Vol.9,n.1,pp.

24-28 (Dez 2014 - Fev 2015) Brazilian Journal of Surgery and Clinical Research - BJSCR

ESTUDO DO EFEITO DO MEDICAMENTO DINAMIZADO

Thuya occidentalis SOBRE O CONTROLE DA PROLI-
FERAO E DIFERENCIAO CELULAR
STUDY OS THE EFFECT OF THE DRUG DINAMIZED Thuya occidentalis OVER THE
CONTROL OF CELL PROLIFERATION AND DIFFERENTIATION

MARIANA CAMARGO HANDA1, MONICA BORDIN PESSUTO, GISELY CRISTINY LOPES*

1. Acadmica do curso de graduao em Farmcia da Faculdade Ing UNING; 2. Mestre em Cincias Farmacuticas, Co-orientadora do Trabalho de
Concluso de Curso do Bacharelado em Farmcia da Faculdade Ing UNING; 3. Doutora em Cincias Farmacuticas, Orientadora do Trabalho de
Concluso de Curso do Bacharelado em Farmcia da Faculdade Ing UNING.
* Rodovia PR 317, 6114, Maring, Paran, Brasil, CEP: 87035-510. giselycl@gmail.com

Recebido em 01/10/2014. Aceito para publicao em 04/11/2014

RESUMO gillus species. Thuja occidentalis is a plant used in homeopathy,

and shows promising effects against papillomas and condylo-
O processo de morte celular programada ou apoptose vem mas. The objective of this work was evaluate the effect of the
sendo muito estudado devido ao seu importante papel na homeopathic medicine Thuja occidentalis 30CH under germi-
regulao e manuteno dos organismos multicelulares. nation and vegetative growth of the ascomycete Aspergillus
Aspergillus um grupo de fungos filamentosos que abran- nidulans, and its relation to the induction of apoptosis in normal
gem mais de 200 milhes de anos de evoluo. Os fungos conditions and in the presence of genetic damage caused by
filamentosos revelam-se teis como modelo eucarionte para exposure to ultraviolet. In vitro evaluation, the homeopathic
o estudo da apoptose, onde as relaes filogenticas mos- remedy Thuja occidentalis CH30 has caused repair and apop-
tram similaridade de mamferos com as protenas apopt- tosis in cell differentiation model used, with increase in the
ticas de espcies de Aspergillus. Thuya occidentalis uma activity of metabolic activation, activation of cell cycle and
planta utilizada em homeopatia e, apresenta efeitos pro- activation of polarized growth during germination of A. nidu-
missores contra papilomas e condilomas. O objetivo deste lans, demonstrating pro homeostasis effect that justifies the use
trabalho foi analisar o efeito do medicamento homeoptico of this preparation as coadjuvant in the treatment of tumors.
Thuya occidentalis 30CH sob a germinao e desenvolvi-
mento vegetativo do ascomiceto de Aspergillus nidulans, e KEYWORDS: Thuya occidentalis, Aspergillus nidulans,
sua relao com a induo de apoptose em condies nor- homeopaty, apoptosis.
mais e, em presena de danos genticos causados pela ex-
posio radiao ultravioleta. Na avaliao in vitro, o
medicamento homeoptico Thuya occidentalis CH30, pro- 1. INTRODUO
vocou reparo e apoptose no modelo de diferenciao celular
utilizado, com aumento na atividade de ativao metabli- A homeopatia uma terapia fundada pelo mdico
ca, ativao de ciclo celular e ativao do crescimento pola- Christian Frederich Samuel Hahnemann no sculo XVIII
rizado durante a germinao de Aspergillus nidulans, de- e, baseia-se em alguns princpios no convencionais, tais
monstrando efeito pr- homeostase que fundamenta o uso como: ultradiluies homeopticas, doses mnimas,
dessa preparao como coadjuvante no tratamento de tu- princpio da similitude, experimentaes em indivduos
mores.
sadios e medicamento nico1.
PALAVRAS-CHAVE: Thuya occidentalis, Aspergillus No Brasil, os primrdios da Homeopatia remontam a
nidulans, homeopatia, apoptose. meados de 1840, sendo inicialmente utilizada por escra-
vos e pelas classes menos favorecidas, em virtude de seu
baixo custo, associados eficcia e segurana. Foi re-
ABSTRACT conhecida como especialidade mdica pelo Conselho
The process of programmed cell death or apoptosis has been Federal de Medicina em 1980, com reconhecimento rea-
extensively studied due to its important role in the regulation firmado em 2002, por meio da Resoluo CFM n
and maintenance of multicellular organisms. Aspergillus is a 1634/20022.
group of filamentous fungi spanning over 200 million years of Segundo Dr. Hahnemann, o princpio da similitude
evolution. Filamentous fungi are eukaryotic excellent models
for the study of apoptosis, where the phylogenetic relationships
o mais importante e definidor conceito da homeopatia, e
show similarity with mammalian apoptotic proteins in Asper- baseia-se no Similia similibus curantur (semelhante

