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Comparación
entre quimioluminiscencia
e inmunofluorescencia
indirecta en la determinación
de anticuerpos antinucleares
Palabras clave: Inmunofluorescencia María del Rocío Munive Lima,* Jesús I Simón Domínguez,*
indirecta, anticuerpos antinucleares, Rodolfo González Solís,* María Eugenia Suárez Botello*
inmunoensayo, quimioluminiscencia.
* Departamento de Laboratorio Clínico.
Key words: Indirect immunofluorescence Centro Médico ABC Observatorio.
assay, antinuclear antibodies, immunoassay,
chemiluminescence. Correspondencia:
100 María del Rocío Munive Lima.
Centro Médico ABC, Departamento de Laboratorio Clínico
Recibido: 15/12/2009 Sur 136 núm. 116, Col. Las Américas, 01120 México, D.F.
Aceptado: 04/02/2010 Tel: 52-30-8000 ext 8921. E-mail: marocili@yahoo.com.mx

Resumen Abstract
La determinación de anticuerpos antinucleares es una prue- The detection of antinuclear antibodies is an important tool
ba de gran utilidad en el diagnóstico de diversas enfermeda- in the diagnosis of several connective tissue diseases. The
des del tejido conectivo. El método estándar para su deter- standard method for its determination is the indirect im-
minación es la inmunofluorescencia indirecta, cuyas desven- munofluorescence analysis, whose disadvantages like subjec-
tajas, como subjetividad y complejidad, han propiciado la ge- tivity and complexity have caused the generation of new tests;
neración de nuevos ensayos; uno de ellos es la quimio- one of them is the chemiluminescent immunoassay, which is
luminiscencia, siendo ésta una técnica automatizada de alta an automated technique with high sensitivity. The aim of the
sensibilidad. El objetivo de este estudio fue evaluar la present work was to evaluate chemiluminescent immu-
quimioluminiscencia y compararla con la inmunofluorescencia noassay and compare them with indirect immunofluores-
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indirecta para la determinación de anticuerpos antinucleares.
Se realizó un estudio descriptivo y transversal en el Centro
cence for the detection of antinuclear antibodies. We did a
descriptive and cross-sectional study in the ABC Medical
Médico ABC de noviembre de 2006 a febrero de 2008. Se Center, between november 2006 to february 2008. We
analizaron 208 muestras, obteniendo los siguientes resulta- analyzed 208 samples, obtaining the following results: 95%
dos: 95% de sensibilidad, 59% de especificidad, valor sensitivity, 59% specificity, 67% positive predictive value and
predictivo positivo de 67% y valor predictivo negativo de 94% negative predictive value. Due to the high sensibility the
94%. Debido a su alta sensibilidad, la quimioluminiscencia es chemiluminescent immunoassay is an attractive alternative

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una alternativa atractiva como método de escrutinio de as an screening method for antinuclear antibodies, whereas
anticuerpos antinucleares; pero ante un resultado positivo, to the positive results it is recommended to confirm titles
se recomienda confirmar los títulos y patrones, usando la and patterns using indirect immunofluorescence.
inmunofluorescencia indirecta.

