OUBU G15 E0502 (1052)

Berichrom* α2-Antiplasmin
Berichrom [ANTIPLASMIN]
Reagents for the determination of α2-antiplasmin Procedure
Manual:
Intended Use Cuvette: 1 cm thickness
For the quantitative determination of biologically active α2-antiplasmin as an aid in the diagnosis of
Wavelength: 405 nm
inherited or acquired deficiencies and in management of fibrinolytic therapy.
Testing temperature: +37 °C
Prewarm the plasmin solution, plasmin substrate and the plastic cuvettes or tubes to the chosen
Summary and Explanation testing temperature.
α2-antiplasmin is the most important physiological inhibitor of the fibrinolytically active enzyme
plasmin, with which it very quickly forms an irreversible inactive complex. Reduced α2-antiplasmin Pipetting scheme for the kinetic method
activity is found in cases of hyperfibrinolysis that can occur as a complication of disseminated
intravascular coagulation (DIC) or in operations on organs with a high content of plasminogen Plasmin enzyme value (PEV) Sample
activators. An α2-antiplasmin deficiency may also indicate a synthesis disorder (e.g. in severe liver Isotonic saline solution 20 µL -
cell damage). The determination of α2-antiplasmin is also indicated for additional assessment of Plasma Sample - 20 µL
problematic cases during fibrinolytic therapy1. Plasmin 1000 µL 1000 µL
Mix and incubate for 1 minute at +37 °C.
Principle of the Method Plasmin Substrate 100 µL 100 µL
The α2-antiplasmin in the sample deactivates the plasmin present. The residual plasmin content Mix and determine ∆A405 nm/min.
is determined in a kinetic test measuring the increase in absorbance at 405 nm according to the Photometer/Stopwatch: Read the optical density within 30 seconds and start the stopwatch at
following reaction scheme: the same time. Repeat the reading after exactly 60 and 120 seconds, then calculate the respec-
α2-antiplasmin sample + plasmin excess –––––> [α2-antiplasmin-plasmin] + plasmin remainder tive ∆A/min by subtraction and then the mean value from both measured values.
plasmin remainder Evaluation, Kinetic Method
HD-Nva-CHA-Lys-pNA –––––––––––––––> HD-Nva-CHA-Lys-OH + p-Nitroaniline For each measurement series, at least 1 plasmin enzyme value (∆A/minPEV) and 1 reference value
is necessary. These must be determined like a sample using a reference plasma with target value
Reagents specifications for α2-antiplasmin (e.g., Standard Human Plasma). The laboratory internal factor FL
is determined as follows:
Materials provided Target value (% of the norm)reference plasma
Berichrom [ANTIPLASMIN], [REF] OUBU with FL = –––––––––––––––––––––––––––––––––
3 x l 5 mL [REAGENT__|_ P], Plasmin ∆A/minPEV - ∆A/minreference plasma
3 x l 2 mL [PLASMIN] [SUBSTRATE], Plasmin Substrate The α2-antiplasmin content of the sample in % of the norm is calculated using the following formula:
1 x 15 mL [REAGENT__|_ P_ |_ DILUENT], Buffer Solution α2-Antiplasminsample (% of the norm) = FL x (∆A/minPEV - ∆A/minsample)
Composition Comments
Plasmin (human), lyophilized; concentration in the working solution: 0.1 CTA U/mL 1. Doubling or halving the volumes has no effect on the calculation and the laboratory internal factor.
Plasmin Substrate, lyophilized; concentration in the working solution: D-Norvalyl-cyclohexylala- 2. If the α2-antiplasmin content in the sample is less than 20 % of the norm, it is recommended that
nyl-lysyl-p-nitroanilide (HD-Nva-CHA-Lys-pNA) 3 mmol/L 40 µL of sample be used in the test. The result is then divided by 2.
Buffer solution: KH2PO4, NaCl, glycerol, pH 7.5 3. The laboratory internal factor FL or the reference curve must be redetermined for each change
in instruments and for each new lot of Berichrom* α2-Antiplasmin.
Preservative: sodium azide (< 1 g/L)
Automatic:
Warnings and Precautions
Siemens provides Reference Guides (Application Sheets) for several coagulation analyzers.
1. For in-vitro diagnostic use only.
2. Contains sodium azide (< 0.1 %) as a preservative. Sodium azide can react with copper or lead Internal Quality Control
pipes in drain lines to form explosive compounds. Dispose of properly in accordance with local Normal range: Control Plasma N
regulations. Pathological range: Control Plasma P
3. Each donor or donor unit was tested and found to be negative for human immunodeficiency Two controls must be measured with each calibration and at least every 8 hours during each day of
virus (HIV) 1 and 2, hepatitis B virus (HBV) and hepatitis C virus (HCV) using either tests found testing (one in the normal range and one in the pathological range). The controls should be treated
to be in conformance with the In Vitro Diagnostic Directive in the EU or FDA approved tests. like the samples. Each laboratory should determine its own quality control range, either by means
Because no known test can offer complete assurance of the absence of infectious agents, all of the target values and ranges provided by the manufacturer of the controls or by means of ranges
human derived products should be handled with appropriate caution. determined in the laboratory. If the measured control value lies outside of the pre-determined range,
Preparation of the Reagents then the reagents, the laboratory-internal factor FL or the reference curve and coagulation analyzer
should be checked.
[REAGENT__|_ P]: Reconstitute with the amount of buffer solution indicated on the label and incubate
for 15 minutes at +15 to +25 °C. Limitations of the Procedure
[PLASMIN] [SUBSTRATE]: Dissolve the contents of the vial with the amount of distilled or deionized Plasmin inhibitors like aprotinin might lead to elevated results3.
water indicated on the label. Because of the increased viscosity (glycerol content) of the reconstituted plasmin, it is recommended
Mix reagents carefully before each use. that the plasmin solution not be pipetted too quickly.
Storage and Stability If the patient sample result exceeds 120 % of the norm, dilute the sample with isotonic saline and
assay the dilution. Multiply the result by the dilution factor to compensate for the increased dilution.
The test kit may be used up to the expiry date indicated on the label if stored unopened at +2 to +8 °C. If the patient sample result is greater than the Plasmin Enzyme Level, complete depletion of patient
Stability after reconstitution: α2-antiplasmin is indicated.
Siemens has validated use of these reagents on various analyzers to optimize product performance
Temperature [REAGENT__|_ P] [PLASMIN] [SUBSTRATE] and meet product specifications. User defined modifications are not supported by Siemens as
+37 °C 3 hours 1 week they may affect performance of the system and assay results. It is the responsibility of the user to
validate modifications to these instructions or use of the reagents on analyzers other than those
+15 °C 2 days 2 weeks
included in Siemens Reference Guides (Application Sheets) or these instructions for use.
+2 to +8 °C 1 week 6 weeks Results of this test should always be interpreted in conjunction with the patient’s medical history,
≤-20 °C 1 month 6 months clinical presentation and other findings.
[REAGENT__|_ P_ |_ DILUENT] is stable for 6 months after it is first opened if stored at +2 to +8 °C.
Information regarding on-board stability is specified in the Reference Guides (Application Sheets) Expected Values
for the different coagulation analyzers. 80 - 120 % of the norm4
Reference intervals vary from laboratory to laboratory depending on the population served and the
Additional materials required, but not provided: technique, method, equipment and reagent lot used. Therefore, each laboratory must establish
Standard Human Plasma, [REF] ORKL its own reference intervals or verify them whenever one or more of the aforementioned variables
Control Plasma N, [REF] ORKE are changed.
Control Plasma P, [REF] OUPZ
Imidazole Buffer Solution, [REF] OQAA or
Specific Performance Characteristics
Measuring range
Dade® Owren’s Veronal Buffer, [REF] B4234 or The linear measuring range is from 0 to 150 % of the norm.
Dade® CA System Buffer, [REF] B4265 or
Precision
Isotonic saline solution The within-series reproducibility, estimated by the coefficient of variation calculated from repetitive
Distilled or deionized water assay of samples in different laboratories, was 0.5 to 9.9 % for samples in the normal range and
3.1 to 8.4 % for pathological samples. The inter-assay coefficients of variation, measured similarly,
Equipment
were 3.2 to 8.4 % for normal range samples and 3.2 to 7.4 % for pathological samples.
Berichrom* α2-Antiplasmin can be used manually or on automated coagulation analyzers. Siemens
Healthcare Diagnostics provides Reference Guides (Application Sheets) for several coagulation Method comparison
analyzers. The Reference Guides (Application Sheets) contain analyzer/assay specific handling At 4 European laboratories, the performance of the Berichrom* α2-Antiplasmin test (y) was com-
and performance information which may differ from that provided in these Instructions for Use. In pared with a commercial test (x) which employs a similar synthetic substrate for measuring the
such a case, the information contained in the Reference Guides (Application Sheets) supersedes analyte. Assays were performed on 108 plasma specimens throughout the measuring range of the
the information in these Instructions for Use. In addition, please consult the instruction manual of method using the manual two point procedure at +37 °C. The calculated least squares regression
the instrument manufacturer! equation was y = 1.01 x + 2.7 % with a correlation coefficient (r) of 0.946.

