Hematologa y citologa sangunea en reptiles

Hematology and blood cytology in reptiles

A. Martnez-Silvestre,1 S. Lavn,2 R. Cuenca 2

1

Centro de Recuperacin de Anfibios y Reptiles de Catalua (CRARC) 08783 Masquefa

2
Servei de Diagnstic Hematolgic. Facultat de Veterinaria. UAB. Bellaterra.

Resumen
Los reptiles son un grupo de animales cada vez ms comunes en la consulta veterinaria. En estas especies, muchas herramientas diagnsticas estn
en fases descriptivas, entre ellas el diagnstico hematolgico y la citologa sangunea. Este artculo analiza las clulas sanguneas descritas en reptiles:
eritrocito, heterfilo, eosinfilo, basfilo, monocito, azurfilos y trombocito. Tambin se expone la utilizacin de valores hematolgicos como el hematocrito, recuentos totales, hemoglobina e ndices eritrocitarios. Para todos estos valores, se discute su interpretacin clnica en cuanto a las variaciones
que sufren tanto fisiolgica como patolgicamente.

Palabras clave: Reptil, hematologa, citologa sangunea, diagnostico.

Keywords: Reptile, hematology, blood cytology, diagnosis.
Clin. Vet. Peq. Anim, 2011, 31 (3): 131-141

Introduccin
La interpretacin de la hematologa y de la citologa sangunea en reptiles es una excelente herramienta
diagnstica en estas especies cada vez ms comunes
en la clnica de animales exticos.
En el presente artculo se describen las principales
clulas con sus caractersticas citolgicas. Tambin se
detallan las tcnicas de recuento y evaluacin celular,
as como la interpretacin de las alteraciones fisiolgicas y patolgicas. De este modo, se ha intentado que
el artculo ayude al clnico veterinario, citlogo o patlogo en el examen del frotis sanguneo en las distintas
especies de reptiles.

Previo al anlisis
La mayora de los trabajos publicados hasta el momento utilizan la heparina de sodio o de litio como anticoagulante de eleccin en hematologa de reptiles.1,2
El EDTA puede causar lisis de los eritrocitos en algunas
especies de tortugas.3 Sin embargo, en algunas especies de reptiles como la iguana verde (Iguana iguana), o
el dragn de agua chino (Physignathus concincinus), se
puede utilizar el EDTA y se considera un buen anticoagulante, ya que no se observa lisis eritrocitaria, permite

una buena tincin y, por tanto, una mejor identificacin

celular respecto a las clulas expuestas a la heparina.4
El uso de citrato se desaconseja debido a que provoca
cristalizacin de la hemoglobina y produce hemlisis.5
En tortugas africanas (Malachochersus tornieri) se ha
probado la adicin de albmina bovina como estabilizante celular para evitar la eritrolisis del muestreo, dando buenos resultados y ajustando mejor los valores en
recuentos y frotis.6
La heparina se usa en una concentracin de 1-3 mg/
ml.5 Los inconvenientes de su uso incluyen el tinte azulado que da a la extensin de sangre al teirla y la agregacin que causa a los leucocitos y trombocitos, lo que
afecta a los recuentos celulares.7
El lugar de venipuncin y el mtodo de recogida
pueden afectar al valor hematocrito y a los recuentos
totales. En los reptiles, los vasos linfticos acompaan
a los sanguneos, lo que produce con frecuencia una
contaminacin linftica de la sangre durante la extraccin.5 Para evitarlo, los puntos de extraccin con menor contaminacin linftica son, en tortugas la vena
yugular y el plexo braquial, en saurios la vena coccgea
ventral y en serpientes la vena palatina o la puncin
intracardiaca.

* Contacto: albertmarsil@hotmail.com

131

Martnez-Silvestre et al.

Tcnicas de recuento y evaluacin celular

Las tcnicas bsicas de hematologa, tanto en recuentos
como en morfologa, se aplican del mismo modo en los
reptiles que en mamferos, aunque existen algunas modificaciones destacables. Adems, la morfologa y la fragilidad
osmtica de las clulas hemticas varan en relacin a la de
los mamferos.8
Recuento celular
Contadores automticos
La presencia de eritrocitos y trombocitos nucleados en la
sangre de los reptiles dificulta la interpretacin de los resultados obtenidos con contadores automatizados. Estudios
preliminares9 indican que sera posible obtener un recuento
leucocitario total fiable en reptiles, mediante el empleo de
contadores como el Cell Dyn 3500 y el uso del programa
informtico asociado para veterinaria, de la empresa Abbott Diagnostics, Abbott Park, IL. Sin embargo, incluso empleando analizadores de cierta complejidad, la variacin que
existe entre las diferentes especies de reptiles requiere que
el operador modifique parmetros y realice estudios de validacin para cada especie estudiada.
Recuentos manuales
Recuento de eritrocitos
Se puede determinar utilizando la cmara hemocitomtrica de Neubauer (Cuadrcula central de 4 x 4 lneas) o la de
Neubauer modificada (Cuadrcula central de 5 x 5 lneas),
con la solucin de Natt y Herrick5 como diluyente, o bien
empleando el sistema Unopette (Becton Dickinson, Rutherford, NJ). (Tabla 1).
En ambos mtodos se coloca una gota de la muestra diluida en una cmara de recuento y se deja sedimentar durante uno a cinco minutos antes de realizar el recuento. Se
cuentan los cuatro cuadrados de las esquinas y el central de
la cuadrcula central de la cmara (Fig. 1). El nmero total de
eritrocitos por microlitro se calcula multiplicando el nmero
de eritrocitos contados por 10.000.