Introducción jetos sanos, encontrándose coeficientes de varia-

ción interlaboratorios entre 36 y 51%.8
a determinación de anticuerpos antinuclea- Debido a la baja reproducibilidad y los proble-
L res (ANAs) es una prueba importante en
la práctica reumatológica, ya que su identificación
mas asociados a su variabilidad, se han desarrolla-
do métodos más simples y de alto rendimiento
es de gran utilidad en el diagnóstico de diversas que pueden ser automatizados y estandarizados;2
enfermedades del tejido conectivo (ETC).1 entre ellos, el ensayo inmunoabsorbente ligado a
La primera descripción de los anticuerpos an- enzimas (ELISA), el cual fue introducido en 1972
tinucleares (ANAs) se realizó en 1948 y se les ha para este fin y tiene como ventaja el ser una técni-
definido como un grupo heterogéneo de autoan- ca objetiva, de fácil procesamiento, automatizada
ticuerpos dirigidos contra antígenos localizados y menos operador-dependiente.9 Las desventajas
en el núcleo y citoplasma celulares.2 Estos anti- del ensayo de ELISA con respecto a la inmunofluo-
cuerpos, en principio asociados a lupus eritema- rescencia indirecta (IFI) son la falta de sensibili-
toso sistémico, se han identificado en otras en- dad para antígenos citoplasmáticos o nucleares des-
fermedades de tipo autoinmune y no autoinmune conocidos y ausencia de un modelo de reactividad
e incluso en sujetos sanos.2-4 para anticuerpos antinucleares (ANAs) que existe 101
Actualmente se cuenta con varias técnicas para en la IFI.
detectarlos y caracterizarlos,5 siendo la inmu- Actualmente existen diversos ELISA que se han
nofluorescencia indirecta (IFI) el método están- propuesto como alternativa para el tamizaje de
dar y de primera elección.2-3,6 La inmunofluores- ANAs, los cuales difieren principalmente en su
cencia indirecta es una técnica de alta sensibilidad composición antigénica. Una alternativa que ha
que consiste en incubar el suero del paciente (an- surgido para los métodos de IFI y ELISA es un
ticuerpo) en un sustrato antigénico (células HEp- inmunoensayo basado en el principio de quimio-
2, hígado o riñón de rata), al cual se le añade una luminiscencia (CLIA), el cual está experimentan-
antiinmunoglobulina unida a un fluorocromo que do un creciente interés, ya que es un método sim-
permite visualizar la reacción con un microsco- ple, barato, que maneja coeficientes de variación
pio de fluorescencia. Los resultados son reporta- de alrededor de 10%, presenta una sensibilidad y
dos como negativos o positivos, expresando la especificidad analíticas excelentes, además de que
dilución y el tipo de patrón emitido.6 permite la resolución y cuantificación de varios
La gran desventaja de este método es que es analitos en mezclas relativamente complejas.10
operador-dependiente y la confiabilidad de los Para la determinación de ANAs con CLIA, se
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resultados está directamente relacionada con la emplea una fase sólida conformada por partículas
experiencia del observador;7 éste y otros facto- magnéticas recubiertas con antígenos elevadamen-
res pueden llevar a falta de reproducibilidad, lo te purificados y recombinantes (dsDNA, RNP/Sm,
cual ya ha sido documentado por Tan y colabora- SS-A (Ro), SS-B (La), Scl-70, Jo-1, CENP-B y mi-
dores quienes determinaron anticuerpos antinu- tocondria) junto con extractos nucleares de célu-
cleares con inmunofluorescencia indirecta en su- las HEp-2, y como conjugado anticuerpos mono-

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clonales de ratón anti-IgG humano unidos a un de- La determinación de ANAs mediante CLIA se
rivado del isoluminol.11 A través de incubaciones y realizó en muestras de suero que se procesaron
procesos de lavado, los ANAs presentes en la en el equipo LIAISON® ANA screen de DiaSorin,
muestra reaccionan con la fase sólida, el conjugado en el Laboratorio Clínico del Centro Médico ABC.
y reactivos, promoviendo una reacción de quimio- En casos específicos, se revisaron los expedien-
luminiscencia, la cual genera una señal luminosa que tes clínicos de los pacientes, mediante el empleo
es medida en un fotomultiplicador en unidades re- del expediente médico electrónico, orientado a
lativas de luz (RLU), que indican la concentración la búsqueda de criterios diagnósticos de enfer-
de ANAs en muestras de suero o plasma.11 medades del tejido conectivo (ETC).
La CLIA posee todas las ventajas de un méto- Análisis. Los resultados obtenidos para ANAs
do de ELISA y como tal se está evaluando en la mediante IFI se compararon contra los resulta-
determinación de ANAs. El papel principal de los dos obtenidos con CLIA.
ELISA es funcionar como método de tamizaje antes Para elaborar una tabla de contingencia, las ti-
de llegar a la IFI, ya que esto reduce de manera tulaciones con IFI menores de 1:40 se considera-
considerable el número de muestras analizadas ron como negativas y las mayores o iguales a 1:40
por IFI que resultan negativas. como positivas.
Debido a que la determinación de ANAs es una Para los resultados obtenidos con CLIA se uti-
parte importante para el diagnóstico de varias lizaron los límites de referencia indicados por el
enfermedades del tejido conectivo (ETC), es im- proveedor, considerando como negativos los re-
portante conocer si la determinación de ANAs sultados menores de 1.5 RLU y positivos los
mediante CLIA puede ser utilizado como méto- mayores o iguales a 1.5 RLU.
102 do de tamizaje inicial antes de llegar a IFI sin pér- Se calcularon los valores de sensibilidad, espe-
dida de información crítica. cificidad y valores predictivos en base al teorema
El objetivo de este estudio fue evaluar la deter- de Bayes.
minación de ANAS mediante CLIA al compararla
con la IFI utilizada como método estándar. Resultados
Material y métodos Durante el periodo de estudio se procesaron 208
muestras, el rango de edad de los pacientes estu-
Estudio descriptivo y transversal llevado a cabo diados fue 4 a 84 años, con predominio del sexo
de noviembre de 2006 a febrero de 2008, en el femenino (n= 187, 89.9%).
Laboratorio Clínico del Centro Médico ABC. Los títulos por IFI de los 93 especímenes que
Se incluyeron los resultados de pacientes a los resultaron positivos para ambos ensayos oscilan
que se les realizó la determinación de anticuer- entre 1:40 a > 1:1,280, de los cuales seis tuvie-
pos antinucleares (ANAs) mediante ambas meto- ron título de 1:40, dos de 1:80, 15 de 1:160, 16
dologías: inmunofluorescencia indirecta (IFI) y de 1:320, 22 de 1:640, 17 de 1:1,280 y 15 con
quimioluminiscencia (CLIA). más de un patrón y título; los resultados obteni-
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La determinación de ANAs mediante IFI se lle- dos mediante CLIA en RLU se encontraron en el
vó a cabo en muestras de suero que se procesa- rango comprendido entre 1.86 y 12.
ron en el laboratorio de referencia Quest Diag- Los títulos de IFI de las cuatro muestras que no
nostics Inc (Nichols Institute, San Juan Capistrano, fueron detectados mediante CLIA mostraron lo si-
California, EUA), el cual emplea como sustrato guiente: un título de 1:40 en paciente diagnosticada
antigénico células HEp-2. con lupus eritematoso sistémico bajo tratamiento

