1

Conteni dos






Recomendaciones generales

Elementos habituales en un laboratorio de qumica orgnica

Reaccin de neutralizacin (titulacin)

Soluciones reguladoras (sistemas Buffer)

Reacciones de caracterizacin de aldehdos y cetonas

Reacciones de hidratos de carbono

Extraccin cido-base

Cromatografa

Hidrlisis de lecitina y reconocimiento de sus componentes

Aislamiento de las protenas de la leche

Cuestionarios


2
CONDICIONES GENERALES DE SEGURIDAD


- Es obligatorio el uso de GUARDAPOLVO, como barrera de proteccin
ya que por mucho cuidado que se tenga al trabajar, las salpicaduras de
productos qumicos o biolgicos son inevitables.

- El guardapolvo ser preferentemente de algodn, material
ms resistente a los cidos, lcalis y al fuego (otros tejidos pueden
adherirse a la piel en caso de incendio, aumentando el dao) y tener
broches en lugar de botones (para que en caso de accidente sea ms
fcil despojarse del mismo), de manga larga, tener los puos
ajustados a las muecas y usarse completamente abrochados.

- Los guardapolvos se usaran solamente en el laboratorio y mientras se
ejecuta la tarea. No pueden llevarse fuera del laboratorio a otras reas
como oficinas, sanitarios, comedor, etc.

- No utilizar ninguna vestimenta por encima del guardapolvo.

- No es aconsejable llevar minifalda o pantalones cortos que dejan
desprotegida una parte de las piernas, ni tampoco medias tipo
cancn, (las fibras sintticas en contacto con determinados productos
qumicos se adhieren a la piel).

- Es obligatorio el uso de zapatos cerrados. No se debe utilizar
sandalias, ojotas u otros zapatos abiertos, como as tampoco zapatos
de taco cuando se trabaja con animales.

- En caso de tener el pelo largo, deber llevarlo sujeto, de tal modo que
no quede expuesto en el rea de trabajo.

- Utilizar guantes en todas aquellas tareas que lo requieran. Seleccionar
el tipo de guante correcto, segn la sustancia a manipular o el tipo de
tarea a realizar.

- Utilizar anteojos de seguridad en todas aquellas tareas que lo requieran

- No deber trabajar con accesorios como pulseras, colgantes,
collares, que puedan enganchar y volcar materiales.

- No comer ni beber.

- No llevar las manos a la boca u ojos cuando haya estado
manipulando productos qumicos o biolgicos.




3

- No inhalar, probar u oler, productos qumicos. Nunca acercar la nariz
para inhalar directamente sobre un producto qumico.

- No guardar alimentos en los armarios o heladeras del laboratorio.

- Por razones higinicas y de seguridad, est prohibido fumar en el
laboratorio

Recomendaciones


El laboratorio es un lugar de trabajo: deben tenerse en cuenta ciertas
pautas de conducta para que las tareas que se realizan se desarrollen dentro
de un marco de seguridad.


Cmo trabaj ar para obtener buenos resul tados

Orden en la mesada de trabajo

Durante el trabajo se debe mantener la mesada limpia y seca. Slo deben estar
presentes los elementos necesarios para la prctica, guardando en el cajn
todo aquello que no se ha de utilizar.
No deben colocarse sobre la mesa de trabajo ropas ni tampoco libros o papeles
que no sean imprescindibles.
Los elementos de trabajo deben guardarse limpios.

Manejo de sustancias qumicas

Se debe poner atencin en el manejo de sustancias qumicas, pues stas
pueden ser de carcter irritante, corrosivo, txico, etc. Se deben usar las
cantidades de reactivos indicados en la gua.
Se debe tapar el reactivo inmediatamente despus de ser usado y cuidar que
sea con su tapn correspondiente. Antes de tomar los frascos con reactivos se
debe observar que stos estn limpios y secos. No daar las etiquetas, pues si
la lectura fuera confusa podra inducir al uso indebido de una sustancia con
accidentes de graves consecuencias (explosiones, mezclas txicas, etc.).

Trabajo con atencin

Se debe concurrir al laboratorio con guardapolvo y habiendo ledo la gua
del trabajo prctico a efectuar y sus fundamentos tericos.
Se debe poner atencin en el trabajo para la propia seguridad; se debe trabajar
en calma, evitando movimientos bruscos.
Se recomienda hablar slo lo necesario y en voz baja. No correr. No distraer a
los compaeros. Nunca se debe fumar, comer o beber durante el trabajo. Se
4
debe evitar llevarse las manos a la cara, a los ojos, etc., ya que pudo haber
tocado sustancias irritantes o txicas sin que lo hubiere notado.

