcentage
<1,5 ml 3 6
1,5-6 ml 46 90
> 6 ml 2 4
Total 51 100
Quarante-six Individus soit 90% avaient un volume normal de sperme c’est-à-dire

compris entre 1,5mL et 6mL.

43
5.2.2. Concentration des spermatozoïdes
16% 8
43
84%
<15millions/ml >15millions/ml
Figure 8: Répartition des individus selon la numération des spermatozoïdes

Nous avons observé chez 16% des individus une concentration de spermatozoïdes
inférieure à la valeur normale (<15 millions/ ml).

44
5.2.3. Mobilité
12
24%
76%
Anormale <32%
39 Normale >32%
Figure 9: Répartition des individus en fonction de la mobilité

Au courant de notre étude, la grande majorité des participants (76%) avaient au
moins 32% de spermatozoïdes à mobilité progressive.

45
5.2.4. Cellules rondes
16%
84% ≥ 1 million
43
< 1 million
Figure 10: Répartition des individus en fonction de la concentration des cellules

rondes
L’évaluation des cellules rondes nous a permis de déterminer chez 8 (16%) individus
une fréquence plus élevée de ces cellules.

46
5.2.5. Vitalité
Figure 11: Image de spermatozoïdes

Les spermatozoïdes vivants n’ont aucune coloration et un d’entre eux est indiqué par
la flèche rouge. Par contre, les spermatozoïdes non viables sont colorés en rouge et
un d’entre eux est indiqué par la flèche noire

47
Anormale Normale
22% 11
40
78%
Figure 12: Répartition des individus en fonction de la vitalité

Dans notre cas nous avons trouvé que 78% (40 sur 51) des participants avaient une
vitalité normale.

48
5.2.6. Morphologie
Figure 13: Morphologie des spermatozoïdes.

L’analyse de la morphologie des spermatozoïdes a été effectuée par le SCA SCOPE.
Comme nous pouvons le constater sur l’image ci-dessus, le SCA à la capacité
d’analyser les spermatozoïdes afin de déceler les différentes anomalies
morphologiques.

49
27% 14
73%
37
Anormale Normale
Figure 14: Répartition des individus en fonction de la morphologie

Au courant de notre étude nous avons que 73% (37 sur 51) des participants avaient
une morphologie normale.

50
5.2.7. Anomalies du Spermogramme
23
45%
55%
28
Spermogramme normal (SN) Spermogramme anormal (SA)
Figure 15: Répartition des individus en fonction du résultat du spermogramme.

En considérant les paramètres analysés du spermogramme, nous avons trouvé que
23(45%) individus de la population d’étude présentaient un spermogramme anormal.

51
Tableau III: Répartition des individus en fonction des anomalies du
spermogramme
Anomalies spermogramme Effectifs Pourcentage

Spermogramme normal 23 45
Tératozoospermie isolée 7 13
Asthénozoospermie isolée 4 8
Asthéno-nécrozoospermie 2 4
Nécrozoospermie isolée 2 4
Oligo-asthéno-tératozoospermie 2 4
Oligo-asthéno-nécrozoospermie 1 2
Oligozoospermie isolée 2 4
Oligo-nécrozoospermie 2 4
Asthéno-tératozoospermie 2 4
Oligo-tératozoospermie 2 4
Oligo-terato-necrozoospermie 2 4
TOTAL 51 100
Parmi les 51 patients représentant la population d’étude, 23 (45%) avaient un
spermogramme normal et les 28 (55%) autres présentaient un spermogramme
anormal. Au sein de groupe des spermogrammes anormaux, on a observé en majorité
une tératozoospermie isolée avec une fréquence de 25% (7 cas sur 23).

52
5.3. Données sur la fragmentation de l’ADN
5.3.1. Indice de fragmentation
Figure 16: Fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes.

Ces images représentent les spermatozoïdes avec divers degrés de fragmentation de
l’ADN par le test SCD. Les flèches noires indiquent les spermatozoïdes avec un
ADN intact, ils forment donc de grands halos. Les flèches rouge et jaune indiquent
les spermatozoïdes avec ADN fragmentés ils forment soit un petit halo, soit pas de
halos.

53
Tableau IV: Répartition des individus selon l’indice de fragmentation de
l’ADN (DFI)
Indice de Fragmentation ADN

(%) Effectif Pourcentage
Fragmentation faible (0-15) 18 35
Fragmentation modérée (15-30) 18 35
Fragmentation élevé (> 30) 15 30
Total 51 100
L’indice de fragmentation d’ADN (DFI) défini par la SCD est le pourcentage de

spermatozoïde fragmentés par rapport au nombre total de spermatozoïdes lus.
Au sein de notre population d’étude, 33 (65 %) des 51 individus avaient un DFI
supérieur à la valeur seuil, et parmi ces 33 individus 15 présentaient un DFI supérieur
à 30%, en d’autres termes élevé.

54
100
Taux de fragmentation de l'ADN
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51
Population d'étude
Figure 17: Distribution des valeurs de la fragmentation de l’ADN après le test

de dispersion de la chromatine de la population d’étude.
Le taux moyen des spermatozoïdes à ADN fragmenté évalué par le test de dispersion
de la chromatine dans la population d’étude était de 26,80% avec des extrêmes de
0% et 100%. Le taux de fragmentation le plus élevé était de 100% était observé chez
le patient 22 et le taux le plus faible était de 0% chez le patient 30.

55
5.3.2. Fragmentation et spermogrammes normaux
4
17%
10
44%
39%
9
Fragmentation faible Frgamentation moderée Fragmentation élevée
Figure 18: Distribution du taux de fragmentation d’ADN chez les individus

présentant un spermogramme normal.
Parmi les 23 individus avec un spermogramme normal, 17% (4/23) et 39% (9/23)
d’entre eux présentaient un DFI modéré (15-30) et élevé (> 30 %), respectivement.

56
Taux de fragmentation ADN 70
60
50
40
30
20
10
0
Individus avec spermogrammes normaux
Figure 19: Distribution des valeurs de la fragmentation d’ADN des individus

avec spermogrammes normaux.
La valeur moyenne de DFI était de 19.70% avec des extrêmes entre 0% et 65.79%.
En outre, 4 individus présentaient un DFI supérieur à 30%.

57
5.3.3. Fragmentation et spermogrammes anormaux
25%
7
11 39%
36%
10
Fragmentation faible Fragmentation modérée Fragmentation élevée
Figure 20: Distribution du taux de fragmentation d’ADN chez les individus

présentant un spermogramme anormal.
Parmi 28 individus qui présentaient un spermogramme anormal, nous avons trouvé
que 11 d’entre eux avaient un DFI supérieur à 30%.

58
Taux fragmentation ADN 120
100
80
60
40
20
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112131415161718192021222324252627282930
Individus avec spermogrammes anormaux
Figure 21: Distribution du DFI chez les individus avec un spermogramme

anormal.
Le taux de gamètes avec ADN fragmentés dans le groupe des patients avec
spermogrammes anormaux varie entre 5,45% et 100% avec une valeur moyenne de
32,05%.

