Simmons Citrato Agar

Uso
Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la capacidad de usar
citrato como única fuente de carbono y energía.

Fundamento
Algunas bacterias tienen la capacidad de sobrevivir en ausencia de fermentación o
producción de ácido láctico, necesitando conseguir energía a través de la utilización de
otros sustratos. En esta prueba la única fuente de carbono ofrecida es el citrato.
Las bacterias que son capaces de sobrevivir bajo estas condiciones metabolizan el citrato
de forma rápida por una vía alterna a la tradicional, utilizando el ciclo del ácido
tricarboxílico o el ciclo de fermentación del citrato.
El catabolismo del citrato por parte de las bacterias comprende un mecanismo enzimático
sin la intervención de la coenzima A. Esta enzima se conoce con el nombre de citricasa
(citrato oxalacetato-liasa) o citrato desmolasa. La reacción requiere la presencia de un
catión bivalente, que en ese caso es suministrado por el magnesio.
La reacción genera oxaloacetato y piruvato, que luego dan origen a ácidos orgánicos en
medio de un pH alcalino formado por la utilización de la fuente de nitrógeno. Estos ácidos
orgánicos son usados como fuente de carbono generando carbonatos y bicarbonatos,
alcalinizando aún más el medio.

Composición
En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato
de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el
desarrollo bacteria- no. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es
cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmó- tico, el azul de
bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino y el agar es el
agente solidificante.
El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganis - mos capaces de utilizar
citrato como única fuente de carbono usan sales de amonio como única fuente de
nitrógeno, con la consi- guiente producción de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias posee- doras de citrato
permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato genera
progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino,
da origen a ácidos orgánicos que al ser utilizados como fuente de carbono, producen
carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de
la producción de citrato permea- sa.
Christensen Medio (Urea Agar Base)
Uso
Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad ureásica.
Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp. Otras
enterobacterias y estafilococos.

Fundamento
El medio tiene como indicador de la producción de acidez o alcalinidad el Rojo Fenol.
Los microorganismos que poseen actividad ureasa, actúan sobre la urea presente en el
medio, formando Amoniaco y Dióxido de Carbono, el Amoniaco alcaliniza el medio y el
indicador hace que el medio vire de anaranjado-amarillo a rosa fuerte.
Los miroorganismos que no descomponen la Urea y fermentan la Glucosa, pueden virar
el medio a ácido y aparecer el medio con un color amarillo o incluso no alterarlo al ser
pequeña la presencia de este azúcar.
La incorporación de sistema de tamponamiento, permite la detección de gérmenes que
metabolizan rápidamente la urea (de 4 a 6 horas) así como los que hidrolizan la Urea
lentamente como el Citrobacter, Klebsiella, Yersinia y Bordetella.

Composición
En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa, aportan el nu- trientes para el desarrollo
de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el rojo de fenol
es el indicador de pH. El agar es el agente solidificante.
Las bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa libe- ran amoníaco y
dióxido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio de cultivo haciendo virar el
indicador rojo de fenol del color amarillo al rojo.
Es recomendado especialmente para la detección de la actividad ureásica en bacterias que
hidrolizan lentamente la urea ya que la fermentación de la glucosa presente activa la
enzima ureasa mi- crobiana. Este es el caso de Klebsiella spp., Enterobacter spp y
Citrobacter spp.

Lisina Hierro Agar

Uso
Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, espe- cialmente Salmonella
spp., basado en la decarboxilación y desami- nación de la lisina y en la producción de ácido
sulfhídrico.
Fundamento
El agar LIA (Lisina Hierro) es una prueba bioquímica utilizada para la identificación de
bacterias de la familia Enterobacteriaceae. Este medio fue creado por Edwards y Fife,
basados en la fórmula de Falkow.
Originalmente esta prueba era un caldo que contenía peptonas, extracto de levadura,
glucosa, L-lisina, púrpura de bromocresol y agua destilada. Edwards y Fife le agregaron
agar-agar, citrato férrico de amonio y tiosulfato sódico.
La prueba consiste básicamente en demostrar la presencia de la enzima lisina
descarboxilasa, capaz de reaccionar con el grupo carboxilo del aminoácido L-lisina.
También puede ocurrir una desaminación del aminoácido por la presencia de la enzima
lisina desaminasa.
Adicionalmente, la composición del medio permite evidenciar la capacidad de algunos
géneros bacterianos de producir sulfuro de hidrógeno. Finalmente, también es posible
observar la generación o no de gas en el medio.

