Apostila de Microbiologia
Apostila de Microbiologia
Apostila de Microbiologia
PROFESSOR: FABRICIO SMAHA DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA BSICA CURSO: FARMCIA E BIOQUMICA
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NDICE
ORIGEM E DESENVOLVIMENTO DA MICROBIOLOGIA.............................................3 TEORIA MICROBIANA DA DOENA................................................................................10 CITOLOGIA BACTERIANA ................................................................................................11 FISIOLOGIA BACTERIANA................................................................................................20 CULTIVO DE BACTRIAS...................................................................................................23 REPRODUO BACTERIANA ...........................................................................................25 METABOLISMO BACTERIANO.........................................................................................28 ISOLAMENTO E CARACTERIZAO DE MICROORGANISMOS.............................29 MICROBIOTA NORMAL DO ORGANISMO HUMANO..................................................34 BACTRIAS PATOGNICAS ..............................................................................................37 PRINCIPAIS SNDROMES INFECCIOSAS .......................................................................41 ANTIBIOGRAMA...................................................................................................................46 OS FUNGOS E AS MICOSES................................................................................................47 VRUS.......................................................................................................................................58
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Esta rea do conhecimento teve seu incio com os relatos de Robert Hooke e Antony van Leeuwenhoek, que desenvolveram microscpios que possibilitaram as primeiras observaes de bactrias e outros microrganismos, alm de diversos espcimes biolgicos. Embora van Leeuwenhoek seja considerado o "pai" da microbiologia, os relatos de Hooke, descrevendo a estrutura de um bolor, foram publicados anteriormente aos de Leeuwenhoek. Assim, embora Leeuwnhoek tenha fornecido importantes informaes sobre a morfologia bacteriana, estes dois pesquisadores devem ser considerados como pioneiros nesta cincia. Recentemente foi publicado um artigo discutindo a importncia de Robert Hooke para o desenvolvimento da Microbiologia.
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No entanto, a partir dos estudos de C. Woese (1977), passamos a dispor de um sistema de classificao baseado principalmente em aspectos evolutivos (filogentica), a partir da comparao das sequncias de rRNA de diferentes organismos. Com esta nova proposta de classificao, os organismos so agora subdividos em 3 domnios (contendo os 5 reinos), empregando-se dados associados ao carter evolutivo. Archaea: Procariotos Bacteria: Procariotos Eukarya: Eucariotos
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A princpio, acredita-se que estes 3 domnios divergiram a partir de um ancestral comum. Provavelmente os microrganismos eucariticos atuaram como ancestrais dos organismos multicelulares, enquanto as bactrias e archaeas correspondem a ramos que no evoluram alm do estgio microbiano. Archaea: so organismos procariotos que, freqentemente so encontrados em ambientes cujas condies so bastante extremas (semelhantes s condies ambientais primordiais na Terra), sendo por isso, muitas vezes considerados como sendo ancestrais das bactrias. No entanto, hoje em dia considera-se as archaeas como um grupo intermedirio entre procariotos e eucariotos. Muitos destes organismos so anaerbios, vivendo em locais "inabitveis" para os padres humanos - fontes termais (com temperaturas acima de 100C), guas com elevadssimos teores de sal (at 5M de NaCl - limite de dissoluo do NaCl), em solos e guas extremamente cidos ou alcalinos (espcies que vivem em pH 0, outras em pH 10) e muitas so metanognicas. Genericamente, podemos dizer que as Archaeas definem os limites da tolerncia biolgica s condies ambientais. Bacteria: Corresponde a um enorme grupo de procariotos, anteriormente classificados como eubactrias, representadas pelos organismos patognicos ao homem, e bactrias encontradas nas guas, solos, ambientes em geral. Dentre estas, temos as bactrias fotossintetizantes (cianobactrias) e outras quimiossintetizantes (E. coli), enquanto outras utilizam apenas substratos inorgnicos para seu desenvolvimento. Eukarya: No mbito microbiolgico, compreende as algas, protozorios e fungos (alm das plantas e animais). As algas caracterizam-se por apresentarem clorofila (alm de outros pigmentos), sendo encontradas basicamente nos solos e guas. Os protozorios correspondem a clulas eucariticas, apigmentados, geralmente mveis e sem parede celular, nutrindo-se por ingesto e podendo ser saprfitas ou parasitas. Os fungos so tambm clulas sem clorofila, apresentando parede celular, realizando metabolismo heterotrfico, nutrindo-se por absoro. Como mencionado anteriormente, os vrus so tambm assunto abordado em microbiologia, embora, formalmente, no exibam as caractersticas celulares, no sentido de no apresentarem metabolismo prprio, de conterem apenas um tipo de cido nuclico, etc.
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podem originar uma srie de doenas, com maior ou menor gravidade. Nesta classe de organismos esto aqueles denominados patognicos e potencialmente patognicos. Sabe-se que em cerca de 1013 clulas de um ser humano podem ser encontradas, em mdia, cerca de 1014 clulas bacterianas. No homem, estas se encontram em vrias superfcies, especialmente na cavidade oral e trato intestinal.
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Importncia da Microbiologia
uma rea da Biologia que tem grande importncia seja como cincia bsica ou aplicada. Bsica: estudos fisiolgicos, bioqumicos e moleculares (modelo comparativo para seres superiores). => Microbiologia Molecular Aplicada: processos industriais, controle de doenas, de pragas, produo de alimentos, etc. reas de estudo: Odontologia: Estudo de microrganismos associados placa dental, crie dental e doenas periodontais. Estudos com abordagem preventiva. Medicina e Enfermagem: - Doenas infecciosas e infeces hospitalares. Nutrio: - Doenas transmitidas por alimentos, Controle de qualidade de alimentos, Produo de alimentos (queijos, bebidas). Biologia: - Aspectos bsicos e biotecnolgicos. Produo de antibiticos, hormnios (insulina, GH), enzimas (lipases, celulases), insumos (cidos, lcool), Despoluio (Herbicidas Pseudomonas, Petrleo), Bio-filme (Acinetobacter), etc. BIOTECNOLOGIA - Uso de microrganismos com finalidades industriais, como agentes de biodegradao, de limpeza ambiental, etc.
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Antes da II Guerra Mundial, o resultado das guerras era definido pelas armas, estratgias e pestilncia, sendo esta ltima decisiva. Em 1566, Maximiliano II da Alemanha reuniu um exrcito de 80.000 homens para enfrentar o Sulto Soliman da Hungria. Devido a uma epidemia de tifo, o exrcito alemo foi profundamente dizimado, sendo necessria a disperso dos sobrevivente, impedindo assim a expulso das hordes de tribos orientais da Europa nesta poca. Na guerra dos 30 anos (1618-1648), onde protestantes se revoltaram contra a opresso dos catlicos, alm do desgaste decorrente da longa durao do confronto, as doenas foram determinantes no resultado final. Na poca de Napoleo, em 1812, seu exrcito foi quase que completamente dizimado por tifo, disenteria e pneumonia, durante campanha de retirada de Moscou. No ano seguinte, Napoleo havia recrutado um exrcito de 500.000 jovens soldados, que foram reduzidos a 170.000, sendo cerca de 105.000 mortes decorrentes das batalhas e 220.000 decorrentes de doenas infecciosas. Em 1892, outra epidemia de peste bubnica, na China e ndia, foi responsvel pela morte de 6 milhes de pessoas. At a dcada de 30, este era quadro, quando Alexander Fleming, incidentalmente, descobriu um composto produzido por um fungo do gnero Penicillium, que eliminava bactrias do gnero Staphylococcus, um organismo que pode produzir uma vasta gama de doenas no homem. Este composto - denominado penicilina - teve um papel fundamental na desfecho da II Guerra Mundial, uma vez que passou a ser administrado s tropas aliadas, enquanto o exrcito alemo continuava a sofrer pesadas baixas no campo de batalha. Alm destas epidemias, vale ressaltar a importncia das diferentes epidemias de gripe que assolaram o mundo e que continuam a manifestar-se de forma bastante intensa at hoje. Temos ainda o problema mundial envolvendo a AIDS, o retorno da tuberculose (17 milhes de casos no Brasil) e do aumento progressivo dos nveis de resistncia aos agentes antimicrobianos que vrios grupos de bactrias vm apresentando atualmente.
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CITOLOGIA BACTERIANA
1) MORFOLOGIA BACTERIANA
As clulas bacterianas so caracterizadas morfologicamente pelo seu tamanho, forma e arranjo. Tamanho - variam de 0,3 por 0,8 m at 10 por 25 m. - as espcies de maior interesse mdico medem entre 0,5 a 1,0 m por 2 a 5 m. Forma e arranjo 1) Formas de cocos (esfricas): grupo mais homogneo em relao a tamanho sendo clulas menores (0,8-1,0 m). Os cocos tomam denominaes diferentes de acordo com o seu arranjo: - Diplococos: cocos agrupados aos pares. Ex: Neisseria meningitides (meningococo). - Ttrades: agrupamentos de quatro cocos.
- Sarcina: agrupamentos de oito cocos em forma cbica. Ex: espcie Sarcina. - Estreptococos: cocos agrupados em cadeias. Ex: Streptococcus salivarius, Streptococcus pneumoniae (pneumococo). Streptococcus mutans. - Estafilococos: cocos em grupos irregulares, lembrando cachos de uva. Ex: Staphylococcus aureus. - Micrococos: cocos que se separam completamente aps a diviso celular.
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2) Forma de bastonete: So clulas cilndricas, em forma de bastonetes que apresentam grande variao na forma e tamanho entre gneros e espcies. Dentro da mesma espcie os bastonetes so relativamente constantes sob condies normais de crescimento, podendo variar em tamanho e espessura (longos e delgados, pequenos e grossos, extremidade reta, convexa ou arredondada). Quanto ao arranjo podem variar em : - Diplobacilo: bastonetes agrupados aos pares. - Estreptobacilos: bastonetes agrupados em cadeias. - Paliada: bastonetes alinhados lado a lado como palitos de fsforo. Ex: bacilo da difteria. - Tricomas: similares a cadeias de bastonetes, mas com uma rea de contato muito maior entre as clulas adjacentes Ex: espcies Beggiatoa e Saprospira
3) Formas helicoidais ou espiraladas: constituem o terceiro grupo morfolgico sendo caracterizada por clulas de forma espiral que se dividem em: - Espirilos: possuem corpo rgido e se movem s custas de flagelos externos, dando uma ou mais voltas espirais em torno do prprio eixo. Ex: Aquaspirillium - Espiroquetas: So flexveis e locomovem-se provavelmente s custas de contraes do citoplasma, podendo dar vrias voltas completas em torno do prprio eixo. Ex: Treponema pallidum, Treponema denticola.
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Alm desses trs tipos morfolgicos, existem algumas formas de transio. Quando os bacilos so muito curtos, podem se assemelhar aos cocos, sendo ento chamados de cocobacilos (Ex: Brucella melitensis). Quando as formas espiraladas so muito curtas, assumindo a forma de vrgula, eles so chamados de vibrio (Ex: V. cholerae).
2) CITOLOGIA BACTERIANA
O tamanho, a forma e o arranjo das bactrias constituem sua morfologia grosseira, sua aparncia externa; a observao interna das estruturas celulares d-nos uma idia de como a bactria funciona no ambiente. Na figura abaixo esto representadas esquematicamente diversas estruturas bacterianas que sero comentadas a seguir:
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2.1) Flagelos
Flagelos so organelas especiais de locomoo, constitudas por uma estrutura protica denominada flagelina, formando longos filamentos delgados e ondulados de 3-12m que partem do corpo da bactria e se estendem externamente parede celular. Um flagelo tem trs partes: o corpo basal (estrutura composta por vrios anis que ancora o flagelo membrana citoplasmtica), uma estrutura curta em forma de gancho e um longo filamento helicoidal. O flagelo propulsiona a bactria atravs do lquido podendo chegar a 100 m por segundo (o equivalente a 3000 vezes o seu comprimento por minuto). O mtodo exato do movimento desconhecido (contrao das cadeias proticas -movimento ondulatrio; movimento rotatrio a partir da extremidade fixa gancho) e aparentemente a energia vem da degradao de ligaes energticas de fosfato. Em geral a motilidade ocorre ao acaso embora s vezes esteja relacionado com quimiotaxia. As bactrias recebem denominaes especiais de acordo com a distribuio dos flagelos: atrquias (sem flagelo); monotrquias (um flagelo em uma das extremidades); anfitrquias (um flagelo em cada extremidade); lofotrquias (tufo de flagelos em uma ou ambas as extremidades); e peritrquias (cercadas de flagelos).