Specimen Collection and Preparation Bibliography 

To obtain the plasma, carefully mix 1 part sodium citrate solution (0.11 mol/L) with 9 parts venous 1. Saito H. α2-Plasmin inhibitor and its deficiency states. J Lab Med. 1988; 112: 671-8.
blood, avoiding the formation of foam. Centrifuge immediately at no less than 1,500 x g for at least 2. Dick W, Cullmann W, Müller N. Automatisierung eines neuen amidolytischen Verfahrens zur
10 minutes. α2-Antiplasmin-Bestimmung im Plasma. Lab med. 1983; 7: 51-4.
Stability of the samples: 3. Johannessen M, Edsberg B, DeVries C, Nielsen F. A modified non-amidolytic assay non-
≤-20 °C 1 month affected by aprotinin for determination of α2-antiplasmin in plasma from patients undergoing
cardiopulmonary bypass (CBP). Thromb Haemost. 1993; 69: 1353 (Abstract).
+2 to +8 °C 2 days
4. Kraus M. α2-antiplasmin. In: Thomas L, ed. Clinical Laboratory Diagnostics. Frankfurt: TH-
+15 to +25 °C 6 hours Books Verlagsgesellschaft, 1998: 627-8.
Thaw plasma stored at ≤-20 °C within 10 minutes at +37 °C and perform the determination within
2 hours. Patient plasma is used undiluted in the chosen testing system.

OUBU G15 E0502 (1052) 1

Dade is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics. Untersuchungsmaterial
* Berichrom is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics. Zur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lösung 0,11 mol/l mit 9 Teilen Venenblut sorgfältig
unter Vermeidung von Schaumbildung mischen. Sofort mindestens 10 Minuten bei mindestens
1.500 x g zentrifugieren.
Stabilität der Proben:
≤-20 °C 1 Monat
+2 bis +8 °C 2 Tage
+15 bis +25 °C 6 Stunden
Edition November 2008 Bei ≤-20 °C gelagerte Plasmen innerhalb von 10 Minuten bei +37 °C auftauen und die Bestimmung
dann innerhalb von 2 Stunden durchführen. Das Patientenplasma wird unverdünnt in das gewählte
Testsystem eingesetzt.

Berichrom* α2-Antiplasmin Testdurchführung

Manuell:

Berichrom [ANTIPLASMIN]
Küvette: 1 cm Schichtdicke
Wellenlänge: 405 nm
Testtemperatur: +37 °C
Reagenzien zur Bestimmung von α2-Antiplasmin Plasmin-Lösung, Plasmin-Substrat sowie die Kunststoffküvetten bzw. -röhrchen auf die gewählte
Testtemperatur vorwärmen.
Anwendungsbereich Pipettierschema für die kinetische Methode
Zur quantitativen Bestimmung von biologisch aktivem α2-Antiplasmin zur Unterstützung der Diagnose
angeborener oder erworbener Mangelzustände und zur Steuerung der fibrinolytischen Therapie. Plasmin-Enzymwert (PEW) Probe
isotonische Kochsalzlösung 20 µl -
Diagnostische Bedeutung Plasma-Probe - 20 µl
α2-Antiplasmin ist der physiologisch bedeutendste Inhibitor für das fibrinolytisch wirksame Enzym Plasmin 1000 µl 1000 µl
Plasmin, mit dem es extrem schnell und irreversibel einen inaktiven Komplex bildet. Verminderte mischen und 1 Minute bei +37 °C inkubieren.
Aktivitäten von α2-Antiplasmin werden bei einer Hyperfibrinolyse, die als Komplikation einer disse- Plasmin-Substrat 100 µl 100 µl
minierten intravasalen Gerinnung (DIC) oder bei Operationen an Organen mit einem hohen Gehalt mischen und ∆E405 nm/min bestimmen.
an Plasminogen-Aktivatoren auftreten kann, gefunden. Außerdem ist bei α2-Antiplasmin-Mangel Photometer/Stoppuhr: innerhalb von 30 Sekunden die Extinktion ablesen und gleichzeitig die
an eine Synthesestörung (z. B. bei schwerem Leberzellschaden) zu denken. Darüberhinaus ist die Stoppuhr starten. Nach genau 60 und 120 Sekunden Ablesung wiederholen, die jeweiligen
Bestimmung von α2-Antiplasmin zur zusätzlichen Beurteilung von problematischen Fällen bei der ∆E/min durch Differenzbildung berechnen und aus beiden Messwerten den Mittelwert bilden.
Fibrinolysetherapie angezeigt1.
Auswertung, kinetische Methode
Prinzip der Methode Für jede Messserie ist mindestens 1 Plasmin-Enzymwert (∆E/minPEW) und 1 Referenzmesswert, der
mit einem Bezugsplasma mit Sollwertangabe für α2-Antiplasmin (z. B. Standard-Human-Plasma) als
Das α2-Antiplasmin der Probe inaktiviert vorgelegtes Plasmin. Der Rest-Plasmingehalt wird in Probe bestimmt wird, erforderlich. Damit wird der labor-interne Faktor FL berechnet:
einem kinetischen Test mit Extinktionszunahme bei 405 nm nach folgendem Reaktionsschema
bestimmt: Sollwert (% der Norm)Bezugsplasma
α2-Antiplasmin Probe + Plasmin Überschuss –––––> [α2-Antiplasmin-Plasmin] + Plasmin Rest FL = –––––––––––––––––––––––––––
∆E/minPEW - ∆E/minBezugsplasma
Plasmin Rest Der α2-Antiplasmin-Gehalt der Probe in % der Norm ergibt sich dann nach folgender Formel:
HD-Nva-CHA-Lys-pNA ––––––––––––––> HD-Nva-CHA-Lys-OH + p-Nitroanilin
α2-AntiplasminProbe (% der Norm) = FL x (∆E/minPEW - ∆E/minProbe)
Reagenzien Anmerkungen
1. Eine Volumenverdopplung oder -halbierung hat keine Auswirkung auf die Berechnung und den
Inhalt der Handelspackung
laborinternen Faktor.
Berichrom [ANTIPLASMIN], [REF] OUBU mit
2. Bei einem α2-Antiplasmin-Gehalt der Probe unter 20 % der Norm empfiehlt es sich, 40 µl Probe
3 x l 5 ml [REAGENT__|_ P] Plasmin in den Test einzusetzen. Das Ergebnis wird durch 2 dividiert.
3 x l 2 ml [PLASMIN] [SUBSTRATE] Plasmin Substrat 3. Bei jedem Gerätewechsel und für jede Charge Berichrom* α2-Antiplasmin muss der laborinterne
1 x 15 ml [REAGENT__|_ P_ |_ DILUENT], Pufferlösung Faktor FL bzw. die Bezugskurve neu bestimmt werden.
Zusammensetzung Automatisch:
Plasmin (human), lyophilisiert; Konzentration in der Gebrauchslösung: 0,1 CTA-U/ml Siemens stellt für verschiedene Gerinnungsmessgeräte Referenzhandbücher (Applikationsvor-
schriften) zur Verfügung.
Plasmin-Substrat, lyophilisiert; Konzentration in der Gebrauchslösung: D-Norvalyl-cyclohexylala-
nyl-lysyl-p-nitroanilid (HD-Nva-CHA-Lys-pNA) 3 mmol/l Interne Qualitätskontrolle
Pufferlösung: KH2PO4, NaCl, Glycerin, pH 7,5 Normalbereich: Kontroll-Plasma N
Konservierungsmittel: Natriumazid (< 1 g/l) Pathologischer Bereich: Kontroll-Plasma P
Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen Bei jeder Kalibration und mindestens alle 8 Stunden an jedem Testtag müssen zwei Kontrollen
(eine im Normalbereich und eine im pathologischen Bereich) gemessen werden. Das Kontrollma-
