AGAR KLIGLER

Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiologa de alimentos para la diferenciacin de entero bacterias, en base a la fermentacin de glucosa y lactosa, y a la produccin de cido sulfhdrico.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la triptena, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe
3+

, los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de

hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. El agar es el agente solidificante.

Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.

Ingredientes
Frmula (en gramos por litro) Peptona de carne Cloruro de sodio Lactosa Tripteina Glucosa Citrato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Rojo de fenol Agar 13.0 5.0 10.0 10.0 1.0 0.5 0.3 0.025 15.0

Instrucciones

Suspender 54.8 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitacin frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolucin total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.

Modo

de

siembra

A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, sembrar el medio de cultivo, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.

Incubacin
A 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.

Resultados
Pico alcalino/fondo cido (pico Solamente fermenta la glucosa

rojo/fondo amarillo) Pico cido/fondo cido (pico Fermenta glucosa y lactosa

amarillo/fondo amarillo) Pico alcalino/fondo alcalino (pico No fermentador de azcares

rojo/fondo rojo) Presencia de burbujas, o ruptura del Productor de gas medio de cultivo Ennegrecimiento del medio Productor de cido sulfhdrico

CITRATO DE SIMMONS
Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como nica fuente de carbono y compuesto amoniacales como nica fuente de nitrgeno. El medio contiene citrato sdico, fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador; este se tornar azul cuando el medio se basifica. Las bacterias que metabolizan el citrato liberan iones amonio al medio (degradacin del fosfato amnico) lo que provoca que este se alcalinice y el indicador vire azul.

Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.

Ingredientes
Frmula (en gramos por litro) Citrato de sodio Cloruro de sodio Fosfato dipotsico Fosfato monoamnico 2.0 5.0 1.0 1.0

Sulfato de magnesio Azul de bromotimol Agar

0.2 0.08 15.0

Instrucciones
Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos. Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar en posicin inclinada.

Modo de siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inculo ligero, usando un asa sin arrastrar el agar.

Incubacin
A 35-37 C, durante 24-48 horas, en aerobiosis. Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 das de incubacin.

Resultados
+Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad. -Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

AGAR CIDO SULFHDRICO INDOL-MOTILIDAD (SIM)

Es un semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de sulfuro de hidrogeno en un mismo tubo. Es til para diferenciar miembros de la familia entero bactericeae.

Fundamento
El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2.

Ingredientes
Frmula (en gramos por litro) Triptena Peptona Sulfato de hierro y amonio Tiosulfato de sodio Agar 0.2 3.5 20.0 6.1 0.2

Instrucciones
Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar hasta disolver; calentar agitando y hervir durante un minuto. Distribuir unos 4 ml en tubos de hemlisis y esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos. Solidificar en posicin vertical. Color mbar.

Modo de siembra
A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin profunda con aguja de inoculacin recta (no usar ansa con anillo). Se debe inocular el centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en lnea recta.

Incubacin
Durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis. Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich.

Resultados
Positivo 1.-Rojo: presencia de indol (el triptfano fue degradado) 2.-Color negro (presencia de H2S. 3.- Difuminacin del crecimiento de la bacteria hacia los lados (movilidad) Negativo 1.-Amarillo (la bacteria no puede degradar el triptfano) 2.- El medio se queda igual. 3.- la bacteria solo crece en la lnea de inoculacin (no mvil)..

AGAR HIERRO TRIPLE AZCAR (TSI)

El Agar-hierro-triple azcar es un medio de cultivo. Gracias a su composicin es uno de los medios de cultivo ms empleados para la diferenciacin de enterobacterias segn fermenten o no: glucosa, lactosa o sacarosa, y segn produzcan o no cido sulfhdrico o gas.

Fundamento
Determinar la capacidad de un microorganismo para atacar un hidrato de carbono especfico incorporado en un medio de desarrollo basal, con produccin de gas o sin ella, junto con la determinacin de la posible produccin de cido sulfhdrico (H2S).