2.2) Fmbrias
As fmbrias ou "Pili" so organelas filamentosas mais curtas e delicadas que os flagelos, constitudas por uma protena chamada pilina e presentes em muitas bactrias (especialmente Gram negativas). Elas originam-se de corpsculos basais na membrana citoplasmtica e sua funo parece estar relacionada com a troca de material gentico durante a conjugao bacteriana (fmbria sexual), e tambm com a aderncia s superfcies mucosas. As fmbrias podem ser removidas sem comprometimento da viabilidade celular e regeneram rapidamente.
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2.3) Cpsula
Muitas bactrias apresentam, externamente parede celular, uma camada viscosa denominada cpsula que constitui uma forma de proteo da bactria contra as condies externas desfavorveis. Tal formao pode ser evidenciada com a ajuda de mtodos especiais de colorao (nanquim). Geralmente as cpsulas so de natureza polissacardea (homopolissacardeas, composta por um nico tipo de acar ou heteropolissacardeas, composta por diferentes acares), embora tambm possam ser constitudas por polipeptdeos. A cpsula est relacionada com a virulncia da bactria pois confere resistncia fagocitose, de modo que, em uma mesma espcie, as amostras capsuladas so mais virulentas que as no capsuladas. Nas bactrias desprovidas de cpsula ocorre a formao de um envoltrio viscoso delgado chamado de camada limosa (slime layer) ou por um material limoso mal delimitado (loose slime).
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Acredita-se que sua presena confira maior resistncia da parede contra a maioria das peptidases. Assim, em cada resduo de NAM h um tetrapeptdeo associado. A enorme rigidez da parede celular resultante das ligaes entre os tetrapeptdeos de cadeias adjacentes. Neste aspecto, h uma grande diferena entre as bactrias Gram positivas e negativas. Nas bactrias Gram negativas (Ala-Glu-DAP-Ala), a ligao entre os tetrapepdeos direta, ocorrendo entre o grupamento amino do DAP subterminal (posio 3) e o grupamento carboxi da D-Ala terminal (posio 4). J nas Gram positivas (Ala-Glu-Lys-Ala), a ligao indireta, sendo mediada por uma ponte interpeptdica de natureza varivel (cinco glicinas em S. aureus). A anlise das figuras abaixo deixa clara a grande estruturao do peptdeoglicano, em virtude das inmeras ligaes cruzadas existentes ao longo da molcula. Assim, devido a esta complexa estruturao fsica, o peptideoglicano confere rigidez parede, embora exiba certo grau de elasticidade e tambm porosidade. Nas bactrias Gram positivas, cerca de 90% da parede celular composta pelo peptdeoglicano, que geralmente forma cerca de 20 camadas. O restante da parede composto essencialmente por cido teicico. Nas bactrias Gram negativas, apenas cerca de 10% da parede corresponde ao peptideoglicano, existindo geralmente como uma camada nica ou dupla.
cidos Teicicos Juntamente com peptideoglicano, os cidos teicicos compem a parede celular das bactrias Gram positivas. Estes compostos, presentes em grandes quantidades, correspondem a polmeros de glicerol ou ribitol ligados a acares ou aminocidos e conectados entre si por meio de grupamentos fosfato. Os cidos teicicos associam-se ao peptideoglicano pela ligao do grupamento 6 hidroxil do cido N-acetilmurmico, podendo alternativamente associar-se aos lipdeos da membrana citoplasmtica, quando passam a ser denominados de cidos lipoteicicos. Devido sua carga negativa, os cidos teicicos contribuem com o carter negativo da superfcie celular de Gram positivas. Seu papel fisiolgico ainda desconhecido, mas especula-se que estes possam participar nos processos de passagem de ons pela parede, ou ligar-se a prtons, mantendo um pH celular relativamente baixo. Em casos de escassez de fosfato, os cidos teicicos podem ser substitudos por cidos teicurnicos, deixando assim os fosfatos livres para comporem ATP ou DNA, por exemplo.
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Gram Positivas
Possuem uma quantidade maior de peptideoglicano em sua parede celular, o que torna a parede dessas bactrias mais espessa e rgida do que a das bactrias Gram negativas. Composta de protedas, lipdeos, peptideoglicano e cidos teicicos (cadeias de polifosfato com resduos de ribitol e glicerol), essas bactrias so sensveis lisozima e sua parede constitui o local de ao de alguns antibiticos alm de apresentar elementos bsicos para identificao sorolgica
Gram Negativas
A parede celular dessas bactrias menos espessa e elas so mais complexas do que as Gram positivas por apresentarem uma membrana externa cobrindo a fina camada de peptdeoglicano. A membrana externa o que distingue as bactrias Gram negativas, servindo como uma barreira seletiva para a entrada e sada de algumas substncias da clula e podendo ainda causar efeitos txicos srios em animais infectados. A estrutura da membrana
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externa composta por fosfolipdios, lipoprotenas e lipopolissacardeos (LPSs). Os lipopolissacardeos esto localizados exclusivamente na camada externa da membrana, enquanto que os fosfolipdeos esto presentes quase completamente na camada interna. Os LPSs so compostos por trs segmentos ligados covalentemente: (1) lipdeo A, firmemente embebido na membrana; (2) cerne do polisssacardeo, localizado na superfcie da membrana; e (3) antgenos O, que so polissacardeos que se estendem como plos a partir da superfcie da membrana em direo ao meio circundante. A poro lipdica do LPSs tambm conhecida como endotoxina e pode atuar como um veneno, causando febre, diarria, destruio das clulas vermelhas do sangue e um choque potencialmente fatal.
A face externa da membrana externa rica em lipopolissacardeos (LPS), inexistentes na membrana citoplasmtica. Estes componentes so tambm denominados de endotoxina, uma vez que provocam febre, choque e eventualmente morte, quando injetados em animais. O LPS uma molcula complexa, composta por 3 regies distintas: lipdeo A, polissacardeo central e cadeia polissacardica lateral O, ou Antgeno O.
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2.6) Mesossomos
Os mesossomos so invaginaes da membrana citoplasmtica que podem ser simples dobras ou estruturas tubulares ou vesiculares. Eles podem colocar-se prximos membrana citoplasmtica ou afundar-se no citoplasma. Os mesossomos profundos e centrais parecem estar ligados ao material nuclear da clula estando envolvidos na replicao de DNA e na diviso celular. Os mesossomos perifricos penetram muito pouco no citoplasma, no so restritos localizao central da bactria e no esto associados com o material nuclear. Parecem estar envolvidos na secreo de certas enzimas a partir da clula, tais como as penicilinases que destroem a penicilina. Alguns autores associam ainda aos mesossomos o valor funcional das mitocndrias, atribuindo eles papel na respirao bacteriana.
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nica molcula de DNA no delimitado por membrana nuclear. O cromossomo bacteriano contm todas as informaes necessrias sobrevivncia da clula e capaz de autoduplicao. - Plasmdeo: algumas bactrias possuem molculas menores de DNA, tambm circulares, cujos genes no codificam caractersticas essenciais, porm muitas vezes conferem vantagens seletivas bactria que as possua. Essas molculas chamadas plasmdeos so capazes de autoduplicao independente da replicao do cromossomo, e podem existir em nmero varivel no citoplasma bacteriano.
2.8) Esporos
Os esporos que se formam dentro da clula, chamados endosporos, so exclusivos das bactrias (principalmente as pertencentes ao gnero bacillus e clostridium). Eles possuem parede celular espessa, so altamente refrateis (brilham muito com a luz do microscpio) e altamente resistentes a agentes fsicos (dessecao e aquecimento) e qumicos (antispticos) adversos devido a sua parede ou capa impermevel composta de cido dipicolnico. Os esporos surgem quando a clula bacteriana no se encontra em um meio ideal para o seu desenvolvimento. A bactria produtora pode crescer e multiplicar-se por muitas geraes como clulas vegetativas. Em alguma etapa do desenvolvimento, em ambiente com exausto de fontes de carbono e nitrognio ou completa falta de nutrio, ocorre no interior do citoplasma vegetativo a sntese do esporo (sua formao leva por volta de 6 horas). Ela iniciada pela condensao de uma nucleoprotena no citoplasma que migra para a extremidade da clula enquanto esta e o citoplasma so envolvidos por uma membrana dupla derivada da membrana citoplasmtica. O tegumento formado na membrana dupla e o citoplasma sofre condensao para completar a formao do cerne. Os esporos tm pouca atividade metablica, podendo permanecer latente por longos perodos, representando uma forma de sobrevivncia e no de reproduo.
FISIOLOGIA BACTERIANA
Prof. Fabricio Smaha - Microbiologia - FAEMA Pgina 20
FISIOLOGIA BACTERIANA
O crescimento e diviso celulares necessitam de um ambiente propcio com todos os constituintes qumicos e fsicos necessrios para o seu metabolismo. Essas necessidades especficas so dependentes de informaes genticas para cada espcie bacteriana. Algumas espcies com vasta flexibilidade nutricional, como as Pseudomonas, so capazes de sintetizar muitos de seus metablitos a partir de precursores simples, enquanto outras espcies so mais exigentes, como as Porphyromonas e Treponemas, que necessitam de nutrientes complexos para o crescimento e reproduo.
NUTRIO
A anlise das estruturas bacterianas revela que sua arquitetura formada por diferentes macromolculas, em particular, protenas e cidos nuclicos. Os precursores das macromolculas podem ser retirados do meio ambiente ou ser sintetizados pelas bactrias a partir de compostos mais simples. A alternativa escolhida vai depender da disponibilidade do composto no meio e da capacidade de sntese do microrganismo. As substncias ou elementos retirados do ambiente e usados para construir novos componentes celulares ou para obter energia so chamados nutrientes. Os nutrientes podem ser divididos em duas classes: macronutrientes e micronutrientes. Ambos os tipos so imprescindveis, mas os primeiros so requeridos em grandes quantidades por serem os principais constituintes dos compostos orgnicos celulares e / ou serem utilizados como combustvel.
Carbono: est presente na maioria das substncias que compem as clulas. As bactrias podem utilizar o carbono inorgnico existente no ambiente, na forma de carbonatos ou de CO2 como nica fonte de carbono. So neste caso chamadas de autotrficas. Os microrganismos que obrigatoriamente requerem uma fonte orgnica de carbono so denominados heterotrficos e as principais fontes, so os carboidratos. Oxignio: requerido na forma molecular como aceptor final na cadeia de transporte de eltrons aerbia. Tambm elemento importante em vrias molculas orgnicas e inorgnicas. Hidrognio: como componente muito freqente da matria orgnica e inorgnica, tambm constitui um elemento comum de todo material celular. Nitrognio: componente de protenas e cidos nuclicos, alm de vitaminas e outros compostos celulares. Est disponvel na natureza sob a forma de gs (N2) ou na forma combinada. Sua utilizao como N2 restrita a um grupo de bactrias cujo principal habitat o solo. Na forma combinada, o nitrognio encontrado como matria inorgnica (NH3 , NO3, etc.) ou matria orgnica: aminocidos, purinas e pirimidinas. Enxofre: faz parte de aminocidos (cistena e metionina), de vitaminas e grupos prostticos de vrias protenas importantes em reaes de xido-reduo. Da mesma forma que o nitrognio, o enxofre pode ser encontrado no ambiente nas formas elementar, oxidada e reduzida; estas duas ltimas aparecem como compostos orgnicos e inorgnicos. Todas as alternativas citadas podem ser utilizadas pelas bactrias, porm so os sulfatos (SO4-2) inorgnicos ou os aminocidos as formas preferencialmente assimiladas. Na forma oxidada, tambm pode ser aceptor final de eltrons das cadeias de transporte de eltrons anaerbias. Fsforo: encontrado na clula na forma combinada a molculas importantes como os nucleotdeos (ATP, CTP, GTP, UTP, TTP) e como fosfato inorgnico; nesta ltima forma incorporado atravs de poucas reaes metablicas, embora uma delas seja de fundamental importncia: a sntese de ATP a partir de ADP e fosfato. As substncias fosforiladas podem estar envolvidas com o armazenamento de energia ( como o ATP) ou atuar como reguladoras de processos metablicos: muitas enzimas tornam-se ativas ao serem fosforiladas.
