Diluição Simples e Seriada

FIBRA
CURSO DE FARMÁCIA
DISCIPLINA DE IMUNOLOGIA CLÍNICA
DILUIÇÕES
Os métodos de laboratório nos
quais uma quantidade de uma substância é
adicionada a outra para reduzir a
concentração de uma das substâncias são
conhecidos como diluições.
IMPORTANTE: Uma diluição é uma expressão de concentração, não de volume. Expressa
de outra forma, uma diluição indica a quantidade relativa de substâncias em uma solução.
Quando a palavra diluição é usada, ela deve significar o número de partes que foram diluídas
em um número total de partes. Em outras palavras, uma diluição deve significar o volume de
concentrado no volume total da solução final. O menor número corresponde ao número de
partes da substância que está sendo diluída; o maior número refere-se ao número total de
partes da solução final.
Considere as seguintes frases:
• Faça uma diluição 1 para 10 de soro em salina.
• Faça uma diluição 1 em 10 de soro em salina.
• Faça uma diluição 1 para 10 de soro com salina.
• Faça uma diluição 1/10 de soro com salina.
• Faça uma diluição 1:10 de soro usando salina.
• Faça uma diluição de 1 parte de soro e 9 partes de salina.
• Faça uma diluição de 1 parte de soro para 9 partes de salina.
Qual é a diferença entre essas frases? Nenhuma! Todas significam exatamente a mesma
coisa.
ENTÃO: Diluir é acrescentar solvente a uma solução mantendo-se inalteradas as
quantidades de soluto existentes.
D= ____ V soluto______
V soluto + V solvente
1 parte de soro
+ 9 partes de salina
10 partes de solução final
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O significado difere quando usamos a palavra razão. Os números passam a se referir aos
materiais da razão, que podem ser escritos de diversas formas:
• 1:9
• 1 para 9
• 1/9
Não importa como a razão é escrita, a ordem dos números deve corresponder à ordem
das substâncias às quais a razão se refere.
Ex: Uma razão de soro para salina 1:9 é igual a uma razão salina para soro 9:1, o que é
a mesma coisa que uma diluição de 1:10 de soro com salina.
TÍTULO
TÍTULO é a concentração de uma solução determinada por titulação. É a menor
quantidade ou concentração que produzia um efeito particular ou produto. O título é a
recíproca da diluição. Então, em uma reação de pesquisa de anticorpos positiva na
diluição ½ e ¼ e negativa na diluição 1/8 e 1/16, o título é 4.
DILUIÇÃO SERIADA
Uma série de diluições é um número de soluções feito pela diluição de alguma
substância com um solvente, então fazendo uma diluição da solução resultante, e
diluindo a segunda solução para fazer uma terceira e assim por diante. A partir da
primeira diluição ou da amostra original, as sucessivas diluições são realizadas a partir
da ultima diluição feita e não mais da amostra oririnal.
Geralmente, mantém-se uma razão constante entre as diluições, o que não é
regra, ou seja, depende da necessidade. No laboratório clínico, a diluição seriada mais
comumente utilizada tem sido na razão 2. Ocasionalmente a série de diluições pode
ser descrita de maneira que cada valor de diluição se refira a uma diluição
independente de algum material em algum solvente.
O individuo deve estar apto a calcular as seguintes variáveis em cada passo em
uma série de diluição" concentração de material em cada solução' quantidade real de
material em cada solução e volume total de cada solução.
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EXERCÍCIOS:
1. Faça 250 mL de uma diluição 1:10 de soro em salina.
5. Faça 7,5 mL de uma diluição 1:150 de soro em salina
6. Quanto de uma amostra de sangue é necessária para se preparar 40 ml de uma diluição
1/10 e quando de diluiente você precisaria?
7. Como você prepararia 20 ml de uma diluição de 1/400
8. Determine a quantidade de soro em 40 mL de uma diluição 1:5 de soro em salina.
9. Quanto de uma diluição de 1:32 de urina com água destilada poderia ser feita com 2
mL de urina?
10. Esquematize a diluição de 5 mL de azul de metileno diluído a 1/4000.
11. Fazer uma diluição seriada partir de uma solução de azul de metileno diluído 1/16 em
água até a diluição 1/512. O volume em cada tubo deve ser 1,6 mL.
12. Fazer uma diluição seriada a partir de uma solução de azul de metileno diluído 1/64
em água até a diluição 1/256. O volume em cada tubo deve ser 0,4 mL.
13. Fazer uma diluição seriada a partir de uma solução de hemácias diluído 1/20 em água
até a diluição 1/20000. O volume em cada tubo deve ser 3,6 mL.