Indumentaria protectora

El uso del guardapolvo es una buena medida de proteccin para evitar la
accin directa de productos sobre la piel o la ropa.


Se recomienda:

1) usar calzado cerrado para evitar el efecto de posibles salpicaduras de los
productos usados.
2) mantener el cabello recogido puede evitar accidentes.

Pinzas de madera

Para el manipuleo de tubos de ensayos se utilizan pinzas de madera. Cuando
se calienta un tubo de ensayos debe orientarse la boca del mismo previendo la
posibilidad de que se produzcan proyecciones (evitar dirigirlo hacia personas
cercanas).

Color de las caeras

Para evitar confusiones hay una norma general de aplicacin en laboratorios;
las caeras estn pintadas de distintos colores para distinguirlas segn de que
se trate:

* amarillo = gas
* rojo = vaco
* verde = agua


Elementos de seguridad

En ciertos casos, especialmente cuando se manipulan sustancias altamente
irritantes, voltiles y txicas es conveniente utilizar elementos de seguridad.

Proteccin ocular

Existen antiparras especiales para proteccin ocular cuyo uso es
recomendable.

Proteccin respiratoria

Hay mscaras de distintos tipos con diferente grado de filtracin segn las
sustancias qumicas empleadas.

5
Proteccin bucal

NO SE DEBE PIPETEAR CON LA BOCA sino utilizando pera de goma u otros
dispositivos.

Guantes protectores

Es apropiado el uso de guantes para proteger las manos. Hay distintos tipos segn
la finalidad del uso: proteccin de la accin del calor, proteccin del efecto de las
sustancias qumicas, etc..



Recomendaci ones fi nal es

Antes de retirarse del laboratorio se proceder a la limpieza con detergente y
escobilla del material de vidrio empleado en el trabajo prctico y luego se lo
colocar en su lugar o sobre la mesa de trabajo, segn se indique.
Lavarse las manos antes de retirarse del laboratorio.
Lea cuidadosamente las recomendaciones especiales de cada trabajo prctico.

En caso de accidente avi sar i nmedi atamente al docente.








6
Elementos habituales en un laboratorio de
qumica orgnica


Materiales de laboratorio


Elementos de uso corriente

Pipetas
Hay de dos tipos: graduadas y aforadas.
Pipetas graduadas: hay de distinta capacidad y graduacin. Ej.: 1ml, 2 ml, 5
ml, 10 ml, 20 ml, 25 ml, etc. de capacidad y graduadas al 1/10, 1/100.
Pipetas aforadas: son tubos que presentan 1 ensanchamiento en su parte
central. El volumen total est marcado por una lnea, en cuyo caso se llama
pipeta de simple aforo o por dos lneas, en cuyo caso se llama de doble
aforo. Hay de distintas capacidades: 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 25, 50 y 100 ml.
Se diferencian de las graduadas porque poseen escurrimiento ms lento y son
ms exactas.

Probetas
Hay probetas graduadas y sin graduar.
Probetas graduadas: pueden ser con pico y sin tapa o sin pico y con tapa,
que puede ser de plstico o de vidrio. Poseen pi, que puede ser de plstico o
de vidrio. Hay de distintas capacidades: 5, 10, 25, 50, 100, 200, 250, 500,
1000, 2000 ml.
Probetas sin graduar: se usan para densimetra.

Buretas
Son tubos largos graduados, provistos en el extremo inferior de una llave (robinete)
que permite la fcil descarga de lquidos. Estn graduadas.
Hay de distintas capacidades y distinta graduacin.
Existen de distintas formas de llenado, con cero automtico (queda enrasada
automticamente), con tubo acodado, con frasco de depsito de la sustancia a
usarse.

Matraz aforado
Son recipientes en forma de pera con cuello largo, con una lnea fina en el cuello
que marca el aforo. Presentan tapn, que puede ser de plstico o de vidrio. Se
utilizan cuando se preparan soluciones: despus de disuelta la sustancia en un
volumen aproximado de lquido, se coloca en el matraz (si estuviera caliente se
espera a que est fra) y luego se lleva a volumen exacto hasta el enrase con agua
destilada.

Balones-Matraces
Hay balones y matraces, sin graduar, con cuello esmerilado (sin tapa) que forman
parte de equipos.
7

Erlenmeyer
Son recipientes cnicos con o sin tapa. Pueden tener tapa de plstico o de vidrio.
Son usados comnmente en titulaciones.