Ingredientes
Frmula (por litro) Extracto de carne Extracto de levadura Peptona Proteosa Dextrosa Lactosa Sacarosa Cloruro sdico Tiosulfato sdico Sulfato ferroso Agar Rojo de fenol 3g 3g 16g 0.5g 0.1g 0.10g 0.10g 0.5g 0.3g 0.2g 1.2g 2.4mL

Modo de siembra
Inoculacin por picadura y estra en pico de flauta.

Incubacin
De 18 a 24 horas en una temperatura de 35 a 37 C.

Resultados
1. Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificar el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de glucosa, el medio permanecer de color rojo. 2. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidificar el medio en su superficie volvindolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuar de color rojo. 3. Si produce cido sulfhdrico (debido a la reduccin de las sales de hierro), se presentar un ennegrecimiento del tubo. La produccin de sulfhdrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentacin de la glucosa (fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa. 4. Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es productora de gas.

AGAR MOTILIDAD INDOL ORNITINA (MIO)

Medio usado para la identificacin de Enterobacteriaceae en base a su movilidad, actividad de ornitina decarboxilasa y produccin de indol.

Fundamento
Medio de cultivo semislido, altamente nutritivo debido a la presencia de extracto de levadura, peptona y triptena. Adems, la triptena aporta grandes cantidades de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realizacin de la prueba del indol. La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la deteccin de la enzima ornitina decarboxilasa, el prpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color prpura y en medio acido es amarillo. Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad, presencia de ornitina decarboxilasa e indol. La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas all de la lnea de inoculacin. La reaccin positiva a la ornitina est dada por un color prpura del medio. Debido a la fermentacin de la glucosa se reduce el pH produciendo una condicin cida y originando que el indicador de pH prpura de bromocresol vire al amarillo. La presencia de acidez, otorga condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina decarboxilasa, la cual decarboxila la ornitina presente. Por decarboxilacin, se alcaliniza el medio, con el consecuente viraje del indicador hacia el color purpura. El indol, es producido a partir del triptofano por los microorganismos que contienen la enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo.

Ingredientes
Frmula (en gramos por litro) Extracto de levadura Dextrosa Peptona Triptena Clorhidrato de L-ornitina Agar Prpura de bromocresol 1.0 3.0 10.0 10.0 5.0 2.0 0.02

Instrucciones
Suspender 31 g del polvo en un litro de agua destilada. Calentar a ebullicin hasta completa disolucin. Distribuir en tubos y esterilizar 15 minutos a 121C.

Modo de siembra
A partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, inocular por puncin profunda con ansa recta.

Incubacin
En aerobiosis, durante 18-24 horas a 35-37 C.

Resultados
1-Movilidad: -Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas all de la lnea de siembra. -Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra. 2-Ornitina decarboxilasa: -Resultado positivo: color prpura. -Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violceo en la superficie del medio. 3-Prueba del indol: La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba de ornitina. -Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador. -Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloroamarillento.

Caractersticas del medio

Medio preparado: prpura transparente a ligeramente opalescente.

AGAR DE HIERRO LISINA (LIA)

El Ajar de Hierro y Lisina es un medio utilizado para la diferenciacin de microorganismos entricos en base a su capacidad para desaminar o descarboxilar la lisina y de producir sulfuro de hidrgeno. Este medio tambin es conocido como LIA.