Recuento de leucocitos
Tambin requiere el uso de una cmara hemocitomtrica
como la de Neubauer modificada y el diluyente de Natt y
Herrick. Este es el mtodo de recuento preferido en aquellas especies de reptiles que tengan normalmente un mayor
nmero de linfocitos circulantes que de heterfilos.
Una de sus principales desventajas es la dificultad de diferenciar los linfocitos de los trombocitos y los eritrocitos inmaduros. Algunos autores sugieren incluir los trombocitos y
los eritrocitos inmaduros en el recuento diferencial leucocitario, realizado sobre la extensin de sangre, lo que permite
la correccin del recuento en cmara.10 El recuento total se
puede ajustar tras obtener una estimacin del nmero de
trombocitos y eritrocitos inmaduros por leucocito, a partir
de la extensin sangunea. Para obtener los leucocitos/l se
tienen que contar los leucocitos presentes en los 9 campos
mayores de la cmara de Neubauer, sumarle un 10 % y
multiplicar el resultado por 200.
El segundo mtodo de recuento es el mtodo indirecto
de Unopette (Tabla 1). La tcnica de Unopette no da hasta
el momento resultados mucho mejores que los realizados
con el sistema de Natt y Herrick, y siempre son variables con
la especie9 (dependiendo si tiene mayor o menor porcentaje
de eosinfilos con respecto a los linfocitos).
Tambin se puede hacer una estimacin del nmero de
leucocitos sobre la extensin de sangre teida. Para realizarla, se cuenta el nmero de leucocitos con el objetivo x40
en 10 campos; el valor medio se multiplica por 1000 y se
obtiene una estimacin del nmero de leucocitos/l. Esta
estimacin permite, adems, confirmar la exactitud del recuento leucocitario, realizado de forma manual.
Recuento de trombocitos
El recuento total de trombocitos tambin se realiza utilizando la cmara de Neubauer y el diluyente de Natt y Herrick, con una dilucin de la sangre 1:200.
Su recuento se hace en la totalidad de la cuadrcula central, en ambos lados de la cmara. El nmero obtenido se
ha de multiplicar por 1000, para obtener el nmero total de
trombocitos por l de sangre. Sin embargo, y debido a la
dificultad de distinguir estas clulas de los linfocitos pequeos, a efectos prcticos se suele hacer una estimacin sobre
la extensin sangunea, durante el recuento diferencial de
leucocitos. En animales con hematocrito comprendido entre un 40 % y un 50%, se procede a contar el nmero de
trombocitos en 5 campos y el resultado se multiplica por
3500. Si el hematocrito difiere de este margen se ha de
aplicar un factor de correccin. De este modo se obtiene el
nmero aproximado de trombocitos por l. El nmero de
trombocitos presentes en la sangre de reptiles sanos, vara
entre 25 y 350 trombocitos por 100 leucocitos.5
Valoracin de la morfologa celular

Figura 1. Esquema de la cmara de Neubauer modificada. En rojo estn

resaltados los cuadros a utilizar en el recuento de eritrocitos.

132

Se realiza sobre extensiones de sangre sin anticoagulante,

secadas al aire y teidas. Las tinciones utilizadas en descripciones cientficas son las de tipo Romanowsky, como la de
May-Grnwald Giemsa.7 Estas consumen mucho tiempo,
pero proporcionan una mejor diferenciacin de los leucocitos,
trombocitos y eritrocitos inmaduros. Alternativamente, en las

2011, Vol. 31 n3

Tabla 1. Comparacin de las tinciones empleadas en los recuentos sanguneos de reptiles

Natt-Herrick

Unopette

Fundamento

Solucin basada en la combinacin de tincin y

diluyente (Metil-Violeta). Ideada inicialmente para
recuentos en aves de corral.

Solucin lisante (Oxalato) y colorante (Floxina B).

Ideada inicialmente para recuentos de eosinfilos en
mamferos.

Materiales

Preparacin de la solucin.
Uso de pipeta hematocitomtrica.
Dilucin 1:200

Diluyente, vial y capilar en pack comercial.

Dilucin 1:200

Metodologa

Llenar la pipeta hasta la marca 0,5 con la sangre y

despus aspirar diluyente hasta 101. Remover 1 minuto.

Solucin inicial que lisa los glbulos rojos.

Posteriormente se tien los leucocitos y se cuentan.

Ventajas

Buena diferenciacin en Recuento eritrocitario. Una

misma pipeta para recuento de eritrocitos y leucocitos.

Ms sencillo.
Ms exacto.
Menor error de dilucin.

Inconvenientes

Preparacin ms lenta.
No fcil distincin de linfocitos y trombocitos en el
recuento de Leucocitos.

Mayor tiempo de espera previo a la lectura.

Menos fiable en reptiles con contaje alto en
linfocitos.
Mala diferenciacin de la serie agranuloctica.

clnicas veterinarias se utilizan las tinciones rpidas (Diff-Quick,

panptico rpido). Sin embargo, no siempre proporcionan una
diferenciacin adecuada entre los diferentes leucocitos; adems, los grnulos de los heterfilos tienden a unirse entre ellos,
ms con las tinciones rpidas, lo que hace difcil su evaluacin.3
Independientemente de la tincin utilizada, la extensin
de sangre debe realizarse sin anticoagulante e inmediatamente despus de la extraccin. De este modo se evita la
presencia de artefactos, como las alteraciones en la morfologa de los leucocitos y trombocitos, cambios en las propiedades tintoriales de los leucocitos, vacuolizacin de los
monocitos o aumento en el tamao de los linfocitos.11

animal tiene una respuesta regenerativa marcada ante una

anemia, en el momento de salir de la hibernacin o cuando
los animales presentan una enfermedad inflamatoria importante o malnutricin (Fig. 3).

Eritrocitos

Nmero y morfologa eritrocitaria

El nmero de eritrocitos en sangre perifrica en los reptiles es inferior al de mamferos y aves, siendo habitual
que el recuento total en los lagartos sea superior al de las
serpientes y tortugas.12 Estos hallazgos indican una mayor
capacidad en el transporte del oxgeno por parte de los
eritrocitos de aves y mamferos, comparado con los animales ectodermos como los reptiles. En general, los valores
de referencia para los recuentos eritrocitarios oscilan desde
300.000 hasta 2.500.000 clulas /L, dependiendo de la
especie12 y del lugar de puncin.13 Como es habitual en
otros parmetros fisiolgicos de los reptiles, el recuento total de eritrocitos vara con las condiciones ambientales, el
estado nutricional, el sexo (algunos machos tienen mayor
nmero que las hembras) y la estacin (ms altos antes de
la hibernacin y ms bajos justamente despus).5,14
Los eritrocitos de los reptiles (Fig. 2) tienen una forma elptica, con los extremos redondeados y el ncleo, de redondo
a oval, colocado en posicin central. El citoplasma tiene una
textura uniforme y es eosinfilo. En reptiles sanos puede
encontrarse algn eritrocito en mitosis, siendo un hallazgo
anecdtico. La deteccin de morfologa nuclear anmala,
binucleacin o actividad mittica son indicativos de que el

Figura 2. Eritrocitos normales en una Python molurus. Se aprecia un eritrocito binucleado. Tincin May Grnwald Giemsa. X 1000.

Figura 3. Morfologa nuclear anmala en eritrocitos de Dragn Barbudo (Pogona vitticeps). Tincin May Grnwald Giemsa. X 400.

133

Martnez-Silvestre et al.