1. Nur zur in-vitro diagnostischen Anwendung.
terial sollte wie die Proben behandelt werden. Jedes Labor sollte seinen Qualitätskontrollbereich
2. Enthält Natriumazid (< 0,1 %) als Konservierungsmittel. Natriumazid kann mit kupfer- oder entweder anhand der vom Hersteller der Kontrollen angegebenen Sollwerte und -bereiche oder
bleihaltigen Abflussrohren explosive Verbindungen eingehen. Entsorgen Sie bitte ordnungsge- anhand im Labor bestimmter Vertrauensbereiche festlegen. Liegt der gemessene Kontrollwert au-
mäß entsprechend den örtlichen Richtlinien. ßerhalb des vorher festgelegten Vertrauensbereiches, sollten Reagenzien, der laborinterne Faktor
3. Jede individuelle Blutspende wurde mit negativem Befund auf humane Immundefizienz-Viren FL bzw. die Bezugskurve und das Gerinnungsmessgerät überprüft werden.
(HIV) 1 und 2, Hepatitis B-Viren (HBV) und Hepatitis C-Viren (HCV) getestet. Die eingesetzten
Teste entsprachen entweder den Anforderungen der EU Richtlinie über In-vitro-Diagnostika
oder waren von der FDA zugelassen. Da kein Test mit völliger Sicherheit die Abwesenheit
Einschränkungen der Testdurchführung
von Infektionserregern garantieren kann, sollten alle Produkte mit humanen Bestandteilen mit Plasmin-Inhibitoren wie Aprotinin können zu erhöhten Ergebnissen führen3.
angemessener Sorgfalt behandelt werden. Aufgrund der erhöhten Viskosität (Glycerin-Gehalt) des rekonstituierten Plasmins empfiehlt es sich,
die Plasmin-Lösung nicht zu schnell zu pipettieren.
Vorbereitung der Reagenzien Überschreitet der Wert einer Patientenprobe 120 % der Norm, die Probe mit isotonischer Koch-
[REAGENT__|_ P]: Mit der auf dem Etikett angegebenen Menge Pufferlösung lösen und 15 Minuten salzlösung verdünnt messen. Das Resultat mit dem Verdünnungsfaktor multiplizieren, um diese
bei +15 bis +25 °C inkubieren. Verdünnung zu berücksichtigen.
[PLASMIN] [SUBSTRATE]: Inhalt der Flasche mit der auf dem Etikett angegebenen Menge desti- Liegt das Ergebnis einer Patientenprobe höher als der Plasmin-Enzymwert, zeigt dies einen voll-
ständigen α2-Antiplasminverbrauch bei dem Patienten an.
liertem oder deionisiertem Wasser lösen.
Siemens hat den Einsatz der Reagenzien auf verschiedenen Analysengeräten auf optimale Pro-
Reagenzien vor Gebrauch noch einmal vorsichtig mischen. duktleistung und Einhaltung der Produktspezifikationen überprüft. Vom Benutzer vorgenommene
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen Änderungen werden von Siemens nicht unterstützt, da sie die Leistung des Systems und die Test-
Der Testkit ist ungeöffnet bei +2 bis +8 °C zu lagern und bis zu dem auf dem Etikett angegebenen ergebnisse beeinflussen können. Es liegt in der Verantwortung des Benutzers, Änderungen an die-
Verfallsdatum verwendbar. sen Anleitungen oder die Verwendung dieser Reagenzien auf anderen als in den Referenzhand-
büchern (Applikationsvorschriften) von Siemens oder diesen Gebrauchsanweisungen genannten
Stabilität nach Rekonstitution: Analysengeräten zu validieren.
Resultate dieses Tests sollten stets in Verbindung mit der Vorgeschichte des Patienten, dem kli-
Temperatur [REAGENT__|_ P] [PLASMIN] [SUBSTRATE] nischen Bild und anderen Untersuchungsergebnissen interpretiert werden.
+37 °C 3 Stunden 1 Woche
+15 °C 2 Tage 2 Wochen Referenzbereich
+2 bis +8 °C 1 Woche 6 Wochen 80 - 120 % der Norm4
≤-20 °C 1 Monat 6 Monate Referenzintervalle variieren von Labor zu Labor in Abhängigkeit von der zu untersuchenden Po-
[REAGENT__|_ P_ |_ DILUENT] ist nach erstmaligem Öffnen 6 Monate bei +2 bis +8 °C stabil. pulation und den angewendeten Arbeitstechniken, Methoden, Geräten und Reagenzchargen. Da-
her sollte jedes Labor auf der Grundlage der jeweils angewendeten Arbeitstechniken, Methoden,
Die Angaben zur Stabilität auf dem Gerät sind in den Referenzhandbüchern (Applikationsvorschriften) Geräte und Reagenzchargen eigene Referenzbereiche ermitteln, bzw. die Referenzbereiche nach
für die einzelnen Gerinnungsmessgeräte aufgeführt. einem Wechsel der aufgeführten Parameter verifizieren.
Zusätzlich benötigte Materialien:
Standard-Human-Plasma, [REF] ORKL Leistungsmerkmale des Tests
Kontroll-Plasma N, [REF] ORKE Messbereich
Kontroll-Plasma P, [REF] OUPZ Der lineare Messbereich reicht von 0 bis 150 % der Norm.
Imidazol-Pufferlösung, [REF] OQAA, oder Präzision
Dade® Owren’s Veronal-Puffer, [REF] B4234 oder Die Wiederholbarkeit in der Serie wurde als Variationskoeffizient basierend auf wiederholten Mes-
Dade® CA-System Puffer, [REF] B4265 oder sungen von Proben in verschiedenen Laboratorien bestimmt. Der Variationskoeffizient betrug 0,5 %
bis 9,9 % für Proben im Normalbereich und 3,1 % bis 8,4 % für pathologische Proben. Der auf
Isotonische Kochsalzlösung vergleichbare Weise bestimmte Variationskoeffizient von Tag zu Tag betrug 3,2 % bis 8,4 % für
Destilliertes oder deionisiertes Wasser Proben im Normalbereich und 3,2 % bis 7,4 % für pathologische Proben.
Geräte Methodenvergleich
Berichrom* α2-Antiplasmin kann für manuelle Methoden oder an automatischen Gerinnungsmess- Die Funktion des Berichrom* α2-Antiplasmin-Tests (y) wurde in 4 europäischen Laboratorien mit
geräten verwendet werden. Siemens Healthcare DIagnostics stellt für verschiedene Gerinnungs- der eines kommerziell erhältlichen Tests (x) verglichen, der ein ähnliches synthetisches Substrat
messgeräte Referenzhandbücher (Applikationsvorschriften) zur Verfügung. Diese enthalten ge- zur Messung des Analyten verwendet. Die Tests wurden mit 108 Plasmaproben, die den gesam-
räte-/testspezifische Informationen zur Abarbeitung und Leistungsdaten, die von den Informationen ten Messbereich abdeckten, unter Verwendung der manuellen Zwei-Punkt-Methode bei +37 °C
in dieser Gebrauchsanweisung abweichen können. In diesem Fall ersetzen die Informationen in durchgeführt. Die Regressionsgleichung war y = 1,01 x + 2,7 % mit einem Korrelationskoeffizienten
den Referenzhandbüchern (Applikationsvorschriften) die Informationen in dieser Gebrauchsanwei- (r) von 0,946.
sung. Bitte auch die Bedienungsanleitung des Geräteherstellers beachten!
Literatur
Siehe englische Gebrauchsanweisung.

