Paper Cymbidium Mosaic Virus (CyMV)

Pendahuluan Latar belakang Cymbidium Mosaik Virus (CyMV) merupakan penyebab penyakit yang sering ditemukan pada tanaman anggrek. Gejala infeksi virus pada daun berupa mosaik disertai bercak – bercak klorotik berwarna hitam yang lama-kelamaan berubah menjadi bercak nekrotik sedangkan pada bunga tanaman yang terinfeksi biasanya memperlihatkan gejala bercak-bercak coklat nekrosis pada petal dan sepalnya. Bunga biasanya berukuran lebih kecil dan mudah rontok dibandingkan dengan bunga tanaman sehat. Penulisan makalah ini bertujuan mengetahui tentang sejarah, gejala, bentuk biologis CyMV pada tanaman anggrek secara serologi dan molekuler serta mengetahui kisaran inang. CyMV termasuk dalam kelompok virus dari genus Potexvirus. CyMV merupakan virus yang dapat ditularkan secara mekanis. Hasil penularan terhadap 5 spesies tanaman indikator dari 3 famili yang telah diinokulasikan CyMV menunjukkan bahwa Datura stramonium (Solanaceae) dan Chenopodium amaranticolor (Chenopodiaceae) menunjukkan gejala lesio lokal yaitu dengan munculnya bercak nekrotik pada bagian daun. Pada Cassia occidentalis (Leguminoceae) menunjukkan gejala sistemik yaitu dengan munculnya gejala mosaik dengan pola gradasi hijau tua-hijau muda pada daun yang diinokulasikan virus CyMV, selain itu pada daun muda yang baru tumbuh menunjukkan gejala daun menjadi kecil dan mengeriput. Tujuan Makalah ini bertujuan mengetahui dan mempelajari mengenai Cymbidium Mosaik Virus (CyMV), serta kendala budidaya anggrek. Tinjauan Pustaka Deskripsi Tanaman Anggrek Anggrek merupakan salah satu jenis komoditas hortikultur dari famili Orchidaceae. Komoditas ini merupakan satu suku tumbuhan berbunga dengan anggota jenis terbanyak (Salunkhe et al. 1990). Jenis-jenisnya tersebar luas di dunia, meskipun sebagian besar anggotanya ditemukan di daerah tropika. Kebanyakan anggota suku ini hidup sebagai epifit, terutama yang berasal dari daerah tropika. Anggrek di daerah beriklim sedang biasanya hidup di tanah dan membentuk umbi sebagai cara beradaptasi terhadap musim dingin. Anggota suku ini cenderung memiliki organ-organ yang sukulen tebal dengan kandungan air yang tinggi. Dengan demikian, anggrek dapat hidup pada kondisi ketersediaan air yang rendah. Air diperoleh dari hujan, tetesan, embun, atau uap air di udara. Anggrek tidak ditemukan di daerah gurun karena perakarannya tidak intensif. Anggrek menyukai cahaya matahari tetapi tidak langsung sehingga biasa ditemukan di alam sebagai tumbuhan yang berada di bawah naungan. Pada umumnya anggrek-anggrek yang dibudidayakan memerlukan temperatur 30° C dengan temperatur minimum 15° C. Kelembaban nisbi (RH) yang diperlukan untuk anggrek berkisar antara 60–85% (Risa 2007). Fungsi kelembaban yang tinggi bagi tanaman antara lain untuk menghindari penguapan yang terlalu tinggi. Oleh karena itu diusahakan agar media dalam pot tidak terlalu basah. Sedangkan kelembaban yang sangat rendah pada siang hari dapat diatasi dengan cara pemberian semprotan kabut (mist) di sekitar tempat pertanaman dengan bantuan sprayer (Sutiyoso 2006). Deskripsi Virus CyMV Cymbidium Mosaik Virus (CyMV) merupakan penyebab penyakit yang sering ditemukan pada tanaman anggrek yang banyak ditemui pada sentra produksi pertanaman anggrek di Indonesia dengan menunjukkan gejala yang berbeda – beda. Gejala