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14. Em vários tubos numerados de 1 a 6, pipetou-se 0,5 mL de tampão em todos eles. No
1º tubo pipetou-se 500 µL de azul de metileno e homogeneizou-se. Transferiu-se do
tubo nº 1 para o tubo nº 2, 500 µL. Este procedimento foi realizado até o 6º tubo.
Sabendo-se que não houve perda de volume, responda.
a) Qual o volume de todos os tubos e as respectivas diluições?
b) Qual é o volume e as respectivas diluições de todos os tubos se
fosse pipetado 3,5 mL de tampão.
15. Uma diluição 1/10 de uma substância é diluída 3/5, rediluída 2/15 e diluída mais uma
vez ½. Qual é a concentração final?
16. Uma solução 3% é diluída 2/30. Qual é a concentração resultante?
17. Uma solução que contém 70 mg/dL é diluída 1/10 e de novo 2/20. Qual é a
concentração final?
18. A alíquota de 0,2 mL de soro do paciente é adicionada a 0,8 mL de salina. Transfere-
se 0,5 mL para um tubo 2 que possui 0,5 mL de salina. Este procedimento é feito até o
tubo 10. As diluições foram utilizadas para testar um anticorpo de um agente
infeccioso. Do tubo 1 ao 8, a reação foi positiva para o anticorpo testado. Qual o título
que deve ser apresentado ao anticorpo?
19. Em uma série de 8 tubos, coloque 0,9 mL de solução fisiológica no 1º tubo e 0,5 mL
de solução fisiológica nos tubos restantes. Adicione 0,1 mL de soro ao 1º tubo, misture
e coloque 0,5 mL dessa solução no tubo subseqüente e repita o processo até o último
tubo. Despreze o último 0,5 mL. Para cafa tubo adicione 0,5 mL de antígeno. A partir
disso, responda:
a) Qual é a diluição de cada tubo antes de adicionar o antígeno?
b) Qual a quantidade de soro presente nos dois primeiros tubos
após a transferência?
c) Qual pe a diluição em cada tubo após a adição do antígeno?
20. Quais diluições representam as misturas abaixo?
a) 0,3 mL de soro sanguíneo com 4,2 mL de solução fisiológica.
b) 0,5 mL de soro sanguíneo com 3 mL de solução fisiológica.
c) 0,2 mL de soro sanguíneo com 6,2 mL de solução fisiológica.
21. Em vários tubos numerados de 1 a 5, pipetou-se 3X mL de água em cada um deles. No
tubo nº 1 pipetou-se X mL de azul de metileno e homogeneizou-se esta solução.
Pipetou-se do tubo nº 1 X mL e passou-se para o tubo nº 2. Este procedimento foi feito
até o 5º tubo.
a) Qual o volume de todos os tubos se X=2 e as respectivas diluições?
b)Se X=10, qual é o volume final de todos os tubos e as respectivas diluições?
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22. Esquematize a preparação de 50 mL de uma solução tampão fosfato a 1/2000. O
tampão foi fornecido pelo fabricante a uma diluição 1/10.
23. Pipetou-se 500 µL se um soluto em tubo de ensaio e acrescentou-se 4,5 mL de
solvente. Qual é a diluição?
24. Pipetou-se 200 µL se um soluto em tubo de ensaio e acrescentou-se 9,8 mL de
solvente. Qual é a diluição?
25. Num laboratório de Virologia, foi diluído 200 µL de soro diluído a 1:4. Porém, a
diluição correta seria 1:10. Como fazer essa correção?
26. Em uma reação imunoenzimática, foi colocado 0,1 mL de soro, 0,8 mL de diluente e
0,1 mL de conjugado. Que volume de soro existe no volume final e qual é a diluição
deste soro?
27. Uma solução estoque de ácido oxálico 1/100 está disponível no laboratório de
química. Como o laboratorista prepararia 6 mL de ácido oxálico 1/150?
28. Fazer uma diluição seriada de razão 2 a partir de uma solução de azul de metileno em
água. Usar uma bateria de 5 tubos. O volume em cada tubo deve ser 4 mL.
água. Usar uma bateria de 8 tubos. O volume em cada tubo deve ser 4,5 mL.
água. Usar uma bateria de 5 tubos. O volume em cada tubo deve ser 3 mL.
31. Fazer uma diluição seriada de razão 2 a partir de uma solução de azul de metileno
diluído ½ em água até a diluição 1/64. O volume em cada tubo deve ser 0,7 mL.
32.
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