La presencia de formas diversas en la morfologa eritrocitaria (poiquilocitos), se observa en un nmero bajo en individuos sanos; sin embargo, se ha asociado su presencia
en nmero elevado a septicemia e infeccin crnica grave.15
Se han descrito tambin inclusiones eritrocitarias en agamas
acuticas (Physignatus lesuerii) sanas.16
En ocasiones, se observan eritrocitos policromatfilos o eritrocitos inmaduros. Son clulas entre redondas a ligeramente irregulares, con un ncleo redondo grande y citoplasma
basoflico. Parecen de menor tamao al eritrocito maduro,
debido probablemente a su forma esfrica. Estas clulas son
especialmente frecuentes en animales jvenes, en animales
en periodo de muda o en aquellos infectados por hemoparsitos.17 El incremento de reticulocitos puede estar asociado
con anemia regenerativa, si bien faltan estudios al respecto
en estas especies. El grado de policromasia o reticulocitosis
en reptiles sanos es generalmente bajo y representa menos
del 1% de la poblacin eritrocitaria. La razn puede ser que
los reptiles tienen un recambio eritrocitario ms lento comparado con los mamferos debido a su vida media, que puede ser de hasta 800 das en algunas especies.15

Incremento del nmero de eritrocitos

Se ha observado un aumento del recuento eritrocitario
como respuesta fisiolgica a la migracin marina en la tortuga boba Caretta caretta.18
En la tortuga Mauremys lerprosa se han observado valores
incrementados de recuento eritrocitario durante el otoo.19
Estos valores se han interpretado como una respuesta adaptativa previa al invierno, que incrementa la capacidad oxigenadora sangunea durante la hibernacin.
El incremento del volumen corpuscular medio, el tamao eritrocitario y el recuento de eritrocitos se han relacionado significativamente con el tamao en las tortugas
marinas de los gneros Caretta, Chelonia, Lepidochelys y
Eretmochelys.20
Disminucin del nmero de eritrocitos
-Fisiolgica: A parte de con la mencionada hemodilucin,
se ha descrito con la edad (disminuido en los juveniles), sexo
(disminuido en las hembras) y segn la estacin (debido a la
anorexia posthibernacin).21
-Patolgica: se describe una disminucin en el recuento
eritrocitario con la deshidratacin, nutricin inadecuada, eritrolisis (autoinmune, por hemoparsitos, por hemorragia),
enfermedad crnica, anemia no regenerativa y en enfermedad renal.10, 22
En algunas especies de reptiles, la hibernacin tambin
provoca cambios en los valores eritrocitarios. As, y de forma
general, los valores son ms altos antes de la hibernacin y
ms bajos inmediatamente despus de sta. Algunas especies, como los viperinos, no muestran diferencias entre los
valores eritrocitarios pre y posthibernacin.23
El diagnstico de anemia se ha descrito vinculado a hemoparsitos y procesos neoplsicos en serpientes24-28 as como a
anemia hemoltica autoinmune o sndrome de inadaptacin
en saurios y tortugas.25, 27 Sin embargo, se ha descrito que
en iguanas puede darse una respuesta eritroide regenerativa
no asociada a anemia en los procesos de mineralizacion de
tejidos blandos.26

134

Valor hematocrito
Se determina mediante el mtodo estndar del microhematocrito, con una centrifugacin a 12000 G, durante 5 minutos.
El color del plasma debe ser de claro a ligeramente amarillo; y debido a los pigmentos de la dieta, en los reptiles
herbvoros, se puede observar un plasma de amarillo-anaranjado, o verde-amarillento en las serpientes.7
El valor hematocrito normal de la mayora de reptiles vara
entre el 15 y el 55%.5 Valores superiores al 55% indican
bien hemoconcentracin o policitemia, mientras que un hematocrito inferior al 15% sugiere anemia, siempre que se
descarte la hemodilucin de la muestra por la presencia de
linfa. Valores inferiores al 10 % indican la valoracin de una
transfusin sangunea.

Incremento del hematocrito

-Fisiolgico: Se ha visto asociado a la edad en tortugas
marinas, teniendo mayor valor hematocrito en las adultas
que en las jvenes.29 Parece ser que este hecho se debe a
que las adultas pasan mucho ms tiempo sumergidas.18 Por
su parte, se ha visto que en la tortuga de agua dulce Mauremys leprosa, los valores son ms elevados en otoo.19
-Patolgico: Se ha descrito asociado a la deshidratacin.
sta, unida a la anemia no regenerativa, puede dar falsa sensacin de hematocrito normal en la enfermedad renal.22
Se ha observado que, en el caso de las iguanas verdes
mantenidas en condiciones naturales exteriores, muestran en
el hematocrito un rango ligeramente ms amplio con respecto a las mantenidas en condiciones artificiales de terrario.30
Hemoglobina
Se determina utilizando el mtodo de la cianometahemoglobina, siempre tras una eliminacin correcta de los ncleos
de los glbulos rojos por centrifugacin previa a la lectura,
puesto que la presencia de ncleos libres puede elevar de forma errnea el valor medido.31 La concentracin de hemoglobina de muchas especies de reptiles vara entre los 6 y 12 g/dl,
aunque con frecuencia los valores son inferiores a 10 g/dl .
La estructura y funcin de la hemoglobina aparece
homognea entre las diferentes especies de reptiles. Sin
embargo, los lagartos tienden a tener una afinidad por el
oxgeno significativamente ms alta que los quelonios.
La sangre de determinados reptiles contiene 2 ms
hemoglobinas, distinguibles por su peso molecular, carga
de superficie y propiedades qumicas.
Estas dos molculas se han descrito en tortugas (Chrysemys picta,
Trachemys scripta), lagartos
La hibernacin provoca
(Lacerta vivipara) y serpiencambios
en los valores
tes (Coluber constrictor).
eritrocitarios.
As, y de
Se hipotetiza que estas
forma general, los valores
dos molculas de hemoglobina existen en el misson ms altos antes de la
mo eritrocito, aunque su
hibernacin y ms bajos
diferencia funcional puede
inmediatamente desdeberse a la edad del eritropus de sta
cito, como ocurre en los mamferos.1,32