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cura semelhante), o qual foi enunciado por Hipcrates no na avaliao da ao de substncias inibidoras ou prote-
sculo IV a.C1. toras sobre os mecanismos de controle da expresso g-
A cincia homeoptica busca estimular a cura ou nica e preservao da homeostase.
melhora de determinada doena ou disfuno orgnica Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi analisar o
atravs de preparados de princpios ativos em doses bai- efeito do medicamento dinamizado Thuya occidentalis
xas, empregando tcnicas precisas de diluio e sucusso, 30CH (Centesimal Hahnemanniana) sob a germinao e
que resultam em medicamentos dinamizados, ou seja, nas desenvolvimento vegetativo do ascomiceto de A. nidu-
ultradiluies homeopticas3. lans, e sua relao com a induo de apoptose em con-
Na cincia moderna, cada vez mais a procura por dies normais e, em presena de danos genticos cau-
novas terapias, alm dos tratamentos alopticos conven- sados pela exposio luz ultravioleta.
cionais vem sendo avaliadas, entre elas, a homeopatia.
Essa terapia visa minimizar a toxicidade, reduzir custos e 2. MATERIAL E MTODOS
propiciar o uso de princpios ativos e matrias-primas
abundantes e/ou de fcil acesso. Assim, vrios estudos Linhagem
vm sendo realizados com preparados homeopticos em Foi utilizada a linhagem biA1methG1 de Aspergillus
vrias reas da cincia na busca de novas descobertas e nidulans, proveniente da Universidade de Glasgow (Es-
avanos cientficos4-6. ccia), que apresenta desenvolvimento normal, esporos
Thuya occidentalis uma planta utilizada na home- verdes e deficincia nutricional para biotina (vitamina) e
opatia e, apresenta efeitos promissores contra certos tipos metionina (aminocido).
de tumores7, principalmente sobre papilomas e condilo-
mas8. Segundo Sunila et al. 20099, medicamentos dina- Anlise de germinao de condios em resposta
mizados podem agir como indutores de apoptose e/ou a temperatura, estabilizador osmtico e fatores
apresentar citotoxicidade para clulas tumorais. Estudos nutricionais
recentes com o medicamento homeoptico Carcinosinum Para a anlise da temperatura, foram feitos ensaios a
30CH e 200C, sugerem esta ao, pois o mesmo induziu 28o C e 37o C. Para a avaliao do efeito do estabilizador
genes pr-apoptticos em cultura de clulas tumorais in osmtico foram utilizados meios com 0,5 M de NaCl.
vitro9. Para se estimar a influncia dos fatores nutricionais, foi
O processo de morte celular programada ou apoptose utilizado, o meio completo e o meio mnimo, suplemen-
vem sendo muito estudado devido ao seu importante tado com os nutrientes especficos para cada linhagem.
papel na regulao e manuteno dos organismos multi- Para a anlise de germinao, condios das linhagens
celulares10. em estudo foram coletados de colnias com 5 dias de
Aspergillus um grupo de fungos filamentosos que crescimento em meio completo, a 37 C e transferidos
abrangem mais de 200 milhes de anos de evoluo. Os para 0,01% de Tween 80. As suspenses de condios
fungos filamentosos revelam-se teis como modelo eu- foram filtradas em l de vidro e inoculadas nos diferentes
carionte para o estudo da apoptose, pois as relaes fi- meios lquidos. Em seguida, 100 uL foram transferidos
logenticas mostram similaridade de mamferos com as para lminas de microscopia em cmara mida e incu-
protenas apoptticas de Aspergillus11. bados nas duas temperaturas por um perodo de 8 horas.
Aspergillus (=Emericella) nidulans um fungo fila- A cada 2 horas, as duas lminas (repeties) de cada
mentoso, com taxa de crescimento rpida, sendo consi- condio foram analisadas ao microscpio ptico.
derado modelo para estudos de gentica do desenvolvi- Em cada leitura foram analisados 200 condios e
mento, portanto, um excelente sistema para o estudo da calculadas as porcentagens de condios em cada uma das
diferenciao celular12. Sua utilizao indicada devido a fases de germinao (condio dormente, embebido, com
haploidia, morfognese bem definida e ciclo de vida boto germinativo e com tubo germinativo).
curto, compreendendo 3 fases: o ciclo vegetativo, que Na ltima leitura, foi feita uma estimativa de sobre-
inicia com a germinao do esporo (condio ou ascspo- vivncia, considerando-se vivos apenas os condios com
ro) e continua por toda vida da colnia, no crescimento e tubo germinativo e observao de tipo e frequncia de
ramificao das hifas; o ciclo assexual ou conidiognese, aberraes no desenvolvimento dos tubos germinativos.
inicia-se nas hifas que diferenciam-se em conidiforos, e
pelo processo de mitose originam os condios e, o ciclo 3. RESULTADOS E DISCUSSO
sexual ou ascosporognese, fase em que formam-se os
esporos a partir do processo de meiose, ditos ascsporos. No presente trabalho, o medicamento Thuya occi-
Apesar da influncia de fatores ambientais, estas fases dentalis foi preparado segundo a Farmacopeia Homeo-
so expressas por grupos de genes que estabelecem re- ptica Brasileira, 3a edio, na potncia 30CH, ou seja, na
lao entre as diferentes cascatas regulatrias de cada trigsima dinamizao Centesimal Hahnemanniana,
fase13. Esse o motivo que nos leva a utilizar este modelo considerada uma ultradiluio.