Fundamento
Edwards y Fife desarrollaron este medio para diferenciar a Salmonella arizonae. Debido a que S. arizonae fermenta la lactosa rpidamente, la produccin de H2S es suprimida en el Agar de Hierro y Triple Azcar. Eliminando la lactosa e incorporando la lisina, Edwards y Fife encontraron que este medio diferencia a los bacilos entricos en base a su capacidad para descarboxilar o desaminar la lisina y producir H2 S. Este medio es especialmente recomendado para la identificacin de bacilos que fermentan rpidamente la lactosa. En este medio la peptona provee la fuente de carbono y nitrgeno. El extracto de levadura provee vitaminas y cofactores para el crecimiento. La dextrosa es la fuente de energa. El hidrocloruro de L-lisina es el sustrato donde actan las enzimas descarboxilasa o desaminasa. El citrato frrico de amonio y el tiosulfato de sodio actan como indicadores de la produccin de H2S. El prpura de bromocresol es un indicador de pH. El agar es adicionado como agente solidificante.

Ingredientes
Frmula en gramos por litro Peptona de Gelatina Lisina Extracto de Levadura Tiosulfato de Sodio Dextrosa Citrato de Hierro y Amonio Prpura de Bromocresol 5.0 10.0 3.0 0.04 1.0 0.5 0.02

Instrucciones
Suspender 23 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y hervir durante un minuto. Dispensar en tubos de vidrio, tapar y esterilizar en autoclave a 121C (15 libras de presin) durante 15 minutos. Dejar enfriar en posicin horizontal.

Modo de siembra
A partir de una colonia aislada sembrar el medio por picadura en el fondo y por estra en la superficie. Incubacin Incubar a 35 2C durante 18 a 48 horas.

Resultados
Prueba Produccin de H2S Reaccin positiva Formacin de un precipitado de precipitado negro Fondo y superficie del medio color prpura (alcalino) Superficie roja Producen cultivos con superficie roja sobre fondo amarillo Reaccin negativa No hay formacin negro en la superficie Fondo amarillo (acido) superficie prpura (alcalina) Superficie prpura

Descarboxilacin de la lisina Desaminacin de la lisina Proteus y Providencia

CALDO LACTOSA
Se recomienda como prueba presuntiva para investigar la presencia de bacterias del grupo coliforme en agua, productos lcteos, etc. Actualmente tambin est indicado para el preenriquecimiento no selectivo en la bsqueda de Salmonella spp. a partir de alimentos.

Fundamento
Es un medio rico en nutrientes, y no contiene inhibidores del crecimiento bacteriano. El extracto de carne y la peptona, son la fuente de carbono y nitrgeno, mientras que la lactosa es el hidrato de carbono. Por la fermentacin de la lactosa, se produce cido y gas, y ste ltimo se demuestra al usar las campanas Durham. Se lo usa tambin como medio de preenriquecimiento, porque permite recuperar clulas injuriadas, diluye sustancias txicas o inhibitorias y favorece el desarrollo de Salmonella con respecto a otras bacterias

Ingredientes
Frmula en gramos por litro Extracto de carne Peptona Lactosa 3.0 5.0 5.0

Instrucciones
Suspender 13 g por litro de agua destilada. Mezclar bien y distribuir en tubos con campanas de Durham. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121C. Color mbar claro.

Modo de siembra
a) Para investigar la presencia de bacterias coliformes, si se trata de volmenes pequeos de muestra (1ml), sembrar en caldo simple concentracin, si se trata de volmenes grandes (10ml) sembrar en caldo doble concentracin. b) Cuando se emplea como preenriquecimiento no selectivo en la bsqueda de Salmonella spp a partir de alimentos, se siembra 25 g ml de alimento en 225 ml de caldo.

Incubacin
a) Para bacterias coliformes: a 35-37 C durante 24-48 horas, en aerobiosis. b) Para preenriquecimiento de Salmonella spp.: a 35-37 C durante 24 horas, en aerobiosis. Resultados
Microorganismos Escherichia coli K. pneumoniae Citrobacter freundii E. faecalis P. aeruginosa Salmonella typhimurium Crecimiento Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno Bueno

CALDO UREA
La urea es una diamida del cido carbnico que puede ser hidrolizada con liberacin de amonaco y dixido de carbono.

Fundamento
La ureasa es una enzima que poseen muchas especies de m.o. que pueden hidrolizar urea. El amonaco reacciona en solucin para formar carbonato de amonio, producindose alcalinizacin y aumento de pH del medio.