OUBU G15 E0502 (1052) 2

Dade ist ein Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics. Échantillons du test
* Berichrom ist ein Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics. Pour obtenir les plasmas, prélever 1 volume de solution de citrate de sodium (0,11 mol/l) avec 9
volumes de sang veineux, et mélanger avec précaution en évitant la formation de mousse. Centri-
fuger immédiatement pendant au moins 10 minutes et à au moins 1500 x g.
Stabilité des échantillons :
≤-20 °C 1 mois
+2/+8 °C 2 jours
Ausgabe November 2008
+15/+25 °C 6 heures
Décongeler le plasma conservé à≤-20 °C dans les 10 minutes en le plaçant à +37 °C et procéder

Berichrom* α2-Antiplasmine au dosage dans les 2 heures. Tester les plasmas de patients non dilués.

Réalisation du test

Berichrom [ANTIPLASMIN] Méthode manuelle :

Cuve :
Longueur d’onde :
1 cm de trajet optique
405 nm
Réactifs pour le dosage de l’α2-antiplasmine Température du test : +37 °C
Préchauffer la solution de Plasmine, le Substrat Plasmine ainsi que les cuves ou tubes plastique à
Domaine d’utilisation la température choisie pour le test.
Permet le dosage quantitatif de l’α2-antiplasmine biologiquement active, comme aide au diagnostic Schéma de pipetage pour la méthode cinétique
des déficits congénitaux ou acquis et pour le suivi des traitements fibrinolytiques.
Valeur enzymatique de plas- Echantillon
Intérêt diagnostique mine (VEP)
L’α2-antiplasmine est l’inhibiteur physiologique le plus important de la plasmine, enzyme qui agit Sérum physiologique 20 µl -
fibrinolytiquement, et avec lequel il forme extrêmement rapidement et de façon irréversible un Echantillon plasmatique - 20 µl
complexe inactif. On observe des activités diminuées d’α2-antiplasmine dans les hyperfibrinolyses Plasmine 1000 µl 1000 µl
qui surviennent comme complication d’une coagulation intravasculaire disséminée (CIVD) ou en Mélanger et laisser incuber 1 min à +37 °C.
cas d’opérations sur des organes avec un taux élevé d’activateurs du plasminogène. En cas de Substrat Plasmine 100 µl 100 µl
déficit en α2-antiplasmine, on peut également penser à un trouble de la synthèse (par ex. en cas Mélanger et déterminer ∆D.O.405 nm/min.
d’endommagement grave des cellules hépatiques). Par ailleurs, le dosage de l’α2-antiplasmine
est également indiqué comme avis complémentaire de cas problématique en cas de traitement Photomètre/chronomètre : Lire la densité optique dans les 30 secondes et démarrer simul-
fibrinolytique1. tanément le chronomètre. Après exactement 60 et 120 sec, faire une deuxième puis une
troisième lecture, calculer la ∆D.O./min entre chaque lecture par différence, puis la valeur
moyenne à partir des deux ∆D.O./min obtenues.
Principe de la méthode
L’α2-antiplasmine de l’échantillon inactive la plasmine prédistribuée. Le taux de plasmine résiduel Exploitation de la méthode cinétique
est mesuré par un test cinétique avec une augmentation de la densité optique à 405 nm selon le Pour chaque série de mesures, il est impératif d’avoir au moins 1 valeur enzymatique de plasmine
schéma réactionnel suivant : (∆D.O./minVEP) et 1 valeur de référence obtenue à l’aide d’un plasma de référence avec une valeur
α2-antiplasmine échantillon + plasmine excès –––––> [α2-antiplasmine-plasmine] + plasmine résiduelle théorique d’α2-antiplasmine (par ex. le Plasma standard humain). On peut ainsi calculer un facteur
interne au laboratoire, FL :
plasmine résiduelle Valeur théorique (% de la normale)plasma de référence
HD-Nva-CHA-Lys-pNA ––––––––––––––––> HD-Nva-CHA-Lys-OH + p-nitroaniline FL = ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––
∆D.O./minVEP - ∆D.O./minplasma de référence
Réactifs La concentration en α2-antiplasmine de l’échantillon en % de la normale se calcule ensuite selon
Conditionnement la formule suivante :
Berichrom [ANTIPLASMIN], [REF] OUBU contenant α2-antiplasmineéchantillon (% de la normale) = FL x (∆D.O./minVEP - ∆D.O./minéchantillon)
3 x l 5 ml [REAGENT__|_ P] Plasmine Remarques
3 x l 2 ml [PLASMIN] [SUBSTRATE] Substrat Plasmine 1. La multiplication ou la division par deux des prises d’essai n’a pas d’influence sur l’exploitation
des résultats ni sur le facteur interne au laboratoire.
1 x 15 ml [REAGENT__|_ P_ |_ DILUENT], Solution tampon
2. Pour une concentration d’α2-antiplasmine inférieure à 20 % de la normale, il est recommandé
Composition d’utiliser 40 µl d’échantillon et de recommencer le dosage. Diviser alors le résultat par 2.
Plasmine (humaine), lyophilisée ; concentration de la solution d’emploi : 0,1 CTA U/ml 3. Déterminer un nouveau facteur interne au laboratoire FL ou une nouvelle courbe d’étalonnage
Substrat Plasmine, lyophilisé ; concentration de la solution d’emploi : 3 mmol/l de D-norvalyl- à chaque changement d’appareil ou de lot de Berichrom* α2-Antiplasmine.
cyclo-héxylalanyl-lysyl-p-nitroanilide (HD-Nva-CHA-Lys-pNA) Méthode automatique :
Solution tampon : KH2PO4 (100 mmol/l), NaCl (9 g/l), glycérine (250 g/l), pH 7,5 Siemens propose des Guides de référence (fiches d’application) pour plusieurs appareils de coa-
Conservateur : azide de sodium (< 1 g/l) gulation.
Mises en garde et précautions d’emploi Contrôle de qualité interne
1. Réactifs réservés à un usage de diagnostic in-vitro. Domaine normal : Plasma de contrôle N
2. Contient de l’azite de sodium (< 0,1 %) comme conservateur. L’ azite de sodium peut réagir Domaine thérapeutique : Plasma de contrôle P
avec les tuyaux d’évacuation en cuivre ou en plomb et former des composés explosifs. L’éva- Deux contrôles doivent être mesurés à chaque nouvel étalonnage et au moins toutes les 8 heures sur
cuer conformément aux réglementations locales. une journée de travail (un contrôle dans le domaine normal et un dans le domaine pathologique). Trai-
3. Chaque donneur ou donneur d’unité a été testée avérée négative pour le virus d’immunodé- ter les contrôles comme des échantillons de patients. Chaque laboratoire doit déterminer son propre
ficience humaine (HIV) 1 et 2, virus de l’hépatite B (HBV) et virus de l’hépatite C (HCV) en domaine de contrôle de qualité, à partir soit des valeurs théoriques et domaines de confiance indiqués
utilisant soit un test en conformité avec la directive diagnostique in vitro en vigueur en Europe par le fabricant des contrôles utilisés, soit des domaines de confiance établis dans son laboratoire.
ou les tests approuvés par le FDA. Comme aucun test connu ne peut offrir l’assurance complète Si les valeurs obtenues pour les contrôles sortent du domaine de confiance préalablement établi,
de l’absence des agents infectieux, tous les produits dérivés humains devraient être manipulés procéder à la vérification des réactifs, du facteur interne au laboratoire FL, de la courbe d’étalonnage
avec les précautions appropriées. et de l’appareil de coagulation utilisé.
Préparation des réactifs
[REAGENT__|_ P] : Reconstituer avec la quantité de solution tampon mentionnée sur l’étiquette, et Limites du test
incuber pendant 15 minutes à une température comprise en + 15/+ 25 °C. Les inhibiteurs de la plasmine, tels que l’aprotinine, peuvent provoquer une élévation des valeurs
obtenues3.
[PLASMIN] [SUBSTRATE] : Dissoudre le contenu du flacon avec la quantité d’eau distillée ou d’eau
déminéralisée mentionnée sur l’étiquette. Du fait de l’augmentation de la viscosité (taux de glycérine) de la plasmine reconstituée, il est
recommandé de ne pas pipeter trop rapidement la solution de plasmine.
Mélanger soigneusement les réactifs avant chaque utilisation.
Si la valeur obtenue pour l’échantillon de patient est supérieure à 120 % de la normale, diluer
Stabilités et conditions de conservation l’échantillon avec du sérum physiologique isotonique, et mesurer l’échantillon dilué. Multiplier alors
Le coffret peut être utilisé jusqu’à la date d’expiration mentionnée sur l’étiquette s’il est conservé le résultat par le facteur de dilution, afin de tenir compte de cette dilution. Si la valeur obtenue
dans son emballage fermé entre + 2/+ 8 °C. pour l’échantillon de patient est supérieure à la valeur enzymatique de plasmine, elle indique une
déplétion totale de l’α2-antiplasmine chez le patient.
Stabilités après reconstitution : Siemens a validé l’utilisation de ces réactifs sur plusieurs analyseurs afin d’optimiser les performan-
Temperature [REAGENT__|_ P] [PLASMIN] [SUBSTRATE] ces du produit et répondre à ses spécifications. Les modifications apportées par l’utilisateur ne sont
pas sous la responsabilité de Siemens dans la mesure où elles peuvent affecter les performances
+37 °C 3 heures 1 semaine du système et les résultats des dosages. Il est de la responsabilité de l’utilisateur de valider toutes
+15 °C 2 jours 2 semaines modifications apportées à ces instructions ou à l’utilisation des réactifs sur les analyseurs autres
+2/+8 °C 1 semaine 6 semaines que ceux mentionnés dans les protocoles d’application Siemens ou dans la présente notice d’uti-
≤-20 °C 1 mois 6 mois lisation.
Après ouverture, [REAGENT__|_ P_ |_ DILUENT] conservée à +2/+8 °C reste stable pendant 6 mois. Les résultats de ce test doivent toujours être interprétés en rapport avec les antécédents médicaux
du patient, les signes cliniques et autres constatations.
Les informations relatives à la stabilité dans l’appareil sont mentionnées dans les Guides de réfé-
rence (fiches d’application) des différents appareils de coagulation.
Domaine de référence
Autres réactifs et matériel nécessaires : 80 - 120 % de la normale4
Plasma standard humain, [REF] ORKL Les intervalles de référence varient d’un laboratoire à l’autre en fonction de la population ainsi que
Plasma de contrôle N, [REF] ORKE de la technique, de la méthode, du matériel et du lot de réactif utilisés. En conséquence, chaque
laboratoire doit déterminer ses propres intervalles de référence ou les vérifier chaque fois que l’une
Plasma de contrôle P, [REF] OUPZ ou plusieurs des variables mentionnées ci-dessus sont modifiées.
Solution tampon Imidazole, [REF] OQAA, ou
Dade® Tampon véronal d’Owren, [REF] B4234, ou
Caractéristiques du test
Dade® Tampon pour systèmes CA, [REF] B4265, ou Domaine de mesure
Le domaine de mesure linéaire s’étend de 0 à 150 % de la normale.
Sérum physiologique isotonique
Précision
Eau distillée ou déminéralisée
La répétabilité a été déterminée par un coefficient de variation calculé sur le dosage répété
Matériel d’échantillons dans différents laboratoires. Le coefficient de variation a été trouvent entre 0,5 %
Berichrom* α2-antiplasmine peut être utilisé manuellement ou sur un appareil automatisé de coa- et 9,9 % pour les échantillons classés dans le domaine normal, et entre 3,1 % et 8,4 % pour les
gulation. Siemens Healthcare DIagnostics propose des Guides de référence (fiches d’application) échantillons pathologiques. De même, le coefficient de variation de reproductibilité a été trouvée
pour plusieurs appareils de coagulation. Les Guides de référence (fiches d’application) contiennent entre 3,2 % et 8,4 % pour les échantillons du domaine normal et entre 3,2 % et 7,4 % pour les
des informations sur les performances et l’utilisation des différents appareils / dosages, qui peuvent échantillons pathologiques.
différer de celles mentionnées dans la présente notice. Le cas échéant, les informations conte-
Comparaison avec une autre méthode
nues dans les Guides de référence (fiches d’application) annulent et remplacent celles contenues
dans la présente notice. En outre, veuillez consulter le guide d’utilisation édité par le fabricant de La performance du test Berichrom* α2-antiplasmine (y) a été comparée dans quatre laboratoires
l’appareil! européens à celle d’un test du commerce (x) qui utilise un substrat de synthèse similaire pour
mesurer la substance à analyser. Les tests ont été effectués sur 108 échantillons plasmatiques
couvrant la totalité du domaine de mesure, selon la méthode manuelle en deux points à +37 °C.
L’équation de régression était de y = 1,01 x + 2,7 %, et le coefficient de corrélation (r) de 0,946.

