tp 2 microbio

TP2:GALERIE BIOCHIMIQUE CLASSIQUE
est un ensemble de tests visant à identifier des bactéries. Chaque test permet de
déterminer la présence d'enzymes spécifiques chez la bactérie. Ces tests peuvent
inclure des: Test ONPG, Utilisation du citrate , Réaction de Voges-Proskauer (VP),
Test LDC, ODC et ADH, Test de mannitol mobilité
1/ Test ONPG (orthonitrophényl-bêta-D-galactopyranoside):
Principe:
objet du test ONPG est d'étudier l'existence dune bêta-galactosidase qui hydrolysent le lactose en
glucose et galactose. La lecture est alors très rapide après 30min d'incubation.
B-gala
La réaction est la suivante : ONPG ONP + galactose
Couleur
jaune
Technique : Lecture:
Réaliser une suspension du germe à étudier
dans de l'eau physiologique contenant une
solution Incolore
Coloration jaune
tamponnée d’ONPG La bactérie a hydrolysée pas d’ONP dans le milieu, la
Interprétation l’ONPG bactérie n’a pas hydrolysé
ajouté une goutte de toluène(agent en ONP (produit coloré jaune) l’ONPG
perméabilisant) La bactérie ne possède
La bactérie possède la
Conclusion pas la b-galactosidase
b-galactosidase
Incuber à 37 °C elle est dite ONPG -
elle est dite ONPG +
2/Utilisation du citrate :
Principe:
Certaines bactéries peuvent utiliser le citrate comme seule source de carbone et d'énergie grâce à la présence de
la citrate perméase et des enzymes du catabolisme du citrate. croître sur un milieu spécifique (au citrate de
Simmons) contenant du citrate de sodium comme source de carbone, des sels d'ammonium comme source
d'azote, et du bleu de bromothymol comme indicateur de pH. Initialement vert (pH 7,0), le milieu vire au bleu
lorsque la croissance bactérienne entraîne une alcalinisation (milieu devient basique)
Ensemencez le milieu au citrate de Simmons
avec une culture prélevée sur milieu gélosé
(sans bouillon ou en eau peptonée pour éviter
d'apporter des nutriments) Présence d’une
Présence d’une coloration coloration bleue du a
Incubez à 37 °C pdt 5 jours (observer tout les verte dans tout le milieu une alcalinisation du
jours) pas d'utilisation de citrate milieu. (même localisée
et donc pas d'alcalinisation uniquement en surface)
: réaction négative : réaction positive.
3/Réaction de Voges-Proskauer (VP):
Principe:
le glucose est dégradé en acide pyruvique , l'acétoïne est produite en tant que sous-produit. Lors de la
réaction de VP, l'ajout de réactifs spécifiques permet d'oxyder l'acétoïne en (diacétyle). Ce diacétyle réagit
ensuite avec des composés présents dans le milieu, formant un complexe de couleur rouge/rose en
présence d'une base forte.
Ensemencer un milieu de Après 10min
Clark et Lubs (peptone, phosphate
bipotassique, glucose, pH 7,5).
Incuber48 heures à 37 °C
Prélever 1 mL de milieu et
La présence bactérie VP -
ajouter 0,5 mL de KOH ou de
NaOH (réactif VP 1) et 0,5 mL dacétoïne
dalpha-naphtol (réactif VP 2). bactérie VP +
4/Test LDC (lysine décarboxylase), ODC (ornithine décarboxylase)
et ADH (arginine dihydrolase) :
Principe:
Déterminer la capacité des bactéries à décarboxyler des acides aminés spécifiques
Lysine lysine cadavérine+ augmentation de ph ornithine Ornithine putrescine + augmentation de ph
décarboxylase décarboxylase
Arginine arginine ornithine +production d'ammoniac + augmentation de ph
dihydrolase
Ensemencer chacun des
trois tubes avec une
suspension bactérienne.
recouvrant la surface du
milieu d'huile de Fermentation de glucose + (pour Fermentation de glucose + (pour
paraffine. acidifier le milieu et activer la synthèse acidifier le milieu et activer la synthèse
des enzymes décarboxylases) des enzymes décarboxylases)
Incuber à 37° C. Réaction + (alcalinisation du milieu) Réaction - (acidifcation du milieu)
5/Test de mannitol mobilité :
Principe:
Le principe du milieu repose sur l'aptitude de certaines entérobactéries à fermenter le mannitol (virage
au jaune) du au changement de ph et à éventuellement réduire les nitrates en nitrites ainsi que leur
capacité a se déplacer
Par piqûre centrale à
l’aide d’une pipette
Pasteur fermée. A: pas de B: Dégradation D: Bactérie non E: Bactérie mobile,
dégradation du du mannitol mobile, colonies répartition des
mannitol Mannitol+ au lieu de colonies dans le
Incuber 24 heures à Mannitol- l'ensemencement milieu
37°C
C: Dégradation du mannitol
avec production de gaz

tp 2 microbio

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

tp 2 microbio

Transféré par

Informations du document

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

tp 2 microbio

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

TP2:GALERIE BIOCHIMIQUE CLASSIQUE

Vous aimerez peut-être aussi