Frmula
El caldo urea y agar urea de Christensen son los dos medios ms comnmente usados en los laboratorios para la deteccin de la ureasa de microorganismos

Frmula en gramos por litro Caldo de Stuart Extracto de levadura Fosfato monopotsico Fosfato disdico Urea Rojo fenol 9.5 20 0.01 Cloruro de sodio Fosfato monopotsico Urea Rojo fenol 5 2 20 0.012 9.1 Glucosa 1 0.1 Agar urea de Christensen Peptona 1

Instrucciones
Inocular el caldo con una ansada cargada con el cultivo puro del microorganismo o estriar la superficie del agar. Incubar a 35C durante 24 hs.

Resultados
Los microorganismos que hidroliza urea rpidamente pueden producir reacciones positivas en 1 a 3 hs. Las especies ms lentas pueden requerir 3 o ms das. Caldo: una coloracin rojiza indica alcalinazacin e hidrlisis de urea. Agar: una coloracin rojiza en el medio indica hidrlisis de urea positiva. Los degradadores lentos producen coloracin parcial (generalmente el pico), los rpidos producen coloracin en todo el tubo. Si no hay hidrlisis el medio permanece con el color original (amarillo) y se observa crecimiento.

Urea Positiva

Urea Negativa

AGAR DEXTROSA
El Agar Dextrosa Sabouraud es un medio utilizado para el cultivo de hongos y levaduras.

Fundamento
El Agar de Dextrosa Sabouraud es una modificacin a la frmula original del Agar de Dextrosa desarrollado por Raymand Sabouraud. Este medio es utilizado para el cultivo de hongos patgenos, particularmente de aquellos asociados con infecciones de piel. La alta concentracin de dextrosa y la acidez del pH hacen a ste un medio selectivo para hongos. Con la adicin de cicloheximida, estreptomicina y penicilina, se obtiene un excelente medio para el aislamiento primario de dermatofitos. Este medio es tambin utilizado para la determinacin microbiolgica en cosmticos y para evaluar la presencia de hongos en alimentos. En este medio las peptonas proveen la fuente de carbono y nitrgeno para el crecimiento de los microorganismos, la dextrosa acta como fuente de energa y el agar es agregado como agente solidificante.

Frmula
Frmula en gramos por litro Dextrosa Peptona de Casena Digerido Pancretico de Tejido Animal Agar bacteriolgico 40.0 5.0 5.0 15.0

Instrucciones
Suspender 65 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y hervir durante un minuto. Evitar el sobrecalentamiento. Esterilizar en autoclave a 121C (15 libras de presin) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50C y vaciar en placas de Petri estriles.

Modo de siembra
1. Sembrar las muestras tan pronto lleguen al laboratorio siguiendo las recomendaciones para su proceso y siembra. 2. Incubar las placas o tubos sembrados en una atmsfera hmeda a 25-30C. 3. Examinar los cultivos semanalmente para reportar resultados de crecimiento. Los cultivos debern dejarse en incubacin hasta por 6 semanas antes de reportarse como negativos.

Resultados
En las muestras positivas se observa el crecimiento de hongos y levaduras con su morfologa colonial tpica o confluencia de colonias.

AGAR SAL Y MANITOL

El Agar Sal y Manitol es utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos a partir de muestras clnicas y diversos materiales.

Fundamento
El Agar Sal y Manitol fue formulado por Chapman para obtener el aislamiento de estafilococos, inhibiendo el crecimiento de otras bacterias al utilizar una alta concentracin de sal. Al adicionar cloruro de sodio al 7.5% al Agar Rojo de Fenol y Manitol, observ un abundante crecimiento de cepas patgenas de estafilococos (coagulasa positivos) que formaban colonias y halos amarillos a diferencia de las cepas no patgenas que dan colonias pequeas de color rojo y sin cambio en el color del medio. En este medio las peptonas y el extracto de carne proporcionan la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales. El D.manitol es el carbohidrato. La alta concentracin de cloruro de sodio inhibe el crecimiento de flora acompaante. El rojo de fenol acta como indicador de pH. El agar es adicionado como agente solidificante.