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Cuadro I. Comparación de quimioluminiscencia (CLIA)

Recientemente, diversos estudios han tenido
con inmunofluorescencia indirecta (IFI) para la por objetivo el evaluar la utilidad de diferentes
determinación de anticuerpos antinucleares (ANAs). métodos de ELISA comparándolos con IFI, con
la meta de disminuir el número de pruebas que
IFI (Estándar)
son procesadas por IFI y así poder superar la
CLIA Positivo Negativo Total
variabilidad que presenta este método. Las con-
Positivo 93 45 138 clusiones sobre los ELISA son discrepantes en
Negativo 4 66 70 términos de sensibilidad-especificidad entre di-
Total 97 111 208
ferentes reactivos comerciales. Estudios multi-
céntricos han reportado sensibilidades entre 69.5
y 97.7%, y especificidades entre 66.9 y
médico desde hace seis años, una muestra con títu-
97.7%,11 encontrando coeficientes de variación
lo 1:320 de paciente con siete resultados previos
de 4 a 12%,2,7 que superan los coeficientes de
de ANAs positivos sin diagnóstico de enfermeda-
variación reportados por IFI entre 36 y 51%; el
des del tejido conectivo (ETC), una muestra con tí-
coeficiente de variación encontrado para CLIA
tulo de 1:160 y otra con título 1:80 cuyos pacientes
en nuestro estudio fue de 11%.
no regresaron a seguimiento; los resultados por CLIA
Como hallazgo incidental, se encontró que en los
en RLU de los cuatro fueron de 0.5.
resultados en donde se obtuvo concordancia por
Los valores de CLIA comparada con IFI se
ambas metodologías, CLIA presentó como valor
muestran en el cuadro I y son los siguientes: sensi-
mínimo 1.86 de RLU, el cual no puede ser conside-
bilidad = 0.95, especificidad = 0.59, valor pre-
rado como punto de corte para esta metodología;
dictivo positivo = 0.67 y valor predictivo negati-
éste
ESTEtendría que ser confirmado
DOCUMENTO mediante POR
ES ELABORADO una vali- 103
vo = 0.94.
dación clínica con sujetos sanos y con pacientes con
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diagnóstico de enfermedades autoinmunes, para de-
DISCUSIÓN
terminar el valor ideal que optimice la sensibilidad
La determinación de anticuerpos antinucleares y especificidad de esta metodología.
(ANAs) es una parte importante en la integración En un estudio previo realizado por Ghilliani y
de un diagnóstico de enfermedades del tejido colaboradores11 se obtuvieron valores de sensi-
conectivo (ETC); el método de escrutinio utiliza- bilidad y especificidad de 94 y 99.3% para CLIA;
do debe ser confiable para poder clasificar ade- dichos resultados no son comparables con los
cuadamente a los pacientes sanos y enfermos. obtenidos en el presente estudio, por las diferen-
Por las desventajas encontradas en inmunofluo- cias en el diseño y en el punto de corte, ya que en
rescencia indirecta (IFI) y por la gran cantidad de ese caso se consideraron como positivos títulos
pruebas solicitadas, se han desarrollado nuevas mayores o iguales a 1:160 por IFI.
técnicas que otorgan la posibilidad de automati-
zación y objetividad, que pueden servir como Conclusiones
método de escrutinio antes de la IFI, lo que dis-
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Basados en el resultado del valor predictivo positi-
minuiría costos, tiempo de entrega y subjetividad
en el procedimiento. vo para CLIA, proponemos el uso de esta metodo-
Dado que la prevalencia en la población de logía como prueba de tamizaje antes de llegar a IFI;
ANAs positivos es baja,4 el número de muestras usado de esta manera un resultado negativo puede
con resultado negativo es elevado, lo que nos lle- ser reportado como tal, mientras que un resultado
va a varias determinaciones de IFI negativas. positivo siempre debe ser confirmado por IFI, esto