Refri gerante
Son tubos encamisados que se usan para condensar vapores. Son de distinta
longitud y de distinto diseo. Por ej.: de tubo recto (Liebig).

Vasos de precipitados
Son recipientes cilndricos con pico; de distinta capacidad: 20, 50, 100, 250, 500,
1000, 2000, 4000 ml, etc..

Embudo
Se presentan con vstago corto y largo (filtracin rpida) de distinta capacidad.
Se emplean como soporte de papel de filtro.

Tubo de ensayos
Son de distinta capacidad, sin tapa, con tapa, graduados, aforados, etc..

Mecheros
Hay distintos tipos de mecheros y se diferencian en diseo y capacidad de entregar
calor, llegando a alcanzar distintas temperaturas (700C, 1000C, etc.).

Tel as metlicas
Son enrejados que se usan para proteger el material de vidrio de un
calentamiento excesivo distribuyendo uniformemente el calor.


Ampol la de decantacin
La ampolla de decantacin se utiliza para separar distintas fases, pueden tener
diferentes formas, desde esfricas hasta elongadas en forma de pera. Tienen
un robinete en la parte inferior por donde drena el contenido del vstago.

8
Reaccin de neutralizacin

Titulacin


Fundamentos tericos

Cuanti fi cacin volumtrica

Unos de los procedimientos mas usados para la determinacin de la
concentracin de una especie qumica en solucin es la titulacin o
valoracin.
Estos mtodos estn basados en reacciones qumicas entre la sustancia que
se va a dosar (analito) y otra sustancia de concentracin conocida (titulante), la
cual cumple la funcin de estndar.
Para que una reaccin qumica pueda ser utilizada en un mtodo analtico,
debe cumplir una serie de requisitos, entre los que se encuentran los
siguientes:
- la reaccin entre el analito y el titulante se debe producir en una
proporcin bien definida, es decir que la estequiometra de la misma
debe estar exactamente establecida.
- La reaccin debe ser completa, es decir que el equilibrio qumico debe
estar completamente desplazado hacia los productos.
- Debe ser tal que permita establecer exactamente la cantidad de titulante
necesaria para reaccionar completamente con el analito.
Generalmente la determinacin se hace mediante la medicin de algn
volumen por ello, stos mtodos forman parte del anlisis volumtrico.

Titul aci n

Es una tcnica cuantitativa que consiste en agregar volmenes bien medidos
de un reactivo adecuado y de concentracin conocida (llamada solucin
valorada) a la muestra problema, cuya concentracin se quiere determinar.
Si la titulacin se basa en una reaccin de neutralizacin, se trata de una
titulacin cido base
Usualmente, en una titulacin se agrega con una bureta una solucin valorada
hasta que la cantidad total agregada es equivalente (segn la estequiometra
de la reaccin) a la de la sustancia que se investiga. Este punto se llama punto
de equivalencia.

Indicador

Es un reactivo que se coloca en el sistema a valorar, tiene la funcin de
producir algn cambio observable en la solucin (color, aparicin de
precipitado, etc), en las cercanas del punto de equivalencia. El punto en el cual
se produce dicho cambio, se denomina punto final de la titulacin. El punto
final no coincide, necesariamente, con el punto de equivalencia, este ltimo es
el punto final terico. A la diferencia porcentual entre el volumen del punto final
9
y el volumen del punto equivalente, se la conoce como error de titulacin. Este
es el error mnimo que se comete en una volumetra, ya que adems existen
siempre los errores aleatorios propios de cualquier proceso de medicin.

Peso equivalente

El peso equivalente, el equivalente gramo, o el equivalente de una
sustancia, es el peso en gramos de la sustancia que cede un tomo gramo de
in hidronio, u in hidroxilo en el caso el caso de reacciones de cido base.
Ejemplo:
En las titulaciones cido base siempre es sencilla la deduccin del peso
equivalente
En las titulaciones de cidos monoprticos un equivalente es igual a un mol de
acuerdo con la reaccin:

H
3
O
+
+Cl
-
+Na
+
+

HO
-
---------- Na
+
+Cl
-
+H
2
O


Es decir en el caso del cido HCl el peso equivalente (Peq) =Mr del HCl
as Mr =36,5.g/Mol =36,5g/Equiv. =Peq

En el caso del cido sulfrico el peso equivalente es igual =Mr /2 =98g/Mol/2
as Peq =49g/Equiv. de acuerdo con la reaccin:

2 H
3
O
+
+SO
4
-2
+2 Na
+
+

2

HO
-
---------- 2 Na
+
+SO
4
-2
+H
2
O

Es decir que una masa de 36,5 g de HCl contiene los mismos equivalentes
cido-Base que una masa de 49g de cido sulfrico.