Micronutrientes
Os elementos ferro, magnsio, mangans, clcio, zinco, potssio, sdio, cobre, cloro, cobalto, molibdnio, selnio e outros so encontrados sempre na forma inorgnica, fazendo parte de minerais. So necessrios ao desenvolvimento microbiano, mas em quantidades variveis, dependendo do elemento e do microrganismo considerados. Os micronutrientes podem atuar de diferentes maneiras, incluindo as seguintes funes principais: - componentes de protenas, como o ferro que participa da composio de vrias protenas enzimticas ou no, de citocromos, etc.; - cofatores de enzimas, como o magnsio, potssio, molibdnio, etc. - Componentes de estruturas, como o clcio, presente em um dos envoltrios dos esporos; - Osmorreguladores.
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CULTIVO DE BACTRIAS
Condies de Cultivo
Para se cultivar microrganismos deve-se obedecer a requisitos bsicos obrigatrios, quais sejam incub-los em meios de cultura adequados e incub-los em condies ambientais igualmente adequadas. Um inculo uma amostra de material contendo geralmente uma pequena quantidade de microrganismos; obedecidas as condies citadas, os microrganismos contidos no inculo multiplicam-se, aumentando em nmero e massa e, com isto, atingindo o objetivo desejado.
Meios de Cultura
Meio de cultura uma mistura de nutrientes necessrios ao crescimento microbiano. Basicamente deve conter a fonte de energia e de todos os elementos imprescindveis vida das clulas. A formulao de um meio de cultura deve levar em conta o tipo nutritivo no qual o microrganismo pertence, considerando-se a fonte de energia (luz ou substncia qumica), o substrato doador de eltrons (orgnico ou inorgnico) e a fonte de carbono (orgnica ou inorgnica). Estabelecidas as condies gerais, o meio de cultura deve ainda atender as necessidades especficas do grupo, da famlia, do gnero ou da espcie que se deseja cultivar. Assim, imprescindvel acrescentar ao meio vitaminas, cofatores, aminocidos, etc., quando estes compostos no so sintetizados pelos microrganismos que se deseja cultivar.
Fatores de crescimento
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Entre as bactrias heterotrficas h uma imensa variedade de exigncias nutritivas. Algumas so capazes de crescer em meio muito simples, constitudo de uma soluo de glicose, sal de amnio e alguns sais minerais. A partir desses compostos, sintetizam todos os componentes do protoplasma: protenas, polissacardeos, cidos nuclicos, coenzimas, etc. Outras, todavia, so incapazes de sintetizar determinados compostos orgnicos essenciais para o seu metabolismo. Para que estes microrganismos possam crescer, tais compostos devem ser obtidos do meio natural ou artificial em que vivem. Essas substncias so denominadas fatores de crescimento. Muitos desses fatores so componentes de coenzimas, que, para o homem, so vitaminas. Na realidade, certas vitaminas, como o cido flico, foram descobertas por serem necessrias ao crescimento de determinadas bactrias. As composies dos meios de cultura, portanto, podem ser muito variadas. Um meio pode ter uma composio simples, contendo um nico carboidrato como fonte de energia e carbono e alguns sais minerais; em outro extremo esto os meios requeridos por microrganismos mais exigentes, apresentando composio complexa, contendo vrias fontes de carbono e energia, vitaminas e aminocidos, podendo ainda ser acrescidos de sangue ou soro de animais. Alm da composio qualitativa, o meio de cultura deve obedecer aos limites de quantidade de cada componente suportveis pelos microrganismos. Muitas vezes o meio de cultura deve conter substncias para neutralizar a ao de produtos txicos lanados pelos prprios microrganismos, que sofrem os efeitos de seu acmulo. Um exemplo rotineiro adio de tampes para impedir a queda de pH provocada pelos cidos orgnicos produzidos por fermentao bacteriana. Os meios podem ser lquidos, quando so uma soluo aquosa de nutrientes, ou slidos, quando a soluo aquosa gelificada por um polissacardeo extrado de algas, o gar. O meio slido obrigatoriamente usado quando se pretende separar clulas. Cada clula individualizada ou agrupamento isolado d origem, por multiplicao, a um aglomerado que constitui uma colnia. Colnias de diferentes espcies geralmente apresentam caractersticas morfolgicas diferentes. Os meios de cultura podem ser seletivos, quando contm uma substncia que inibe o crescimento de um determinado grupo de microrganismos, mas permite o desenvolvimento de outros.
1) Temperatura
Cada tipo de bactria apresenta uma temperatura tima de crescimento, em torno desta temperatura observa-se um intervalo dentro do qual o desenvolvimento tambm ocorre, sem, no entanto, atingir o seu mximo. Ultrapassado o limite superior, rapidamente ocorre desnaturao do material celular e, conseqentemente, a morte da clula. As temperaturas inferiores tima levam a uma desacelerao das reaes metablicas, com diminuio da velocidade de multiplicao celular, que em caso extremo, fica impedida. As variaes quanto ao requerimento trmico permite classificar as bactrias segundo a temperatura tima para o seu crescimento, em: - psicrfilas: entre 12 e 17 C - mesfilas: entre 28 e 37C - termfilas: 57 e 87C Embora grupos excntricos, que necessitam de altas temperaturas para o seu crescimento, a maioria concentra-se no grupo de mesfilas, principalmente as de interesse mdico, veterinrio e agronmico.
2) pH
Os valores de pH em torno da neutralidade so os mais adequados para absoro de alimentos para a grande maioria das bactrias. Existem, no entanto, grupos adaptados a viver em ambientes cidos e alcalinos.
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3) Oxignio
O oxignio pode ser indispensvel, letal ou incuo para as bactrias, o que permite classific-las em:
aerbias estritas: exigem a presena de oxignio, como as do gnero Acinetobacter. microaerfilas: necessitam de baixos teores de oxignio, como o Campylobacter
jejuni.
disponvel, mas desenvolver-se tambm em sua ausncia. Escherichia coli e vrias bactrias entricas tm esta caracterstica. anaerbias estritas: no toleram o oxignio. Ex.: Clostridium tetani, bactria produtora de potente toxina que s se desenvolve em tecidos necrosados carentes de oxignio.
REPRODUO BACTERIANA
Crescimento: aumento do protoplasma celular pela sntese de cidos nuclicos, protenas, polissacardeos e lipdeos; e, absoro de gua e eletrlitos. Termina na diviso celular. Multiplicao: resposta necessria presso de crescimento.
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Reproduo sexuada
Para as bactrias considera-se reproduo sexuada qualquer processo de transferncia de fragmentos de DNA de uma clula para outra. Depois de transferido, o DNA da bactria doadora se recombina com o da receptora, produzindo cromossomos com novas misturas de genes. Esses cromossomos recombinados sero transmitidos s clulas-filhas quando a bactria se dividir. A transferncia de DNA de uma bactria para outra pode ocorrer de trs maneiras: por transformao, transduo e por conjugao.
Transformao
Na transformao, a bactria absorve molculas de DNA dispersas no meio e so incorporados cromatina. Esse DNA pode ser proveniente, por exemplo, de bactrias mortas. Esse processo ocorre espontaneamente na natureza. Os cientistas tm utilizado a transformao como uma tcnica de Engenharia Gentica, para introduzir genes de diferentes espcies em clulas bacterianas.
Transduo
Na transduo, molculas de DNA so transferidas de uma bactria a outra usando vrus como vetores (bactrifagos). Estes, ao se montar dentro das bactrias, podem eventualmente incluir pedaos de DNA da bactria que lhes serviu de hospedeira. Ao infectar outra bactria, o vrus que leva o DNA bacteriano o transfere junto com o seu. Se a bactria sobreviver infeco viral, pode passar a incluir os genes de outra bactria em seu genoma.
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Conjugao
Na conjugao bacteriana, pedaos de DNA passam diretamente de uma bactria doadora, o "macho", para uma receptora, a "fmea". Isso acontece atravs de microscpicos tubos proticos, chamados pili, que as bactrias "macho" possuem em sua superfcie. O fragmento de DNA transferido se recombina com o cromossomo da bactria "fmea", produzindo novas misturas genticas, que sero transmitidas s clulas-filhas na prxima diviso celular.
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Fase log (A): esta fase de crescimento ocorre quando as clulas so transferidas de um meio para outro ou de um ambiente para outro. Esta a fase de ajuste e representa o perodo necessrio para adaptao das clulas ao novo ambiente. As clulas nesta fase aumentam no volume total em quase duas ou quatro vezes, mas no se dividem. Tais clulas esto sintetizando DNA, novas protenas e enzimas, que so um pr-requisito para diviso. Fase exponencial ou log (B): nesta fase, as clulas esto se dividindo a uma taxa geomtrica constante at atingir um mximo de crescimento. Os componentes celulares como RNA, protenas, peso seco e polmeros da parede celular esto tambm aumentando a uma taxa constante. Como as clulas na fase exponencial esto se dividindo a uma taxa mxima, elas so muito menores em dimetro que as clulas na fase Lag. A fase de crescimento exponencial normalmente chega ao final devido depleo de nutrientes essenciais, diminuio de oxignio em cultura aerbia ou acmulo de produtos txicos. Fase estacionria (C): durante esta fase, h rpido decrscimo na taxa de diviso celular. Eventualmente, o nmero total de clulas em diviso ser igual ao nmero de clulas mortas, resultando na verdadeira populao celular estacionria. A energia necessria para manter as clulas na fase estacionria denominada energia de manuteno e obtida a partir da degradao de produtos de armazenamento celular, ou seja, glicognio, amido e lipdeos. Fase de morte ou declnio (D): quando as condies se tornam fortemente imprprias para o crescimento, as clulas se reproduzem mais lentamente e as clulas mortas aumentam em nmeros elevados. Nesta fase o meio se encontra deficiente em nutrientes e rico em toxinas produzidas pelos prprios microrganismos.
METABOLISMO BACTERIANO
Uma vez garantidos pelo ambiente os nutrientes e as condies adequadas para assimil-los, as bactrias vo absorv-los e transform-los para que cumpram suas funes bsicas, quais sejam, o suprimento de energia e de matria prima. Como matria-prima, os nutrientes vo ser transformados em estruturas celulares ou em molculas acessrias sua sntese e funcionamento.
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Obteno de energia
As substncias com alto valor energtico so sempre aquelas com elevado grau de reduo, e grande parte das bactrias (exceo s fotossintetizantes) vai obter toda energia de que necessita por oxidao desses substratos. As substncias preferencialmente oxidadas por microrganismos so os acares, seguidos de protenas, peptdios e, mais raramente, as gorduras. As bactrias utilizam energia para o transporte de nutrientes, o movimento dos flagelos, mas sobretudo para as biossnteses. WIELAND (1912), reconheceu que a maioria das reaes biolgicas, ocorre na ausncia de oxignio, por desidrogenao. Em biologia, pode-se dizer que a perda de um eltron equivale a perda de um hidrognio. Pode-se, ento, definir oxidao como o ganho de um hidrognio e reduo como a perda de um hidrognio.
Fermentao
Metabolismo no qual os compostos orgnicos servem como doadores e receptores de eltrons (hidrognio). A fermentao conduz, geralmente, ciso parcial de molculas de glicose (gliclise). Conceito antigo (clssico): decomposio microbiana de carboidratos na ausncia de oxignio.
Putrefao
Decomposio de compostos nitrogenados (protenas), utilizando-se de substncia orgnica como aceptor-doador de eltrons. um tipo de fermentao que produz produtos finais de odor desagradvel: indol, escatol, cido sulfdrico.
Respirao
Decomposio microbiana de substratos cujo receptor de hidrognio o oxignio. Na respirao ocorrem as seguintes etapas: a) Ciclo de Krebs; b) Cadeia transportadora de eltrons; c) Fosforilao oxidativa.