2011, Vol. 31 n3

Aunque antiguamente se crea que los reptiles tenan cantidades elevadas de metahemoglobina, consideradas patolgicas en los mamferos, actualmente se considera que los
valores son similares entre ambos grupos animales.
En la tortuga Chrysemys picta, cuando se mantiene a
temperaturas bajas, equivalentes a las del invierno, la hemoglobina muestra una mayor afinidad por el oxgeno, incluso con un descenso simultneo en el pH. Estos cambios
observados en el transporte del oxgeno por la sangre, pueden facilitar la captacin de oxgeno durante la inmersin
invernal, permitiendo as la hibernacin bajo el agua.33,34 Por
otro lado, se suelen observar valores elevados en otoo en la
hemoglobina de la tortuga Mauremys leprosa.19
ndices eritrocitarios
El volumen corpuscular medio (VCM), la concentracin
corpuscular media de hemoglobina (CCMH) y la hemoglobina corpuscular media (HCM), son ndices que se pueden
calcular, mediante el uso de las frmulas estndar, una vez
se han obtenido la concentracin de hemoglobina, el valor
hematocrito y el nmero total de eritrocitos.
Los eritrocitos maduros de los reptiles tienen un VCM superior al de los pjaros, peces y mamferos. Los datos publicados
para reptiles varan entre 160 a 950 fl. Las iguanas tienen
el menor volumen corpuscular (170 a 300 fl), observndose
un tamao creciente en serpientes, galpagos, cocodrilos y
tortugas respectivamente (500 a 540 fl).7,12 Existe una relacin
inversa entre el tamao de los eritrocitos y el nmero total de
clulas circulantes; as, a medida que se incrementa el VCM,
desciende el nmero de eritrocitos circulantes.
En los reptiles el promedio de la CCMH es de aproximadamente un 30 % (intervalo entre el 22 % y el 41 %).
Los ndices eritrocitarios ayudan a valorar la respuesta medular ante una anemia. La respuesta regenerativa eritrocitaria en los reptiles parece ser ms lenta que la observada
en los mamferos. En los reptiles con policromasia, existe
una menor CCMH y un VCM disminuido. En mamferos,
normalmente el VCM aumenta durante la respuesta regenerativa, debido al mayor tamao de sus reticulocitos. Sin
embargo, las clulas policromatfilas de los reptiles son, generalmente, ms pequeas que sus eritrocitos adultos.

Disminucin en Recuento leucocitario

-Fisiolgico: Se ha descrito en invierno en Boa constrictor.36
-Patolgico: Se ha observado tras la administracin de fenbendazol en la tortuga T.hermanni.37
Recuento diferencial leucocitario
Heterfilo
A nivel funcional, es la clula equivalente al neutrfilo
de los mamferos y tiene una enorme variacin morfolgica en las distintas especies de reptiles. Son clulas redondeadas, grandes, y aunque el nmero y la forma de
los grnulos vara con la especie (Figs. 4 y 5), por lo general, tienen los grnulos citoplasmticos refringentes
fusiformes, que se tien de color naranja brillante con
las tinciones de Diff Quick o May-Grnwald Giemsa. En
una misma clula pueden aparecer grnulos opacos y
refringentes. El ncleo es excntrico y de forma redondeada a oval. Algunas especies de lagartos, como las
iguanas o los dragones barbudos, tienen heterfilos con
el ncleo lobulado (Fig. 5). Su tamao vara segn la especie.38,39 El nmero de heterfilos en el leucograma de
reptiles sanos vara con la especie, pudiendo representar
hasta ms del 40% del recuento diferencial en algunas
de ellas.12,38,40

Figura 4. Heterfilo de una pitn india (Python molurus). Se aprecia ncleo

sin lobulaciones y grnulos citoplasmticos con respuesta heterognea a la
tincin. Junto a l hay un linfocito. Tincin May Grnwald Giemsa. X 1000.

Leucocitos
Usando el mtodo de Natt y Herrick, los valores normales
en el recuento de leucocitos oscilan entre 1000 y 5000 cel
/L en cocodrilos, 4000 y 13000 cel /L en serpientes, 4000
y 33000 cel /L en tortugas de agua, 2000 y 18000 cel /L
en tortugas de tierra y 6000 y 20000 cel /L en lagartos.

Incremento en Recuento leucocitario

-Fisiolgico: Se ha descrito un incremento natural con
la edad en tortuga boba Caretta caretta.24 Tambin se ha
visto un incremento significativo durante el invierno en vboras africanas (Cerastes cerastes y Cerastes vipera).35
-Patolgico: Se ha observado en la enfermedad renal
crnica.22 De la misma manera, pueden afectar no slo las
enfermedades infecciosas o parasitarias, sino tambin el
estrs o la exposicin a toxinas ambientales o qumicas.

Figura 5. Heterfilos con ncleo lobulado en Dragn barbudo (Pogona vitticeps) Tincin May Grnwald Giemsa. X 1000.

135

Martnez-Silvestre et al.

En lagartos, serpientes y cocodrilos, se pueden observar

heterfilos degranulados. Este fenmeno puede ser un artefacto del manejo de la muestra, del almacenaje prolongado
en el anticoagulante, de una fijacin inadecuada o bien ser
parte del proceso de envejecimiento in vivo normal de estas clulas.15
Incremento de los heterfilos
-Fisiolgico: Suele ser estacional (valores mximos en verano y ms bajos durante la hibernacin). Tambin se ha
observado una heterofilia como respuesta a la migracin en
la tortuga Caretta caretta.18
-Patolgico: Los heterfilos, son principalmente clulas
fagocitarias y por tanto, incrementos significativos en su
recuento, se asocian con enfermedades inflamatorias, especialmente infecciosas o que supongan un dao tisular. Ello
se ha descrito en la infeccin o inflamacin heptica, renal,
en la inflamacin aguda heptica41 o en la enfermedad renal
aguda.22
Las causas no inflamatorias de la heterofilia tambin son
el estrs (exceso de glucocorticoides) y la presencia de neoplasias. En sangre circulante pueden aparecer heterfilos
anmalos, entre los que se incluyen los heterfilos inmaduros y las clulas txicas. Los primeros (normalmente mielocitos y metamielocitos), aparecen en la sangre de reptiles que
tienen ciertas enfermedades que provocan una utilizacin
perifrica excesiva de los heterfilos maduros. Los heterfilos inmaduros tienen mayor grado de basofilia del citoplasma, el ncleo no lobulado, menor nmero de grnulos
especficos que las clulas maduras y, en ocasiones, grnulos
inmaduros (grnulos primarios). Su presencia en una sangre
con heterofilia es indicativa de una enfermedad inflamatoria. Si la desviacin a la izquierda se presenta junto con una
heterofilia, es indicativa de una sobredemanda ante una
respuesta inflamatoria asociada, probablemente, con una
etiologa infecciosa.
La presencia de heterfilos txicos denota una enfermedad inflamatoria asociada a la presencia de agentes infecciosos (Fig. 6). Dependiendo del grado de toxicidad se clasifican
en una escala del +1 al + 4: +1, indica aumento de basofilia
citoplasmtica; +2, indica, adems, una ligera granulacin
anormal (degranulacin parcial, grnulos con tendencia a