Normali dad y ecuaci n de titulaci n

Es una forma de expresar la concentracin de una solucin y se la define como
el nmero de equivalentes por litro de solucin. El nmero de equivalentes se
calcula dividiendo la masa de sustancia disuelta por el peso equivalente de la
misma (neq=Masa/Peq).
Cuando se llega al punto de equivalencia los equivalentes de cido y base son
iguales y se cumple que

Va Na =Vb Nb.

Titul aci n cido-base

1.-cido fuerte con base fuerte

Como los cidos y bases fuertes estn totalmente ionizados, es muy simple
calcular la variacin de la concentracin de ion hidrgeno, y el pH durante el
curso de la neutralizacin.
Si se comienza con 100 ml de cido clorhdrico 1 N y agregamos 90 ml de
hidrxido de sodio:
[H
+
]=5,3 x 10
-2
N pH =1,3
10
Cuando se hayan agregado 100 ml de NaOH 1 N se alcanzar el punto de
equivalencia.

Con 101 ml de NaOH 1 N , habr 1 ml de base en exceso en un volumen de
201 ml. Por lo tanto:

[OH
-
]=5 x 10
-3
N ; [H
+
]=10
-14
/5 x 10
-3

[H
+
]=2 x 10
-12
M

pH=11,7

En la siguiente tabla se analizan las variaciones de pH durante la titulacin de
HCl con NaOH para diferentes concentraciones de cido y base agregados . Se
parten de100ml de cido fuerte (HCl 1N, 0,1N y 0,01N) respectivamente. Se
calculan los pH despus de agregados sucesivos de hidrxido de sodio de
concentracin igual a la del cido.

Solucin 1 N Solucin
0,1N
Solucin 0,01N Vol NaOH
Agregado (ml)
[H+] pH pH pH
0 1.0 0 1.0 2.0
50 3,3.10
-1
0.5 1.5 2.5
90 5.10
-2
1.3 2.3 3.3
98 1.10
-2
2.0 3.0 4.0
99 5.10
-3
2.3 3.3 4.3
99.8 1.10
-3
3.0 4.0 5.0
99.9 5. 10
-4
3.3 4.3 5.3
100.0 10
-7
7.0 7.0 7.0
100.1 2.10
-11
10.7 9.7 8.7
100.2 1.10
-11
11.0 10.0 9.0
101 2.10
-12
11.7 10.7 9.7
102 1.10
-12
12.0 11.0 10.0
110 2.10
-13
12.7 11.7 10.7

Titulacin de HCl 0,1N con NaOH 0,1N

Cuando se titulan cidos y bases ms diluidos, los cambios de pH cerca del punto
de equivalencia son menos abruptos. Por ejemplo, despus de agregar 98 ml de
NaOH 0,1N a 100 ml de HCl 0,1N el pH es igual a 3. Por agregado posterior de
NaOH, la solucin comienza a cambiar de color por el efecto que produce la
variacin de color del indicador segn la acidez del medio. Despus de haber
agregado 99.8ml de NaOH, el pH es 4. A esta altura estamos a 0.2 ml del punto de
equivalencia.

11
Titulacin de HCl con Na OH
0
2
4
6
8
10
12
14
0 20 40 60 80 100 120
Vol de NaOH agreg(ml)
pH
HCl 1 N con NaOH 1 N



Titulacin de HCl 0,01N con NaOH 0,01N

Para esta titulacin debe usarse un indicador diferente al del caso anterior,
pues con el anaranjado de metilo no se observa un cambio de color ntido.
En este caso, despus de agregar 90 ml de NaOH, el pH es 3,3. Con igual
criterio, despus de agregar 99,8 ml de NaOH, el pH ser 5.

2.-Titulacin de Carbonato con HCl

En el organismo es frecuente encontrar mezclas de CO
3
2-
y HCO
3
-
.
Si se titula una cantidad determinada de CO
3
2-
con HCl se observar, en primer
lugar, que cada mol de CO
3
2-
reacciona con un mol de H
+
(provenientes del
HCl) para dar un mol de HCO
3
-
segn:
CO
3
2-
+H
+
HCO
3
-


El HCO
3
-
producido a su vez se neutralizar con un segundo mol de HCl segn:
HCO
3
-
+H
+
CO
2
+H
2
O