Respirao anaerbica
Quando o oxignio substitudo por outro receptor inorgnico de eltrons.
Na natureza encontramos vrias espcies de microrganismos (bactrias, fungos, algas e protozorios) convivendo no mesmo ambiente. Para estudar as propriedades de um determinado microrganismo em particular, deve-se primeiramente isol-lo em cultura pura, ou seja, uma cultura isenta de todos os demais tipos de organismos, onde todas as clulas na populao sejam idnticas (originrias de uma mesma clula parental).
MEIOS DE CULTURA
Os ingredientes necessrios para o crescimento de microrganismos podem ser supridos por um sistema vivo, como um hospedeiro animal ou vegetal, uma cultura de clulas, ou por uma mistura de todos os nutrientes requeridos juntos em um sistema artificial, denominado meio de cultura. Os meios de cultura contm os materiais nutrientes para o cultivos dos diferentes microrganismos. Estes meios podem ser preparados no prprio laboratrio com ps desidratados, ou adquiridos prontos no comrcio em placas de Petri ou tubos de ensaio. Estes meios podem ser em caldo (lquido) ou gar (slido). Os meios lquidos so teis para a obteno de relativa grande biomassa de microrganismos e revelao de provas bioqumicas, mas no permitem a separao de dois ou mais microrganismos de espcies diferentes em uma populao mista, no possibilitando a observao de algumas caractersticas especficas dos microrganismos, como a morfologia de suas colnias. Para se determinar as necessidades nutricionais de um microrganismo so utilizados meios quimicamente definidos, ou seja, se conhece a composio exata de tais meios. Meios de cultura mnimos ou basais so meios onde somente so fornecidos elementos qumicos necessrios ao microrganismo, na forma de molculas ou frmulas inicas simples. Nesses meios somente so encontrados uma nica fonte de carbono (geralmente glucose), de nitrognio (sais de amnio ou nitratos), de fsforo, etc. e no so detectados fatores de crescimento, aminocidos ou cidos nuclicos. Meios com finalidades especiais so meios que fornecem informaes especiais sobre os microrganismos: Meios seletivos so desenvolvidos para promover o crescimento de determinados microrganismos em detrimento de outros, que tambm se encontram na amostra em questo. A prtica mais comum a incorporao de substncias tais como antibiticos ou inibidores que propiciam tal seleo. Ex.: Agar de Thayer-Martin seletivo para Neisseria gonorrhoeae e N. meningitidis onde os organismos contaminantes so inbidos pela colistina, nistatina, vancomicina e trimetroprim e MSB (sacarose e bacitracina) seletivos para Streptococcus mutans. Meios diferenciais so desenvolvidos para facilitar a separao presuntiva de espcies de microrganismos que porventura estejam colonizando um mesmo ecossistema. Esses meios, via de regra, permitem a obteno de colnias com caractersticas fenotpicas diferenciadas (morfologia, colorao, etc), de acordo com o processamento de agentes cromognicos ou acares e indicadores incorporados ao meio. Ex.: gar-sangue (Porphyromonas e Prevotellas). Meios de enriquecimento so variaes dos meios seletivos empregados para se estimular o crescimento de certos microrganismos exigentes e que encontram-se particularmente presentes em pequeno nmero numa amostra que inclui grande nmero de outros da microbiota normal. Meios para anaerbios so meios pr-reduzidos empregados na coleta e manuteno de bactrias anaerbias, onde so adicionadas substncias redutoras (cido ascrbico 0,1%, cistena 0,1%, tioglicolato de sdio 0,1%) que se combinam com o oxignio e indicadores de oxi-reduo (azul de metileno, resazurina).
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Meios para o cultivo de bactrias simulam o habitat natural das bactrias. Pode ser adicionado sangue, soro animal, glicose, etc. Ex.: Brain Heart Infusion Agar BHI agar. Meios para o cultivo de fungos os fungos podem crescer em uma mistura simples contendo glicose, uma fonte de nitrognio inorgnico ou orgnico e alguns minerais. Em geral esses meios tm uma concentrao maior de acar (4%) e um pH menor (3,8 a 5,6) que o meio para cultivo bacteriano (pH 6,5 a 7,5). Ex.: Sabouraud Agar.
MTODOS DE CULTIVO
Inoculao Quando o inculo (material colocado no meio de cultura), obtido de uma suspenso original da amostra, colocado dentro ou sobre um meio geleificado (gar), as clulas so imobilizadas e cada uma ir se multiplicar produzindo uma colnia isolada. Cada colnia nada mais do que clulas individuais agrupadas, com ancestral nico, visvel a olho nu. Tcnica de esgotamento por estrias: atravs de uma ala ou agulha de semeadura esgota-se o material por meio de estrias na superfcie do meio.
Tcnica da semeadura em superfcie: o inculo espalhado na superfcie do gar com o auxlio de uma ala de vidro (ala de Digralsky). Mtodo de pour-plate: uma suspenso de clulas misturada com Agar fundido a 45C, que se verte em uma placa de Petri. Quando o gar se solidifica, as clulas so nele imobilizadas e crescem, formando colnias. Se a suspenso de clulas que ser inoculada foi previamente diluda, as colnias formadas estaro bem separadas, com alta probabilidade de ser derivada de uma nica clula. Mas para se ter certeza disso necessrio repicar uma colnia do tipo desejado, suspend-la em soluo apropriada e replaque-la. Este procedimento dever ser repetido quantas vezes for necessrio, o que ir assegurar a obteno de uma cultura pura. Um outro mtodo de obteno de cultura pura o de diluio com extino. A suspenso original da amostra diluda seriadamente e semeiam-se amostras de cada diluio. Se apenas algumas amostras de uma diluio particular exibirem crescimento,
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presume-se que essas culturas se originaram a partir de clulas isoladas. Este mtodo utilizado somente quando no possvel o cultivo em placa por algum motivo e deve ser empregado apenas para se isolar o tipo de organismo predominante em uma populao mista.
ISOLAMENTO DE AERBIOS
Estes microrganismos requerem oxignio para sua sobrevivncia. Aps a semeadura em placas ou tubos com meio de cultura, estes so mantidos em estufa a 37C em presena de oxignio do ar atmosfrico. Existem grupos de microrganismos, como a Neisseria gonorrohoeae, que necessitam nveis elevados de dixido de carbono (CO2), neste caso pode ser utilizado o mtodo da jarra microaerfila. Aps semeados, os meio so colocados dentro da jarra juntamente com uma vela acesa que ento fechada hermeticamente. Aps a vela se apagar ser obtida uma quantidade reduzida de oxignio livre e um teor de dixido de carbono de aproximadamente 10%.
ISOLAMENTO DE ANAERBIOS
Durante a preparao dos meios, estes so fervidos para que a maior parte do oxignio dissolvido seja retirada. O gs nitrognio livre de oxignio colocado nos tubos contendo o meio, e ento um agente redutor deve ser adicionado (normalmente cistena), o qual remove os ltimos traos de oxignio. Os meio so esterilizados em autoclave na completa ausncia de oxignio. Cmara de anaerobiose: a manipulao dos microrganismos realizada dentro da cmara que contm luvas especiais acopladas parede da cmara. A atmosfera dentro da cmara uma mistura de hidrognio, dixido de carbono e nitrognio. O material introduzido ou removido da cmara por meio de um sistema fechado para o ar. Qualquer resduo de oxignio na cmara removido pela reao com o hidrognio, na presena do catalisador paldio. Jarras de anaerobiose: os meios inoculados so colocados em uma jarra juntamente com um envelope que contm substncias qumicas que geram hidrognio e dixido de carbono. Este sistema inadeqado para o cultivo de anaerbios estritos. Mtodo de Veillon: o microrganismo inoculado em meio slido em coluna alta, crescendo no fundo do tubo de ensaio. Para os anaerbios so utilizados meios reduzidos, que so meios de cultura com a adio de um agente redutor (ex.: tioglicolato de sdio), que so capazes de absorver o oxignio ou gerar H2 e CO2.
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MEDIDA DO CRESCIMENTO DA POPULAO MICROBIANA Existe uma variedade de tcnicas para quantificar o crescimento bacteriano. Os dois mtodos quantitativos mais comuns so aqueles que avaliam o nmero de clulas - UFC/mL Unidade Formadora de Colnias por mL ex.: Contagem celular microscpica ou eletrnica, contagem em placa ou atravs de membrana filtrante e aqueles que medem o peso celular ou ainda atravs da estimativa de unidades de absorbncia da massa de clulas em caldo ou outras suspenses (turbidez). Caractersticas Morfolgicas Os microrganismos podem ser observados ao microscpio ptico utilizando-se preparaes fixadas e coradas. Preparaes a fresco (em gota pendente ou preparaes entre lmina e lamnula), so teis quando a estrutura do microrganismo pode ser distorcida pelo calor ou agentes qumicos utilizados na preparao do material seco e corado, podendo ser utilizadas tambm quando o microrganismo no se cora facilmente ou para observar motilidade ou ingesto de alimentos particulados. As tcnicas de colorao servem para mostrar as vrias estruturas dos microrganismos (flagelos, membranas, cpsulas), identificar suas estruturas internas e ajudar a identificar e separar microrganismos similares. As coloraes podem ser feitas com um ou mais corantes. Colorao simples: realizada com uma nica soluo corante. As clulas coram-se uniformemente com esta tcnica. (ex.: Violeta de genciana) Colorao diferencial: envolve mais de uma soluo corante. Evidencia diferenas entre as clulas microbianas ou parte das clulas. (ex.: Colorao de Gram, Colorao de Zihel-Nielsen) Colorao de Gram O microbiologista pode utilizar a colorao de Gram do material obtido de colnias isoladas para obter, atravs de observao ao microscpio ptico, maiores informaes sobre a morfologia celular. A maioria das bactrias pode ser dividida em dois grupos distintos de acordo com os resultados apresentados pelo Gram: Bactrias Gram-positivas coram-se em violeta escuro Bactrias Gram-negativas coram-se em vermelho Essa diferena na colorao est relacionada com a espessura e estrutura das paredes celulares das bactrias. Caractersticas Metablicas Existem vrios testes laboratoriais que podem determinar a atividade metablica (metabolismo oxidativo, metabolismo fermentativo, catabolismo protico) de um organismo. O registro das reaes realizadas por uma espcie microbiana til e muitasvezes essencial para sua identificao Caractersticas Fisiolgicas Condies fsicas como a atmosfera gasosa, a temperatura, o pH, a luminosidade e os fatores de crescimento prprios de cada microrganismo tambm fornecem parmetros para a identificao. Por exemplo, os microrganismos do corpo humano crescem a 35C e os do oceano a temperaturas entre 4 e 20C. Caractersticas Antignicas
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Uma clula microbiana apresenta estruturas fsicas em sua superfcie que podem agir como antgeno e induzir, desta forma, a produo de anticorpos. Os anticorpos produzidos em animais de laboratrio podem ser usados para detectar a presena de antgenos nicos em culturas bacterianas e so usados para caracterizar microrganismos. Caractersticas patognicas A inoculao do microrganismo em hospedeiro sensvel (animal, plantas ou micrbios), com a finalidade de reproduzir a doena, poder determinar se este ou no um patgeno. Caractersticas genticas Atravs dos avanos na biologia molecular surgiram tcnicas que permitem realizar anlises genticas para classificar ou identificar os microrganismos ou compreender a sua atividade, atravs de mtodos mais sensveis e precisos.
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O termo microbiota normal refere-se aos microrganismos presentes regularmente em determinados locais do corpo. Se removidos, prontamente se recompem. a tambm chamada microbiota residente. De 10 a 20% das pessoas normais da comunidade extra hospitalar, so portadoras de Staphylococcus aureus, em concentrao elevada, na nasofaringe. Esse estado de portador assintomico que pode ser persistente, intermitente ou transitrio, pode alcanar 60 a 90% das pessoas em atividades hospitalares. Os surtos ocasionais devidos ao Staphylococcus aureus, principalmente em enfermarias re recm-natos, podem ser rastreados e relacionados com a pele e fossas nasais das pessoas que trabalham nestes locais. H tambm a microbiota transitria, que pode ser constituda por microrganismos no patognicos (de baixo potencial patognico) ou alto potencial patognico e que habitam a pele e mucosas por horas, dias ou semanas. A microbiota residente benfica quando evita a colonizao pelas patognicas, por diversos mecanismos: competio por substncias nutritivas, inibio por produtos metablicos txicos, competio por receptores das culas do hospedeiro, etc. A microbiota normal tambm pode provocar doenas nos seguintes casos: 1. Quando deslocada do seu ambiente para outros rgos ou tecidos. Exemplo: Streptococcus do grupo viridans incuo na orofaringe, causa endocardite quando se instala no corao. 2. Provocando enfermidades em pessoas debilitadas ou imunodeprimidas.