59
5.4. Corrélation entre paramètres du spermogramme et DFI
5.4.1. Vitalité et DFI
Tableau V: Corrélation entre la vitalité et le taux de fragmentation
DFI
Faible Modéré Élevé Total
Vitalité <15% 15-30% >30%
Normale 18 16 6 40
Anormale 0 2 9 11
Comme précédemment mentionné, nous avons établi la vitalité selon les critères de
l’OMS qui définit une vitalité normale lorsque le pourcentage des spermatozoïdes
viables est supérieur ou égale à 58% et anormale quand ce pourcentage est inférieur
à 58% (51). Nous avons trouvé que les individus présentant une vitalité anormale
avaient tous des spermatozoïdes ayant un DFI moyen ou élevé (11/11). Par contre,
une vitalité normale n’excluait pas une élévation du DFI car plus de la moitié des
individus (22/40) ayant une vitalité normale des spermatozoïdes présentaient DFI
modéré ou élevé. L’analyse statistique a montré une corrélation significative entre
une élévation de la fragmentation et la proportion de spermatozoïdes non viables
(r= -0,583; p<0,000001). La vitalité des spermatozoïdes est inversement associée au

DFI.

60
5.4.2. Mobilité et fragmentation
Tableau VI: Corrélation entre la valeur de motilité et le taux de

fragmentation
DFI
Mobilité Faible Modéré Élevé Total
<15% 15-30% >30%
Normale 14 15 10 39
Anormale 2 4 6 12
Comme nous l’avons ultérieurement évoqué, nous avons établi la mobilité selon les
critères de l’OMS qui définit qu’un sperme normal doit contenir au moins 32% de
spermatozoïdes à mobilité progressive (51). Nous avons trouvé que parmi les
individus qui présentaient une mobilité anormale, la grande majorité avait un DFI
moyen ou élevé (10/12). En revanche, une mobilité normale n’excluait pas une
élévation du DFI car plus de la moitié des individus (25/39) ayant une mobilité
normale des spermatozoïdes présentaient DFI modéré ou élevé. L’analyse statistique
a montré une corrélation significative entre une élévation de la fragmentation et une
faible mobilité progressive (r= -0,334; p=0,016). La mobilité des spermatozoïdes est
inversement associée au DFI.

61
5.4.3. Concentration et Fragmentation
Tableau VII: Corrélation entre la concentration et le taux de fragmentation
DFI
Concentration Faible Modéré Élevé Total
<15% 15-30% >30%
Normale 15 15 13 43
Anormale 1 5 2 8
Nous nous sommes basés sur les valeurs de l’OMS pour mesurer la concentration
des spermatozoïdes. Selon l’OMS, la valeur normale de la concentration des
spermatozoïdes est de 15 millions pour chaque millilitre d’éjaculat (51). Nous avons
remarqué que sur les 8 les individus qui présentaient une concentration anormale de
spermatozoïdes, un seul avait un DFI normal (1/8). Cependant une concentration
normale n’était synonyme de DFI faible car 28 individus sur les 43 qui présentaient
une concentration normale avaient un DFI modéré ou élevé. L’analyse statistique a
montré une corrélation significative entre une élévation de la fragmentation et la
faible concentration de spermatozoïdes (r= -0,302; p=0,031). La concentration des
spermatozoïdes est inversement associée au DFI.

62
5.4.4. Morphologie et Fragmentation
Tableau VIII: Corrélation entre la morphologie et le taux de fragmentation
DFI
Morphologie Faible Modéré Élevé Total
<15% 15-30% >30%
Normale 12 13 12 39
Anormale 3 7 4 14
Nous nous sommes rapportés aux valeurs de l’OMS pour mesurer la morphologie
des spermatozoïdes. Selon l’OMS un sperme normal doit contenir au moins 4% de
spermatozoïdes normaux (typiques) (51). Nous avons trouvé que sur les 14 individus
qui présentaient un pourcentage de morphologie anormal trois (3) avaient un DFI
faible. Cependant, une morphologie normale n’était pas synonyme de DFI faible car
25 individus sur les 39 qui présentaient une morphologie normale avaient un DFI
modéré ou élevé. L’analyse statistique n’a pas montré de corrélation significative
entre une élévation de la fragmentation et une morphologie anormale (r= -0,115
p=0,421).
5.4.5. Spermogramme et Fragmentation

63
Tableau IX: Corrélation entre le résultat du spermogramme et le taux de
fragmentation
DFI
Spermogramme Faible Modéré Élevé Total
<15% 15-30% >30%
Normale 10 9 4 23
Anormale 7 10 11 28
Nous avons trouvé que sur les 23 individus qui présentaient un spermogramme
normal 13 avaient un taux de fragmentation anomal. Tandis que parmi les 28
individus qui avaient un spermogramme anormal 21 avaient un taux de
fragmentation anormal. Nous avons trouvé une corrélation significative entre un
spermogramme anormal et un taux élevé de fragmentation (p=0,001.

64
COMMENTAIRES ET
DISCUSSION

65
6. COMMENTAIRES ET DISCUSSION
L’objectif de cette étude était de démontrer la faisabilité et l’intérêt de

l’utilisation de la technique de fragmentation Sperm Chromatin Dispersion (SCD)
comme technique complémentaire aux analyses de spermogramme et de
spermocytogramme afin de permettre une meilleure appréciation de la qualité des
gamètes mâles même lorsque ces analyses semblent normales.
Nous avons recruté 51 individus référés pour évaluation du spermogramme et

du spermocytogramme. En outre d’évaluer les paramètres du spermogramme et du
spermocytogramme. Nous avons également étudié la fragmentation de l’ADN des
spermatozoïdes par le test de dispersion de la chromatine (SCD). À notre
connaissance c’est la première fois qu’une étude pareille est menée au Mali. Cette
technique d’évaluation de la qualité de l’ADN des spermatozoïdes est une étape
importante dans la détermination de nouvelles stratégies de prise en charge de
l’infertilité masculine.
Par ailleurs, nous avons des limites sur l’étude, notamment une petite taille de
notre population d’étude, une courte durée de notre essaie et aussi nous n’avons pas
pu faire le recrutement d’individus témoins.
Au cours de notre étude, les données cliniques que nous avons analysées
étaient les indications cliniques et l’âge. Soixante-onze pourcent des individus
avaient consulté pour un bilan d’infertilité primaire. L’âge moyen était de 37 ans
avec des extrêmes allant de 20 ans à 52 ans. Ces résultats sont similaires à ceux
rapportés par A. Kbirou (53) et O. Bagayoko (54) qui ont retrouvé, respectivement,
un âge moyen de 37,5 ans et de 35 ans. Une étude faite en Turquie a retrouvé la
même tendance d’âge moyen lors de l’analyse du spermogramme pour cause
d’infertilité masculine et cet âge était de 37.18 ± 8.11ans (55). Nous pouvons