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A ultradiluio (UHD) obtida a partir da diluio de De acordo com a literatura, T. occidentalis foi avali-
uma soluo acima do nmero de Avogadro, alcanada ada em experimentos in vitro e in vivo, e revelou signi-
atravs da tcnica de dinamizao (diluio com sucus- ficativo potencial imunofarmacolgico2,8. Naser et al.16,
so). O medicamento homeoptico obtido atravs da em seu trabalho de reviso, sugerem que os ativos fito-
ultradiluio induz um efeito celular supressor e estimu- qumicos presentes em extratos de T. occidentalis apre-
lador que age sobre sistemas orgnicos; apresenta curvas sentaram ao estimulante em citocinas e, modulam a
dose-efeito oscilatrias, mas eficiente o bastante, para a produo de anticorpos, alm de atuarem na ativao de
manuteno da homeostasia celular3. macrfagos e outras clulas imunocompetentes.
Segundo Morais14, o efeito biolgico observado com A observao das caractersticas de cada fase de
as ultradiluies advm de uma reao secundria do germinao de A. nidulans permite-nos inferir se o tra-
organismo substncia farmacolgica utilizada, decor- tamento da amostra com o medicamento Thuya occi-
rente de uma alterao da molcula de gua, num esforo dentalis CH30, quando comparado ao controle, revela ou
finalstico de manuteno da homeostase. no interferncia nas fases de ativao metablica e sn-
Os resultados da anlise de germinao esto apre- tese proteica (dormente-embebido) e no ciclo celular
sentados nas tabelas 1 e 2. (embebido-boto).
Tabela 1. Porcentagem de condios da linhagem biA1methG1 em cada Na Tabela 2 observa-se que, nas amostras de A. ni-
fase de germinao em 3, 4, 6, 8 horas; (C) grupo controle; (T) grupo dullas tratadas com Thuya occidentalis 30CH submetido
tratado com Thuya occidentalis 30CH. radiao com luz UV, houve diminuio do nmero de
. mal formados e significativo aumento de condios mor-
3 horas 4 horas 6 horas 8 horas tos, comparados ao grupo controle, indicando, portanto,
(C) (T) (C) (T) (C) (T) (C) (T)
DORMENTE 50,9 48,6 22,7 8,2 1,7 0 0 0 apoptose.
EMBEBIDO
BOTO
49,1
0
49,1
0
33,6
34,6
25,5
22,6
6,6
11,6
2,5
5,4
0,5
0,5
2
1,5
De acordo com Hiwasa et al.17, a radiao UV causa
GERMINA-
0 0 9 43,8 70,9 80,9 94,7 90 danos ao DNA e induz apoptose. No trabalho, foi pos-
DO
MALFOR- svel observar que na anlise entre o controle irradiada
0 0 0 0 9,6 11,2 4,4 6,5
MADO com UV, e a amostra irradiada com UV e, tratada com
Thuya occidentalis 30CH, o medicamento dinamizado
Como se pode observar na tabela 1, aps 2 horas, quan- intensificou a fase de ativao metablica.
do ocorre o incio da ativao metablica, no houve
ativao ou inibio da germinao em resposta ao tra- Tabela 2. Porcentagem de condios da linhagem biA1methG1 em cada
tamento. fase de germinao em 2, 4, 6, 8 horas; (C) grupo controle sem expo-
No perodo seguinte, 3 horas, nenhum aumento na sio radiao ultravioleta; (T) grupo tratado com Thuya occidentalis
30 CH exposto a radiao ultravioleta; (UV) grupo irradiado com
ativao metablica foi constatado. No entanto, houve radiao ultravioleta.
ativao do metabolismo e do ciclo ce-
2 horas 4 horas 6 horas 8 horas
lular com 4 horas de germinao, ocor- (C) (UV) (T) (C) (UV) (T) (C) (UV) (T) (C) (UV) (T)
rendo uma sensvel ativao em respos- DORMENTE 30,2 61 59,1
11,5
2
36,3 35,3 5 14,6 9,8 2,9 8,6 8,8
ta ao medicamento quando comparado EMBEBIDO 69,7 39 40,9 60 62,7 60,6 5 50,2 43,6 4,9 20,7 18,1
BOTO 0 0 0 16,5 0,9 4,1 4 18 15,7 0,9 9 12,5
com o controle. GERMINA-
0 0 0 11,9 0 0 80 17,1 30,9 6 59,9 58,3
A ativao metablica tardia foi sig- DO
MALFOR-
nificativa. Podemos observar, atravs do MADO 0 0 0 0 0 0 6 0 0 12,3 2 2,3