Se deduce que el volumen de HCl necesario para convertir el CO
3
2-
en HCO
3
-

ser el mismo que para neutralizar el HCO
3
-
a CO
2
y H
2
O, pues en cada
reaccin intervino un equivalente. Al agregar el cido, el CO
3
2-
se convierte en
HCO
3
-
y la fenolftalena produce el cambio de color de la solucin. El mismo
volumen de HCl utilizado para la conversin de CO
3
2-
a HCO
3
-
, se requerir
para convertir este HCO
3
-
, (formado a partir del CO
3
2-
) en Cl
-
, H
2
O y CO
2
. En
este ltimo caso, se utilizar naranja de metilo como indicador, que favorecer
la observacin ntida del punto de equivalencia. Como se trata de especies
provenientes de cidos dbiles ( para el cido carbnico Ka
1
=3,3 x 10
-7
y la
Ka
2
=5 x 10
-11
) el primer punto de equivalencia se encontrar a pH>7 y el
segundo punto de equivalencia a pH <7.




12
Trabaj o Experimental

Titul aci n de una soluci n de HCl a partir de una sol ucin val orada
de NaOH

Material es

Agarradera para bureta Agua destilada
Bureta Fenolftalena
Pipetas aforadas de 50 mL Solucin de NaOH 0,5 N
Probetas de 100 mL Solucin de HCl
Erlenmeyer de 250 mL Solucin de H
2
SO
4

Soporte universal

Caractersticas del ci do cl orhdrico:

Cuando el cido est concentrado es una solucin acuosa que contiene no
menos del 35% p/p de Cloruro de Hidrgeno, es un lquido incoloro fumante,
con olor irritante.
Advertencia: es corrosivo, muy irritante para el sistema respiratorio.
En el trabajo prctico se lo utiliza en una dilucin que es la queremos
determinar.

Caractersticas del Hi drxido de sodio:

El hidrxido de sodio puro es un slido blanco muy higroscpico, custico, que
puede daar seriamente la vista y se debe evitar el contacto con la piel.
Muchas calidades analticas de este reactivo contienen pequeas cantidades
de agua y de carbonatos, por lo tanto no se puede preparar una solucin
patrn disolviendo una cantidad de hidrxido de sodio en agua, sino que es
necesario valorarla contra una droga patrn. La solucin que manejamos en el
trabajo prctico ha sido valorada previamente con Ftalato de Potasio (Patrn
primario).

Caractersticas de la soluci n de fenolftal ena:

Es un cido orgnico , cuya forma disociada tiene un color diferente al de la
forma no disociada. Para cada indicador existe un mbito de pH en el cual se
produce el cambio de color, y se lo llama intervalo de viraje. En el caso de la
fenolftalena el intervalo es ( 8-9,8 ).A pH menor a 8 es incolora y a ese pH
comienza a tomar color prpura .

Procedimiento

Se coloca en un erlenmeyer de 250 ml, 50 ml de solucin de HCl y se le
agregan 100 ml de agua destilada. Se colocan en el erlenmeyer dos gotas de
solucin de fenolftalena usada como indicador.
13
En una bureta se coloca la solucin de NaOH 0,5 N (previamente valorada)
enrasando a cero .Se descarga el lquido contenido en la bureta gota a gota y
agitando continuamente. Cuando se produce el cambio de color (incoloro a
rosado) se ha llegado al punto final y se procede a anotar el volumen de NaOH.



Aplicando la formula :
Na : normalidad del cido
Nb: normalidad de la base.
Va Na =Vb Nb Vb: volumen de la base .
Va: volumen del cido


- Calcule la Normalidad del cido.

- Lavar bien la bureta


INFORME N

REACCIN DE NEUTRALIZACIN

APELLIDO Y NOMBRE......................................................................................

FECHA ..............................

TURNO.............................. J EFE:..........................................


1 - Objetivo del Trabajo Prctico


2 - Reaccin de neutralizacin


3 - Esquema del equipo utilizado


4 - Volumen de NaOH utilizado

Normalidad de la solucin de NaOH

Volumen de solucin de cido

Clculos:

Normalidad de la solucin de cido
14
Soluciones reguladoras
(Sistemas buffer)


Las soluciones reguladoras poseen la propiedad de oponerse a los cambios de
pH cuando a ellas se agregan pequeas cantidades de cidos o bases.
Las soluciones reguladoras usadas frecuentemente estn constituidas por un
cido dbil y una sal formada por el mismo cido dbil con una base fuerte (por
ejemplo: solucin de cido actico - acetato de sodio); o por una base dbil y
una sal formada por la misma base dbil y un cido fuerte (por ejemplo:
solucin acuosa de amonaco - cloruro de amonio).