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ayudará a racionalizar los recursos y disminuir el 6. Gniewek RA, Stites DP, McHugh MT, Hilton JF, Nakagawa M.
Comparison of antinuclear antibody testing methods: Immu-
número de muestras que son procesadas con IFI. nofluorescence assay versus enzyme immunoassay. Clin Diagn
Lab Immunol 1997; 4 (2): 185-188.
7. Hayashi N, Kawamoto T, Mukai M, Morinobu A, Koshiba M et
Referencias al. Detection of antinuclear antibodies by use of an enzyme
immunoassay with nuclear HEp-2 cell extract and recombinant
1. Hoffman IE, Peene I, Veys EM, De Keyser F. Detection of spe- antigens: Comparison with immunofluorescence assay in 307
cific antinuclear reactivities in patients with negative antinuclear patients. Clin Chem 2001; 47 (9): 1649-1659.
antibody immunofluorescence screening test. Clin Chem 2002; 8. Tan EM, Smolen JS, McDougal JS, Butcher BT, Conn D et al. A
48 (12): 2171-2176. critical evaluation of enzyme immunoassays for detection of
2. Fenger M, Wiik A, Hoier-Madsen M, Lykkegaard JJ, Rozenfeld T antinuclear autoantibodies of defined specificities. Arthritis Rheu-
et al. Detection of antinuclear antibodies by solid-phase immu- matism 1999; 42 (3); 455-464.
noassays and immunofluorescence analysis. Clin Chem 2004; 9. Kern P, Kron M, Hiesche K. Measurement of antinuclear antibo-
50 (11): 2141-2147.
dies: Assessment of different test systems. Clin Diagn Lab Im-
3. Ulvestad E, Kanestrom A, Madland TM, Thomassen E, Haga HJ
munol 2000; 7 (1): 72-78.
et al. Evaluation of diagnostic test for antinuclear antibodies in
10.García-Campaña AM, Baeyens WRG, Zhang X, Alés F, Gámiz
rheumatological practice. Scand J Immunol 2000; 52: 309-315.
4. Tozzoli R, Bizzaro N, Tonutti E, Villalta D, Bassetti D et al. L. Quimioluminiscencia: Una interesante alternativa para la de-
Guidelines for the laboratory use of autoantibody test in the tección analítica en sistemas de flujo. Ars Pharmaceutica 2001;
diagnosis and monitoring of autoimmune rheumatic diseases. 42 (1): 81-107.
Am J Clin Pathol 2002; 117 (2): 316-324. 11.Ghillani P, Rouquette AM, Desgruelles C, Hauguel N, Le Pende-
5. Solomon DH, Kavanaugh AJ, Schur PH. Evidence-Based guide- ven et al. Evaluation of the LIAISON ANA screen assay for
lines for the use of immunologic test: Antinuclear antibody tes- antinuclear antibody testing in autoimmune diseases. Ann N Y
ting. Arthritis Rheum 2002; 47 (4): 434-444. Acad Sci 2007; 1109: 407-413.

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