ensaio, a ativao do crescimento pola-

rizado, em que ocorre a primeira mitose, que resultou em Com o uso de radiao ultravioleta (UV), houve o au-
um grande nmero de germinados, 43% da Thuya occi- mento da porcentagem de condios mortos (dormentes +
dentalis 30CH contra 9% do controle. embebidos com 8 horas) (Figura 1), e a diminuio de
Aps 6 horas, o grupo controle apresentou 0,5% de mal formados, o que sugere que ocorreu apoptose.
mortos e 9,5% de germinados, contra o 2% e 98% res- O processo de morte celular programada ou apoptose
pectivamente no grupo tratado com Thuya occidentalis de extrema importncia na homeostase tecidual e como
30CH. meio de remoo de clulas com genomas instveis10.
Com 8 horas, quando administrado sozinho, o medi- Suas principais caractersticas morfolgicas so: frag-
camento homeoptico Thuya occidentalis 30CH apre- mentao do DNA, condensao da cromatina e forma-
sentou maior nmero de mal formados que o controle, o o de corpos apoptticos10,15.
que indica provvel reparo, com apoptose, o seja, o grupo A apoptose pode ser desencadeada por diferentes fa-
tratado apresenta sinais pr-apoptticos significativos. tores como ligaes de molculas e receptores de mem-
O reparo de DNA est ligado com a regulao, brana, radiao, danos no DNA, agentes quimioterpicos,
transcrio e replicao do ciclo celular15, e um meca- choque trmico, fatores de crescimento alterados, quan-
nismo importante da clula reparar seus danos e/ou per- tidade de nutrientes baixa, outros18.
das. O processo apopttico desencadeado por comple-
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xas vias de sinalizao, conhecidas como via intrnseca e REFERNCIAS