Sistemas buffer en l os organismos animal es

Los organismos animales necesitan mantener el pH de su medio interno dentro
de un estrecho rango para que se puedan llevar a cabo las funciones vitales.
Para ello existen en el organismo sistemas buffer que, conjuntamente con el
normal funcionamiento de los sistemas respiratorio, renal y circulatorio impiden
grandes variaciones de pH que son incompatibles con la vida. Por ejemplo, en
el hombre el rango normal del pH de la sangre se encuentra entre 7.38 y 7.42.
Por debajo o por encima de estos niveles el organismo presenta acidosis o
alcalosis respectivamente.
En otras especies el rango normal es el siguiente:
caballo: 7,20 - 7,55
vaca: 7,35 - 7.50
perro: 7,32 - 7.48

Los principales sistemas buffer del organismo son:

- dixido de carbono acuoso - bicarbonato (CO
2
(aq) /HCO
-
3
)
- hemoglobina (HHb / Hb
-
)
- oxihemoglobina (HHbO /HbO
-
)
- fosfato monocido - fosfato dicido ( HPO
4
2-
/H
2
PO
4
-
)
- protenas (HPr/Pr
-
)

Estos sistemas se encuentran distribuidos en los fluidos intra y extracelulares.
El principal amortiguador en el plasma y en los fluidos intersticiales de los
vertebrados es el sistema dixido de carbono acuoso - bicarbonato, mientras
que en los glbulos rojos es el sistema de la hemoglobina.

Para comprender mejor la accin reguladora, tomemos como ejemplo el
sistema dixido de carbono acuoso - bicarbonato. Su accin se representa
mediante las siguientes reacciones de equilibrio:
CO
2
+ 2H
2
O HCO
3
-
+H
3
O
+

15
En el caso de una disminucin del valor del pH (acidosis), debida a un aumento
de la concentracin de iones hidronio, el equilibrio representado mediante la
ecuacin se desplaza hacia la izquierda, de acuerdo con el principio de Le
Chatelier. Como consecuencia de ello aumenta la concentracin del dixido de
carbono en el fluido. Esto produce un aumento de la velocidad de eliminacin
de CO
2
a nivel pulmonar.
En el caso de un aumento en el valor del pH (alcalosis) se produce una
disminucin de la concentracin de iones hidronio. El equilibrio representado
mediante la ecuacin se desplaza hacia la derecha, a fin de mantener la normal
concentracin de iones hidronio. Por consiguiente la concentracin de CO
2

disminuye. Como consecuencia disminuye tambin la velocidad de eliminacin
de CO
2
a nivel pulmonar.
La sangre es un tejido formado por sustancia intercelular lquida llamada
plasma y clulas sanguneas. En el caso particular de la sangre la sustancia
intercelular es lquida y se llama plasma.
El plasma est formado por agua, gases disueltos, sales disueltas y protenas
plasmticas: albminas, globulinas y fibringeno. Para obtener plasma se debe
someter a la sangre a centrifugacin utilizando un anticoagulante.
Las clulas sanguneas son eritrocitos o glbulos rojos, leucocitos o glbulos
blancos y restos celulares llamados plaquetas.
El suero sanguneo est formado por todos los componentes de la sangre
excepto las clulas y el fibringeno. Esta protena se convierte en fibrina, la
cual forma parte del cogulo sanguneo. Para obtener suero se debe colocar la
sangre en un tubo y esperar a que coagule, se retraiga el cogulo y luego se
pueda separar el suero.

Medici n del pH
La medicin del pH puede realizarse mediante mtodos colorimtricos (empleo
de indicadores); pero se logra mayor exactitud mediante el empleo de mtodos
potenciomtricos. Para medir el pH por este ltimo mtodo se utiliza un aparato
llamado peachmetro que consta bsicamente de un sistema de medicin de
tensiones, conectado a dos electrodos, uno de ellos llamado electrodo de vidrio
y el otro electrodo de referencia o de calomel (Hg
2
Cl
2
). Ambos electrodos
pueden hallarse montados en un mismo dispositivo, llamado electrodo
combinado. Al sumergir el electrodo combinado en la solucin cuyo pH se
desea medir se genera entre los dos electrodos (el de vidrio y el de referencia)
una diferencia de potencial que es directamente proporcional al pH de la
solucin. Esta diferencia de potencial se mide mediante un voltmetro, calibrado
en unidades de pH.
Cuando el peachmetro no se halla en funcionamiento, es necesario tener la
precaucin de mantener el electrodo sumergido en una solucin apropiada,
segn las caractersticas del mismo.