infeksi virus pada daun berupa mosaik disertai bercak – bercak klorotik berwarna hitam yang lama – kelamaan berubah menjadi bercak nekrotik sedangkan pada bunga tanaman yang terinfeksi biasanya memperlihatkan gejala bercak-bercak coklat nekrosis pada petal dan sepalnya. Bunga biasanya berukuran lebih kecil dan mudah rontok dibandingkan dengan bunga tanaman sehat. CyMV merupakan virus yang termasuk ke dalam kelompok potexvirus berbentuk filamen memanjang lentur dengan ukuran panjang kurang lebih 440- 480 x 13 nm dan memiliki RNA berukuran ±600 bp (Aichun et al. 2009, Lee & Chang 2006). CymMV awalnya dideskripsikan sebagai virus Cymbidium Black Streak dan itu adalah sebuah deskripsi yang tepat dari gejala daun. Necrotic melesat atau bercak adalah khas dan lesi ini dapat ditemukan pada kedua bunga dan daun. CyMV dapat ditularkan melalui inokulasi mekanik dan melalui bahan perbanyakan vegetatif tanaman, tetapi tidak dapat ditularkan secara alami oleh serangga vektor. CyMV di lapangan dapat ditularkan melalui kontak langsung antara tanaman sakit dengan tanaman sehat, kontaminasi peralatan potong dan pot yang digunakan selama perawatan dan panen bunga (Lawson 1995). Isi Sejarah CyMV CymMV pertama kali dijelaskan pada tahun 1951 oleh Dilworth D. Jensen yang mengamati hitam nekrosis bercak pada Cymbidium spp dan menamai virus Cymbidium Black Virus Streak. Dr Dilworth terus menemukan penyakit virus anggrek lainnya sementara di Sekolah Tinggi Pertanian, Universitas California, Berkeley selama pertengahan 1950 hingga akhir hayatnya pada 1973. Pekerjaannya dengan A.H Gold berhasil mengidentifikasi partikel virus mosaik Cymbidium melalui mikroskop elektron dan menggambarkannya sebagai batang berliku (sekitar 18nm X 475 nm) (Gambar 1). Ia dikreditkan sebagai pelopor penelitian virus anggrek dan diberi nama a Fulbright Research Scholar pada tahun 1959-60 di mana ia ditugaskan ke Universitas New York Utrecht di Belanda. Dia terus meneliti anggrek transmisi virus saat berada di Belanda dan menemukan bahwa baik pribadi maupun publik koleksi dan produsen komersial di sana mengamati gejala yang mirip dengan di Amerika Serikat. Dia dikreditkan dengan mengidentifikasi 30 kemungkinan virus anggrek selama hidupnya. Meskipun ia dikenal karena terobosan dalam penyakit virus anggrek, Jensen adalah seorang entomolog dan dengan gigih mencari vektor serangga untuk Virus mosaik Cymbidium, tetapi tidak berhasil. Gambar 1. Partikel-partikel virus dari persiapan yang dimurnikan dalam uranyl asetat. Bar mewakili 500 nm. Biologi CyMV CyMV merupakan virus yang termasuk ke dalam kelompok potexvirus berbentuk filamen memanjang lentur dengan ukuran panjang kurang lebih 440- 480 x 13 nm (Han et al. 2009) dan memiliki RNA berukuran ±600 bp (Aichun et al. 2009, Lee dan Chang 2006). Virus ini menyebabkan penyakit pada tanaman anggrek yang banyak ditemui pada sentra produksi pertanaman anggrek di Indonesia dengan menunjukkan gejala yang berbeda-beda. Tanaman anggrek Cymbidium sp. yang terserang CyMV awalnya menunjukkan gejala berupa bercak klorotik yang lama kelamaan menjadi bercak nekrkotik berbentuk bintik-bintik, garis-garis atau lingkaran. Gejala khusus pada Cattleya sp. yang terinfeksi CyMV adalah munculnya bercak coklat atau hitam cekung dan kadang terbentuk lingkaran nekrotik dengan jaringan berwarna hijau