fusionarse o grnulos anmalos) o vacuolizacin; +3, indica

cambios ms graves, como una ligera cariorrexis o cariolisis; finalmente, +4, indica cambios muy marcados tanto en
el ncleo como en el citoplasma. La lobulacin nuclear, en
especies de reptiles que normalmente no la poseen, indica
una inflamacin grave. Esto se observa en tortugas del gnero Testudo.42
Disminucin de los heterfilos
Se ha observado asociada a infeccin viral38 as como tras
la administracin de fenbendazol en la tortuga Testudo hermanni.32
Eosinfilos
Los eosinfilos de los reptiles son clulas grandes
(11-17m), redondas, con grnulos citoplasmticos
esfricos eosinoflicos (Fig. 7). En lagartos se observan
de color magenta oscuro (Fig. 8.). El ncleo tiene una
forma variable, desde redondo a ligeramente elongado;
en algunas especies de reptiles puede ser bilobulado. Su
tamao vara con la especie; y as, las serpientes tienen
los eosinfilos ms grandes; y los lagartos, los ms pequeos.39, 43-47
Por lo que respecta a su nmero, vara con la especie y
los cambios estacionales. En general, los lagartos tienen
pocos eosinfilos circulantes comparado con algunas
especies de tortugas, donde pueden representar hasta
un 20% de los leucocitos.
Incremento de eosinfilos
-Fisiolgico: En algunas especies, el recuento de eosinfilos es normalmente ms elevado durante la hibernacin.35
Adems, tambin es relativamente normal encontrar un valor alto en las tortugas del gnero Trachemys.
-Patolgico: Asociados con infecciones parasitarias y la
estimulacin del sistema inmune.21 En referencia a los parsitos, se ha visto eosinofilia en enfermedad renal causada
por trematodos en serpientes o Hexamita en tortugas.22 En
aligtor, se ha observado un incremento ligado a la presencia de sanguijuelas (Placobdella).48 Sin embargo, la presencia de Hemogregarinas no se ha visto asociada a eosinofilia
tanto en cocodrilidos 48 como en tortugas.49
Disminucin de eosinfilos
Su disminucin se ha relacionado con la estivacin. Adems, se describe eosinopenia como respuesta fisiolgica a la
migracin en la tortuga Caretta caretta.18

Figura 6. Heterfilo con granulacin txica (+ 2) y lobulacin en una tortuga mora (Testudo graeca) afectada con infeccin respiratoria. Tincin May
Grnwald Giemsa. X 1000.

136

Basfilos
La eosinofilia se
Son clulas redondas, pequeas, que contienen un
observa relacionada
nmero variable de gr- tanto a endo como ectoparnulos citoplasmticos mesitos; sin embargo, la presentacromticos basoflicos,
cia de Hemogregarinas no se
que enmascaran con freha visto asociada a eosinocuencia el ncleo (Fig. 9.).
El tamao de estas clulas
filia tanto en cocodrilidos
vara entre las 7 y las 20 m
como en tortugas
y al igual que ocurre con el
resto de granulocitos, vara con

2011, Vol. 31 n3

zii) pueden constituir hasta el 40% de los leucocitos, si bien

la razn de este hecho se desconoce.30,50-52 En la especie de
tortuga acutica Pseudemys ruiventris es el tipo celular predominante en los recuentos leucocitarios.53

Figura 7. Eosinfilo de un galpago de Florida (Trachemys) Tincin May

Grnwald Giemsa. X 1000.

Figura 8. Eosinfilo de una Iguana verde (Iguana iguana). Tincin May

Grnwald Giemsa. X 1000.

Figura 9. Basfilo de un lagarto del gnero Gallotia. Tincin May Grnwald

Giemsa. X 1000.

la especie: los lagartos tienen basfilos pequeos y los quelonios y cocodrilos tienen basfilos ms grandes.
Su funcin es, probablemente, similar a la de los basfilos
de los mamferos. El nmero de estas clulas, normalmente
bajo, vara con la especie. Sin embargo, en algunas especies
de quelonios como la tortuga del desierto (Gopherus agassi-

Incremento de basfilos
-Fisiolgico: Es normal encontrar un valor alto en las tortugas Trachemys o Chelidra serpentina. El nmero de basfilos
en los reptiles no parece variar con los cambios estacionales, como ocurre con otros granulocitos. Sin embargo, se
ha descrito un incremento significativo durante el invierno
en los viperinos africanos (Cerastes cerastes y Cerastes vipera).35
-Patolgico: Se ha visto relacionado con la presencia de
infecciones parasitarias (bsicamente parsitos intestinales y
ocasionalmente hemoparsitos) e infecciones virales.53
Linfocitos
Son clulas redondeadas, con citoplasma escaso, de moderado a dbilmente basoflico y ncleo tambin de morfologa circular y situado centralmente (Figs. 4 y 10). El citoplasma es homogneo y generalmente carece de vacuolas y
grnulos, aunque en algunos linfocitos se pueden encontrar
algunos grnulos citoplasmticos azurfilos con la tincin
May-Grnwald Giemsa. Tienden a amoldarse alrededor
de clulas adyacentes en la extensin de sangre. Pueden
presentar pseudopodia en la periferia celular. Varan en tamao desde pequeo (5 10 m) a grande (15 m).
Su nmero en los vertebrados inferiores tambin vara,
llegando a superar el 80% del recuento diferencial en algunas especies. Muchas especies de reptiles sanas tienen
un recuento mayor de linfocitos que de heterfilos.9
Tambin varan con el sexo (las hembras de algunas especies pueden tener una concentracin de linfocitos significativamente ms grande que los machos de la misma
especie), el estado nutricional (se produce un descenso
asociado a la malnutricin), y la estacin del ao (su nmero disminuye en invierno y es ms elevado en el verano).
Incluso los reptiles tropicales que no hibernan, muestran
un descenso de linfocitos en circulacin durante el invierno.42,44,54-56
Los reptiles tienen los dos tipos principales de linfocitos
(B y T) involucrados en la funcin inmunolgica, pero a
diferencia de los mamferos y pjaros, las respuestas inmunolgicas de los reptiles estn muy influidas por el ambiente; de este modo, las bajas temperaturas pueden suprimir
o inhibir la respuesta inmune.
Incremento de linfocitos
-Fisiolgico: A parte de las variaciones fisiolgicas observadas en funcin del sexo y de la especie, se han observado un
incremento del valor de los linfocitos asociado a una edad
mayor en tortugas marinas de la especie Caretta caretta.29
-Patolgico: Se describe asociado a inflamacin, infecciones parasitarias y vricas y neoplasia como la leucemia, as
como a situaciones de cicatrizacin de heridas.
La presencia de linfocitos reactivos, con un volumen citoplasmtico aumentado y mayor grado de basofilia citoplasmtica, sugiere una estimulacin del sistema inmune por la
presencia de antgenos sistmicos.9,57

137

Martnez-Silvestre et al.