Ingredientes

Frmula en gramos por litro Digerido Pptico de Tejido Animal Digerido Pancretico de Casena Extracto de Carne Agar Bacteriolgico Cloruro de Sodio D-Manitol Rojo de Fenol 5.0 5.0 1.0 15.0 75.0 10.0 0.025

Instrucciones
Suspender 111 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121C (15 libras de presin) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50C y vaciar en placas de Petri estriles.

Modo de siembra
1. Inocular las placas por el mtodo de estra. 2. Incubar las placas a 35 2 C durante 24 a 48 horas y observar el desarrollo.

Resultados
La morfologa colonial tpica se describe en la siguiente tabla: s. aureus Colonias pequeas a medianas con zonas amarillas alrededor Micrococos Colonias grandes de color naranja a blanco Otros Estafilococos Bacterias gran negativas Estreptococos Colonias pequeas de color rojo Sin cambio en el color del medio Inhibidas o muy poco desarrollo Sin crecimiento

ROJO DE METILO VOGES PROSKAUER (RM/VP)

Fundamento
Una de las caractersticas taxonmicas que se utilizan para identificar los diferentes gneros de enterobacterias lo constituyen el tipo y la proporcin de productos de fermentacin que se originan por la fermentacin de la glucosa. Se conocen dos tipos generales: la fermentacin cido-mixta y la fermentacin del 2,3 butanodiol. En la fermentacin cido mixta se forman fundamentalmente lctico, actico y succnico, adems de etanol, H2 y CO2. En la va del butanodiol se forman cantidades menores de cido (acetato y succinato) y los principales productos son el butanodiol, etanol, H2 y CO2.. El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo de viraje entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la produccin de cidos por la va de fermentacin cido mixta. El acetil-metil-carbinol (o acetona) es un producto intermediario en la produccin de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxgeno la acetona es oxidada a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.

Ingredientes
Frmula Peptona Glucosa Fosfato dipotsico Rojo de metilo Revelador VP Alfa-naftol solucin al 5% Solucin de KOH al 40% 7.0 gr 5.0 gr

5.0 gr 0.1 gr

Instrucciones
Inocular el caldo RMVP con un cultivo puro de no ms de 24 horas del m.o. en estudio. Incubar a 35C durante 48 horas. Luego de finalizado el tiempo de incubacin transferir 1 mL del caldo a un tubo limpio para VP. En el caldo restante revelar RM agregando unas 4 - 8 gotas del indicador rojo de metilo. Para revelar VP agregar 0,6 ml (10 gotas) de alfa-naftol al 5% y 1 gota de KOH al 40%. Agitar cuidadosamente para exponer el medio al oxgeno atmosfrico y dejarlo reposar durante 10 a 15 minutos.

Resultados
La prueba RM es positiva si se desarrolla un color rojo estable. Esto indica que la produccin de cido es suficiente para producir el viraje del indicador y el m.o. ferment la glucosa por la va de cido mixta. Un color anaranjado, intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado como positivo. La prueba VP es positiva si se desarrolla un color rojo-fucsia luego de 15 minutos, que indica la presencia de diacetilo, producto de oxidacin de la acetona. Controles RM positivo, VP negativo: Escherichia coli RM negativo, VP positivo: Enterobacter aerogenes

CALDO STREPTOCOCUS FECALES (SF) Consiste en comprobar el crecimiento de determinados microorganismos en presencia de acida sdica y, en su caso, la capacidad de fermentar la glucosa. Fundamento Se utiliza el caldo de glucosa acida que es selectivo para estreptococos fecales o enterococos. Inoculacin Se realiza a 45 c, durante 24-48 horas. Si as disponibilidades del laboratorio no permiten tener una estufa a dicha temperatura, se puede incubar a 37c, pero la seguridad no es total. Resultados El crecimiento se pone de manifiesto por la turbidez del medio, y la fermentacin de la glucosa por variacin del color purpura inicial al amarillo castao.