ditengah atau jaringan yang yang mati dilingkari dengan jaringan yang normal dan seringkali terdapat garis – garis pada daun yang telah tua (Lawson 1995) dan ada beberapa yang symtopmless (gejala infeksi laten) (Tanaka 1997). CyMV dapat ditularkan melalui inokulasi mekanik dan melalui bahan perbanyakan vegetatif tanaman, tetapi tidak dapat ditularkan secara alami oleh serangga vektor. CyMV di lapangan dapat ditularkan melalui kontak langsung antara tanaman sakit dengan tanaman sehat, kontaminasi peralatan potong dan pot yang digunakan selama perawatan dan panen bunga (Lawson 1995). Gejala Virus Penyakit virus pada anggrek dapat diekspresikan melalui berbagai kelainan pada daun dan bunga. Kekuatan yang berkurang juga dikaitkan dengan kehadiran infeksi virus, tetapi itu lebih sulit diukur dan mungkin merupakan fungsi budaya dan kondisi lingkungan. Juga, ekspresi gejala virus mungkin laten di anggrek yang tumbuh dengan baik dan di bawah sedikit stres (Inouye 2008). Awal Peneliti hanya memiliki manifestasi visual dari penyakit virus sebagai petunjuk yang lebih besar masalah. Virus mosaik Cymbidium mungkin yang paling umum, tetapi penyakit virus lain, Virus ringspot Odontoglossum juga merupakan masalah di seluruh dunia. Kedua penyakit virus biasanya memiliki manifestasi yang unik, tetapi tidak konsisten sama. Juga sebuah Masing-masing tanaman atau kelompok tanaman dapat menjangkiti kedua penyakit secara bersamaan. CymMV awalnya dideskripsikan sebagai virus Cymbidium Black Streak dan itu adalah sebuah deskripsi yang tepat dari gejala daun. Nekrotik melesat atau bercak adalah khas dan lesi ini dapat ditemukan pada kedua bunga dan daun (Gambar 2). Virus ringspot Odontoglossum dapat divisualisasikan sebagai bintik warna daun atau sebagai cincin nekrotik konsentris (Gambar 3). Entah virus dapat menyebabkan kondisi yang dikenal sebagai ‘warna istirahat’ (Gambar 4) Gambar 2. Gejala nekrotik oleh CymMV. Gambar 3. Bercak-bercak karena infeksi oleh ORSV. Gambar 4. ‘Color break’ kelainan dalam pewarnaan bunga karena virus. Kisaran Inang CyMV CyMV dapat menyerang pada 8 genera tanaman anggrek, yaitu Aranthera sp, Calanthe sp, Cattleya sp,Cymbidium sp, Gromatophyllum sp, Phalaenopsis sp, Oncidium sp, dan Vanda sp. Kisaran inang CyMv adalah Cassia occidentalis, Cattleya sp, Chenopodium amaranticolor, Cucumis sativus, Cymbidium sp, Datura stramonium, Epidendrum sp, Gomphrena globosa, Laelia sp, Laeliocattleya sp, Oncidium sp, Oryza sativa, Phalaenopsis sp, Tropaeolum majus, Vanda sp, Vanilla fragrans, Zinnia elegans, Zygopetalum sp. (Gara 1995). Deteksi CyMV dengan Uji Serologi Uji serologi dengan memanfaatkan reaksi antigen dan antibodi merupakan salah satu cara dalam mengidentifikasi virus penyebab penyakit tumbuhan (Akin 2006). Kegunaan lain dalam mengukur konsentrasi virus dalam jaringan tumbuhan, mendeteksi virus tumbuhan dalam tubuh serangga vektor, dan untuk mengetahui hubungan kekerabatan antar virus (Agrios 2005). Deteksi dan identifikasi secara serologi sudah umum diaplikasikan untuk berbagai virus. Salah satu uji serologi adalah Enzyme Linked Immunosorbent assay (ELISA). Di Indonesia, informasi mengenai penyakit pada tanaman anggrek yang disebabkan oleh CyMV dan keragamannya masih sangat sedikit. Metode serologi yang telah berhasil dilakukan untuk mendeteksi CyMV diantaranya