66
présumer que cette tranche d’âge serait liée au fait que les hommes, au Mali, en
milieu urbain se marient entre 30 et 40 ans. Nous pouvons aussi croire que cette
tranche d’âge pourrait être liée au fait que si après quelques années un couple n’a
pas d’enfant, la femme est la première à faire des investigations car pour la plupart
la virilité est synonyme de fertilité. De plus nous pouvons aussi supposer qu’elle
serait liée au fait que beaucoup de couples ont recours à la médecine traditionnelle
avant de consulter un médecin spécialiste.
En ce qui concerne le spermogramme, nous avons mis l’accent sur cinq

paramètres notamment : le volume, la vitalité, la concentration, la mobilité et la
morphologie.
Au cours de notre étude 90% des individus avaient un volume normal compris
entre 1,5 ml et 6 ml. Cependant, 6% des individus avaient un volume inferieur à la
norme (hypospermie) contre 4% qui présentaient une hyperspermie. Ces valeurs sont
proches de celles rapportées par Batou S. A. (56) qui a trouvé un volume moyen de
3,9 ml. Elles se rapprochent aussi de celles rapportées par Sangaré S.L (57) qui
retrouva que 90% des individus avaient un volume normal et 10% présentaient une
hypospermie. Les valeurs du volume inférieures à la norme pourraient s’expliquer
par une abstinence trop courte, un recueil incomplet de l’échantillon, un
dysfonctionnement de la prostate ou des vésicules séminales ou une éjaculation
rétrograde. À l’inverse, les valeurs du volume supérieure à la norme pourraient se
traduire par une abstinence trop prolongée.
Pour ce qui est de la concentration des spermatozoïdes, nous avons trouvé que
84% des individus avaient une concentration spermatique normale (supérieure à 15
millions par ml de sperme). En revanche, 16% des individus avaient une
concentration spermatique inferieure à la norme. Ces résultats sont différents à ceux

67
rapportés par d’autres auteurs qui ont mentionné des valeurs qui oscillaient entre
48% à 58,5% (58-61). La différence entre leurs données et les nôtres s’explique par
le biais de sélection qui était inhérente à notre étude. En effet, nous avons exclus des
azoospermies de notre étude car l’évaluation de la fragmentation de l’ADN n’est pas
faisable chez eux.
Quant à la mobilité, nous avons trouvé que 76% des individus avaient une
mobilité progressive normale c’est-à-dire supérieure à 32%. En outre, notre étude
avait aussi la particularité de montrer un pourcentage (78%) plus élevé d’individus
ayant des spermatozoïdes avec une vitalité normale. Par contre, d’autres études ont
montré de faibles pourcentages d’individus présentant des spermatozoïdes avec une
mobilité et une vitalité normale (62-64). Encore, cette différence entre ces études et
la nôtre est due principalement au biais de sélection des individus ne présentant pas
d’azoospermie. Enfin, nous avons trouvé que 27% des individus présentaient une
tératozoospermie. Contrairement à la mobilité et la vitalité, nos résultats sur la
morphologie des spermatozoïdes étaient assimilables à ceux retrouvés dans la
littérature (64,65).
En considérant les paramètres du spermogramme sus mentionnés, nous avons

trouvé que 28 individus (55%) avaient un spermogramme anormal. Les principales
anomalies retrouvées dans les spermogrammes anormaux étaient la
tératozoospermie isolée (25%) et l’asthénozoospermie isolée (14%). Plusieurs
études ont retrouvé une fréquence plus élevée (67, 67) de spermogramme anormal
chez des individus référés pour infertilité que celle retrouvée dans la nôtre. Ce taux
élevé de normozoospermie dans notre étude pourrait s’expliquer par le fait que nous
avons principalement pris pour cible les individus n’ayant pas d’azoospermie,
cryptozoospermie et oligo-asthéno-tératozoospermie sévère (OATS).

68
L’exploration de l’infertilité masculine en première intention repose sur
l’analyse du spermogramme et du spermocytogramme. Ces examens permettent
d’évaluer la fertilité masculine, mais ils ne procurent pas d’information sur
l’intégrité du matériel génétique des spermatozoïdes contenus dans un échantillon
de sperme. L’impact négatif de la fragmentation de l’ADN sur les capacités de
fécondation des spermatozoïdes et le développement embryonnaire a été mis en
évidence par plusieurs études (68-70). Des études ont montré que les spermatozoïdes
présentant un ADN fragmenté sont plus fréquents chez les hommes infertiles que
chez les hommes fertiles (50) et que l’ADN spermatique fragmenté peut conduire à
la transmission paternelle de matériel génétique défectueux, avec des conséquences
néfastes sur le développement embryonnaire (71,72).
Notre étude a révélé que 33 (65%) individus avaient une fragmentation

d’ADN anormale (modéré ou élevée). Chez les 23 individus ayant un
spermogramme normal, 56% (39% modéré, 17% élevé) de ceux-ci présentaient une
fragmentation d’ADN anormal. En revanche, nous avons trouvé que dans le groupe
des individus avec un spermogramme anormal, 75% (21/28) de ces individus avaient
une fragmentation anormale (36% élevée et 39% pathologique). Les résultats de
notre étude indiquent que les niveaux de fragmentation de l’ADN défini par le test
SCD dans le sperme des hommes présentant des paramètres anormaux était plus
élevé que celui de ceux qui avaient des paramètres de sperme normaux. Les résultats
de notre étude se rapprochent de ceux rapportés par Saleh R (16) qui indiquent que
43% des individus qui présentaient des paramètres de sperme normaux avaient un
taux de fragmentation élevée, contre, 62% des individus qui présentaient des
paramètres de sperme anormaux. Ainsi nous avons mis en évidence qu’un index de
fragmentation spermatique modéré ou élevé peut être observé chez un individu
même avec un spermogramme normal. Ces résultats ont une valeur diagnostique et

69
pronostique importante dans la prise en charge de l’infertilité masculine. Le taux
élevé de spermatozoïdes avec de l’ADN fragmenté trouvé chez les hommes qui ont
des paramètres normaux de spermogramme pourrait être une explication à leur
infertilité.
L’étude corrélation entre l’index de fragmentation de l’ADN (DFI) et des

paramètres du spermogramme a montré une corrélation négative significative
statistiquement entre le DFI et la concentration (p=0,049), viralité (p=0,00006) et la
mobilité (p=0,047). Par contre, nous n’avons pas trouvé de corrélation statistique
entre le DFI et la morphologie des spermatozoïdes. D’autres études ont retrouvé des
tendances semblables entre le DFI et les paramètres du spermogramme (73-77).
Un DFI modéré ou élevé peut s’expliquer par l’effet délétère qu’exercent les
DRO lorsqu’ils sont présents en grande concentration. En effet, les DRO peuvent
induire une peroxydation des lipides de la membrane spermatique entrainerait une
détérioration des structures axonémales des spermatozoïdes tout en réduisant, ainsi,
leur mobilité (asthénospermie) (78). Les DRO peuvent également endommager
l’ADN des spermatozoïdes, diminuer la vitalité ainsi que leur concentration (79,80).
Les résultats de notre étude approuvent l’importance de l’analyse de la

fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes (par la technique SCD) en complément
des analyses de spermogramme et de spermocytogramme en vue de l’exploration de
l’infertilité masculine. La technique SCD doit également être recommandée avant
toute procédure de PMA, car la SCD peut révéler des cassures de l’ADN
spermatique. Par conséquent, des individus présentant un risque accru de défaillance
de la reproduction peuvent être identifier afin de faciliter l’élaboration d’un conseil
génétique approprié et aussi de délivrer un traitement aux hommes porteurs de ces
anomalies.