OUBU G15 E0502 (1052) 3

Littérature Raccolta e preparazione dei campioni
Voir la notice d’utilisation en anglais. Per ottenere il plasma, mescolare accuratamente 1 parte di soluzione di citrato di sodio (0,11 mol/L)
con 9 parti di sangue venoso, evitando la formazione di schiuma. Centrifugare immediatamente per
Dade est une marque commerciale de Siemens Healthcare Diagnostics. almeno 10 minuti ad almeno 1.500 x g.
Stabilità dei campioni:
* Berichrom est une marque commerciale de Siemens Healthcare Diagnostics.
≤-20 °C 1 mese
+2/+8 °C 2 giorni
+15/+25 °C 6 ore
Il plasma conservato a ≤-20 °C deve essere scongelato a +37 °C entro 10 minuti ed esaminato
Edition Novembre 2008 entro 2 ore. Il campione di plasma prelevato viene usato indiluito per l’esame prescelto.

Esecuizione del test

Berichrom* α2-Antiplasmina Manuale:
Cuvetta: percorso ottico 1 cm
Lunghezza d’onda: 405 nm

Berichrom [ANTIPLASMIN] Temperatura: +37 °C

Preriscaldare la soluzione di plasmina, il substrato plasmina nonché le cuvette/provette di plastica
alla temperatura scelta.
Reagenti per la determinazione della α2-antiplasmina
Schema di dosaggio per la determinazione in cinetica
Settore d'imiego Valore enzima plasmina (PEV) Campione
Per la determinazione quantitativa dell’attività biologica dell’α2-antiplasmina come contributo nella Soluzione salina isotonica 20 µL -
diagnosi delle carenze ereditarie o acquisite e nella gestione della terapia fibrinolitica. Campione di plasma - 20 µL
Plasmina 1000 µlL 1000 µL
Significato diagnostico Mescolare ed incubare per 1 min. alla temperatura scelta
L’α2-antiplasmina è l’inibitore fisiologico più importate dell’enzima plasmina fibrinoliticamente at- Substrato Plasmina 100 µL 100 µL
tivo col quale forma molto rapidamente un composto inattivo irreversibile. Ridotte attività di α2- Mescolare e determinare il ∆E 405 nm /min.
antiplasmina si riscontrano nelle iperfibrinolisi, che possono verificarsi come complicanze di coagu- Fotometro/cronometro: Leggere la densità ottica entro 30 secondi e avviare contemporanea-
lazione intravascolare disseminata (DIC) o in interventi su organi con elevato contenuto di attivatori mente il cronometro. Dopo 60 e 120 secondi esatti leggere nuovamente l’estinzione, calcolare
del plasminogeno. Una carenza di α2-antiplasmina può anche indicare un disturbo della sintesi (per i relativi valori di ∆E/min. per sottrazione e quindi calcolare il valore medio dei due valori.
es. gravi danni delle cellule epatiche). La determinazione dell’α2-antiplasmina è altresì indicata per
l’ulteriore valutazione di casi problematici in corso di terapia fibrinolitica1. Valutazione, determinazione in cinetica
Per ogni serie è necessario almeno un valore di enzima plasmina (∆E/min.PEV) ed un valore di rife-
Principio del metodo rimento. Tali valori devono essere determinati come campioni utilizzando un plasma di riferimento
L’α2-antiplasmina contenuta nel campione in esame inattiva la plasmina presente. La plasmina a valore noto di α2-antiplasmina (es.: Plasma Umano Standard).
residua viene valutata cineticamente rilevando l’incremento di estinzione a 405 nm secondo il Il fattore interno di laboratorio FL viene determinato come segue:
seguente schema: valore teorico (in % della norma)plasma di riferimento
α2-antiplasmina campione + plasmina in eccesso –––––> [α2-antiplasmina-plasmina] + plasmina residua FL = ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––
∆E/minPEV - ∆E/minplasma di riferimento
Plasmina residua
HD-Nva-CHA-Lis-pNA ––––––––––––––> HD-Nva-CHA-Lis-OH + p-Nitroanilina La concentrazione di α2-antiplasmina del campione in % della norma viene calcolata dalla seguente
formula:
Reagenti α2-antiplasminacampione (% della norma) = FL x (∆E/minPEV - ∆E/mincampione)
Materiali forniti Note
Berichrom [ANTIPLASMIN], [REF] OUBU con 1. Raddoppiando o dimezzando i volumi, i metodi di calcolo ed il calcolo del fattore interno di
laboratorio non subiscono variazioni.
3 x l 5 mL [REAGENT__|_ P], Plasmina 2. Se la concentrazione di α2-antiplasmina nel campione in esame è inferiore al 20 % della norma,
3 x l 2 mL [PLASMIN] [SUBSTRATE], Substrato Plasmina si consiglia di ripetere l’esame usando 40 µL di plasma. Dividere il risultato per 2.
1 x 15 mL [REAGENT__|_ P_ |_ DILUENT], Soluzione tampone 3. Il fattore interno del laboratorio FL oppure la curva di riferimento devono essere determinati per
ogni cambiamento della strumentazione e per ogni nuovo lotto di Berichrom* α2-Antiplasmina.
Composizione
Plasmina (umana), liofilizzata; concentrazione della soluzione d’uso: 0,1 CTA U/mL. Automatica:
Substrato Plasmina, liofilizzato; concentrazione della soluzione d’uso: D-Norvalil-cicloexilalanil- Siemens fornisce Guide di riferimento (Protocolli Analitici) per diversi analizzatori per coagulazione.
lisil-p-nitroanilide (HD-Nva-CHA-Lis-pNA) 3 mmol/L. Controllo di qualità interno
Soluzione tampone: KH2PO4 (100 mmol/L), NaCl (9 g/L), glicerolo (250 g/L), pH 7,5 Ambito normale: Plasma di controllo N
Conservante: sodio azide (< 1 g/L) Ambito patologico: Plasma di controllo P
Avvertenze e precauzioni È necessario analizzare due controlli per ogni calibrazione e almeno ogni 8 ore durante ogni giorno
1. Solo per uso diagnostico in-vitro. di lavoro (uno nell’intervallo normale e uno nell’intervallo patologico). I controlli devono essere
2. Contiene azoturo di sodio (< 0.1 %) come conservante. L’azoturo di sodio può reagire con le trattati come i campioni. Ogni laboratorio dovrebbe determinare il proprio intervallo per il controllo
tubazioni in rame o piombo nelle linee di scarico formando composti esplosivi. Provvedere allo di qualità, basandosi sui valori dichiarati e sugli intervalli forniti dal produttore dei controlli oppure in
smaltimento in modo appropriato e secondo le normative locali. base agli intervalli di accettabilità definiti dal laboratorio. Se i valori misurati per i controlli risultano al
di fuori dell’intervallo di accettabilità predefiniti, bisognerebbe controllare i reagenti, il fattore interno
3. Ogni donatore o unità di sangue da donatore è stato analizzato e trovato negativo per il virus del laboratorio FL oppure la curva di riferimento e l’analizzatore per coagulazione.
dell’immunodeficienza umana (HIV) 1 e 2, per il virus dell’epatite B (HBV) e per il virus dell’epa-
tite C (HCV) utilizzando test conformi alla Direttiva per Diagnostici In Vitro in ambito europeo
oppure test approvati dalla FDA. Poiché nessun test noto può garantire la totale assenza di Limitazione della esecuizione del test
agenti infettivi, tutti i prodotti di derivazione umana devono essere manipolati con adeguate Inibitori della plasmina come l’aprotinina possono portare a risultati elevati3.
precauzioni. A causa della maggiore viscosità (contenuto di glicerolo) della plasmina ricostituita, si consiglia di
pipettare lentamente la soluzione di plasmina.
Preparazione dei reagenti
Se il risultato del campione del paziente supera il 120 % della norma, diluire il campione con so-
[REAGENT__|_ P]: ricostituire con la quantità di soluzione tampone indicata sull’etichetta e incubare luzione fisiologica e analizzare la diluizione. Per compensare la maggiore diluizione, moltiplicare il
per 15 minuti a +15/+25 °C. risultato per il fattore di diluizione. Se il risultato del campione del paziente è maggiore del Livello
[PLASMIN] [SUBSTRATE]: Sciogliere il contenuto del flacone con la quantità di acqua distillata o enzima plasmina, ciò indica la completa mancanza di α2-antiplasmina del paziente.
deionizzata indicata in etichetta. Siemens ha validato l’uso di questi reagenti su vari analizzatori per ottimizzare le prestazioni e ri-
Mescolare con cura i reagenti prima di ogni utilizzo. spettare le specifiche dei prodotti. Le modifiche definite dall’utente non sono supportate da Siemens
poiché possono influire sulle prestazioni del sistema e sui risultati del test. Pertanto è responsabilità
Conservazione e stabilità dell’utente validare tutte le modifiche apportate a queste istruzioni, l’uso dei reagenti su analizzatori
Se conservato sigillato a +2/+8 °C, il kit può essere utilizzato fino alla data di scadenza indicata diversi da quelli inclusi nei fogli di istruzioni o nelle istruzioni d’uso fornite da Siemens.
sull’etichetta. I risultati di questo test devono essere sempre interpretati alla luce della anamnesi del paziente,
Stabilità dopo ricostituzione : della presentazione clinica e valutando contestualmente l’esito di altri accertamenti.