A PELE
A pele possui uma microbiota residente bem definida. Porm, pela sua exposio ao meio ambiente, tem facilidade de apresentar a microbiota transitria. O microrganismo predominante o Staphylococcus epidermidis, com cerca de 103 a 104/cm2 de pele. A maioria est localizada no extrato crneo, outros habitam folulos pilosos e atuam como reservatrio para restabelecimento aps a lavagem.
TRATO RESPIRATRIO
Grande nmero de bactrias coloniza as fossas nasais, garganta e boca. Mas os brnquios inferiores e os alvolos contm poucos ou nenhum microrganismo.
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Prof. Fabricio Smaha - Microbiologia - FAEMA Pgina 35
Cerca de 50% da microbiota da garganta constituda por ESTREPTOCOCOS: Streptococcus do grupo viridans (Streptococcus salivarius, Streptococcus sanguis, Streptococcus mitis, Streptococcus mutans) e o Streptococcus pyogenes, Neisseria sp. no patognica ou patognica, Haemophilus influenzae, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, fusobactrias, lactobacilos, formas onduladas, etc. A cavidade bucal apresenta uma das mais concentradas e variadas populaes microbianas (29 espcies) e cuja localizao principal estno dorso da lngua, sulco gengival e placa dentria. A contagem bacteriana em material da lngua apresenta nmeros que variam de 43 milhes a 5,5 bilhes por ml de saliva. Do sulco gengival e da placa a quantidade pelo menos 100 vezes maior, aproximadamente 200 bilhes por grama. Os estreptococos constituem o grupo mais numeroso, a metade das viveis. (Microbiologia Oral, Burnet, Sherp, Schuster 4a edio).
MUCOSA NASAL
A mucosa nasal habitada por estreptococos e estafilococos, destes o mais importante o Staphylococcus aureus. O Staphylococcus aureus pode ser disseminado causando doenas em hospitais: em enfermarias de recm-nascidos, de queimados, de imunodeprimidos e dos submetidos cirurgia.
Bexiga: a urina na bexiga estril em pessoas ss, mas ao passar pela poro final da uretra, pode se contaminar com Staphylococcus epidermidis, coliformes, difterides e estreptococos no hemolticos. * Staphylococcus saprophyticus faz infeco em TGU inferior em mulheres jovens. A rea em torno da uretra masculina e feminina pode apresentar Mycobacterium smegmatis (BAAR). A candidase torna-se uma das doenas que mais acomete mulheres em idade frtil no mundo atual. A vagina uma regio favorvel ao crescimento de microrganismos, como a Candida albicans, o Thichomonas vaginalis e os bacilos de Doderlin (gram positivos).
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BACTRIAS PATOGNICAS
________________________________________________________________ 1) ESTAFILOCOCOS, ESTREPTOCOCOS, ENTEROCOCOS E OUTROS COCOS GRAM POSITIVOS
Os Estafilococos so as bactrias no esporuladas que mais resistem no meio ambiente. Podem sobreviver por meses em amostras clnicas secas, so relativamente resistentes ao calor e podem tolerar uma concentrao aumentada de sal. No entanto, apesar dos antimicrobianos existentes, da melhora das condies sanitrias e das medidas de controle de infeco hospitalar, este microrganismo continua a ser um dos mais importantes patgenos para o homem. Indivduos sadios so colonizados intermitentemente por Staphylococcus aureus desde a amamentao, e podem albergar o microrganismo na nasofaringe, ocasionalmente na pele e raramente na vagina. A partir destes stios, o S. aureus pode contaminar a pele e membranas mucosas do paciente, objetos inanimados ou outros pacientes por contato direto ou por aerossol, ocasionando infeces letais por conta dos fatores de virulncia ou atravs de resistncia aos antimicrobianos atualmente utilizados. Os estreptococos foram os maiores causadores de infeco hospitalar na era prantibitica, causando surtos de infeco e morte de purperas. Apesar de no serem atualmente uma importante causa de infeco hospitalar, provocam, no entanto, doenas muito graves e muitas vezes letais, mesmo em pacientes imunocompetentes, sendo importante o rpido diagnstico deste agente. J os enterococos apresentam importncia crescente como causadores de infeco hospitalar, pelo aparecimento de resistncia quase total aos antibiticos tradicionalmente utilizados para tratamento destas infeces. Os Enterococos mais comumente isolados so: Enterococcus faecalis (90% dos casos) e Enterococcus faecium, com grande capacidade de colonizao de pacientes e de contaminarem superfcies ou equipamentos utilizados em hospitais. Possuem sensibilidade ou resistncia varivel aos antibiticos chamados glicopeptdios como a vancomicina e teicoplanina.
2. NEISSERIAS
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As espcies de Neisseria tem como caracterstica morfolgica serem diplococos Gram negativos mais achatadas nas laterais, dando a forma de rins ou dois gros de feijo unidos por uma ponte. Apenas a espcie N. elongata difere desta morfologia, sendo diplobacilos ou diplococo-bacilo. Todas utilizam carboidratos por via oxidativa e no fermentativa, sendo baixa a acidez, de modo que podem acontecer reaes duvidosas com o meio CTA (Cistyne Tripticase Agar) com indicador vermelho de fenol, que sempre foi muito utilizado em rotina. Quanto a sua importncia clnica, a maioria das neisserias comensal vivendo em mucosas de humanos e animais.
3. ENTEROBACTRIAS
a maior e mais heterognea famlia de bactrias Gram negativas de importncia mdica. So considerados atualmente: 27 gneros / 102 espcies / 08 grupos indefinidos. Independente da complexidade, mais de 95% das amostras implicadas em caso clnicos so colocadas em 25 espcies, sendo possivel o isolamento de enterobactrias de qualquer amostra clnica.
IMPORTNCIA CLNICA A maioria das enterobactrias encontrada no trato gastrointestinal de humanos, no reino animal, na gua, solo e vegetais. Alguns tambm so considerados enteropatgenos por causarem preferencialmente infeces gastrointestinais como a Salmonella typhi, outras salmonellas, Shigella spp., Yersinia enterocolitica e vrios sorotipos de Escherichia coli, embora possam tambm causar infeco em outros locais. As enterobactrias representam 80% ou mais de todos os Gram negativos de importncia clnica isolados na rotina microbiolgica So responsveis por de cerca de 70% das infeces urinrias e 50% das septicemias. INFECES HOSPITALARES E NA COMUNIDADE
Nas infeces hospitalares: As enterobactrias que atualmente predominam so: Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp. Principais gneros das enterobactrias (cerca de 99% dos isolamentos de enterobactrias de importncia clnica): Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Proteus spp., Providencia spp., Morganella spp., Citrobacter spp., Salmonella spp., Shigella spp., Serratia spp. As enterobactrias menos isoladas so: Edwarsiella spp., Hafnia spp., Yersinia spp.
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Baseado em dados de prevalncia e importncia clnica, considera-se necessrio que os laboratrios de microbiologia utilizem metodologia que permita discriminar com 80% de acerto osgneros e espcies considerados abaixo: - Escherichia coli - Shigella spp. - Salmonella typhi - Salmonella spp. - Citrobacter freundii - Proteus mirabilis - Citrobacter koseri - Klebsiella pneumoniae - Klebsiella oxytoca - Providencia spp. - Serratia spp. - Proteus vulgaris - Enterobacter aerogenes - Enterobacter cloacae - Enterobacter cloacae - Enterobacter agglomerans - Yersinia enterocolitica - Morganella morganii Nas infeces da comunidade: *Destacam-se: Escherichia coli, Klebsiella spp., Proteus spp., Salmonella spp., Shigella spp.
4. BASTONETES NO FERMENTADORES
Os bacilos Gram negativos classificados como no fermentadores (BNFs) so microrganismos aerbios, no esporulados, que se caracterizam pelo fato de serem incapazes de utilizar carboidratos como fonte de energia atravs de fermentao, degradando-os pela via oxidativa. A caracterizao deste grupo de bactrias de grande importncia nos casos de infeco hospitalar. Embora a sua incidncia, mesmo em hospitais, seja pequena quando comparada a outros agentes etiolgicos, geralmente eles apresentam resistncia elevada a vrios antibiticos e so capazes de causar infeces graves. Estas bactrias colonizam e causam infeces, em especial, em pacientes graves oriundos de CTI e submetidos procedimentos invasivos, sendo importante classific-los at o nvel de gnero e espcie. O nmero de bactrias no fermentadoras conhecidas muito grande. Foram selecionadas aquelas consideradas na atualidade de maior importncia clnica (*) e as demais para diagnstico diferencial entre si.
BNFs de importncia clnica: Acinetobacter spp. Alcaligenes spp. Achromobacter spp Bordetella bronchyseptica Burkholderia cepacia Chryseobacterium (Flavobacterium) spp. Methylobacterium spp. Pgina 39
Moraxella spp. Pseudomonas aeruginosa Pseudomanas fluorescens Pseudomonas luteola Pseudomanas oryzihabitans Pseudomanas putida Pseudomonas stutzeri Pseudomanas pseudomallei Roseomonas spp. Stenotrophomonas spp. Shewanella spp. Sphingobacterium spp. Sphingomonas paucimobilis
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PRINCIPAIS CAUSAS INFECCIOSAS DE DESINTERIA Nas ltimas duas dcadas o conhecimento sobre agentes virais, bacterianos e protozorios e os mecanismos pelos quais a diarria produzida (induzida) expandiu-se bastante. Por exemplo: Retocolite ulcerativa e doena de Crohn. Diarria crnica causada por Cryptosporidium spp. e por Isospora spp., reconhecidos como um dos maiores problemas em pacientes aidticos Surtos de diarria devido contaminao da rede de gua pblica com Giardia lamblia. A deteco dos patgenos entricos bacterianos complicada pela presena de microflora fecal normal abundante e complexa. Tal flora aparece logo aps o nascimento, envolvendo o intestino grosso durante o primeiro ms de vida, principalmente em resposta mudana da dieta alimentar. Por volta do primeiro aniversrio, a microflora intestinal totalmente estabelecida e permanece durante a vida inteira, a menos que seja induzida uma grande mudana pela terapia antimicrobiana. A flora fecal obtida de adulto normal contm entre 1011 -1012 microrganismos por grama de fezes, das quais 99% so anaerbios estritos, predominantemente os pertencentes aos gneros: Bacteroides, Fusobacterium, Bifidobacterium, Eubacterium e Propionibacterium. Quando comparados com a microflora fecal facultativa, esta mais modesta em nmero e variedade, com 108 - 109 organismos por grama de fezes. O desafio para o microbiologista clnico a tentativa de detectar vrios enteropatgenos em meio incrivelmente complexo. As infeces intestinais ocorrem em funo de fatores ligados ao hospedeiro, como baixa acidez gstrica que reduz significativamente a dose infectante, como sua microbiota, imunidade, motilidade, etc. E fatores ligados ao agente, destacando-se os fatores de virulncia e inculo.
INFECES URINRIAS
A espcie da flora intestinal mais freqentemente associada com infeces urinrias a Escherichia coli. Na realidade, essa espcie a responsvel por 80 a 90% das infeces urinrias adquiridas na comunidade. A infeco das vias urinrias normalmente se fazem por via ascendente, isto , a E. coli proveniente dos intestinos atinge a uretra, passando em seguida para a bexiga, e, eventualmente, vias urinrias superiores. Devido curta distncia existente entre o nus e a uretra feminina, as infeces urinrias so mais freqentes na mulher. A espcie E. coli inclui um grande nmero de variedades, mas somente algumas so patognicas para as vias urinrias. Essas se caracterizam pela presena de fmbrias de adeso e produo de hemolisinas. Alteraes do fluxo urinrio, anatmicas ou mesmo funcionais, so fatores importantes na gnese das infeces urinrias.