70
CONCLUSION

71
7. CONCLUSION
Nous avons analysé la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes des hommes
ayant des paramètres spermatiques normaux et anormaux. Les résultats de cette
étude indiquent qu’une augmentation significative de la fragmentation de l’ADN
spermatique, évaluée par la technique de dispersion de la chromatine (SCD), peut
être trouvée dans le sperme des hommes avec un spermogramme normal. Par
conséquent, l’analyse de la fragmentation de l’ADN spermatique peut révéler des
dommages à l’ADN du sperme chez les infertiles classés comme idiopathique sur la
base des paramètres de sperme normaux.
L’étude de la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes est une méthode

essentielle et complémentaire des analyses de routine dans la prise en charge des
individus présentant une infertilité masculine et de la procréation médicalement
assistée. D’un autre coté, il serait intéressant de faire une étude sur le long terme en
effectuant des tests répétés sur les individus afin de savoir si la fragmentation de
l’ADN des spermatozoïdes est un phénomène réversible dans le temps, de faire aussi
l’étude sur une plus grande population d’étude et enfin de valider le test et de le
mettre sur le marché.

72
RECOMMANDATIONS

73
8. RECOMMANDATIONS
Au terme de cette étude, nous exprimons les recommandations suivantes :
Aux autorités politiques et sanitaires
❖ Eduquer la population sur la stérilité enfin qu’elle puisse comprendre que

celle-ci n’est ni une fatalité, ni une malédiction mais un problème qui peut
toucher tout le monde.
❖ Sensibiliser les hommes sur leur part de responsabilité en cas d’infertilité du
couple.
❖ Financer des études de recherche sur l’infertilité au Mali
❖ Former le personnel de santé dans le domaine de la reproduction.
❖ Installer des structure (centre de fertilité) spécialisées dans les analyses en vue
de l’exploration de l’infertilité masculine.
❖ Créer une unité d’assistance médicale à la procréation (AMP) dans les
services publiques en vue d’une meilleure prise en charge des couples
infertiles.
À la communauté scientifique et au personnel de santé
❖ Demander systématiquement un test de fragmentation de l’ADN des

spermatozoïdes aux hommes même lorsque les résultats du spermogramme et
du spermocytogramme sont normaux.
❖ Faire de plus en plus travaux des recherches dans le domaine de la
reproduction.
❖ Continuer de sensibiliser les hommes sur leur implication possible en cas
d’infertilité du couple.
❖ Assurer une très bonne collaboration entre professionnels de la sante afin de
garantir une bonne prise en charge des couples infertiles.

74
À la population
❖ Faire régulièrement des analyses afin de vite déceler des problèmes

d’infertilité
❖ Se diriger vers des structures spécialisées en cas d’infertilité
❖ Se soutenir mutuellement en cas d’infertilité du couple
❖ Participer aux études de recherche sur l’infertilité du couple

75
REFERENCES
BIBLIOGRAPHIQUES

76
9. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
1 World health Organization (WHO). International classification of diseases
11th Revision (ICD-11) Geneva WHO.2018.
2 Brahem S, Jellad S, Ibala S, Saad A, Mehdi M. DNA Fragmentation status in

patients with necrozoospermia. Systems Biology in Reproductive Medicine. 2012;
58(6):319–23.
3 Perrin A, Nguyen MH, Bujan L, Vialard F, Amice V, Guéganic N et al. DNA

Fragmentation is higher in spermatozoa with chromosomally unbalanced content in
men with a structural chromosomal rearrangement. Andrology. 2013; 1(4): 632–38.
4 Lewis S E, Aitken R J. DNA Damage to spermatozoa has impacts on

fertilization and pregnancy. Cell tissue research. 2005; 322(1): 33-41.
5 Agarwal A, Majzoub A, Baskaran S, Panner Selvam MK, Cho CL, Henkel R

et al. Sperm DNA Fragmentation: a new guideline for clinician’s world J men health.
2020; 38(4): 412-471.
6 Agarwal A, Allamaneni SS. Sperm DNA damage assessment: a test whose

time has come. Fertil Steril. 2005 ; 84(4) : 850-853.
7 Marc F, Siffroi J P. Génétique de l’infertilité chez l’homme, nouvelles

approches. Andrologie. 2003 ; 13(2) :148–157.
8 Benchaib M, Braun V, Lornage J, Hadj S, Salle B, Lejeune H, Guérin JF.

Sperm DNA fragmentation decreases the pregnancy rate in an assisted reproductive
technique. Hum Reprod. 2003 ;18(5) :1023-1028.
9 Humeau C, Arnal F. Reproduction et développement. Sauramps Medical

3ème édition revue et corrigée : vol 24 2008.

77
10 Morton DA, Foreman K, Albertine KH. Eds. Chapter 13 Male Reproductive
System. In:The big picture: Gross Anatomy, Medical course and Step 1 Review. 2nd
Edition. Mc Graw Hill-Education; 2018.
11 Samir H, Elie S et al. Médecine et biologie de la reproduction des gamètes à

la conception. Elsevier Masson. 2004 ; 2 ème édition : 386 pages.
12 Peter D Turnpenny, Sian Ellard. Emery's Elements of Medical Genetics. 15th

Edition: Elsevier;2017. 416.
13 Cho C, Willis WD, Goulding EH, Jung-Ha H, Choi YC, Hecht NB, Eddy EM.
Haploinsufficiency of protamine-1 or -2 causes infertility in mice. Nat Genet. 2001;
28(1):82-6.
14 Cho C, Jung-Ha H, Willis WD, Goulding EH, Stein P, Xu Z et al. Protamine

2 deficiency Leads to Sperm DNA Damage and Embryo Death in Mice. Biol Reprod.
2003; 69(1): 211–17.
15 Wang C, Swerdloff R S. Limitations of Semen Analysis as a Test of Male

Fertility and Anticipated Needs from Newer Tests. Fertility and Sterility.
2014;102(6):1502–7.
16 Saleh R A, Agarwal A, Nelson DR, Nada E A, El-Tonsy M H, Alvarez J G et

al. Increased sperm nuclear DNA damage in normozoospermic infertile men: a
prospective study. Fertil Steril. 2002;78(2):313-8.
17 Agarwal A, Cho C L, Esteves S C. Should We Evaluate and Treat Sperm DNA

Fragmentation? Current Opinion in Obstetrics and Gynecology. 2016; 28(3):164–
71.

78
18 Esteves SC, Sharma RK, Gosálvez J, Agarwal A. A translational medicine
appraisal of specialized andrology testing in unexplained male infertility. Int Urol
Nephrol. 2014; 46(6):1037-52.
19 Esteves SC, Sánchez-Martín F, Sánchez-Martín P, Schneider DT, Gosálvez J.