T Tr ra ab ba aj j o o e ex xp pe er ri i m me en nt t a al l

Capaci dad reguladora del suero y de la orina


16
Material es

agua destilada HCl 0,1 M
electrodo combinado NaOH 0,1 M
peachmetro solucin buffer de pH 7
pipetas suero
piseta orina
vasos de precipitados 10 cm
3




Procedimiento

1. Aj uste del peachmetro
- Se enciende el peachmetro y se ajusta la temperatura de trabajo del aparato
a la temperatura de la solucin (en este caso, temperatura ambiente), mediante
el empleo de la perilla correspondiente.
- Se retira el electrodo de la solucin en la que est sumergido, se lo lava con
agua destilada, empleando para ello la pipeta y se lo seca con papel de filtro.
- Para ajustar el peachmetro, se sumerge el electrodo combinado en una
solucin buffer de pH 7 y se ajusta mediante el control correspondiente hasta
que la lectura en la escala coincida con el pH del buffer.
- Se retira el electrodo de la solucin, se lo lava nuevamente con agua
destilada, se seca y se lo sumerge en la solucin standard, quedando el
peachmetro en condiciones de trabajo.

2. Determinaci n de l a vari aci n del pH del agua desti lada por
agregado de ci do o base
- Se colocan 12 cm
3
de agua destilada en un vaso de precipitados de 25 cm
3
y
se determina el pH de la misma.
- Se toman dos alcuotas de agua destilada del vaso anterior, de 5 cm
3
cada
una y se colocan en sendos vasos de 10 cm
3
.

- A una de las alcuotas se le agregan 0,3 cm
3
de HCl 0,1 M.

- Se homogeneiza por agitacin y se determina el pH de la solucin resultante.

- Se lava el electrodo con agua destilada y se seca.

- A la otra alcuota se le agregan 0,3 cm
3
de NaOH 0,1 M

- Se homogeneiza por agitacin y se determina el pH de la solucin resultan

- Se lava el electrodo con agua destilada, se seca y se sumerge en la solucin
standard.
17

3. Determi naci n de la capaci dad regul adora de la ori na
- Se repite idntica secuencia de operaciones que en el punto 2 reemplazando
el agua destilada por orina.

4. Determi nacin de la capaci dad regul adora del suero
- Se repite idntica secuencia de operaciones que en el punto 2 reemplazando
el agua destilada por suero sanguneo.

_______________________________________________________________

INFORME N

CAPACIDAD REGULADORA DEL SUERO Y DE LA ORINA


APELLIDO Y NOMBRE.......................................................................................

FECHA..........................................

TURNO.......................................... J EFE..............................



1 - Objetivo del Trabajo Prctico


2 - Completar el siguiente cuadro de valores


pH pH pH

Agua destilada



Orina


Suero


Agua destilada
+HCl


Orina +HCl

Suero +HCl


Agua destilada
+NaOH


Orina +NaOH

Suero +NaOH



3 Conclusiones
18
CUESTIONARIO

Titul aci n

1) Describa brevemente la tcnica de titulacin.

2) Cul es el objeto de usar un indicador? Qu indicadores cido- base conoce?

3) Mencione dos indicadores cido- base con diferente rango de viraje especificando
el cambio de color producido en cada uno de ellos en funcin del pH.

4) Se titulan 20 ml de NaOH 0,1N con HCl 0,1N usando fenolftalena como
indicador:
a)Cul es el pH en el punto de equivalencia?
b) Complete el siguiente cuadro y grafique pH=f(Vol)
Vol HCl agreg (ml) [H
+
] Color de la
solucin
pH

0,0



5,0



10,0



20,0



5)Cul es la diferencia entre punto de equivalencia y punto final?

Sistemas buffer

1) Explique por qu se utilizan iguales volmenes de orina, suero y agua para
comparar el poder regulador.

2) Si el suero fisiolgico se reemplazara por solucin fisiolgica (qu es una
solucin de cloruro de sodio al 0,9 % masa/volumen), Se observara
comportamiento buffer? J ustifique.

3) Formule la ecuacin de Henderson - Hasselbach y mencione cules son los
lmites dentro de los cuales hay regulacin de pH.

4) Cmo funciona el sistema buffer CO
2
(aq) / HCO
3
-
en el fluido extracelular
para una acidosis y una alcalosis?
5) Cul o cules son los sistemas buffer que regulan en el suero?