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PATOGNESE
As trs possibilidades de um microrganismo alcanar o trato urinrio e causar infeco so: Via ascendente: o microrganismo poder atingir atravs da uretra, a bexiga, ureter e o rim. Esta via a mais freqente, principalmente em mulheres (pela menor extenso da uretra) e em pacientes submetidos instrumentao do trato urinrio. Via hematognica: ocorre devido a intensa vascularizao do rim podendo o mesmo ser comprometido em qualquer infeco sistmica; a via de eleio para ITU(s) por alguns microrganismos como Staphylococcus aureus, Mycobacterium tuberculosis, Histoplasma spp., sendo tambm a principal via das ITU(s) em neonatos. Via linftica: rara embora haja a possibilidade de microrganismos alcanarem o rim pelas conexes linfticas entre o intestino e o rim e/ou entre o trato urinrio inferior e superior.
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Faringite Estreptocccica
Quase 70% das dores de garganta agudas so causadas por vus. A infeco mais frequnte do trato respiratrio superior manifesta-se sob a forma de faringite e tonsilite (amigdalite) causada por Streptococcus pyogenes (ESTREPTOCOCO BETA HEMOLTICO DO GRUPO A DE LANCEFIELD) = angina estreptoccica (90%). uma infeco que requer ateno especial, visto que, alm de disseminar-se a outros locais causando sinusite, otite, mastoidite e vias areas inferiores provocando broncopneumonias, pneumonias e empiema (pus no espao pleural), ainda pode provocar seqelas graves psestreptoccicas como Febre Reumtica e Glomerulonefrite Aguda (GNA). As caractersticas clssicas so semelhantes ao Haemophilus e Moraxella. Nas tonsilas palatinas existem as criptas amigdalianas, que so invaginaes da mucosa, aumentando a superfcie da tonsila, promovendo uma maior exposio de eptopos aos ndulos linfticos confluentes que existem subjacentes mucosa. Nessas criptas no h drenagem de ductos das glndulas salivares menores, portanto ali o acmulo de material facilitado. Durante uma tonsilite, alm da presena de febre na maioria dos casos, acumula-se exsudato purulento nessas regies, dando o aspecto de placas amarelo-esbranquiadas sobre as tonsilas. Essas placas so facilmente removidas com swab e esse o material que se utiliza para fazer semeadura em gar sangue.
PERITONITES
Essas infeces ocorrem quando o contedo intestinal entra na cavidade peritoneal. O risco de desenvolver uma infeco est diretamente relacionado com o local da perfurao intestinal e flora associada. Assim, o risco relativamente pequeno quando da perfurao no trato intestinal superior, uma vez que a flora escassa nessas partes dos intestinos. Ao contrrio, perfuraes do intestino grosso esto associadas a elevado risco de infeco. A bacteriologia da infeco peritoneal caracteriza-se por uma flora polimicrobiana constituda de bactrias aerbias e anaerbias. As anaerbias mais freqentes so bacterides, clostrdeos e cocos anaerbios. Entre os aerbios, os mais comuns so E. coli, coliformes e enterococos. interessante que dentre as centenas de espcies que habitam os clons, somente algumas (em torno de cinco) participam da peritonite. Certamente essas so dotadas de fatores de virulncia que lhes qualificam para causar infeco.
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INFECES INTRAVASCULARES
As bactrias da flora normal passam continuamente em pequenas quantidades atravs da barreira mucosa para os ndulos linfticos mesentricos e outros stios extra-intestinais por um processo chamado translocao. No hospedeiro normal, esses baixos nmeros de bactrias translocantes so mortos em rota ou nos ndulos linfticos, provavelmente por macrfagos, no se disseminando para outros locais, como fgado, bao e sangue. De fato, a presena dessas bactrias translocantes em nmeros baixos, na lmina prpria e ndulos linfticos, possivelmente, um mecanismo normal benfico para estimular o sistema imune do hospedeiro a responder mais rapidamente a uma infeco por patgenos exgenos. Entretanto essa hiptese ainda no foi investigada. As bactrias da flora intestinal so patgenos oportunistas e as bactrias translocantes podem causar infeces mortais em pacientes debilitados, especialmente imunodeprimidos. Embora bactrias anaerbias (bacterides, fusobactrias) possam atravessar a mucosa, as enterobactrias (E. coli, Enterobacter e Proteus) translocam-se mais eficientemente que os anaerbios estritos, em modelos animais e no homem. De fato, as enterobactrias so as principais causas de Septicemia em pacientes hospitalizados.
INFECES GENITAIS
Os microrganismos que colonizam o trato genital feminino incluem lactobacilos, difterides, Gardnerella vaginalis, estafilococos coagulase negativos, Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Enterococcus spp., estreptococos alfa e gama hemolticos, Escherichia coli e leveduras. A uretra masculina normalmente contm relativamente poucos microrganismos encontrados na pele, tais como: estafilococos, micrococos, corynebactrias e estreptococos alfa hemolticos. Muitas infeces do trato genital feminino tm origem em microrganismos endgenos. A patogenicidade deles pode ser facilitada por fatores do hospedeiro, como por infeces primrias causadas por outros microrganismos como: herpes simplex vrus (HSV), o vrus papiloma humano (HPV), Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, ou ainda com infeces especficas como aquelas causadas pela Neisseria gonorrhoeae. O Laboratrio de Microbiologia deve estar capacitado para detectar os principais agentes das doenas sexualmente transmissveis: Neisseria gonorrhoeae, Treponema pallidum, Haemophilus ducreyi, Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum e Mycoplasma hominis.
VAGINOSE BACTERIANA
Esta doena, tambm conhecida como vaginite anaerbia, ainda no foi claramente definida. A sintomatologia tpica queixa de mau odor, muitas vezes associado ao aumento do fluido vaginal, frequntemente mais notado aps a menstruao ou coito.
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s vezes a paciente pode se queixar de prurido vulvar ou erupo perivulvar. O pH vaginal geralmente maior que 4,5. O principal agente etiolgico envolvido a Gardnerella vaginalis. Uma das caractersticas marcantes da secreo de vaginose bacteriana microscopia ptica a presena de clue cells (clulas epiteliais da vagina cobertas de bactrias). A patogenicidade da Gardnerella vaginalis ainda no foi estabelecida. considerada por alguns pesquisadores como resultado do desequilbrio entre a microbiota vaginal normal, com a relao sinrgica entre o nmero aumentado de Gardnerella e anaerbios.
Bactria Mycobacterium leprae Mycobacterium tuberculosis Clostridium tetani Neisseria gonorrheae Streptococcus pneumoniae Salmonella thuphi Corynebacterium diphteriae Vibrio cholerae Brucella melitensis Yersinia pestis Treponema pallidum Salmonella sp./ Shigella sp. Leptospira interrogans
Doena Causada Hansenase ou Lepra Tuberculose Ttano Gonorria Pneumonia Febre Tifide Difteria Clera Brucelose Peste Bubnica Sfilis Disenterias Lepstospirose
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ANTIBIOGRAMA
Um antibiograma um ensaio que mede a susceptibilidade/resistncia de uma bactria a um ou mais agentes antimicrobianos. Seu objetivo tanto a anlise do espectro de sensibilidade/resistncia a drogas de uma bactria quanto a determinao da concentrao mnima inibitria. O gar de Mueller Hinton recomendado pelo U.S. Food and Drug Administration (FDA) e pela Organizao Mundial da Sade (OMS) para o teste de sensibilidade/resistncia a antibiticos de bactrias Gram positivas e Gram negativas, aerbicas ou anaerbicas facultativas, comumente encontradas em alimentos e espcimes clnicos. O teste, denominado antibiograma, feito utilizando-se discos de difuso antibiticos depositados sobre a superfcie do meio onde se inoculou, por espalhamento, uma amostra de uma cultura bacteriana previamente crescida em meio lquido. Material Pipetador com volume fixo de 100 l, ponteiras esterilizadas, ala de Drigalski esterilizada, placas de Petri contendo meio Mueller Hinton, discos de difuso de antibiticos, cultura bacteriana em Caldo Nutriente ou meio LB. Procedimento Semear, por espalhamento com ala de Drigalski ou com uma zaragatoa esterilizada, uma alquota de 100 l da cultura bacteriana em uma placa de Petri contendo meio gar de Mueller Hinton. Em seguida, depositar discos de papel filtro impregnados, separadamente, com quantidades determinadas de um antibitico especfico sobre a superfcie do meio em disposio ordenada. Incubar a placa, invertidas, a 37C por cerca de 24 horas. Resultados A formao de um halo transparente sobre a superfcie do meio, ao redor de um disco de antibitico, indica uma regio com ausncia de crescimento bacteriano, revelando a ao inibitria do agente antimicrobiano sobre a bactria ensaiada.
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OS FUNGOS E AS MICOSES
CARACTERSTICAS GERAIS
So seres eucariontes, uni ou pluricelulares (99% so pluri) SEM CLOROFILA e HETERTROFOS FUNGOS NO FORMAM TECIDOS VERDADEIROS (no mnimo formam hifas) Aproximam-se muito mais do Reino Animmalia do que do Reino Plantae: A rmazenam GLICOGNIO Parede celular de QUITINA A digesto pode ser extracorprea, por meio de enzimas no substrado. Seres UBIQUITRIOS: vivem em qualquer lugar que tenha matria orgnica em decomposio (ex: tecidos necrosados). Podem ser aerbios e anaerbios. Exemplos: Mofos, bolores, fermentos, levedos, leveduras, cogumentos, etc.
MODOS DE VIDA
Saprbios: obtem seus alimentos decompondo organismos mortos. Vivem sobre a matria orgnica. Mutualistas: sem grande importncia mdica. So os liquens (cianobactria + fungo) e micorrizas (fungo + raiz de fanergama). Predadores: capturam pequenos animais. Parasitas: obtm alimentos de organismos vivos. Ex: Candida albicans, Trycophyton sp.
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2. LEVEDURAS Formato esfrico, oval, tem parede dupla ao MO. Aspecto macroscpico cremoso, pastoso, gelatinoso. ASPECTO MIDO Exemplos: Cryptococcus neoformans, Candida albicans.
3. DIMRFICOS podem ser bolores e leveduras, depende da condio do ambiente (umidade, temperatura). Causam doenas endmicas e so potentes patgenos em indivduos imunocomprometidos (principalmente doenas pulmonares). Ex: Histoplasma capsulatum, Paracocciodioides brasiliensis
HIFAS: Nos bolores, encontramos um corpo formado por HIFAS (filamentos multinucleados), no por tecidos. As hifas so pequenos filamentos secos que correspondem ao corpo do fungo, denominado MICLIO. Miclio coletivo de hifas.
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H dois tipos de miclio: o vegetativo (hifas que adentram nos tecidos ou substrato em busca de alimento) e o reprodutivo, em que as hifas tm a funo de propagao e d origem aos esporos. O reprodutivo chama-se de corpo de frutificao e geralmente so os que ficam pra fora da pele nas leses cutneas.
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A Candida o nico fungo pseudo-filamentoso, isto , que forma falsas hifas. O talo unicelular e a reproduo por brotamento; porm os brotos formados alongam-se, e brotando pelas extremidades conservam-se em posio seriada, resultando a formao de pseudo-hifas ou pseudofilamentos. As colnias deste tipo de miclio so do tipo leveduriforme. A Candida vive nas mucosas digestiva, respiratria e genital como saproba, aproveitando uma debilidade do organismo ela passa a ser patognica: passa da forma de levedura para a forma pseudofilamentosa (dimorfismo).
FUNGOS E MEDICINA
Aproximadamente 1.000.000 espcies patognicas. Os fungos patognicos podem ser classificados com base nas suas formas de crescimento ou no tipo de infeco que causam. Micotoxicose: NO sinnimo de micose. Micose infeco por fungo; micotoxicose ingesto e/ou inalao de fungo que produz produtos txicos ao organismo humano (ex: alcalides), gerando um quadro de intoxicao por substncias orgnicas.