Comparison of reproductive outcome in oligozoospermic men with high sperm DNA
fragmentation undergoing intracytoplasmic sperm injection with ejaculated and
testicular sperm. Fertil Steril. 2015 ;104(6) :1398-405.
20 Muratori M, Tamburrino L, Marchiani S, Cambi M, Olivito B, Azzari C, et al

. Investigation on the Origin of Sperm DNA Fragmentation: Role of Apoptosis,
Immaturity and Oxidative Stress. Mol Med. 2015;21(1):109-22.
21 Esteves SC. Novel concepts in male factor infertility: clinical and laboratory
perspectives. J Assist Reprod Genet. 2016; 33(10):1319-1335.
22 Simon L, Emery BR, Carrell DT. Review: Diagnosis and impact of sperm
DNA alterations in assisted reproduction.Best Practice Research Clinical Obstetrics
and Gynaecology. 2017; 44:38-56.
23 Agarwal A, Allamaneni SS. Sperm DNA damage assessment: a test whose

time has come. Fertil Steril. 2005;84(4):850-3.
24 Zini A, Kamal K, Phang D, Willis J, Jarvi K. Biologic variability of sperm

DNA denaturation in infertile men. Urology. 2001 ;58(2):258-61.
25 Evenson DP, Larson KL, Jost LK. Sperm chromatin structure assay: its
clinical use for detecting sperm DNA fragmentation in male infertility and
comparisons with other techniques. J Androl. 2002;23(1):25-43.

79
26 Lopes S, Jurisicova A, Sun JG, Casper RF. Reactive oxygen species: potential
cause for DNA fragmentation in human spermatozoa. Hum Reprod. 1998;13(4):896-
900.
27 Evenson DP, Jost LK, Marshall D, Zinaman MJ, Clegg E, Purvis K, et al.
Utility of the sperm chromatin structure assay as a diagnostic and prognostic tool in
the human fertility clinic. Hum Reprod. 1999;14(4):1039-49.
28 Green DR, Droin N, Pinkoski M. Activation-induced cell death in T cells.

Immunol Rev. 2003; 193:70-81.
29 Nandipati KC, Pasqualotto FF, Thomas AJ Jr, Agarwal A. Relationship of

interleukin-6 with semen characteristics and oxidative stress in vasectomy reversal
patients. Andrologia. 2005;37(4):131-4.
30 Jones R, Mann T, Sherins R. Peroxidative breakdown of phospholipids in

human spermatozoa, spermicidal properties of fatty acid peroxides, and protective
action of seminal plasma. Fertil Steril.1979; 31(5):531-7.
31 hen SJ, Allam JP, Duan YG, Haidl G. Influence of reactive oxygen species on
human sperm functions and fertilizing capacity including therapeutical approaches.
Arch Gynecol Obstet. 2013;288(1):191-9.
32 Aitken RJ, Smith TB, Jobling MS, Baker MA, De Iuliis GN. Oxidative stress
and male reproductive health. Asian J Androl. 2014 ;16(1) :31-8.
33 O’Donnell L. Mechanisms of Spermiogenesis and Spermiation and How They

Are Disturbed. Spermatogenesis. 2015;26(2) :979632.
34 Rousseaux S, Boussouar F, Gaucher J, Reynoird N, Montellier E, Curtet S et

al. Molecular models for post-meiotic male genome reprogramming. Syst Biol
Reprod Med. 2011;57(1-2):50-3.

80
35 Esteves SC, Agarwal A, Sijo J P. Male infertility: contemporary clinical
approaches, andrology, ART and antioxidant. Cham Springer. 2020; 361–375.
36 Zorgniotti AW, Macleod J. Studies in temperature, human semen quality, and

varicocele.Fertil Steril 1973;24(11):854–863.
37 Rubes J, Selevan SG, Evenson DP, Zudova D, Vozdova M, Zudova Z,

Robbins WA, Perreault SD. Episodic air pollution is associated with increased DNA
fragmentation in human sperm without other changes in semen quality. Hum
Reprod. 2005 ;20(10) :2776-83.
38 Xu DX, Shen HM, Zhu QX, Chua L, Wang QN, Chia SE, Ong CN. The
associations among semen quality, oxidative DNA damage in human spermatozoa
and concentrations of cadmium, lead and selenium in seminal plasma. Mutat Res.
2003;534(1-2):155-63.
39 Bian Q, Xu LC, Wang SL, Xia YK, Tan LF, Chen JF et al. Study on the
relation between occupational fenvalerate exposure and spermatozoa DNA damage
of pesticide factory workers. Occup Environ Med. 2004 ; 61(12) :999-1005.
40 Sánchez-Peña LC, Reyes BE, López-Carrillo L, Recio R, Morán-Martínez J,

Cebrián ME, Quintanilla-Vega B. Organophosphorous pesticide exposure alters
sperm chromatin structure in Mexican agricultural workers. Toxicol Appl
Pharmacol. 2004 ;196(1):108-13.
41 Elbardisi H, Majzoub A, Agarwal. A Genetics of male infertility: a case-based

guide for clinicians Cham Springer 2020; 39–55.
42 Perrin J, Tassistro V, Mandon M, Grillo JM, Botta A, Sari-Minodier I.

Tobacco consumption and benzo(a)pyrene-diol-epoxide-DNA adducts in

81
spermatozoa: in smokers, swim-up procedure selects spermatozoa with decreased
DNA damage. Fertil Steril. 2011 ;95(6):2013-7.
43 Yang Q, Zhao F. Effect of paternal overweight or obesity on IVF treatment

outcomes and the possible mechanisms involved. Rep 2016;(6):29787.
44 Agbaje IM, Rogers DA, McVicar CM, McClure N, Atkinson AB, Mallidis C,
Lewis SE. Insulin dependant diabetes mellitus: implications for male reproductive
function. Hum Reprod. 2007;22(7):1871-7.
45 Agarwal A, Desai NR, Makker K, Varghese A, Mouradi R, Sabanegh E,

Sharma R. Effects of radiofrequency electromagnetic waves (RF-EMW) from
cellular phones on human ejaculated semen: an in vitro pilot study. Fertil Steril.
2009;92(4):1318-1325.
46 Boe-Hansen GB, Fedder J, Ersbøll AK, Christensen P. The sperm chromatin

structure assay as a diagnostic tool in the human fertility clinic. Hum Reprod.
2006;21(6):1576-82.
47 Gavrieli Y, Y Sherman, Sasson B. Identification of Programmed Cell Death

In Situ via Specific Labeling of Nuclear DNA Fragmentation. J Cell Biol.
1992;119(3):493–501.
48 Ouafia L L. Exploration de l’infertilité masculine à l’ouest Algérien à l’aide

des techniques de FISH et TUNEL.[These de doctorat en science].Sidi Bel Abbès
(Algerie) Université Djilali Liabès; 2017.
49 Duty SM, Singh NP, Silva MJ, Barr DB, Brock JW, Ryan L, Herrick RF,
Christiani DC, Hauser R. The relationship between environmental exposures to
phthalates and DNA damage in human sperm using the neutral comet assay. Environ
Health Perspect. 2003;111(9):1164-9.