yaitu metode ELISA, digunakan untuk mendeteksi pada tanamana anggrek Grammatophyllum sp. Diagnosis CyMV juga telah berhasil dilakukan oleh (Hu et al. 1993), dan (Sherpa et al. 2007) dengan menggunakan metode serologi Double Antibody Sandwich (DAS) ELISA pada tanaman anggrek jenis Arachnis, Aranda, Asocentrum, Cymbidium, Catteleya, Dendrobium, Oncidium, Phalaenopsis, dan Vanda. Metode serologi ini menggunakan antiserum monoklonal yang bereaksi secara spesifik dengan protein selubung virus CyMV. Kehadiran Virus Cymbidium Mosaic di Seluruh Dunia Insiden relatif CymMV dalam tanaman anggrek telah dipelajari oleh banyak orang peneliti. Sebuah survei tahun 1992 terhadap sekitar 3.600 tanaman anggrek di Hawaii ditemukan bahwa virus mosaik Cymbidium ditemukan di 61% dari tanaman yang diuji. ELISA pengujian adalah protokol yang digunakan. Saat itu kebanyakan hibrida Dendrobium komersial (industri bunga potong) adalah benih yang ditanam dan kejadian CymMV adalah 4% di tanaman berusia kurang dari tiga tahun. Namun, diklon Dendrobiums menunjukkan insidensi 45% (Hu et al. 1993). Koleksi Singapore Botanic Garden telah diuji antara tahun 1988 to1991. 54,6% anggrek yang diuji positif untuk virus mosaik Cymbidium. Yang paling mengganggu adalah bahwa 50,5% dari jaringan kultur jaringan in-house berada terinfeksi dengan CymMV (Wong et al. 1994). Mengembangkan Resistensi CymMV telah diamati di seluruh dunia dalam koleksi pribadi dan publik, tetapi dengan bahkan signifikansi ekonomi yang lebih besar dalam industri bunga potong seperti yang dijelaskan sebelumnya. Dalam program pemuliaan tradisional, jumlah bunga, ukuran dan warna menjadi tujuan akhir. Pemuliaan atau skrining untuk resistensi CymMV di garis anggrek komersial belum menjadi tujuan penelitian umum. Namun, pada tahun 1988, Kuehnle, menemukan bahwa Dendrobiums yang rentan CymMV ketika dibesarkan ke Dendrobium rentan lainnya yang rentan keturunan dan kultivar tahan ketika disilangkan dengan kultivar yang resisten lainnya menghasilkan keturunan yang resisten. Dia menentukan bahwa kerentanan adalah yang dominan karakteristik dalam perkawinan silang jenis dan ekspresi nekrosis bunga dikontrol secara genetis. Para Peneliti Secara Aktif Bekerja Untuk Mengembangkan Strain Resisten CymMV Varietas Dendrobium melalui modifikasi genetik. Dalam satu kasus, gerakan mutan gen protein, mut11 dimasukkan melalui biolistik menjadi dua Dendrobium yang berbeda hibrida dan tanaman berulang kali ditantang oleh inokulasi 1: 1000 pengenceran CymMV. Padahal samplingnya kecil, dengan hanya 24 orisinal tanaman, 9 dari tanaman transgenik tetap CymMV gratis setelah 12 bulan (Obsuwan et al. 2009). Di Taiwan, kelompok penelitian lain mengisolasi CymMV dan cDNA dari CP gen kemudian disintesis dan diurutkan. Melalui penembakan partikel, gen yang disintesis berubah menjadi tanaman Dendrobium yang sangat muda. Itu Kehadiran gen dikonfirmasi oleh PCR, Southern, Northern, dan Western teknik blot. Ketika tanaman ini ditantang dengan CymMV mereka dipamerkan gejala jauh lebih ringan (Chang et al. 2005). Kelompok penelitian lain di Taiwan bekerja dengan hibrida Phalaenopsis. Perlawanan pada tanaman tersebut dicapai dengan memasukkan protein mantel CymMV dan no terminator ditempatkan hilir promotor ubiquitin jagung. Tanaman itu menunjukkan peningkatan resistensi terhadap