Figura 10. Linfocito de un lagarto del gnero Gallotia. Tincin May Grnwald
Giemsa. X 1000.

Figura 11. Monocito de una iguana verde (Iguana iguana). Tincin May
Grnwald Giemsa. X 1000.

Citolgicamente, la presencia de mitosis, anisocariosis y

anisocitosis est principalmente relacionada con una respuesta inflamatoria o sepsis y no necesariamente con neoplasia linfoproliferativa.58
Disminucin de linfocitos
Se produce de forma secundaria a la presencia de enfermedades asociadas con la inmunosupresin, el estrs y la
malnutricin crnica.9,57,59
Monocitos
Son los leucocitos de mayor tamao que se encuentran
en la sangre perifrica.
La morfologa celular vara desde redonda a ameboide,
y su ncleo es pleomrfico (redondo, oval, lobulado) y
normalmente indentado (Figs. 11 y 12). Su tamao vara
entre 8 y 20 m. El citoplasma de esta clula se tie de
color azul-grisceo y puede contener vacuolas o grnulos eosinoflicos semejantes a partculas de polvo, o bien
azurfilo.
Los monocitos aparecen en pequeo nmero en la sangre de los vertebrados inferiores y suelen representar entre un 0 y un 10% del diferencial leucocitario.60-62
De los reptiles estudiados, la concentracin de monocitos cambia poco con la variacin estacional si se compara
con otras clulas sanguneas.
Incremento de monocitos
-Fisiolgico: Se ha observado un incremento hibernal en
la serpiente Boa constrictor, as como en ejemplares de edad
avanzada en la tortuga marina Caretta caretta.22
-Patolgico: Asociado a enfermedad inflamatoria, como
la estomatitis y nefritis crnica, as como la hepatitis granulomatosa. Con frecuencia, los monocitos en sangre perifrica muestran actividad fagocitaria. La eritro y la leucofagocitosis por parte de estas clulas se puede asociar con
anemia y la presencia de enfermedades infecciosas.9,41
Azurfilos
La identificacin y clasificacin de esta clula ha estado
rodeada de confusin. Se describi por primera vez en la

138

Figura 12. Monocito de un lagarto del genero Lacerta. Tincin May Grnwald
Giemsa. X 1000.

literatura cientfica hace aproximadamente un siglo. Desde entonces se la ha denominado granulocito azuroflico,
granulocito neutrfilo o monocito. Los escasos azurfilos
presentes en quelonios se han denominado tambin neutrfilos o azurfilos neutroflicos.10 Se trata de una clula
de forma irregular, ligeramente ms pequea en tamao
que el monocito.5 El ncleo es no segmentado y de redondo a oval de forma irregular (Fig. 13). El citoplasma es
basoflico y ms oscuro que el del monocito, de color azul
a lavanda. En este citoplasma estn presentes un nmero
pequeo de grnulos azuroflicos mate, de varios tamaos. En el citoplasma de estas clulas puede aparecer vacuolizacin y material fagocitado.
Los monocitos y los azurfilos se han descrito como clulas del mismo tipo segn algunos autores 63 o de distinto tipo segn otros.10,51
Esta clula es ms comn en el suborden de las serpientes que en los lagartos o crocodilianos12,15,47 y tan slo se
ve ocasionalmente en quelonios.10
En el momento actual, hay consenso en que los azurfilos se confirman como poblacin nica en las serpientes. Representan una clula fagoctica similar en
morfologa al monocito, que puede desencadenar un

2011, Vol. 31 n3

dao oxidativio importante, similar al del neutrfilo de

los mamferos.60
Incremento de los azurfilos
-Patolgico: Se ha descrito asociado a inflamacin e
infeccin, as como a parasitismo. En lagartos parasitados con el hemoprotozoo Karyolysus17 y en serpientes
con Hepatozoon60 se ha descrito azurofilia, posiblemente relacionada con la respuesta inflamatoria frente a los
parsitos.

Las trombocitopenias se producen en los reptiles probablemente debidas a una utilizacin perifrica excesiva
de los trombocitos o a un descenso en su produccin.
En ocasiones, pueden aparecer trombocitos anmalos,
con ncleo polimrfico; se cree que su presencia est
asociada a enfermedades inflamatorias graves.

Trombocitos
Los trombocitos son clulas pequeas, elpticas o fusiformes que contienen un ncleo oval y central. El citoplasma
es casi transparente, hecho importante que los diferencia
de los linfocitos pequeos. Normalmente tienden a agregarse, lo que hace ms fcil su identificacin (Fig. 14.). En
algunos de ellos, pueden aparecer mrgenes citoplasmticos poco definidos (Fig. 15) tpicos en serpientes aunque
probablemente sean producto de la edad o tambin artefactos.64
Los trombocitos juegan un papel activo en la formacin
del trombo, la coagulacin sangunea y la cicatrizacin de
las heridas. Se ha sealado su carcter pluripotencial; segn el cual, en condiciones de anemia, pueden adquirir
capacidad de transportar oxgeno, cubriendo la demanda
ocasionada por la prdida eritrocitaria.5 Asimismo, tambin parecen tener capacidad fagocitaria en determinadas
condiciones y ante determinados agentes quimiotcticos.5

Figura 14. Agregado trombocitario en una tortuga mediterrnea (Testudo

hermanni). Tincin May Grnwald Giemsa. X 1000.

Disminucin de trombocitos
-Fisiolgico: Se ha descrito en invierno en la serpiente
Boa constrictor.36

Figura 15. Trombocitos caractersticos de una pitn reticulada (Python reticulatus). Tincin May Grnwald Giemsa. X 1000.

Agradecimientos
Figura 13. Azurfilo de un lagarto del gnero Lacerta. Tincin May Grnwald
Giemsa. X 1000.

Los autores agradecen la ayuda aportada, tanto en la recopilacin bibliogrfica como casustica y fotogrfica a Ignasi Marco, Gonzalo Otero, Joaquim Soler y Lola Cano.

139

Martnez-Silvestre et al.

Summary
Reptiles are a group of animals ever more common in veterinary practice. In these species, many diagnostic tools are in descriptive stages, including
diagnostic blood cytology or hematology. This article analyzes blood cells described in reptiles: erythrocytes, heterophiles, eosinophiles, monocytes,
azurophiles and thrombocytes. It also shows the use of routine hematologic values as packed cell volume, total counts, hemoglobin and red blood cell
indices. For all these values, we discuss its clinical interpretation related to physiological and pathological conditions.

Bibliografa
1. Sykes JM , Klaphake E: Reptile hematology. Vet Clin of North America: Exotic Anim
Pract 2008; 11, 481-500.