Doenas de Hipersensibilidade: Respostas alrgicas que certas pessoas tm quando vestem um casaco que estava h muito tempo guardado no armrio (ascomicetos), por exemplo. Neste caso, o fungo no se desenvolve nos tecidos. As manifestaes patolgicas ocorrem em virtude da produo de imunoglobulinas pelos linfcitos B sensibilizados. Essas reaes alrgicas por esporos fngicos (os imungenos em questo) se enquadram nas reaes de hipersensibilidade tipo I (anafilaxia). Exemplos de anafilaxia por fungos: renite alrgica, asma brnquica, alveolite, etc.
Tipos de Micoses
1) SUPERFICIAIS: Colonizam as camadas mais superficias da pele (crnea e lcida), incluindo os pros. Provocam alteraes de importncia esttica.
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a) Ptirase Versicolor: Seu agente etiolgico a Malassezia furfur. Caracteriza-se por leses acrmicas ou hiperpigmentadas, de bordos delimitados, localizadas no couro cabeludo, trax, abdome, pescoo e face, principalmente. O tratamento pode ser feito com sulfeto de selnio.
b) Tinha Nigra: O agente etiolgico a Exophiala werneckii, um fungo dimrfico que produz melanina, conferindo uma colorao marrom leso. normalmente assintomtica, e as manifestaes clssicas, quando existem, consistem em leses maculares bem demarcadas (manchas pigmentadas na pele), que so elevadas acima da superfcie. As leses so observadas com maior frequncia em palmas das mos e plantas dos ps. c) Piedra: H dois tipos de Piedra a Piedra Branca e a Piedra Negra. A Piedra Negra uma infeco nodular dos fios de cabelo causada pela Piedraia hortae. A Piedra Branca decorrente da infeco por Trichosporon beigelii, manifesta-se na forma de ndulos amarelados, maiores e de consistncia mais mole nos plos (axilares, pbicos, barba e cabelos). O tratamento consiste na remoo dos plos e aplicao de antifngicos tpicos. Muitas vezes estas duas doenas esto associadas falta de higiene do paciente.
2) CUTNEAS : Localizam-se mais profundamente na epiderme (camada granulosa e basal), incluindo doenas invasivas de plos e unhas. So as DERMATOMICOSES, por isso, os fungos etiolgicos so denominados DERMATFITOS (que vivem s custas da queratina da pele e das unhas) e por espcies do gnero Candida.
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As manifestaes clnicas dos dermatfitos so tambm conhecidas como tinha ou tinea. O termo tinha (ou tinea) origina-se do Latim e significa verme ou traa. A adio do outro termo indica o local anatmico afetado.
b) Dermatomicoses por Candida sp.: Ocorrem principalmente pela contaminao com Candida albicans. Podem determinar leses de pele, plos, unhas e mucosas de indivduos que apresentam fatores predisponentes como obesidade, diabetes mellitus, uso prolongado de antibiticos ou glicocorticides e indivduos que manuseiam muita gua.
As leses mais freqentes so em unhas e espaos interdigitais das mos. A leso que se encontra ao redor do leito ungueal (paroniquia) tambm comum. A paronquia uma tumefao anormal ao redor das unhas que pode ser causada por diversos agentes, como o Staphylococcus aureus.
3) SUBCUTNEAS: Os fungos que provocam micoses subcutneas normalmente residem no solo e na vegetao. Penetram na pele ou tecido subcutneo por inoculao traumtica com material contaminado. Em geral as leses tornam-se granulomatosas (reao de hipersensibilidade tipo IV) e propagam-se lentamente a partir da rea de implantao. So infeces que afetam a derme, tecidos subcutneos, mculos e fscias. Podem ser doenas
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ocupacionais por causa do tipo de trauma. Ex: cortadores de coco. TEM QUE HAVER TRAUMA CUTNEO PARA ATINGUIR A DERME (TECIDO CONJUNTIVO). a) Esporotricose: uma infeco crnica caracterizada por leses nodulares e ulcerativas (local correto para a coleta do material para exame microscpico) que se desenvolve ao longo dos vasos linfticos. Os ndulos amolecem, rompem-se e liberam exsudato purulento. tambm conhecida como Doena do Jardineiro e do Floricultor ( uma doena ocupacional). O agente etiolgico o fungo Sporothrix schenckii. um fungo saprfito encontrado no solo, nas roseiras, nos arbustos, em cascas de rvores e nas brifitas. A infeco acontece mediante a um traumatismo. Surge como uma pequena ppula ou ndulo subcutneo que se desenvolve entre 1 semana e 6 meses. Posteriormente atinge as cadeias linfticas. Outras formas raras de esporotricose incluem soluo saturada de iodeto de potssio, itraconazol e os demais derivados imidazicos. Quando a infeco assume carter sistmico, o tratamento intrahospitalar com Anfotericina B.
b) Cromoblastomicose (cromomicose): Crescimento de ndulos verrucosos que aparecem nos locais de inoculao. Com o tempo assume o aspecto de couve flor. Os pontos enegrecidos so os locais certos para a coleta do material para exame. O agente etiolgico predominante no Brasil a Fonsecaea pedrosoi. Mas h outras espcies que podem provocar a cromoblastomicose: Phialophora verrucosa, Rhinocladiella aquaspersa, Fonsecaea compacta e Cladosporidium carrionii. Esses microrganismos habitam o solo e coletivamente so denominados fungos dematieos, com parede celular melaninizada. uma doena comum em trabalhadores rurais, principalmente nas reas descobertas do corpo. O tratamento consiste na cauterizao e na remoo cirrgica das leses inicias. J na doena avanada, torna-se necessrio o uso de quimioterpicos. Existem outras micoses subcutneas, porm de incidncia muito baixa, entre elas a Feo-Hifomicose, o Micetoma Eumictico, a Zigomicose, a Lobomicose e a Rinosporidiose.
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4) SISTMICAS: Todos os fungos que causam infeces sistmicas so DIMRFICOS. Em meios de cultura simples (entre 24 e 28C) e na natureza formam colnias micelianas formadas por hifas (bolores). Nos tecidos e nos meios de cultura especiais (entre 35 e 37C), desenvolvem a forma de leveduras, que a forma parasitria. Localizam-se principalmente nos rgos internos e vceras podendo abranger muitos tecidos diferentes. H preferncia pelos pulmes. a) Paracoccidioidomicose (blastomicose Sul-Americana ou Micose de Lutz-Splendore Almeida): O agente etiolgico o fungo dimrfico Paracoccidioides brasiliensis. Aspectos Clnicos:
Aspecto radiogrfico do pulmo em asa de borboleta P resena de vesculas no sulco gengival (muitas vezes o diagnstico feito pelo cirurgio-dentista e o paciente chega ao mdico por encaminhamento) O 1 rgo de acometimento o pulmo; o 2 rgo a mucosa bucal. Muitas vezes leses na boca aparecem antes (at dois anos) das manifestaes pulmonares. a nica micose pulmonar que atinge o imunocompetente Na prtica clnica a paracoccidioidomicose chamada de PCM A lm do pulmo, pode fazer leso osteoltica, disseminar-se para o SNC, rgos genitais, TGI. s vezes o cirurgio encontra ao fazer uma laparotomia. A infeco pode resultar tanto da inoculao de estruturas do fungo consideradas infectantes, como a reativao de algum foco pr-existente. O nmero de homens afetados desproporcional ao nmero de mulheres (9:1). Esta diferena foi atribuda a fatores de alto risco, doena subjacente, desnutrio e diferenas hormonais. P neumonia por Paracoccidioides brasiliensis muito difcil de tratar. O tratamento consiste no uso prolongado de Itraconazol, algumas vezes associado a Sulfametoxazol e Trimetropim (Bactrim).
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5) OPORTUNISTAS: Inmeros fungos foram identificados como agentes etiolgicos de infeces oportunistas. Muitas vezes ocorre em ambientes hospitalares. Pacientes transplantados, usurios crnicos de glicocorticides e HIV positivos merecem ateno especial nesses casos, uma vez que a cura torna-se muito dificultada. a) Candidase, candidose e Candida sp. A Candida sp. o patgeno fngico mais comum do paciente imunocompetente. uma levedura oportunista em uma variedade de pacientes e em vrios stios do corpo. No intestino ela atua como agente de microbiota normal. A espcie mais comum, epidemiologicamente, a Candida albicans. Essa levedura gera diversos tipos de quadros clssicos como candidase bucal e candidase vaginal. Hoje em dia estes termos no so mais utilizados pela nmina anatmica moderna. Usa-se o termo CANDIDOSE para manifestaes na cavidade bucal e o termo CANDIDASE para as demais infeces por Candida sp. Alm disso, pode provocar alteraes cutneas, gastrointestinais e endocardites, particularmente em usurios de drogas ilcitas.
A candidose pode ser encontrada em uma variedade de pacientes imunocomprometidos, pessoas com uso de prteses odontolgicas mal adaptadas, portadores de diabetes mellitus, em tratamento com antibiticos de largo espectro, usurios crnicos de
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glicocorticides, xerostomia (hipoproduo de saliva) entre outros. A manifestao mais freqente se d por meio de placas esbranquiadas (forma pseudomembranosa) de fcil destaque com o auxlio de um algodo, principalmente em dorso de lngua e palato duro. H tambm a forma eritematosa, que se manifesta por meio de leses hiperemiadas. O tratamento pode ser feito com o uso tico de nistatina, anfotericina e derivados imidazicos. Se o paciente for imunocomprometido e/ou a infeco j tiver adquirido carter mais invasivo, deve se apelar para o uso de antifngicos sistmicos. * Causas comuns xerostomia: pacientes que fazem quimioterapia (que destri glndulas salivares colateralmente) e usurios de antidepressivos como inibidores da recaptao de serotonina (5-HT). Esses pacientes so fortes candidatos a possurem candidose.
A candidase vaginal uma das doenas que mais comumente acometem mulheres jovens, principalmente em pases de clima tropical como o Brasil. Esta patologia pode, inclusive, ser enquadrada dentro do grupo das DSTs, uma vez que o contato sexual uma das formas mais comuns de contgio. O homem tem a Candida albicans na microbiota normal peniana, portanto uma atividade sexual sem preservativo faria com que a mulher entrasse em contato direto com a levedura. Se ela estiver em uma queda imunolgica pode desenvolver a doena, bem como cultiva-la, fazendo sexo repetidamente com o mesmo parceiro (portador). Salienta-se tambm que as pessoas que fazem sexo oral sem proteo esto sujeitas a contrarem candidase por entrarem em contato com a microbiota normal do pnis. imprescindvel que o tratamento seja feito com o casal, ambos devem prosseguir com a terapia at a erradicao das leveduras.
b) Criptococose
O agente etiolgico o Cryptococcus neoformans. Um fungo leveduriforme que possui uma cpsula espessa de polissacardeos complexos ao redor de sua parede celular.