via extrnseca, envolvendo a expresso de genes deter-
minantes na sntese de protenas pr-apoptticas e an- [01] Dayenas E, Beauvais F, Amara J. Oberbaum M. Robin-
zon B, Miadonna A, Tedeschit A, Pomeranz B, Fortner P,
ti-apoptticas19,20. Belon P, Saintelaudy J, Poitevin B, Benveniste J. Human
Assim, o medicamento homeoptico Thuya occiden- basophil degranulation triggered by very dilute antiserum
talis 30CH revela sinais pr-apopttico. against IgE. Nature 1988; 333:816-8.
[02] Conselho Federal de Medicina, 2002. Resoluo CFM n
1634/2002, Dispe sobre convnio de reconhecimento de
especialidades mdicas firmado entre o Conselho Federal
de Medicina CFM, a Associao Mdica Brasileira
AMB e a Comisso Nacional de Residncia Mdica -
CNRM.
[03] Guedes JRP. Ultradiluio homeoptica de triiodotironina
altera a apoptose celular da cauda de girinos de Rana ca-
tesbeiana: in vitro. So Paulo, 2009. Tese (Doutorado).
Faculdade de Medicina da Universidade de So Paulo,
60p.
[04] Monteiro VLC, Coelho MCOC. Thuya occidentalis e
papilomatose. Brazilian Homeopathic Journal 2008;
10:16-21.
[05] Santos FR, Santana RO, Carvalho EA, Costa NA, Minafra
CS, Oliveira PR. Desempenho e perfil srico bioqumico
de frangos de corte alimentados com raes contendo
produtos homeopticos. Revista Brasileira de Sade e
Produo Animal 2014; 15(2):394-405.
[06] Andrade FMC, Casali VWD, Cecon PRC. Crescimento e
Figura 1. Grfico comparativo para os valores em % de condios da
linhagem biA1methG1 em cada fase de germinao em 2, 4, 6, 8 horas; produo de cumarina em plantas de chamb (Justicia
(C) grupo controle sem exposio radiao ultravioleta; (T) grupo pectoralis Jacq.) tratadas com isoterpico. Rev Bras.
tratado com Thuya occidentalis 30CH exposto a radiao ultravioleta; Plantas Med. 2012; 14:154-8.
(UV) grupo irradiado com radiao ultravioleta. [07] Hayfield R. Vida Nova: Homeopatia. Remdios simples
para uma sade natural. Lisboa: Editora Estampa Ltda,
1999; 307.
4. CONCLUSO [08] Valsa JO, Felzenszwalb I. Genotoxic evaluation of the
effect of Thuya occidentalys tinctures. Rev. Bras. Biol.
2001; 61(2):329-32.
Em condies normais, o medicamento homeoptico [09] Sunila ES, Kuttan R, Preethi KC, Kuttan G. Dynamized
Thuya occidentalis 30CH provocou aumento na atividade preparations in cell culture. Evid Based Comp Altern
da ativao metablica, ativao de ciclo celular e ati- Med. 2009; 6:25763.
vao do crescimento polarizado durante a germinao de [10] Anazetti MC, Melo PS, Durn N, Haun M. Comparative
Aspergillus nidulans. cytotoxicity of dimethylamide-crotonin in the promye-