21. McArthur SDJ, Wilkinson RJ, Barrows MG: Tortoises and turtles. Manual of Exotic
Pets BSAVA 2001; 4, 208-222.

2. Lawrence K: An introduction to haematology and blood chemistry of the reptilia. En

Towson y Lawrence (Ed): Reptiles: breeding,behaviour and veterinary aspects . London.
British Herpetological Society. 1985, 99-110.

22. Selleri P , Hernandez-Divers SJ: Renal diseases of reptiles. Vet Clin of North America:
Exotic Anim Pract 2006; 9, 161-174.

3. Muro J, Cuenca R, Pastor J, Vias L, Lavn S: Effects of lithium heparin andtripotassium EDTA on hematologic values of Hermanns tortoises (Testudo hermanni). J Zoo
Wildl Med 1998; 29, 40-44.
4. Hanley ChS, Hernandez-Divers SJ, Latimer KS, Bush S: Comparison of dipotassium
EDTA and lithium heparin on hematologic values in the green iguana (Iguana iguana).
Proceedings A R A V 2003; 20, 30.

23. Dutton CJ , Taylor P: A comparison between pre- and post hibernation morphometry, hematology, and blood chemistry in viperid snakes. J Zoo Wildl Med 2003; 34:
53-58.
24. Barry Heath K: Fatal parasitic anemia in a green vine snake. Vet Med /Small Animl
Clinician 1983; July, 1095-1096.
25. Boyer TH: Autoimmune hemnolytic anemia in a parsons chameleon, Calumna
parsonii parsonii. Proceedings A R A V 2002; 9, 81-84.

5. Frye FL: Biomedical and Surgical Aspects of Captive Reptile Husbandry. Malabar,
Florida, Krieger Publishing, 1991; 2 vol.

26. Garner M: Regenerative erythroid response without anemia in Iguanidae: Associated with soft tissue mineralization. Proceedings A R A V 2001; 8, 213-216.

6. Myers DA, Mitchell MA, Fleming G et al: Determining the vallue of bovine albumin
as a blood cell stabilizer for pancake tortoise, Malachochersus tornieri, blood smears. J
Herpet Med Surg 2009; 18: 95-99.

27. Lewbart GA, Lewbart GA, harpe N, Dombrowski D, Stoskopf MK: Preliminary assessment of a visual scoring system for identifying and quantifying anemia in male eastern box turtles (Terrapene carolina carolina). Proceedings A R A V 2008; 15, 66-67.

7. Campbell T: Interpretation of the reptilian blood profile. Exotic Pet Practice 1998;
3, 33-36.

28. Schilliger L, Selleri P, Frye FL: Lymphoblastic lymphoma and leukemic blood profile
in a red-tail boa (Boa constrictor constrictor) with concurrent inclusion body disease. J
Vet Diagn Invest 2011; 23, 159-162.

8. Troiano JC, Vidal JC, Uriarte E et al: Osmotic fragility and erythrocyte size in Iguana
iguana (Sauria- iguanidae) in captivity. J Comp Hem 2000; 22, 14-18.
9. Strik NI, Alleman AR, Harr KE: Circulating inflammatory cells. En: Jacobson ER (ed):
Infectious Diseases and Pathology of Reptiles: Color Atlas and Text, Cabo Raton, Florida, CRC Press, 2007; 167-218.
10. Wilkinson R: Clinical Pathology. En:McArthur S, Wilkinson R, Meyer J (ed): Medicine
and Surgery of Tortoises and Turtles, Iowa, Blackwell Publishing Ltd, 2004; 141-187.
11. Perpian D, Hernandez-Divers SM, McBride M, Hernandez-Divers SJ: Comparison
of three different techniques to produce blood smears from green iguanas, Iguana
iguana. J Herpet Med Surg 2006; 16: 99-101.
12. Raskin RE: Reptile complete blood count. En:Fudge AM (ed): Laboratory medicine:
Avian and exotic pets, Philadelphia, Saunders Company, 2000; 193-197.
13. Lopez-Olvera JR, Montan J, Marco I et al: Effect of venipuncture site on hematologic and serum biochemical parameters in marginated tortoise (Testudo marginata). J
Wild Dis 2003; 30: 830-836.
14. Frye FL: Herpetological haematology. Congreso Nacional de AVEPA 1998; 33, 25.
15. Martnez-Silvestre A. Hematologa y bioqumica sangunea en tres especies de lagartos gigantes de las islas canarias (gnero Gallotia). 1-215. 2011. Facultat de Veterinaria. Tesis Doctoral. Universitat Autonoma de barcelona.

29. Kakizoe Y, Sakaoka K, Kakizoe F et al: Successive changes of hematologic characteristics and plasma chemistry values of juvenile loggerhead turtles (Caretta caretta). J
Zoo Wildl Med 2007; 38: 77-84.
30. Nevarez JG, Mitchell MA, Le Blanc C, Graham P: Determination of plasma biochemistries, ionized calcium, vitamin D3, and hematocrit values in captive green iguanas
(Iguana iguana) from El Salvador. Proceedings A R A V 2002; 9, 87-94.
31. Seidel ME: Hemoglobin variation and comments on systematic relationship in the
turtle family Emydidae. Copeia 2003; 4, 1118-1121.
32. Gelli D, Morgante M, Ferrari V et al: Hematologic, serum biochemical, and serum
electrophoretic patterns in loggerhead sea turtles (Caretta caretta). Proceedings A R A
V 2004; 11, 149-152.
33. Maginniss LA, Tapper SS, Miller LS: Effect of chronic cold and submergence on blood
oxygen transport in the turtle, Chrysemys picta. Respir Physiol 1983; 53: 15-29.
34. Maginniss LA, Ekelund SA, Ultsch GR: Blood oxygen transport in common map
turtles during simulated hibernation. Physiol Biochem Zool 2004; 77: 232-241.
35. Al-Badry KS , Nuzhy S: Hematological and biochemical parameters in active and
hibernating sand vipers. Comp Biochem Physiol 1983; 74 A: 137-141.

16. Clark P, Johnstone AC, Ellison R, Goold M: Inclusions in the erythrocytes of eastern
water dragons (Physignathus lesuerii). Aust Vet J 2001; 79, 61-62.

36. Machado C, Silva LFN, Ramos PRR, Takahira R: Seasonal influence on hematologic
values and haemoglobin electrophoresis in brazilian Boa constrictor amarali. J Zoo Wildl Med 2006; 37: 487-491.

17. Martnez-Silvestre A, Mateo JA, Silveira LS, Bannert B: Presencia de protozoos intraeritrocitarios en el lagarto gigante de La Gomera (Gallotia simonyi gomerana). Bol
Asoc Herpetol Esp 2001; 12, 90-92.