CmyMV pada tantangan virus. Periplaneta australasiae, The Australian Cockroach (Stejskal et al. 2004) menggambarkan kecoa Australia sebagai penyebaran cepat hama bergerak dari daerah asalnya ke daerah beriklim sedang. Diperkirakan berasal dari Afrika Utara meskipun namanya umum. Spesies hama dari kecoak diyakini telah tersebar dengan eksplorasi manusia awal (Kunkle 2007). Kecoa ini tidak hanya menyerang tempat penyimpanan makanan, tetapi rumah kaca dan kecoa ini tidak hanya menyerbu tempat penyimpanan makanan, tetapi rumah kaca dan konservatori juga. Tidak seperti beberapa kerabatnya yang lebih terkenal, ia dapat memberi makan pada bahan tanaman tender (Gambar 7). Secara lokal dapat ditemukan dalam angka yang merusak di kompleks Smithsonian dan Kebun Raya Amerika Serikat. Di rumah kaca dan konservatori jumlahnya dapat membangun dengan cepat terutama ketika semprotan yang ditargetkan dari program yang ketat pengelolaan hama terpadu diamati (Bell et al. 1999). Menyerupai kecoa Amerika, Periplaneta australasiae berbeda dengan pita kuning ditemukan mengelilingi toraks dan tanda kuning kecil di sampingnya dekat dasar sayap (Gambar 8). Orang dewasa bisa mencapai dua puluh tujuh hingga tiga puluh tiga mm panjang (Cochran 1999) Deteksi CyMV dengan Teknik Molekuler Selain menggunakan metode serologi, deteksi dan identifikasi virus tanaman dapat juga dilakukan dengan teknik molekuler misalnya Reverse Trancriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) (Ryu et al. 1995) dan mikroskop elektron (Akin 2006). Metode ini terdiri atas dua reaksi, yaitu reaksi transkripsi balik (reverse transcription) yang menggunakan genom RNA virus sebagai cetakan dan menghasilkan cDNA primer (untai tunggal) serta reaksi penggandaan (PCR) (Akin 2006). Metode RT-PCR ini telah terbukti dapat digunakan sebagai alat deteksi virus yang memiliki sensitifitas dan akurasi yang tinggi (Marshall dan Atkinson 1991). Deteksi dengan RT-PCR telah berhasil dilakukan oleh (Gara 1995) untuk mendeteksi CyMV dari tanaman anggrek Vanda. Identifikasi menggunakan mikroskop elektron dapat dilakukan dengan mengamati bentuk dan ukuran virion. Berdasarkan bentuk dan ukuran itu, dapat ditentukan jenis virus yang menyerang suatu tanaman (Akin 2006). Identifikasi virus dengan mikroskop elektron telah berhasil dilakukan (Han et al. 1999) Untuk menidentifikasi CyMV hasil pemurnian dari tanaman anggrek Catteleya spp. Menentukan CymMV Host Range Peneliti selama tahun 1950 terutama bekerja dengan teknik bioassay; menginokulasi getah dari anggrek dengan gejala ke berbagai tanaman, keduanya anggrek dan non-anggrek untuk menetapkan kisaran inang. Pada tahun 1952, Dr. Jensen adalah berhasil mentransmisikan virus yang baru diidentifikasi ini dari Laelia anceps ke Cymbidium sp. dan dari Cymbidium sp. ke Cymbidium sp. (Jensen 1952). Ketika diinokulasi dengan getah dari anggrek yang sakit, Datura stramonium (Putih dan Goodchild 1955), Cassia occidentalis (Corbett 1960), Tropaeolum majus, Oryza sativa, Passiflora edulis, dan Zinnia elegans (Murakishi 1958) semuanya terbukt untuk merespon dengan pembentukan lesi daun. Namun, para peneliti tidak mampu untuk membedakan antara Odontoglossum Ringspot virus dan virus mosaik Cymbidium berdasarkan gejala saja. Seringkali kedua penyakit virus hadir tanaman yang sama, menambah kebingungan. Karena