Nas amostras do fungo irradiadas com luz ultravio- locytic leukemia cell line (HL60) and human peripheral
leta, o tratamento com Thuya occidentalis CH30 pro- blood mononuclear cells. Toxicology 2003;
moveu a apoptose. Evidencia-se assim efeito 188(2-3):261-74.
[11] Robson GD. Programmed cell death in the aspergilli and
pr-homeostase que fundamenta o uso dessa preparao
other filamentous fungi. Medical Mycology 2006;
como coadjuvante no tratamento de tumores. 44:109-14.
Conflito de interesse [12] Reis MF, Rocha CLMSC. Anlise citolgica do efeito
dos extratos aquosos de Lentinula edodes e Pleurotus os-
Os autores afirmam que no tem qualquer conflito treatoroseus sobre os ciclos de desenvolvimento de As-
de interesse com o tema abordado no artigo. pergillus (=emericella) nidulans. SaBios: Rev Sade e
Biol 2014; 9(1):100-107.
Agradecimentos [13] Timberlake WE, Clutterbuck AJ. Genetic regulation of
conidiation. Prog Ind Microbiol. 1994; 29: 383-427.
Os autores agradecem a Profa. Dra. Carmem Lucia [14] Morais J. O Poder das Bolinhas. Revista Superinteres-
de Mello Sartori Cardoso da Rocha, do Departamento sante So Paulo: Editora Abril. 2002; 172.
de Biotecnologia, Gentica e Biologia Celular da U- [15] Kerr JFR, Wyllie AH, Currie AR. Apoptosis: A Basic
niversidade Estadual de Maring, pela colaborao na Biological Phenomenon with Wide-Ranging Implications
realizao deste trabalho. in Tissue Kinetics. Br. J. Cancer1972; 26:239-57.
[16] Naser B, Bodinet C, Tegtmeier M, Lindequist U. Thuja
occidentalis (Arbor vitae): A Review of its Pharmaceuti-
cal, Pharmacological and Clinical Properties. Evid Based

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Handa et al. / Braz. J. Surg. Clin. Res. V.9,n.1,pp.24-28 (Dez 2014 - Fev 2015)

Complement Alternat Med. 2005; 2(1):6978.

[17] Hiwasa T, Arase Y, Chen Z, Kita K, Umezawa K, Ito H,
Suzuki N. Stimulation of ultraviolet-induced apoptosis of
human fibroblast UVr-1 cells by tyrosine kinase inhibi-
tors. FEBS Letters 1999; 444:173-6.
[18] Stevens JB, Liu G, Bremer SW, Ye KJ, Xu W, Xu J, Sun
Y, Wu GS, Savasan S, Krawetz SA, Ye CJ, Heng HH.
Mitotic cell death by chromosome fragmentation. Cancer
Res. 2007; 67(16):7686-94.
[19] Mendes GPA. Apoptose: Programa Molecular de Morte
Celular. Einstein 2003; 1:15-18
[20] Mandal SK, Biswas R, Bhattacharyya SS, Paul S, Dutta
S, Pathak S, Khuda-Bukhsh AR. Lycopodine from Lyco-
podium clavatum extract inhibits proliferation of HeLa
cells through induction of apoptosis via caspase-3 activa-
tion. Eur J Pharmacol. 2010.

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