Temperatura [REAGENT__|_ P] [PLASMIN] [SUBSTRATE] Valori attesi

+37 °C 3 ore 1 settimana 80 - 120 % della norma4
+15 °C 2 giorni 2 settimane Gli intervalli di riferimento variano da laboratorio a laboratorio a seconda della popolazione servita e
+2/+8 °C 1 settimana 6 settimane della tecnologia, del metodo, della strumentazione e del lotto di reagenti utilizzati. Ogni laboratorio
≤-20 °C 1 mesi 6 mesi deve pertanto definire i propri intervalli di riferimento o verificarli ogni volta che sono modificate una
o più delle variabili summenzionate.
[REAGENT__|_ P_ |_ DILUENT], dopo l’apertura, è stabile per 6 mesi se conservata a +2/+8 °C.
Le informazioni relative alla stabilità on board sono specificate nelle Guide di riferimento (Protocolli
Analitici) per i vari analizzatori per coagulazione.
Caratteristiche del test
Ambito di misura
Altro materiale necessario ma non fornito:
L’ambito di misura lineare è compreso tra 0 e 150 % della norma.
Plasma umano standard, [REF] ORKL
Precisione
Plasma di controllo N, [REF] ORKE
La riproducibilità intra-serie, valutata in base al coefficiente di variazione calcolato da ripetute anali-
Plasma di controllo P, [REF] OUPZ si di campioni in laboratori diversi, è risultata da 0,5 % a 9,9 % per i campioni nell’intervallo normale
Soluzione tampone Imidazolo, [REF] OQAA, oppure e da 3,1 % a 8,4 % per i campioni patologici. I coefficienti di variazione inter-serie, calcolati in
maniera similare, sono risultati da 3,2 % a 8,4 % per i campioni normali e da 3,2 % a 7,4 % per i
Tampone di Owren Veronal Dade®, [REF] B4232 oppure campioni patologici.
Soluzione Diluente CA Dade®, [REF] B4265 oppure Confronto dei metodi
Soluzione salina isotonica Le caratteristiche del test Berichrom* α2-Antiplasmina (y) sono state messe a confronto con quelle
Acqua distillata o deionizzata di un test commerciale (x) che utilizza un substrato sintetico analogo per la determinazione dell’ana-
lita presso 4 laboratori europei. I test sono stati eseguiti su 108 campioni di plasma applicando
Strumentazione l’intervallo di misurazione del test e utilizzando la procedura manuale a due punti a +37 °C. L’equa-
Berichrom* α2-Antiplasmina può essere utilizzato manualmente o su analizzatori per coagulazio- zione di regressione calcolata sugli scarti quadratici medi è risultata essere y = 1,01 x + 2,7 %
ne automatici. Siemens Healthcare DIagnostics fornisce Guide di riferimento (Protocolli Analitici) con un coefficiente di correlazione pari a 0,946.
per diversi analizzatori per coagulazione. Le Guide di riferimento (Protocolli Analitici) contengono
informazioni sulla manipolazione e sulle prestazioni specifiche per i diversi analizzatori/ test che Bibliografia
possono essere diverse da quelle fornite nelle presenti Istruzioni per l’uso. In tal caso, le informa- Vedere le istruzioni per l’uso in lingua inglese.
zioni contenute nelle Guide di riferimento (Protocolli Analitici) sostituiscono le informazioni delle
presenti Istruzioni per l’uso. Si consiglia inoltre di consultare il manuale di istruzioni del produttore
dello strumento!

OUBU G15 E0502 (1052) 4

Dade è un marchio di Siemens Healthcare Diagnostics. Extracción y preparación de la muestra
* Berichrom è un marchio di Siemens Healthcare Diagnostics. Para obtener el plasma, mezclar cuidadosamente 1 parte de solución de citrato de sodio (0,11 mol/l)
con 9 partes de sangre venosa, evitando la formación de espuma. Centrifugar inmediatamente
aprox. a 1500 x g un mínimo de 10 minutos.
Estabilidad de las muestras:
≤-20 °C 1 mes
entre +2 y +8 °C 2 días
Edizione Novembre 2008
entre +15 y +25 °C 6 horas
El plasma congelado y almacenado a ≤-20 °C se debe descongelar durante 10 min. a +37 °C y

Berichrom* α2-Antiplasmina
realizar la prueba dentro de las dos horas siguientes. El plasma del paciente se utiliza sin diluir
en el sistema de test escogido.

Procedimiento
Berichrom [ANTIPLASMIN] Manual:
Cubeta:
Longitud de onda
trayectoria óptica de 1 cm
405 nm
Reactivos para la determinación de α2-Antiplasmina Temperatura +37 °C
La solución de plasmina, el substrato de plasmina así como las cubetas o tubos plásticos se deben
Campos de aplicación precalentar a la temperatura escogida.
Para la determinación cuantitativa de la α2-antiplasmina biológicamente activa, para apoyar el diag- Esquema de pipeteo para el método cinético
nóstico de estados de deficiencia heredados o adquiridos y el manejo de la terapéutica fibrinolítica.
Valor enzimático de Plasmina Probe
Significado diagnóstico (VEP)
La α2-antiplasmina es el inhibidor fisiológico más importante de la enzima fibrinolítica activa, plas- Solución salina isotónica 20 µl -
mina, con la cual forma de manera rápida e irreversible un complejo inactivo. Actividades reducidas Muestra de plasma - 20 µl
de α2-antiplasmina se encuentran en la hiperfibrinólisis que se presenta como complicación en la Plasmina 1000 µl 1000 µl
coagulación intravascular diseminada (CID) o en operaciones de órganos con un contenido alto de Mezclar e incubar 1 min. a +37 °C.
activadores del plasminógeno. Además, para una deficiencia de α2-antiplasmina se debe pensar Substrato de plasmina 100 µl 100 µl
en una alteración de su síntesis (por ej., para daños graves del hígado). La determinación de la Mezclar y determinar ∆E405/min
α2-antiplasmina es también indicada como valoración adicional de casos problemáticos durante
la terapéutica fibrinolítica1. Fotómetro/Cronómetro: Leer la densidad óptica en el plazo de 30 segundos y accionar
simultáneamente el cronómetro. Repetir la medida exactamente después de 60 y de 120
segundos. Determinar por diferencia el correspondiente ∆E/min. y calcular el valor promedio
Principio del método de ambas determinaciones.
La α2-antiplasmina de la muestra inactiva la plasmina presente. El resto de plasmina contenido
Valoración, método cinético
se determina en un test cinético, en el cual se mide el aumento de la extinción a 405 nm según el
siguiente esquema de reacción: Para cada serie de medidas es necesario, por lo menos, un valor enzimático de plasmina (∆E/
min.VEP) y 1 valor de referencia, el cual se puede determinar usando un plasma de referencia (p.
α2-Antiplasmina muestra + Plasmina exceso –––––> [α2 - Antiplasmina-Plasmina ]+ Plasmina resto
ej. plasma humano estándar) como muestra. Con esto se va a determinar el factor interno del
Plasmina resto laboratorio o factor FL.
HD-Nva-CHA-Lys-pNA ––––––––––––––> HD-NvA-CHA-Lys-OH + pNitroanilina
Valor teórico (% del valor norma)plasma de referencia
FL = –––––––––––––––––––––––––––––––––––––––
Reactivos ∆E/min VEP - ∆E/minplasma de referencia
Contenido del envase comercial El contenido de α2-antiplasmina de la muestra en % del valor norma se obtiene con la siguiente
Berichrom [ANTIPLASMIN], [REF] OUBU con fórmula:
3 x l 5 ml [REAGENT__|_ P] Plasmina α2-Antiplasminamuestra (% del valor norma) = FL x (∆E/minVEP - ∆E/minmuestra)
3 x l 2 ml [PLASMIN] [SUBSTRATE] Substrato de plasmina Notas
1 x 15 ml [REAGENT__|_ P_ |_ DILUENT], Solución tampón 1. La duplicación o la toma de la mitad del volumen no ejercen ninguna influencia sobre la valo-
ración del factor interno del laboratorio.
Composición
2. Para un contenido de α2-antiplasmina en la muestra por debajo del 20 % del valor norma, se
Plasmina (humana), liofilizada; Concentración en la solución de uso: 0,1 CTA U/ml
recomienda usar 40 µl de la muestra en el test. El resultado se divide por 2.
Substrato de plasmina , liofilizado; concentración en la solución de uso:
3. Para cada cambio de aparato y para cada lote de Berichrom* α2-Antiplasmina se debe deter-
3 mmol/l D-norvalil-ciclohexil-alanil-lisil-p-nitroanilina (D-Nva-CHA-Lys-pNA). minar un nuevo factor FL o elaborar una nueva curva de referencia.
Solución tampón: KH2PO4 (100 mmol/l), NaCl (9 g/l), glicerina (250 g/l), pH 7,5
Automático:
Agente de conservación: Azida sódica
Siemens tiene a su disposición Guías de referencia (Hojas de aplicación) para varios analizadores
Advertencias y medidas de seguridad de coagulación.
1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro. Control de calidad interno
2. Contiene azida de sodio (< 0,1 %) como conservante. La azida de sodio puede reaccionar con Rango normal: Plasma control N
tuberías de cobre o de plomo en los conductos de drenaje y formar compuestos explosivos.
Elimine este producto de forma apropiada conforme a la normativa local. Rango patológico: Plasma control P
3. Cada donante o unidad de donación, ha sido analizada para detectar la presencia del virus Para cada calibración y por lo menos en cada turno de trabajo (8 horas en un día de ensayo) se de-
de inmunodeficiencia humana 1 y 2 (VIH), virus de la hepatitis B (VHB) y virus de la hepatitis ben medir dos controles (uno en rango normal y otro en el rango patológico). El material de control
C (VHC), utilizando las técnicas aprobadas por la directiva de diagnósticos in-vitro de la UE o se debe tratar como las muestras. Cada laboratorio debe establecer su propio rango de control de
FDA. Para la elaboración del producto se han utilizado únicamente las donaciones con resul- calidad, ya sea en base a los valores teóricos y rangos dados por el fabricante del control o en los
tados negativos. Como no hay ninguna prueba que ofrezca la completa seguridad de ausencia valores de control determinados en el mismo laboratorio. Si el valor control medido se encuentra
de agentes infecciosos, todos los productos obtenidos a partir de material de origen humano, por fuera del rango de confianza antes establecido, se deben comprobar los reactivos, el factor FL
deben ser manipulados con las debidas precauciones. o la curva de referencia y los aparatos de medida de la coagulación.