82
50 Fernández JL, Muriel L, Rivero MT, Goyanes V, Vazquez R, Alvarez JG. The
sperm chromatin dispersion test: a simple method for the determination of sperm
DNA fragmentation. J Androl. 2003;24(1):59-66.
51 Fernández JL, Muriel L, Goyanes V, Segrelles E, Gosálvez J, Enciso M,

LaFromboise M, De Jonge C. Simple determination of human sperm DNA
fragmentation with an improved sperm chromatin dispersion test. Fertil Steril.
2005;84(4):833-42.
52 World Health Organization. WHO Laboratory Manual for the Examination

and Processing of Human Semen World Health Organization 2010;271.
53 A Kbirou , I Jandou, E Adnane, E Mohammed, A Moataz, D Mohammed.

Profil épidémiologique et clinique de l’infertilité masculine : étude observationnelle
transversale descriptive et analytique. Sexologies. 2022 31.2 (2022), 117–22 .
54 Bagayogo O. Etude des paramètres spermiologiques des hommes pour bilan

d’infertilités du couple à la clinique Farako à propos de 100 cas. [Thèse de
Médecine]. Bamako(Mali): Université des sciences, des techniques et des
technologies de Bamako; 2020.
55 Demirkol MK, Barut O, Dogan NT, Hamarat MB, Resim S. At What Age
Threshold does the Decline in Semen Parameters Begin? J Coll Physicians Surg Pak
2021; 31(01):4-7.
56 Batou A S, Abessolo F O, Mintsa A. Analyse des paramètres du

spermogramme en relation avec le fructose, le citrate et l’alpha glucosidase neutre
du sperme chez les hommes consultant pour infertilité à Libreville. Int J Biol Chem
Sci .2018 ;12(6):2486-2502.

83
57 Sangare S. Contribution à l’étude des aspects étiologiques de l’infertilité
masculine à la clinique FARAKO de Bamako [Thèse de Médecine]. Bamako (Mali):
Université des sciences, des techniques et des technologies de Bamako ;2021.
58 Cisse I K. Contribution à l’étude du tabagisme sur les paramètres

spermiologiques [Thèse de Médecine]. Bamako (Mali) : Université des sciences, des
techniques et des technologies de Bamako ; 2008.
59 Coulibaly O. Caractéristiques cytospermiologiques de la stérilité masculine à

propos de 598 examens. [Thèse de Médecine]. Bamako (Mali) : Université des
sciences, des techniques et des technologies de Bamako ; 2000
60 KAHAM P C. Analyses cytospermiologiques au service de cytogénétique et

de biologie de la reproduction de l’INRSP (À propos de 860 cas). [Thèse de
Médecine]. Bamako (Mali): Université des sciences, des techniques et des
technologies de Bamako;2005.
61 Kante A. Etude de la stérilité masculine au service d'urologie du CHU du

point G. [Thèse de Médecine]. Bamako (Mali) : Université des sciences, des
techniques et des technologies de Bamako;2009.
62 Mumbere P,Sihalikyolo J,Ndungo E K , Baraka A, et al Les anomalies du

spermogramme sont corrélées aux marqueurs biochimiques épididymo vésiculaires
des hommes infertiles Ann Afr Med 2022. l (15):15.
63 Tognifode M.V, Lokossou S, Aboubakar M, Ogoudjobi M, Hounkpatin B,

Tonato-Bagnan A et al. Parametres du Spermogramme dans l’infertilite du Couple :
Cas d’une Clinique Privee du Benin a propos de 210 Cas. J ournal de la société de
biologie clinique du Bénin. 2018;(28): 41-45.

84
64 FG Epoupa Ngalle, LO Mbouche, EH Moby Mpah, JB Mekeme Mekeme,
AQ Essomba, D Ebe Nkolo, D Feukam, F Angwafo III, ET Mboudo. Profil clinique
et morphologique de l’infertilité masculine dans trois hôpitaux de référence de la
ville de Douala au Cameroun. African Urology.2023; 03(2)
65 MEZIOUT I ; MERAD O La relation entre les perturbations des paramètres

spermatiques et la fragmentation de l’ADN spermatique [Thèse de biochimie et
biologie moléculaire]. Constantine (Algérie)Université de Constantine 1; 2014.
66 Guérin JF, Benchaïb M. Tests d'exploration de la qualité nucléaire du

spermatozoïde: relations avec la fertilité et la qualité du conceptus [Assays for
assessment of sperm DNA integrity: relationships with fertility and conceptus
quality]. Gynecol Obstet Fertil. 2004; 32(9):799-802.
67 JC Fouda, JB Mekeme Mekeme, P F Owon’Abessolo, LO Mbouche, FG

Epoupa Ngalle, AS Nwaha Makon, M Biyouma, DC Mayopa, M Mekeme Yon, AA
Mbassi, E Sobngwi,PJ Fouda, A Essomba. Aspects paracliniques de l’infertilité
masculine à l’Hôpital Central de Yaoundé. African Urology.2023; 03(1).
68 Virro M R, Larson-Cook K L, Evenson D P. Sperm chromatin structure assay

(SCSA) parameters are related to fertilization and intracytoplasmic sperm injection.
Fertil Steril 2004;81: 1289-95
69 Bounartzi T, Dafopoulos K, Anifandis G, Messini CI, Koutsonikou C, Kouris

S, Satra M, Sotiriou S, Vamvakopoulos N, Messinis IE. Pregnancy prediction by
free sperm DNA and sperm DNA fragmentation in semen specimens of IVF/ICSI-
ET patients. Hum Fertil (Camb). 2016; 19(1):56-62.
70 Estefania M, Constanza B, Benzazian A, Lindl K, Peliquero A, Antonio C,

Gnocchi D, Irigoyen M,Tessari L. Sperm DNA fragmentation and male age: results

85
of in vitro fertilization fertilization treatments. JBRA Assit Reprod. 2021; 25(4) : 533–
539.
71 Clément P, Hammoud I, Molina Gomes D, Albert M, Selva J, Vialard F. Étude

de la fragmentation de l’ADN spermatique et des aneuploïdies spermatiques en cas
de fausses couches à répétition. Edimark, Pluteaux. 2009; 347 (6) : 28-33.
72 D Sakkas, Alvarez J G. Sperm DNA Fragmentation: Mechanisms of Origin,

Impact on Reproductive Outcome, and Analysis. Fertil Steril. 2010;93(4):1027–36.
73 Mehdi M, Khantouche L, Ajina M, Saad A. Detection of DNA fragmentation

in human spermatozoa: correlation with semen parameters. Andrologia.
2009;41(6):383–6.
74 Gallegos G, Ramos B, Santiso R, Goyanes V, Gosálvez J, Fernández JL.

Sperm DNA fragmentation in infertile men with genitourinary infection by
Chlamydia trachomatis and Mycoplasma. Fertil Steril. 2008; 90(2):328-34.
75 Saleh A, Agarwal A. Oxidative stress and male infertility: from research

bench to clinical practice. J Androl.2002; 23(6):737-752.
76 Agarwal A, Sharma RK, Desai NR, Prabakaran S, Tavares A, Sabanegh E.

Role of oxidative stress in pathogenesis of varicocele and infertility. Urology
2009;73(3) :461-9.
77 Okubo T, Onda N, Hayashi T, Kobayashi T, Omi K, Segawa T. Performing a

sperm DNA fragmentation test in addition to semen examination based on the WHO
criteria can be a more accurate diagnosis of IVF outcomes. BMC Urol. 2023;
29;23(1):78.
78 Aitken RJ, Koppers AJ. Apoptosis and DNA damage in human spermatozoa.
Asian J Androl.2011;(13):36-42.