MEDIO TIOGLICOLATO.
Este medio de cultivo fue descripto originalmente por Brewer, y es recomendado para usar en ensayos de control de esterilidad, en diversos productos biolgicos. En microbiologa clnica tambin se usa por su capacidad de favorecer el desarrollo de una gran variedad de microorganismos aerobios y anaerobios.

Fundamento
El medio de cultivo, tiene por sus componentes la calidad nutricional del caldo triptena soya. Este permite el desarrollo de una amplia variedad de microorganismos, incluidos los nutricionalmente exigentes. Adems, se observa que las bacterias estrictamente aerobias, crecen en la parte superior, mientras que las anaerobias facultativas o anaerobias estrictas crecen en las profundidades del medio. Las sustancias reductoras como tioglicolato de sodio y cistena proporcionan una anaerobiosis suficiente y debido a los grupos -SH- de estos compuestos, se neutralizan los efectos bacteriostticos de los derivados mercuriales, arsenicales y de otros metales pesados. La presencia de una baja cantidad de agar, retarda la dispersin de CO2 y O2.

Ingredientes
Frmula (en gramos por litro) Triptena Peptona de soya Glucosa Cloruro de sodio Tioglicolato de sodio Agar L-cistina Sulfito de sodio 17.0 3.0 6.0 2.5 0.5 0.7 0.25 0.1

Instrucciones
Suspender 30 g del polvo por litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar a ebullicin hasta disolucin total. Distribuir y esterilizar a 121C por 15 minutos.

Caractersticas del medio

Medio preparado: mbar claro ligeramente opalescente.

Modo de siembra
Segn la muestra a analizar: -Muestras lquidas: agregar 1 o 2 gotas de la muestra a tubos conteniendo medio de cultivo. -Tejidos y otras muestras slidas: macerar en caldo estril. Luego sembrar de la misma manera que para muestras lquidas. -Hisopos: insertarlos en el medio de cultivo, luego de haber sembrado el medio slido apropiado. - Para el cultivo de anaerobios, antes de sembrar, eliminar el oxgeno presente, mediante el hervido de los tubos con las tapas flojas, y luego enfriarlos a temperatura ambiente con las tapas bien cerradas.

Incubacin
El tiempo, temperatura y condiciones de incubacin dependern del microorganismo que se quiera recuperar.

Resultados
Crecimiento de microorganismos importantes:
Microorganismos Streptococcus pyogenes Clostridium perfringens S. aureus Bacteroides fragilis Crecimiento

MEDIO DE TRANSPORTE CARY Y BLAIR

Medio recomendado para la recoleccin, transporte y conservacin de muestras aptas para estudios microbiolgicos. Es especialmente til para la bsqueda de Vibrio spp. a partir de muestras fecales y rectales.

Fundamento
El primer medio utilizado para el transporte de muestras para estudios microbiolgicos fue el medio de Stuart. En 1964 Cary y Blair describieron un nuevo medio para el transporte de muestras fecales. Tena un bajo contenido de nutrientes, un bajo potencial de oxido-reduccin y un alto pH. En los estudios de Cary y cols., Salmonella y Shigella fueron recuperadas luego de 45 das de inoculacin. Otros autores han demostrado la eficacia de ese medio de transporte para estudios microbiolgicos en gastroenteritis. El medio de transporte Cary-Blair, es semislido debido a la baja concentracin de agar. Tiene un mnimo aporte de nutrientes que permite la recuperacin de los microorganismos sin que haya replicacin. El tioglicolato de sodio se incluye para proveer un bajo potencial redox; y el pH relativamente alto minimiza la destruccin bacteriana por acidificacin.