masing-masing virus ini memiliki perbedaan berbagai host alternatif, beberapa studi kisaran inang awal menunjukkan kontradiksi di antara kelompok-kelompok penelitian. Jensen tampaknya memiliki pemahaman terbaik tentang dua penyakit dan mendefinisikan a kisaran host diagnostik untuk CymMV yang termasuk hanya Datura stramonium dan Cassia occidentalis (Jensen 1952). Respons hipersensitif, lesi daun atau klorosis, di tanaman inang memungkinkan untuk digunakan sebagai bioassay atau tanaman indikator di survei virus. Reaksi lokal untuk CymMV ini menempatkan Chenopodium amaranticolor, C. quinoa, Tetragonia tetragonioides, Gomphrena globosa, Datura stramonium, dan Cassia occidentalis dalam kelompok tumbuhan (Inouye 2008). Karya Inouye lebih mampu membedakan dan memisahkan kisaran host diagnostik virus mosaik Cymbidium dan Odontoglossum ringspot virus dan menentukan bahwa Cassia occidentalis adalah pabrik uji paling definitif untuk memvisualisasikan lesi CymMV saja. Kendala budidaya anggrek Kendala utama pada budidaya tanaman anggrek adalah gangguan penyakit yang disebabkan oleh patogen. Salah satu patogen yang sering menimbulkan banyak kerugian pada tanaman anggrek adalah virus. Virus yang dapat menginfeksi tanaman anggrek diantaranya adalah CyMV, Odontoglossum ringspot virus (ORSV) (Tanaka et al. 1997), Bean yellow mosaic virus (BYMV), Vanilla mosaic virus (VMV), Tomato spotted wilt virus (Lawson 1995). Diantara virus – virus yang dapat menginfeksi tanaman anggrek, CyMV merupakan virus yang paling banyak menimbulkan kerugian secara ekonomi (Salinger 1985). Bunga anggrek potong sangat peka terhadap penyakit, tidak saja karena berpetal agak rapuh, tetapi juga terdapatnya cairan madu yang sangat baik untuk pertumbuhan patogen. Penutup Simpulan CymMV pertama kali dijelaskan pada tahun 1951 oleh Dilworth D. Jensen yang mengamati hitam nekrosis bercak pada Cymbidium spp dan menamai virus Cymbidium Black Virus Streak. CyMV merupakan virus yang termasuk ke dalam kelompok potexvirus berbentuk filamen memanjang lentur dengan ukuran panjang kurang lebih 440- 480 x 13 nm. CyMV dapat dideteksi dengan uji serologi dan teknik molekuler. Saran Saran yang dapat diberikan dari penelitian ini adalah perlu dilakukan penelitian lanjutan tentang karakteristik molekuler CyMV penyebab mosaik, klorotik, dan nekrotik pada tanaman anggrek untuk mengetahui indentitas CyMV yang lebih terperinci. Daftar Pustaka Agrios GN. 2005. Plant Pathology. Ed ke-5. New York: Academi Press. Aichun L, Yun Z, Songlin RG. 2009. Quantitative detection of Cymbidium mosaic virus by real time PCR. Frontiers of Biology in China. vol 4:314-320 Akin HM. 2006. Virologi Tumbuhan. Yogyakarta: Kanisius. Bell, H. A., Cooke, D., Wildey, K.B., Baker, L.F., Mosson, J. Short, J. 1999 LongTerm Management of a Population of Australian Cockroaches (Periplaneta australasiae) in a Tropical Plant House in the United Kingdom using the Juvenile Hormone Analogue (S)-Hydroprene. Proceedings of the 3rd International Conference on Urban Pests. Chang, C., Chen, Y. C., Hsu, Y. H., Wu, J. T., Hu. C. C., Chang, W. C., Lin, N. S., 1999. Transgenic resistance to Cymbidium mosaic virus in Dendrobium expressing the viral capsid protein gene. Transgenic Research 2005 Feb. 14 (1): 41-46. Cochran, Donald G.1999. Cockroaches, their biology, distribution, and control. World Health Organization, Communicable Diseases Prevention and Control, WHO Pesticide Evaluation Scheme (WHOPES). Corbett,M K.1960. Purification by density gradient centrifugation, electron microscopy, and properties of Cymbidium mosaic virus. Phytopathology. 