Preparación de reactivos Limitaciones del procedimiento

[REAGENT__|_ P]: Reconstituir con la cantidad de solución tampón indicada en la etiqueta e incubar Inhibidores de la plasmina como la aprotinina pueden provocar resultados elevados3.
durante 15 minutos entre +15 y +25 °C. Debido a la elevada viscosidad (contenido en glicerina) de la plasmina reconstituida, se recomien-
[PLASMIN] [SUBSTRATE]: Reconstituir el contenido del frasco con la cantidad de agua destilada da no pipetear la solución de plasmina muy rápidamente.
o desionizada indicada en la etiqueta. Si el valor de la muestra del paciente sobrepasa el 120 % de la normalidad, repita la medición con
Mezclar los reactivos cuidadosamente antes de usarlos. muestra diluida con solución salina isotónica. Para tener en cuenta esta dilución, multiplicar el re-
sultado por el factor de dilución. Si el resultado de la muestra del paciente está por encima del Valor
Estabilidad y almacenaje enzimático de la plasmina, esto indica el consumo total de la α2-antiplasmina en el paciente.
El kit del test, si se conserva cerrado entre +2 y +8 °C se puede usar hasta la fecha de caducidad Siemens ha validado el uso de los reactivos en varios analizadores para optimizar el rendimiento
indicada en la etiqueta. del producto y cumplir con las especificaciones del mismo. Las modificaciones definidas por el
Estabilidad después de la reconstitución: usuario no están garantizadas por Siemens dado que pueden afectar al rendimiento del sistema y
a los resultados del ensayo. Es responsabilidad del usuario validar las modificaciones realizadas a
Temperatura [REAGENT__|_ P] [PLASMIN] [SUBSTRATE] estas instrucciones o el uso de los reactivos en analizadores distintos a los incluidos en las hojas
de aplicaciones de Siemens o en estas instrucciones de uso.
+37 °C 3 horas 1 semana
Los resultados de esta prueba deberán interpretarse siempre de acuerdo con la historia clínica del
+15 °C 2 días 2 semanas paciente, la sintomatologia clínica y otras observaciones.
+entre +2 y +8 °C 1 semana 6 semanas
≤-20 °C 1 mes 6 meses Valores previstos
[REAGENT__|_ P_ |_ DILUENT], una vez abierta, es estable 6 meses entre +2 y +8 °C. 80 - 120 % de la normalidad4
En las Guías de Referencia (hojas de aplicación) encontrará información específica sobre la esta- Los intervalos de referencias varían entre los diferentes laboratorios dependiendo de la población
bilidad del reactivo dentro del equipo para los diferentes analizadores de coagulación. afectada, la técnica, el método, el equipo y el lote de reactivos utilizados. Por ello, cada laboratorio
Materiales adicionales necesarios: debe establecer su propio intervalo de referencia o verificarlo cada vez que una o más de las
variables mencionadas cambie.
Plasma humano estándar, [REF] ORKL
Plasma de control N, [REF] ORKE Características del test
Plasma de control P, [REF] OUPZ Rango de medida
Solución tampón de imidazol, [REF] OQAA o El rango de medida línea va desde 0 hasta 150 % del valor norma.
Dade® Tampón veronal Owren, [REF] B4234 o Precisión
Dade® Sistema tampón CA, [REF] B4265 o La reproducibilidad en la serie se determino como coeficiente de variación basados en medidas
Solución salina fisiológica repetidas de muestras en diferentes laboratorios. El coeficiente de variación se encontró entre 0,5 %
hasta 9,9 % para muestras en el rango normal y de 3,1 % hasta 8,4 % para muestras en el rango pa-
Agua destilada o desionizada tológico. El coeficiente de variación día a día, determinado de forma comparable, fue de 3,2 % hasta
Equipo 8,4 % para muestras en el rango normal y de 3,2 % hasta 7,4 % para muestras patológicas.
El Berichrom* α2-Antiplasmin puede emplearse en procedimientos manuales o en analizadores Comparación de métodos
de coagulación automatizados. Siemens Healthcare DIagnostics tiene a su disposición Guías de La función del test Berichrom* α2-Antiplasmina (y) fue determinada en 4 diferentes laboratorios
referencia (Hojas de aplicación) para varios analizadores de coagulación. Las Guías de referencia europeos y comparada con un test existente en el comercio (x), el cual utiliza un substrato sintético
(Hojas de aplicación) contienen información específica sobre el manejo y el procedimiento corres- semejante para la medida del analito. El test se realizo con 108 muestras de plasma, que cubrían
pondiente a los analizadores/ensayos que puede diferir de la ofrecida en estas instrucciones de el rango de medida totalmente, usando el método manual de dos puntos a +37 °C. La ecuación de
utilización. En ese caso, la información contenida en las Guías de referencia (Hojas de aplicación) regresión obtenida fue y = 1,01x + 2,7 % con un coeficiente de correlación (r ) de 0,946.
reemplaza a la información de las presentes Instrucciones de utilización. Le rogamos, además,
que consulte el manual de instrucciones del fabricante del equipo!
Literatura
Ver instrucciones de utilización en inglés.

OUBU G15 E0502 (1052) 5

Dade es una marca comercial de Siemens Healthcare Diagnostics. Colheita e preparação de amostras
* Berichrom es una marca comercial de Siemens Healthcare Diagnostics. Para obtenção do plasma, misturar cuidadosamente 1 parte de solução de citrato de sódio
(0,11 mol/l) com 9 partes de sangue venoso, evitando a formação de espuma. Centrifugar imedia-
tamente, no mínimo, a 1.500 x g durante pelo menos 10 minutos.
Estabilidade das amostras:
≤-20 °C 1 mês
Edición Noviembre 2008 +2 a +8 °C 2 dias
+15 a +25 °C 6 horas
Descongele o plasma conservado a ≤-20 °C durante 10 minutos a +37 °C e realize a determinação

Berichrom* α2-Antiplasmina
dentro das 2 horas seguintes. O plasma do paciente é utilizado não diluído no sistema de teste
escolhido.