86
79 Muriel L, Goyanes V, Segrelles E, Gosálvez J, Alvarez JG, Fernández JL.
Increased aneuploidy rate in sperm with fragmented DNA as determined by the
sperm chromatin dispersion (SCD) test and FISH analysis. J Androl. 2007 ;28(1):38-
49.
80 Perrin A, Basinko A, Douet-Guilbert N, Gueganic N, Le Bris MJ, Amice V,

De Braekeleer M, Morel F. Aneuploidy and DNA fragmentation in sperm of carriers
of a constitutional chromosomal abnormality. Cytogenet Genome Res. 2011;133(2-
4):100-6.

87
ANNEXES

88
10. Annexes
FORMULAIRE DE CONSENTEMENT POUR LA PARTICIPATION À

UNE ETUDE DE RECHERCHE
IDENTIFICATION
Nom de l’étude : Etude de la Fragmentation de l’ADN Spermatique par la Technique

de Dispersion de la Chromatine des spermatozoïdes Chez les Hommes Consultant
pour une Infertilité au Mali.
Etudiant(e) chercheur responsable de l’étude : Bintou Coulibaly
Numéro de téléphone : 78047667
Nom du participant :
Age :
Sexe :
Contact :
Introduction :
Vous êtes invité à prendre part à la présente étude de recherche entrant
dans le cadre d’une thèse de Doctorat en Pharmacie de la Faculté de
Pharmacie (FAPH) de l’université des sciences, des techniques et des
technologies de Bamako (USTTB).
Nous tenons à ce que vous ayez connaissance des points suivants :
-La participation à cette étude de recherche est entièrement volontaire.

89
-Vous pouvez choisir de ne pas y participer ou vous pouvez vous retirer
de l’étude à tout moment ; dans ce cas, les renseignements vous
concernant seront détruits.
-Vous demeurez libre de ne pas répondre à une question que vous
estimez embarrassante.
-Votre participation ne vous procure aucun avantage financier. La
recherche peut nous apporter des connaissances nous permettant de vous
aider et d’aider d’autres personnes dans l’avenir.
BUT GÉNÉRAL :
Le but de cette étude consiste à Déterminer le taux de fragmentation
de l’ADN des spermatozoïdes chez les hommes consultant pour une
infertilité au Mali. Cette étude est réalisée dans le cadre d’une thèse de
Doctorat en pharmacie réalisée sous la direction du professeur
Mahamadou Traore et du professeur Oumar Samassekou de la faculté de
Pharmacie de l’USTTB.
PROCÉDURE(S) OU TÂCHES DEMANDÉES AU PARTICIPANT :
-Un questionnaire vous sera soumis sur vos antécédents personnels et

familiaux entre autres. Un échantillon de votre sperme sera prélevé pour
des examens lors de votre passage au Laboratoire.
-Un test de Fragmentation sera réalisé sur les spermatozoïdes présents
dans le sperme : Technique SCD (Sperm Chromatin Dispersion).
Risques et avantages : -Lors du remplissage du questionnaire vous
pouvez vous sentir mal à l’aise en raison de la difficulté de partager des
renseignements personnels sur vos antécédents.

90
-Votre participation à cette étude peut ne pas vous procurez un avantage
direct, mais peut nous permettre d’acquérir des informations susceptibles
de nous aider à notre étude de recherche
ANONYMAT ET CONFIDENTIALITÉ
Il est entendu que les renseignements recueillis lors de l’entrevue sont
confidentiels et que seuls, le responsable de l’étude et son directeur de
recherche le professeur Mahamadou Traoré et Docteur Oumar
Samassekou auront accès aux données de cette étude. Le matériel de
recherche ainsi que votre formulaire de consentement seront conservés
séparément sous clé par l’étudiant-chercheur responsable de l’étude.
COMPENSATION FINANCIÈRE
Votre participation à ce projet est offerte gratuitement. Un résumé des
résultats de recherche vous sera transmis au moment opportun. Ce travail
est effectué dans le cadre d’une thèse de doctorat en médecine
DES QUESTIONS SUR L’ETUDE OU SUR VOS DROITS :
Vous pouvez contacter l’étudiant-chercheur responsable de l’étude au
numéro 78047667 ou à l’adresse mail :
bintoucoulibaly061@gmail.com. Pour des questions
additionnelles.Vous pouvez également échanger avec le directeur de
recherche Professeur Mahamadou Traore au numéro : 66723208 ou à
l’adresse mail seybatraore@yahoo.fr ou avec le Professeur Oumar
Samassekou au 68541075 ou à l’adresse mail :
oumarbarou.samassekou@gmail.com des conditions dans lesquelles se
déroule votre participation et de vos droits en tant que participant à cette
recherche.

91
REMERCIEMENTS
Votre collaboration est importante à la réalisation de ce projet et
nous tenons à vous en remercier par avance.
SIGNATURES
Je reconnais avoir lu le présent formulaire de consentement libre et
éclairé et consens volontairement à participer à cette étude de
recherche. Je reconnais aussi que le responsable de l’étude a
répondu à mes questions de manière satisfaisante et que j’ai disposé
suffisamment de temps pour réfléchir à ma décision de participer. Je
comprends que ma participation à cette recherche est totalement
volontaire et que je peux y mettre fin en tout temps, sans pénalité
d’aucune forme ni justification à donner. Il me suffit d’en informer
le responsable de l’étude.
Signature du participant : Date :
Je déclare avoir expliqué le but, la nature, les avantages, les risques

de l’étude et avoir répondu au meilleur de ma connaissance aux
questions posées.
Signature de l’étudiant(e)
Chercheur responsable de l’étude : Date :

92
FICHE SIGNALETIQUE DE LA THESE
Nom : Coulibaly
Prénom : Bintou
Adresse Email : bintoucoulibaly061@gmail.com
Pays : MALI
Année : 2022-2023
Titre de la thèse : Etude de la Fragmentation de l’ADN Spermatique par la

Technique de Dispersion de la Chromatine des spermatozoïdes Chez les Hommes
Consultant pour une Infertilité au Mali.
Lieu de dépôt : Bibliothèque de la Faculté de Pharmacie (FAPH). Université de

Bamako.
Secteur d’intérêt : Cytogénétique, Génétique de l’infertilité masculine, Biologie

moléculaire, Santé publique.
Résumé : L'infertilité est un problème majeur de santé publique. Longtemps

considérée comme un problème purement féminin, aujourd’hui des recherches ont
démontrées que l’infertilité masculine se révèle être la cause d'un tiers des cas
infertilités du couple. Les causes de l’infertilité masculine sont multiples, et la
fragmentation de l’ADN spermatique est considérée comme l’une des plus
fréquentes. La fragmentation de l'ADN des spermatozoïdes consiste en des cassures
ou des lésions dans le matériel génétique des spermatozoïdes. L'exploration de
l'infertilité masculine est basée sur l'analyse conventionnelle du sperme
particulièrement le spermogramme et le spermocytogramme. Cependant, ces
derniers ne reflètent pas l'intégrité de l'ADN des spermatozoïdes