Composición
Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el me- dio y provocan el viraje
del color púrpura al amarillo.
El ambiente ácido favorece la actividad enzimática decarboxilasa y se metaboliza la lisina
a cadaverina elevando el pH del medio de cultivo y tornándolo al color púrpura o violeta.
Los microorganismos fermentadores de glucosa que no tienen ac- tividad lisina
decarboxilasa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al color amarillo. A
las 24 horas de incubación se observa el fondo del tubo color amarillo y la superficie de
color vio- leta debido al consumo de las peptonas que producen alcalinidad. La generación
de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el ennegre- cimiento del medio debido a la
formación de sulfuro de hierro.
Las cepas de los géneros Proteus, Providencia y algunas de Mor- ganella, desaminan la
lisina. Esto produce un ácido alfa-ceto-car- bónico, el cual con la sal de hierro y bajo la
influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio.

SIM Medio
Uso
Medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de
hidrógeno por los microorganismos.
Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

Fundamento
Es un medio de cultivo que se considera diferencial, debido a que su uso logra distinguir
entre los microorganismos capaces de producir sulfuro de hidrógeno de los que no lo
hacen; también destaca aquellas que forman indol a partir del triptófano de las que no lo
forman, y finalmente diferencia las bacterias mótiles de las inmóviles.

Composición
Medio de cultivo en el cual la tripteína y la peptona aportan nutrien- tes para el desarrollo
microbiano. El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas y
particularmente de la tripteína y puede ser metabolizado por algunas bacterias para
formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas tripto- fanasa. El
indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Ehrlich (Indol Reactivo ReF
B1550361) o de Kovac´s, para originar un compuesto de color rojo.
A partir del tiosulfato de sodio los microorganismos pueden gene- rar ácido sulfhídrico
que reacciona con el hierro presente formán- dose un compuesto de color negro.
El agar es el agente solidificante y a esta concentración le otorga al medio la propiedad
de ser semisólido, condición necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el
enturbiamiento del me- dio o por crecimiento que difunde más allá de la línea de siembra
del microorganismo en estudio.

MIO Medio
Uso
Medio utilizado en la identificación de miembros de la familia Ente- robacteriaceae en
base a la movilidad, producción de indol y activi- dad enzimática ornitina decarboxilasa.

Fundamento
El medio MIO es una prueba bioquímica que se utiliza para ayudar en la identificación de
especies de bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae. Es bastante nutritivo
y está compuesto por glucosa, extracto de levadura, peptona, tripteína, clorhidrato de L-
ornitina, púrpura de bromocresol y agar.
El significado de sus siglas (MIO) describe cada uno de los parámetros que se pueden
observar en este medio; motilidad, indol y ornitina. La motilidad es la capacidad del
microorganismo de moverse por la presencia de flagelos. Para que esta propiedad pueda
ser observada la consistencia del medio debe ser semisólida, por lo que la preparación
lleva menos cantidad de agar.
La producción de indol evidencia la presencia de la enzima triptofanasa que actúa sobre
el aminoácido triptófano, siendo necesario el uso de un reactivo revelador para hacer
visible la producción de indol.
Finalmente, la ornitina determina si la bacteria es capaz de descarboxilar el aminoácido,
es decir, si cuenta con la enzima orinitina descarboxilasa.

Composición
Medio de cultivo altamente nutritivo por la presencia de extracto de levadura, peptona y
tripteína.
La tripteína aporta gran cantidad de triptofano, sustrato de la enzi- ma triptofanasa a
partir del cual se forma indol que puede ser reve- lado con el reactivo de Ehrlich (Indol
Reactivo ReF B1550361) o de Kovac´s por la formación de un compuesto de color rojo.
La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la
detección de la enzima ornitina decarboxilasa, el púrpura de bromocresol es el indicador
de pH, que en medio alcalino es de color púrpura y en medio ácido es amarillo. El agar es
el agente solidificante y a esta concentración le otorga al medio la propiedad de ser
semisólido, condición necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el
enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas allá de la línea de
inoculación del microorganismo en estudio.

Kligler Hierro Agar

Uso
Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiología de ali- mentos para la
diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de hidratos de carbono y a la
producción de ácido sulfhídrico.

Fundamento
Es un medio de cultivo utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la
fermentación de lactosa y glucosa, además de la formación de ácido sulfhídrico. El medio
se solidifica en forma inclinada permitiendo tener dos cámaras de crecimiento: una
aeróbica, el pico de flauta y la otra anaeróbica, el fondo del tubo. La fermentación de
azúcares acidifica el medio lo cual se observa con el vire del rojo de fenol a amarillo que
es el indicador ácido-base incorporado. En caso de no haber fermentación, el medio vira
a rojo.

Composición
En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes adecuados
para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono
fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido
sul- fhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+, los cuales se
combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de
fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es
el agente solidificante.