Procedimento
Berichrom [ANTIPLASMIN] Manual:
Cuvete:
Comprimento de onda:
1 cm de camada de espessura
405 nm
Reagentes para a determinação de α2-Antiplasmina
Temperatura do teste: +37 °C
Campo de aplicação Aquecer, previamente, a solução de plasmina, o substrato de plasmina e cuvetes e frasquinhos de
plástico com a temperatura de teste seleccionada.
Para a determinação quantitativa da α2-Antiplasmina biologicamente activa, em apoio do diagnós-
tico das deficiências herdadas ou adquiridas e para controlo da terapia fibrinolítica. Esquema de pipetagem para o método cinético
Valor da enzima plasmina (VEP) Amostra
Significado diagnóstico Solução isotónica de cloreto de sódio 20 µl -
α2-Antiplasmina é o inibidor fisiológico mais importante da enzima plasmina, activa fibrinolitica- Amostra de plasma - 20 µl
mente, com a qual forma um complexo inactivo, de forma extremamente rápida e irreversível. Nos
casos de hiperfibrinólise, que pode ocorrer como complicação de uma coagulação intravascular Plasmina 1000 µl 1000 µl
disseminada (DIC) ou em operações de órgãos com um elevado teor de activadores de plasmi- Misturar e incubar durante 1 minuto a +37 °C.
nogénio, é encontrada uma actividade reduzida de α2-Antiplasmina. Além disso, a deficiência de Substrato de plasmina 100 µl 100 µl
α2-Antiplasmina, também pode indicar uma desordem da síntese (p. ex., nos casos de lesões Misturar e determinar ∆E405 nm/min.
graves das células hepáticas). Adicionalmente, a determinação da α2-Antiplasmina está indicada Fotómetro/Cronómetro: Leia a densidade óptica no espaço de 30 segundos e ligue o cronó-
na avaliação adicional dos casos problemáticos da terapia fibrinolítica1. metro ao mesmo tempo. Após exactamente 60 e 120 segundos, repetir a leitura, calcular a
respectiva ∆E/min por subtracção e formar o valor médio dos dois valores medidos.
Princípio metodológico Avaliação, método cinético
A α2-Antiplasmina da amostra inactiva a plasmina presente. O teor residual de plasmina é deter- Para cada série de medição são necessários, no mínimo, 1 valor da enzima Plasmina (∆E/minVEP)
minado com um teste cinético, que mede o aumento da absorvância a 405 nm, de acordo com o e 1 valor medido de referência. Estes têm de ser determinados como uma amostra, usando um
seguinte esquema de reacção: plasma de referência com indicação do valor nominal para α2-Antiplasmina (p. ex., plasma humano
α2-Antiplasmina amostra + Plasmina excesso –––––> [α2-Antiplasmina-Plasmina] + Plasmina resto standard). O factor laboratorial interno FL é calculado da seguinte maneira:
Plasmina resto Valor nominal (% do valor normal)plasma de referência
HD-Nva-CHA-Lys-pNA –––––––––––––––> HD-Nva-CHA-Lys-OH + p-Nitroanilina FL = ––––––––––––––––––––––––––––––––––––––––
∆E/minVEP - ∆E/minplasma de referência
Reagentes O teor de α2-Antiplasmina da amostra em % do valor normal, resulta da seguinte fórmula:
α2-Antiplasmina amostra (% val. norm) = FL x (∆E/minVEP - ∆E/minamostra)
Conteúdo da embalagem comercial
Berichrom [ANTIPLASMIN], [REF] OUBU com Observações
3 x l 5 ml [REAGENT__|_ P] Plasmina 1. A duplicação ou divisão em duas partes iguais do volume não tem qualquer efeito sobre o
cálculo e o factor interno do laboratório.
3 x l 2 ml [PLASMIN] [SUBSTRATE] Substrato de Plasmina 2. No caso de o teor de α2-Antiplasmina da amostra ser inferior a 20 % do valor normal, é acon-
1 x 15 ml [REAGENT__|_ P_ |_ DILUENT], Solução tampão selhável utilizar no teste 40 µl de amostra. O resultado é dividido por dois.
Composição 3. O factor de cálculo interno do laboratório FL ou a curva de referência têm de ser determinados
Plasmina (humana), liofilizada; concentração na solução de uso: 0,1 CTA-U/ml de novo para cada mudança de equipamento e lote novo de Berichrom* α2-Antiplasmina.
Substrato de plasmina, liofilizado, concentração na solução de uso: D-Norvalilciclohexilalanil-lisil- Automático:
p-nitroanilida (HD-Nva-CHA-Lys-pNA) 3 mmol/l A Siemens fornece guias de consulta (folhas de instruções de aplicação) para vários analisadores
Solução tampão: KH2PO4 (100 mmol/l), NaCl (9 g/l), glicerina (250 g/l), pH 7,5 de coagulação.
Conservante: Azida de sódio (< 1 g/l) Controlo de qualidade interno
Advertências e medidas de precaução Intervalo normal: Plasma de controlo N
1. Só para uso diagnóstico in-vitro. Intervalo patológico: Plasma de controlo P
2. Contém azida de sódio (< 0,1 %) como conservante. A azida de sódio pode reagir com os tubos Deverão ser medidos dois controlos (um no intervalo normal e um no intervalo patológico) para
de cobre ou de chumbo das canalizações de esgotos formando compostos explosivos. Elimine cada calibração e pelo menos a cada 8 horas durante os dias de teste. O material de controlo
este produto de forma correcta e de acordo com as regulamentações locais. deverá ser tratado como a amostra. Cada laboratório deverá determinar o seu intervalo de controlo
3. Cada doador ou unidade de doação foi testada para detectar a presença de vírus de imunode- de qualidade próprio com base nos valores e intervalos teóricos indicados pelo fabricante dos
ficiências humana 1 e 2 (VIH), vírus de hepatite B (VHB) e vírus de hepatite C (VHC) de acordo controlos, ou com base no intervalo de confiança próprio determinado no laboratório. Se o valor de
com as técnicas aprovadas pelas directivas de diagnóstico in-vitro da EU ou FDA. Para a elabo- controlo medido se situar fora do intervalo de confiança determinado anteriormente, é necessário
ração deste produto foram utilizadas unicamente as unidades com resultados negativos. Como controlar os reagentes, o factor de cálculo interno do laboratório FL ou curva de referência e o
não existe nenhum teste que ofereça a garantia completa de ausência de agentes infecciosos, coagulómetro.
todos os materiais obtidos a partir de material de origem humana deverão ser manipulados com
as devidas precauções. Limitações do procedimento
Preparação dos reagentes Os inibidores de plasmina como a aprotinina podem originar resultados elevados3.
Devido à viscosidade aumentada (teor de glicerol) da plasmina reconstituída, recomenda-se que a
[REAGENT__|_ P]: Reconstituir com a quantidade de solução tampão indicada no rótulo e incubar
solução de plasmina não seja pipetada depressa demais.
durante 15 minutos entre +15 e +25 °C.
Se o resultado da amostra do doente exceder 120 % da norma, dilua a amostra com solução salina
[PLASMIN] [SUBSTRATE]: Dissolver o conteúdo do frasco com a quantidade de água destilada isotónica e processe a diluição. Multiplique o resultado pelo factor de diluição para compensar a
ou desionizada indicada no rótulo. diluição aumentada. Se o resultado da amostra do doente for superior ao nível da enzima plasmina,
Misturar os reagentes cuidadosamente antes de cada utilização. isso indica uma deplecção integral de α2-antiplasmina no doente.
Estabilidade e condições de conservação A Siemens validou a utilização destes reagentes em vários analisadores, com o intuito de optimizar
o desempenho do produto e satisfazer as especificações do produto. As modificações definidas
O kit de teste pode ser utilizado até à data de validade indicada no rótulo se for conservado, não pelo utilizador não são suportadas pela Siemens, na medida em que podem afectar o desempenho
aberto, entre +2 e +8 °C. do sistema e os resultados do ensaio. Constitui responsabilidade do utilizador validar as modifi-
Estabilidade após a reconstituição: cações efectuadas nestas instruções ou em relação ao uso dos reagentes noutros analisadores
que não os incluídos nas folhas de instruções de aplicação da Siemens ou nestas instruções de
Temperatura [REAGENT__|_ P] [PLASMIN] [SUBSTRATE] utilização.
+37 °C 3 horas 1 semana Os resultados deste teste devem sempre ser interpretados em conjunto com o histórico médico do
+15 °C 2 dias 2 semanas doente, estado clínico e outros dados de interesse.
+2 a +8 °C 1 semana 6 semanas
≤-20 °C 1 mês 6 mês Valores esperados
80 - 120 % da norma4
Depois de ser aberta a primeira vez, a [REAGENT__|_ P_ |_ DILUENT] permanece estável durante 6
meses, entre +2 a +8 °C. Os intervalos de referência variam de laboratório para laboratório dependendo da população ser-
vida e da técnica, método, equipamento e lote de reagentes utilizados. Por conseguinte, cada
A informação acerca da estabilidade no equipamento é especificada nos guias de consulta (folhas laboratório deve estabelecer os seus próprios intervalos de referência sempre que uma ou mais
de instruções de aplicação) para os diferentes analisadores de coagulação. das variáveis acima mencionadas forem alteradas.
Outros materiais necessários:
Plasma humano standard, [REF] ORKL Características do teste
Plasma de controlo N, [REF] ORKE Intervalo de medição
O intervalo de medição linear vai de 0 a 150 % do valor normal.
Plasma de controlo P, [REF] OUPZ
Solução tampão Imidazol, [REF] OQAA, ou Precisão
Tampão Veronal de Owren Dade®, [REF] B4234 ou A reprodutibilidade na série foi determinada como coeficiente de variação, com base em medições
repetidas de amostras em vários laboratórios. O coeficiente de variação foi de 0,5 % a 9,9 % para
Tampão sistema CA Dade®, [REF] B4265 ou as amostras no intervalo normal e de 3,1 % a 8,4 % para as amostras patológicas. O coeficiente
Solução isotónica de cloreto de sódio de variação no dia a dia, determinado da mesma maneira, foi de 3,2 % a 8,4 % para as amostras
Água destilada ou desionizada no intervalo normal e de 3,2 % a 7,4 % para as amostras patológicas.
Equipamento Comparação de métodos
Berichrom* α2-Antiplasmina pode ser utilizado manualmente ou em analisadores de coagulação O desempenho do teste de Berichrom* α2-Antiplasmina (y) foi comparado em 4 laboratórios eu-
automatizados. A Siemens Healthcare DIagnostics fornece guias de consulta (folhas de instruções ropeus com um teste comercial (x) que emprega um substrato sintético semelhante para medir o
de aplicação) para vários analisadores de coagulação. Os guias de consulta (folhas de instruções analito. Os testes foram executados com 108 amostras de plasma cobrindo a gama de medição total
de aplicação) contêm informações específicas sobre o manuseamento e desempenho do analisa- e utilizando o método manual de dois pontos a +37 °C. A equação de regressão foi y= 1,01 x + 2,7 %,
dor/teste que podem diferir das fornecidas nestas instruções. Numa situação destas, as informa- com um coeficiente de correlação (r) de 0,946.
ções contidas nos guias de consulta (folhas de instruções de aplicação) substituem as informações
nestas instruções. Deverá ainda consultar o manual de instruções do fabricante do aparelho! Bibliografia
Ver Instruções em inglês.

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Dade é uma marca comercial da Siemens Healthcare Diagnostics.
* Berichrom é uma marca comercial da Siemens Healthcare Diagnostics.

Edição Novembro 2008

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