50:346-351. Gara IW. 1995. Studies on Cymbidium Mosaic Virus Isolated from Vanda Orchid. [thesis]. Japan: Research Institute for Bioresources, Okayama University. Han JH, La YJ dan lee CH. 2009. Use of Triton X-100 and Sephacryl S-500 HR for the Purification of Cymbidium Mosaic Virus from Orchid Plants. Plant Pathology Journal. 15(1) : 34-37. Hu JS. 1993. Tomato Spotted Wilt Detection of Cymbidium Mosaic Virus, Odontoglossum Ringspot Virus, and Potyviruses Infecting Orchids in Hawaii.Plant Dis. 77:464-468. Inouye, Narinobu. 2008. Viruses of Orchids, Symptoms, Diagnosis, Spread, and Control. The Netherlands:Blue Bird Publishers. Jensen, D. D. 1952. Virus Diseases of Orchids. California Agriculture. 6: 7, 15, 16. Lawson, RH. 1995. Viruses and their control. Pages 74-104. In: Orchid Pests and Diseases, American Orchid Society. Florida: West Palm Beach. Lee CS, Chang CY. 2006. Multiplex RT-PCR detection of orchid viruses with an internal control of plant nad5 mRNA. Plant Pathology. 15: 187-196. Marshall G dan Atkinson D. 1991. Molecular biology: its practice and role in crop pretection. Great Britain: The Lavenham Press Limited. Murakishi, HH. 1958. Host range, symptomalology, physical properties, and crossprotection studies of orchid virus isolates. Phytopathology. 48:132- 137. Obsuwn, K., Hieber, D. A., Mudalige-Jayawickrama, R. G., Kuehnle, A. R. 2009. A dysfunctional CymMV movement protein confers resistance to CymMV in Dendrobium Orchid. Acta Horticulturae. No. 836 pp. 149-154. Risa. 2007. Budidaya Anggrek Bulan. Lembang: BBPP. Ryu KH, Yoon KE dan Park WM. 1995. Detection by RT-PCR of Cymbidium Mosaic Virus in orchids. Phytopathology 143:643-646 (15 ref.). Salinger JP. 1985. Commercial Flower Growing. Wellington, N.Z.: Butterworths Horticultural Books. Salinger JP. 1985. Commercial Flower Growing. Wellington, NZ: Butterworths Horticultural Books. Salunkhe DK, Bhaf NR, Desai BB. 1990. Postharvest Biotechnology of Flowers and Ornamental Plant. New York : Springer VBH. Sherpa, A. R., Hallan, V., Pathak, P., Zaidi, A. A. Complete nucleotide sequence analysis of Cymbisium mosaic virus Indian isolate: further evidence for natural recombination among Potexviruses. Journal of Bioscience. 32 (4) June 2007, 663- 669. Stejskal, V., Lukas, J., and Aulicky, R. 2004. Temperature-dependent development and mortality of Australian Cockroach, Periplaneta australasias (Fabricius). Plant Protection Science. 40(1) 11-15. Sutiyoso Y. 2006. Merawat Anggrek. Jakarta: Penebar swadaya. Tanaka S, Nishii H, Ito S, Kameya-Iwaki M, and Sommartya P. 1997. Detection of Cymbidium mosaic potexvirus and Odontoglossum ringspot tobamovirus from Thai orchids by rapid immunofilter paper assay. Plant Dis. 81:167-170 Trigiano RN, Windham MT, Windham AS. 2004. Plant Pathology :concepts and laboratory exercises. New York: CRC Press. Wong, S. M., Chng, C. G., Lee, Y. H., Tan, K., Zettler, F. W. 1994. Incidence of Cymbidium mosaic and Odontoglossum ringspot viruses and their significance in orchid cultivation in Singapore. Crop Protection. 13:235-239.