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um microrganismo euribionte, uma vez que o criptococo transmitido pelas fezes dos pombos. No pombo o fungo inativo, pois a cpsula de carboidrato no se desenvolve no interior da ave. Quando a levedura chega ao organismo humano, a cpsula se desenvolve a partir dos carboidratos do nosso metabolismo ( um fator de patogenicidade, junto a produo de melanina e enzimas). Por fim, e o fungo adquire sua verdadeira forma ativa e infectante. A inoculao geralmente pulmonar e assintomtica. Esse fungo tem tropismo pelo SNC (vem dos pulmes por via hematognica). Pode fazer meningite criproccica quando atinge as meninges. Acredita-se que o criptococo possa atravessar a barreira hematoenceflica via infeco de moncitos e/ou clulas endoteliais. Essa forma de meningite responsvel pela morte de muitos pacientes com AIDS e outros imunocomprometidos na imunidade celular. A resposta imunolgica do hospedeiro se faz pela ativao dos linfcitos CD4 e produo de IFN. No entanto alguns pacientes imunocompetentes so acometidos tambm, porm numa porcentagem bem menor e com sintomas mais brandos, alm de terem uma cura mais rgida e eficaz. Nos casos de meningite criptoccica, a levedura pode ser demonstrada no lquido crebro-espinhal. A identificao tambm pode ser feita pela deteco do antgeno no teste de aglutinao em ltex, usando ltex recoberto com anticorpos especficos. O tratamento engloba uma combinao entre anfotericina B e flucitosina, e pode ser monitorado pela queda na concentrao de antgenos no LCE. O prognstico varia muito de acordo com a doena de base do paciente; nos pacientes severamente imunocomprometidos, a mortalidade gira em torno de 50%. Nos pacientes com AIDS praticamente impossvel erradicar o microrganismo, mesmo com a terapia intensiva. Pacientes com leucemia, linfomas, LES, linfoma de Hodgkin ou sarcoidose merecem ateno especial tambm.
c) Aspergilose
O Aspergillus sp. ubiquitrio no meio ambiente e faz parte da microbiota normal do organismo humano. Seus esporos so regularmente inalados sem conseqncias danosas. um gnero que contm vrias espcies, das quais a que merece maior destaque o Aspergillus fumigatus, que pode provocar diversas manifestaes patolgicas, tais como: Aspergilose broncopulmonar alrgica, que, como seu nome sugere, uma resposta alrgica presena do antgeno. Aspergillus nos pulmes podem desencadear um processo de hipersensibilidade tipo I e culminar em asma brnquica. Aspergiloma em pacientes com cavidades pulmonares preexistentes (ex: sequela de TB) ou distrbios pulmonares crnicos. O fungo coloniza a cavidade e cresce para produzir uma massa de hifas em forma esfrica, a qual denominada aspergiloma. Esses fungos no invadem os tecidos pulmonares, porm o tamanho do aspergiloma pode desencadear dificuldade respiratria. Doena disseminada no paciente imunocomprometido quando o fungo invade a partir dos pulmes. A aspergilose invasiva geralmente fatal no imunocomprometido, pois os pacientes so neutropnicos (com poucos neutrfilos circulantes). As hifas deste fungo, quando crescem, destroem alvolos e septos alveolares. O crescimento das hifas em ngulo de 45, o que acaba por destruir a arquitetura pulmonar.
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VRUS
Caractersticas
Os vrus so seres diminutos, visveis apenas ao microscpio eletrnico, constitudos apenas por duas classes de substncias qumicas: cido nuclico (que pode ser DNA ou RNA) e protena. So seres acelulares (que no possuem estrutura celular) e precisam de clulas que os hospedem. Por isso, todos os vrus so parasitas intracelulares obrigatrios. O vrus invade uma clula e assume o comando, fazendo com que ela trabalhe quase que exclusivamente para produzir novos vrus. A infeco viral geralmente causa profundas alteraes no metabolismo celular, podendo levar morte das clulas afetadas. Os vrus causam doenas em plantas e animais (incluindo o homem). Fora da clula hospedeira, os vrus no manifestam nenhuma atividade vital e se houver alguma clula compatvel sua disposio, um nico vrus capaz de originar, em cerca de 20 minutos, centenas de novos vrus. At o momento, poucas drogas se mostraram eficazes em destruir os vrus sem causar srios efeitos colaterais. A melhor maneira de combater as doenas virais atravs de vacinas.
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Capsdio
Capsdio o envoltrio do vrus, formado por protenas. Alm de proteger o cido nuclico, o capsdio tem a capacidade de combinar-se quimicamente com substncias presentes na superfcie da clula. Alguns vrus podem apresentar lipdio, proveniente da membrana da clula onde se originaram.
Material Gentico
Cada espcie viral possui um nico tipo de cido nuclico, que pode ser DNA ou RNA, onde esto inscritas as informaes necessrias para a produo de novos vrus.
Vrion
A partcula viral, quando fora da clula hospedeira, chamada de vrion. Cada espcie de vrus apresenta vrions de formatos diferentes.
Especificidade viral
Um tipo de vrus ataca apenas determinados tipos de clulas, por que o vrus s consegue infectar a clula que tiver em sua membrana substncias s quais ele possa se ligar. Por exemplo: o vrus da poliomielite infecta apenas clulas nervosas, intestinais e da mucosa da garganta. O vrus da Rubola j consegue infectar maior nmero de tecidos humanos. O vrus da gripe bastante verstil e pode infectar diversos tipos de clulas humanas.
Reproduo
A reproduo envolve dois aspectos: a duplicao do material gentico viral e a sntese das protenas do capsdio. O vrus entra na clula hospedeira, inibe o funcionamento do material gentico da clula infectada e passa a comandar as snteses de protena.
Ciclo viral
O ciclo viral inclui as seguintes etapas:
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Penetrao faz-se por 3 processos distintos. Alguns vrus penetram por translocao da
partcula para o citoplasma, atravs da membrana. Outros, como o vrus da gripe, fazem-no por fuso do invlucro com a membrana celular. Outros so internalizados em endossomas, por endocitose medida por receptores.
Fase sinttica o perodo em que ocorrem as snteses de todas as protenas virais, sejam
enzimticas, reguladoras ou estruturais, e a replicao do genoma viral. Em alguns vrus, como os papovirus, esta fase pode ser muito simples, sintetizando-se apenas as protenas estruturais e algumas protenas que cooperam com as enzimas celulares para a replicao do DNA. Noutros, como nos vrus do RNA, j necessria a sntese de enzimas virais para replicarem ou transcreverem o RNA viral, funo para que a clula infectada no est equipada. Noutros ainda, mais complexos, como os poxvirus ou os herpesvirus, o genoma codifica para muitas enzimas homlogas de enzimas celulares e ainda para muitas outras funes, por exemplos envolvidas na induo da morte celular programada (apoptose) ou na defesa do vrus contra a resposta imune do hospedeiro. No caso dos retrovrus tem que haver primeiro a transcrio para DNA antes de ocorrer a transcrio para RNAm:
Montagem e extruso na maioria dos vrus, os componentes do virio, recmsintetizados, so montados como partculas, de forma mais ou menos complexa, no local de replicao, seja o ncleo seja o citoplasma. Excetuam-se os vrus de RNA de polaridade negativa e os retrovrus, em que as partculas imaturas so encaminhadas para a periferia da clula, para junto de zonas da membrana em que foram inseridas protenas virais. A ocorrem fases posteriores de montagem das partculas, terminando com a aquisio do invlucro e a sada da clula por gemulao. Excepcionalmente tambm o caso dos herpesvrus, de replicao nuclear, em que a maturao se faz entre os dois folhetos da membrana nuclear, sendo depois os vrus transportados para o exterior atravs do retculo endoplasmtico, sem nunca contatarem com o citoplasma. O seu invlucro de natureza nuclear.
Bacterifago
Esse vrus (Bacterifago T4), se reproduz em certas linhagens de bactria Escheirchia coli. Ao entrar em contato com a bactria, adere parede celular por meio de certas protenas presentes nas fibras de sua cauda. Na cauda desse vrus, esto presentes tambm enzimas que so capazes de digerir e perfurar a parede da clula bacteriana. O DNA do bacterifago injetado no citoplasma celular.
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Os genes do vrus so transcritos em molculas de RNA e traduzidos em protenas virais. Isso ocorre por que a clula no diferencia os genes do invasor de seus prprios genes. Em poucos minutos, a bactria est totalmente controlada pelo bacterifago. O passo seguinte ser a produo de protenas que constituiro as cabeas e caudas dos novos vrus. Depois, as cabeas e caudas se agregam ao DNA formando vrions completos. Cerca de 30 minutos aps a entrada de um nico vrus, a clula j est repleta de partculas virais. Nesse momento, so produzidas enzimas que iniciam a destruio ou lise (do grego lysys, destruio) da parede bacteriana, que arrebenta e libera centenas de vrions maduros que podem reiniciar o ciclo.
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Gripe: transmisso: gotculas de secreo expelidas pelas vias respiratrias. Infeco: o vrus penetra pela boca ou pelo nariz, localizando-se nas vias respiratrias superiores. Controle: nenhum. Sintomas e caractersticas: febre, prostrao, dores de cabea e musculares, obstruo nasal e tosse. Rubola: transmisso: gotculas de muco e saliva; contato direto. Infeco: o vrus penetra pelas vias respiratrias e se dissemina atravs do sangue. Controle: aplicao de imunoglobulina (com efeito protetor discutvel). Sintomas e caractersticas: febre, prostrao, erupes cutneas (em embries provoca a morte ou deficincias congnitas). Varola: transmisso: gotculas de saliva; objetos contaminados e contato direto. Infeco: o vrus penetra pelas mucosas das vias respiratrias e dissemina-se atravs do sangue; finalmente, atinge a pele e as mucosas, causando leses. Controle: vacinao. Sintomas e caractersticas: febre alta e erupes cutneas (geralmente deixando cicatrizes na pele; pode ser fatal). Sarampo: transmisso: contato direto e indireto com secrees nasofarngeas da pessoa doente. Infeco: o vrus penetra pelas mucosas das vias respiratrias e dissemina-se atravs do sangue. Controle: vacinao. Sintomas e caractersticas: febre alta, tosse, vermelhido por todo o corpo (pode ser fatal em crianas). Febre Amarela: transmisso: Picada de mosquitos, entre os quais se destaca o Aedes aegypti. Infeco: o vrus penetra atravs da pele, dissemina-se pelo sangue e localiza-se no fgado, na medula ssea, no bao e em outros rgos. Controle: vacinao e combate aos mosquitos transmissores. Sintomas e caractersticas: febre alta, nuseas, vmitos, calafrios, prostrao e pele amarelada (pode ser fatal). Poliomielite: transmisso: alimento e objetos contaminados; secrees respiratrias. Infeco: o vrus penetra pela boca, multiplica-se no intestino, dissemina-se pelo sangue e instala-se no sistema nervoso central, onde destri os neurnios. Controle: vacinao. Sintomas e caractersticas: paralisia dos membros; em muitos casos ocorrem apenas febres baixas e indisposio, que logo desaparecem sem causar problemas (provoca deficincia fsica). AIDS (Sndrome da Imuno-Deficincia Adquirida): transmisso: sangue, esperma e muco vaginal contaminados. Infeco: o vrus penetra no organismo atravs de relaes sexuais, uso de agulhas de injeo contaminadas ou transfuses de sangue infectado; ataca o sistema imunolgico. Controle: uso de preservativos (Camisinha-vnus) nas relaes sexuais e de agulhas descartveis ou esterilizadas; controle rigoroso, por parte dos bancos de sangue da qualidade do sangue doado; ainda no existem remdios ou vacinas eficazes contra a doena. Sintomas e caractersticas: febre intermitente, diarria, emagrecimento rpido, inflamao dos gnglios linfticos, doenas do aparelho respiratrio, infeces variadas, cncer de pele (doena mortal em 100% dos casos).
Vrus da Gripe
Existem centenas de variedades desse vrus, e todos portadores de RNA. A infeco comea quando o vrion adere substncias presentes na superfcie das clulas (geralmente as que revestem as vias respiratrias). O vrus penetra por inteiro, diferindo-se do vrus bacterifago que s injeta o material gentico. No interior da clula j infectada, o capsdio digerido por enzimas, liberando o RNA viral no citoplasma celular. O RNA capaz de se duplicar, dando origem inmeras cpias dentro da clula hospedeira. A unio de cidos nuclicos e capsdios originam novos vrions que se libertam das clulas infectadas. No h a morte da clula hospedeira, embora isso possa ocorrer.
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Retrovrus
Seu material hereditrio o RNA e sua principal caracterstica a presena da enzima transcriptase reversa, capaz de produzir molculas de DNA a partir do RNA. A membrana desse vrus se funde com a membrana da clula e o capsdio viral penetra no citoplasma celular. O RNA, ento, produz uma molcula de DNA que ir penetrar no ncleo da clula, introduzir-se em um dos cromossomos do hospedeiro e recombinar-se com o DNA celular. Esse DNA viral integrado ao cromossomo celular chamado de provrus, que ir produzir molculas de RNA, originando centenas de vrions completos. Uma vez com os genes do provrus integrados aos da clula, esta ir produzir partculas virais durante toda a sua vida. No leva a morte da clula hospedeira, mas esta poder transmitir o provrus para suas clulas filhas.
Cncer e AIDS
Muitos retrovrus possuem genes denominados oncogenes, que induzem as clulas hospedeiras diviso descontrolada com a formao de tumores cancerosos. H certos retrovrus como o HIV (Human Immunodeficiency Virus) que ataca os linfcitos T do sangue e o agente causador da AIDS.
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