93
Objectif : Déterminer le taux de fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes chez
les hommes consultant pour une infertilité.
Méthodes : Nous avons effectué le spermogramme et le spermocytogramme de 51

individus selon les normes établies par l’OMS. Nous avons par la suite étudié les
niveaux de fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes au moyen de la Technique
SCD grâce au SCA-SCOPE et les résultats ont été exprimés en %DFI. Les résultats
que nous avons obtenus ont fait l’objet d’analyses statistiques.
Résultats : Pami les 51 individus, 23 (45%) présentaient un spermogramme normal

tandis que 28(55%) présentaient un spermogramme anormal avec un ou plusieurs
des paramètres du spermogramme ou un spermocytogramme perturbés. Les tranches
d’âge les plus représentées étaient 31-40 ans et 41-50ans. Le DFI au sein des
individus avec un spermogramme normal était (modéré ou élevé) dans 56% des cas
(13/23). Par ailleurs le DFI au sein des individus avec un spermogramme anormal
était (modéré ou élevé) dans 75% des cas (21/28). En outre nous avons trouvé une
corrélation significative entre : %DFI élevé et une faible vitalité (r= -0,583; p< 0.01),
entre %DFI élevé et une faible mobilité (r= -0,334 ; p= 0.016) et aussi entre un %DFI
élevé et une faible concentration de spermatozoïdes (r= -0,302 ; p=0.031).
Conclusion : Enfin, les données de cette étude montrent à suffisance que la

technique SCD est essentielle dans la prise en charge de l’infertilité masculine au
Mali.

94
INSTRUCTIONS
Surname: Coulibaly
Name: Bintou
Email address: bintoucoulibaly061@gmail.com
Country: MALI
Year: 2022-2023
Thesis Title: Study of Spermatic DNA Fragmentation by Sperm Chromatin

Dispersion Technique in Men Consulting for Infertility in Mali.
Place of deposit: Library of the Faculty of Pharmacy (FAPH). University of

Bamako.
Abstract: Infertility is a major public health problem. There are many causes of
male infertility, and sperm DNA fragmentation is considered one of the most
common. Sperm DNA fragmentation consists of breaks or lesions in the genetic
material of sperm cells. The exploration of male infertility is based on conventional
semen analysis, especially spermogram and spermocytogram. However, these do not
reflect the integrity of sperm DNA
Objective : To determine the rate of sperm DNA fragmentation in men presenting

for infertility.
Methods: We performed spermogram and spermocytogram of 51 individuals

according to the standards established by the WHO. Subsequently, we studied the
levels of sperm DNA fragmentation using the SCD technique using the SCA-
SCOPE and the results were expressed in %DFI. The results we obtained were
statistically analysed.

95
Results: Among the 51 individuals, 23 (45%) had a normal spermogram while 28
(55%) had an abnormal semen analysis with one or more of the semen parameters
disturbed or a disturbed spermocytogram. The most represented age groups were 31-
40 years and 41-50 years. DFI among individuals with a normal spermogram was
(moderate or high) in 56% of cases (13/23). In addition, DFI in individuals with an
abnormal spermogram was (moderate or high) in 75% of cases (21/28). In addition,
we found a significant correlation between: %DFI high and low vitality (r= -0.583;
p< 0.01), between %DFI high and low motility (r= -0.334; p= 0.016) and also
between high %DFI and low sperm concentration (r= -0.302; p=0.031).
Conclusion: Finally, the data from this study sufficiently show that the SCD
technique is essential in the management of male infertility in Mali.

96
SERMENT DE GALIEN
Je jure, en présence des maîtres de la faculté, des conseillers de l’ordre des

pharmaciens et de mes condisciples :
D’honorer ceux qui m’ont instruit dans les préceptes de mon art et de leur
témoigner ma reconnaissance en restant fidèle à leur enseignement ;
D’exercer, dans l’intérêt de la santé publique, ma profession avec conscience et de
respecter non seulement la législation en vigueur, mais aussi les règles de
l’honneur, de la probité et du désintéressement.
De ne jamais oublier ma responsabilité et mes devoirs envers le malade et sa
dignité humaine.
En aucun cas, je ne consentirai à utiliser mes connaissances et mon état pour
corrompre les mœurs et favoriser les actes criminels.
Que les hommes m’accordent leur estime si je suis fidèle à mes promesses.
Que je sois couvert d’opprobre et méprisé de mes confrères si j’y manque.
Je le jure

97

M Bintou Coulibaly

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

M Bintou Coulibaly

Transféré par

Informations du document

Titre original

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

M Bintou Coulibaly

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Ministère de l’Enseignement Supérieur République du Mali

et de la Recherche Scientifique Un Peuple-Un But-Une Foi

Université des Sciences, des Techniques et des Technologies

Année Universitaire :2022-2023 N°……………

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

Professeur Mahamadou TRAORE

➢ Professeur Honoraire de génétique à la Faculté de Pharmacie de

Votre expérience et votre appétence pour le domaine ont fortement contribués à la

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

Professeur Guida Landouré

➢ Spécialiste en Neuro génétique (MD, PhD)

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

➢ Vice doyen de la faculté de Pharmacie

Vous nous faites un grand honneur en acceptant de juger ce travail malgré

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

Professeur Djénéba Koumba Dabitao

➢ Spécialiste en Biologie Moléculaire et en Immunologie

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

Je vous remercie infiniment d’avoir accepté d’encadrer ce travail avec rigueur

Recevez le témoignage de ma profonde reconnaissance.

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

2.1 Objectif général 4

2.2 Objectifs spécifiques 4

3.1. Rappel anatomique du système reproducteur male 6

3.3. Contrôle hormonal de la spermatogenèse 12

3.4. Structure et morphologie du spermatozoïde 13

3.6. Structure de l’ADN des spermatozoïdes 1415

3.7. Fragmentation de l’ADN spermatique 15

3.7.1. Causes de la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes 16

3.7.1.2. Stress oxydatif 16

3.7.1.3. Maturation défectueuse 17

3.7.1.4. Age avancé 18

3.7.1.6. Infections génitaux-urinaires 18

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

3.7.11. Rayonnements ionisants 19

3.7.2. Analyse de la fragmentation de l’ADN des spermatozoïdes 20

3.7.2.1. SCSA (Sperm Chromatin Structure Assay) 20

3.7.2.2. TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl-transferase-mediated dUTP Nick

3.7.2.3. Technique single cell electrophoresis (COMET) 21

3.7.2.4. SCD (Sperm Chromatin Dispersion) 22

3.7.3. Dans quels cas pratiquer le test 2523

4.1. Cadre et lieu d’étude 2725

4.2. Types d’étude et période de l’étude 2725

4.3. Population d’étude 2725

4.3.1. Critères d'inclusion 25

4.3.2. Critères de non-inclusion 26

4.4. Considérations éthiques 2826

4.5. Collècte des données 2826

THÈSE DE PHARMACIE BINTOU COULIBALY

4.5.2. Données cliniques 2927

4.6. Méthodes 2927

4.6.1. Spermogramme 2927