37. Neiffer DL, Lydick D, Burks K, Doherty D: Hematologic and plasma biochemical
changes associated with fenbendazole administration in hermanns tortoises (Testudo
hermanni). J Zoo Wildl Med 2005; 36: 661-672.

18. Stamper MA, Harms CA, Epperly SP et al: Relationship between barnacle epibiotic
load and hematologic parameters in loggerhead sea turtles (Caretta caretta), a comparison between migratory and residential animals in Pamlico Sound, North Carolina.
J Zoo Wildl Med 2005; 36: 635-641.

38. Alleman AR, Jacobson ER, Raskin RE: Morphologic and cytochemical charachteristics of blood cells from the desert tortoise (Gopherus agassizii). Am J Vet Research
1992; 53, 1645-1651.

19. Pags T, Peinado VI, Viscor G: seasonal changes in hematology and blood chemistry of the fresh water turtle Mauremys caspica leprosa. Comp Biochem Physiol 1992;
103 A: 275-278.
20. Frair W: Sea turtle red blood cells parameters correlated with carapace lenghts.
Comp Biochem Physiol 1977; 56 A, 467-472.

140

39. LeBlanc CJ, Heatley JJ, Mack EB: A review of the morphology of lizard leukocytes
with a discussion of the clinical differentiation of bearded dragon, Pogona vitticeps,
leukocytes. J Herpet Med Surg 2000; 10(2), 27-30.
40. Pace J , Mader DR: A comparison of the morphological differences in the reptilian
heterophil. Proceedings A R A V 2002; 9, 113-114.

2011, Vol. 31 n3

41. Simpson M: Hepatic Lipidosis in a Black-Headed Python (Aspidites melanocephalus). Vet Clin of North America: Exotic Anim Pract 2006; 9, 589-598.
42. Kassab A, Shousha S, Fargani A: Morphology of Blood Cells, Liver and Spleen of
the Desert Tortoise (Testudo graeca). The open anatomy Journal 2009; 1, 1-10.

53. Innis ChJ, Tlusty M, Wunn D: Hematologic and plasma biochemical analysis ofjuvenile head-started northern red-bellied cooters (Pseudemys rubriventris). J Zoo Wildl
Med 2007; 38: 425-432.

43. McArthur S: Emerging viral-associated diseases of chelonians in the united kngdom.

Proceedings A R A V 2001; 8, 103-115.

54. Dickinson VM, Jarchow J, Trueblood MH: Hematology and plasma biochemistry
reference range values for free-ranging desert tortoises in Arizona. J Wild Dis 2002;
38, 143-153.

44. Alleman AR, Jacobson ER, Raskin RE: Morphologic, cytochemical staining, and ultrastructural charachteristics of blood cells from eastern diamonmdback rattlesnakes
(Crotalus adamanteus). Am J Vet Research 1999; 60, 507-513.

55. Lamirande EW, Bratthauer AD, Fischer DC, Nichols DK: Reference hematologic
and plasma chemistry values of brown tree snakes (Boiga irregularis). J Zoo Wildl Med
1999; 30, 516-520.

45. Casal AB , Ors J: Morphologic and cytochemical characteristics of blood cells of

juvenile loggerhead sea turtles (Caretta caretta). Research in Vet Science 2007; 82,
158-165.

56. LeBlanc CJ: Clinical differentiation of chinese water dragon, Physignatus spp. Leukocytes. J Herpet Med Surg 2001; 11(3), 31-33.

46. Martnez-Silvestre A, Lavn S, Marco I et al: Hematology and plasma chemistry

of captive Testudo marginata. Proceedings of the International Congress on Testudo
Genus 2001; 3, 187-189.
47. Martnez-Silvestre A, Marco I, Rodriguez-Dominguez MA, Lavn S, Cuenca R: Morphology, cytochemical staining, and ultrastructural charachteristics of the blood cells
of the giant lizardf of El Hierro (Gallotia simonyi). Research in Vet Science 2005; 78,
127-134.

57. Silverstone AM, Garner M, Wojcieszyn JW, Guillermo Couto C, Raskin RE: Acute
lymphoblastic leukemia in a diamondback terrapin, Malaclemys terrapin. J Herpet Med
Surg 2007; 17: 92-99.
58. Origgi FC: Reptile immunology. En:Jacobson ER (ed): Infectious Diseases and Pathology of Reptiles: Color Atlas and Text, Florida, CRCPress, 2007; 131-167.
59. Jacobson ER, Gaskin JM, Brown C et al: Chronic upper respiratory tract disease of
free-ranging desert tortoises (Xerobates agassizi). J Wild Dis 1991; 27: 296-316.

48. Glassman A, Holbrok TW, Bennett CE: Correlation of leech infestation and eosinophilia in Alligators. J Parasitol 1979; 65: 323-324.

60. Salakij Ch, Salakij J, Apibal S et al: Hematology, morphology, cytochemical staining,
and ultrastructural charachteristics of blood cells in King cobras (Ophiophagus hannah). Vet Clin Path 2002; 31, 116-126.

49. Lawrence K , Hawkey CM: Haemogregarine infection in long term captive Mediterranean tortoises. Vet Rec 1985; 117, 129-130.

61. Tucunduva M, Borelli P, Silva JRMC: Experimental study of induced inflammation in

the brazilian boa (Boa constrictor constrictor). J Comp Path 2001; 125, 174-181.

50. Christopher MM, Berry KH, Wallis IR et al: Reference intervals and physiologic alterations in hematologic and biochemical values of free-ranging desert tortoises in the
mojave desert. J Wild Dis 1999; 35, 212-238.

62. Watson J: Diagnostic procedures: Hematology. En:Ackerman L (ed): The biology,

husbandry, and health care of reptiles., New Jersey, TFH, 1998; 703-713.

51. Ellman MM: Hematology and plasma chemistry of the inland Bearded Dragon,
Pogona vitticeps. Bulletin of the Assotiation of Reptilian and Amphibian Veterinarians
1997; 7, 10-12.
52. Fisse A, Draud M, Raphael B, Melkonian K: Differential leukocyte counts of critically
endangered grand cayman blue iguanas, Cyclura nubila lewisi. J Herpet Med Surg
2004; 14: 19-21.

63. Alleman R, Jacobson ER, Raskin RE: Morphologic, cytochemical staining, and ultrastructural charachteristics of blood cells fran eastern diamondback rattlesnakes (Crotalus adamanteus). Am J Vet Res 1999; 60, 507-514.
64. Knotkova Z, Doubek J, Knotek Z, Hjkova P: Blood cell morphology and plasma
biochemistry in russian tortoises (Agrionemys horsfieldii). Acta Vet BRNO 2002; 71,
191-198.

141