Ingredientes
Frmula (en gramos por litro) Tioglicolato de sodio Fosfato disdico Cloruro de sodio Agar 1.5 1.1 5.0 5.0

Instrucciones
Suspender 12,6 g del polvo en 991 ml de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. Enfriar a 50C y agregar 9 ml de una sol. de CaCl2 al 1% preparada recientemente. Ajustar el pH si es necesario. Distribuir y esterilizar 15 minutos a vapor fluente.

Caractersticas del medio. Medio preparado mbar claro. Puede presentar opalescencia. Modo de siembra 1-Utilizando un hisopo estril, recolectar la muestra segn la metodologa apropiada para ensayos microbiolgicos. 2-Colocar el hisopo en el tercio superior del medio de cultivo. Si una parte de la varilla sobresale, cortarla e inmediatamente tapar el tubo. Enviar lo ms pronto posible al laboratorio para su procesamiento, dentro de las 4-6 horas de recolectada la muestra.
Incubacin Mantener a temperatura ambiente durante su envo al laboratorio.

Resultados Los tubos con medio de transporte se subcultivan en medios slidos apropiados segn la muestra y el microorganismo que se quiera aislar. Luego de la incubacin, debe haber escasa o nula reduccin de la viabilidad de los microorganismos, algunos microorganismos de inters son:
Microorganismos S. flexneri Salmonella typhimurium Vibrio cholerae Crecimiento

AGAR FENILALANINA.
El Agar Fenilalanina es utilizado para la diferenciacin de especies de Proteus y Providencia de otras enterobacterias, en base a su capacidad de desaminar la fenilalanina.

Fundamento
Butiaux, Osteux y Morianez desarrollaron un mtodo para diferenciar a los miembros de los gneros Proteus y Providencia de otras enterobacterias en base a su capacidad enzimtica para efectuar la desaminacin de la fenilalanina produciendo cido fenilpirvico. Bynae modific este mtodo incorporando fenilalanina en el medio de cultivo. Ewing, Davis y Reavis simplificaron la formulacin de Bynae eliminando la proteosa peptona. En este medio la DLFenilalanina sirve como sustrato para su desaminacin a cido fenilpirvico. Despus de la incubacin el cido fenilpirvico es detectado con la adicin de cloruro frrico. Los iones frricos forman un quelato con el cido fenilpirvico dando un color verde. El extracto de levadura proporciona las vitaminas y cofactores as como la fuente de carbono y nitrgeno. El difosfato de sodio acta como buffer. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. El agar es adicionado como agente solidificante. El medio de cultivo no puede contener extractos de carne o peptonas por su contenido variable en fenilalanina.

Ingredientes
Frmula (en gramos por litro) Extracto de levadura DL-Fenilalanina Fosfato disdico Cloruro de sodio Agar 3.0 2.0 1.0 5.0 12.0

Instrucciones
Suspender 23 g del polvo en un litro de agua destilada. Calentar a ebullicin hasta disolucin total. Colocar en tubos y esterilizar a 121C durante 15 minutos. Solidificar en posicin inclinada para obtener picos de flauta alargados.

Caractersticas del medio

Medio preparado: amarillo mbar. Se agrega cloruro frrico que forma un complejo de color verde con el cido fenilpirvico.

Modo de siembra
Inocular el agar en pico de flauta, sembrar de manera estriada la superficie del medio con un cultivo puro de 24 horas e incubar a 35C durante 18-24 horas. Luego de transcurrido el perodo de incubacin, agregar 4 o 5 gotas de reactivo de cloruro frrico, directamente sobre la superficie del agar.

Interpretacin de los resultados

La aparicin inmediata de un color verde intenso indica la presencia de cido fenilpirvico y una prueba positiva. Controles Positivo:Proteus. Negativo: Escherichia coli.