6) Indique qu volumen de soluciones de NaAc y de cido HAc, ambos 0,1M
tomara para preparar 100 ml de una solucin buffer cuyo pH es 4,75.Cuntos
ml de solucin de HCl 0,01M debe agregar para disminuir el pH en 0,01
unidades?
19
Reacciones de caracterizacin de aldehdos
y cetonas


Los aldehdos y las cetonas pueden ser alifticos o aromticos segn las
caractersticas de los restos carbonados unidos al grupo funcional carbonilo.
Los aldehdos y cetonas presentan reacciones comunes, pero se comportan de
manera diferente frente a los agentes oxidantes. Los aldehdos se oxidan con
mucha facilidad, dando cidos carboxlicos.

T Tr ra ab ba aj j o o e ex xp pe er ri i m me en nt t a al l

R Re ea ac cc ci i o on ne es s d de e o ox xi i d da ac ci i n n

1 - Reacci n de Fehli ng (para reconocer aldehdos)

Material es

Pipeta
Tubos de ensayos
Solucin de Fehling I (solucin
acuosa de sulfato de cobre)
Pera de goma
Tela metlica
Mechero
Solucin de Fehling II (solucin
acuosa de hidrxido de sodio y tartrato
de sodio y potasio).
Trpode Solucin de formaldehdo
Gradilla Acetona
Pinza de madera Solucin de glucosa


Caractersticas del formol

Es una solucin acuosa de formaldehdo (metanal) que contiene no menos de
37%, ni ms de 41% (p/v) y contiene cantidades variables de etanol o metanol
o ambos para evitar la polimerizacin.
Es un lquido incoloro con olor caracterstico, picante e irritante que ataca a las
mucosas de garganta y nariz.
Advertencia: es txico, corrosivo y cancergeno.
Uso: es un desinfectante muy activo que se usa para esterilizar material
quirrgico. Tambin se usa para conservacin de piezas anatmicas.

Caractersticas de la gl ucosa

Es un polvo blanco, cristalino o granuloso, inodoro y de sabor dulce, tambin
conocido como dextrosa.
Uso: se usa en la preparacin de solucin isotnica de dextrosa: es una
solucin que contiene 50 gramos de glucosa por litro de agua. Tambin se usa
en la preparacin de solucin hipertnica de dextrosa: solucin 300 g / l.

20
Caractersticas de la acetona

Es un lquido polar, incoloro, voltil e inflamable.
Uso: como solvente.
Advertencia: INFLAMABLE

Caractersticas del sul fato de cobre

Se presenta en cristales como sulfato de cobre penta hidrato de color azul.
Advertencia: nocivo, irritante.

Caractersticas del tartrato de sodi o y potasi o

Se presenta en cristales prismticos incoloros, inodoros, solubles en agua fra. Se lo
conoce tambin como sal de Rochela o sal de Seignette.

Procedimiento

- Tubo de ensayo 1: verificar que el tubo est limpio y colocar 2 ml de solucin
de Fehling I +2 ml de solucin de Fehling II +1 ml de formaldehdo.

- Tubo de ensayo 2: verificar que el tubo est limpio y colocar: 2 ml de solucin
de Fehling I +2 ml de solucin de Fehling II +1 ml de solucin de glucosa.

- Tubo de ensayo 3: verificar que el tubo est limpio y colocar: 2 ml de solucin
de Fehling I +2 ml de solucin de Fehling II +1 ml de acetona.

- Se calientan los tres tubos en un bao de agua hirviente. Anote los cambios
observados.

2 - Reacci n de Tollens (para reconocer aldehidos)

Material es

Mechero
Tubos de ensayos
Solucin concentrada de hidrxido de
amonio
Pipeta Solucin de nitrato de plata al 5%
Pera de goma Solucin de hidrxido de sodio al 5%
Tela metlica
Vaso de precipitados

Caractersticas del nitrato de plata
Se presenta como cristales incoloros, inodoros que expuestos a la luz o en
presencia de sustancias orgnicas se colorea de gris o gris parduzco.
Uso: puro o asociado a otras sustancias en barritas con uso custico.
Preparacin de solucin oftlmica al 1%, llamada colirio oftlmico.
Advertencia: corrosivo.

21
Procedimiento

- Preparar tres tubos de ensayo (1, 2 y 3) de la siguiente forma: verificar que los
tubos estn limpio y colocar en CADA UNO, 2 ml de solucin de nitrato de plata
al 5% +una gota de solucin de hidrxido de sodio al 5% +gota a gota solucin
concentrada de hidrxido de amonio hasta disolucin del precipitado de
hidrxido de plata formado; agregando luego un leve exceso de hidrxido de
amonio

- Tubo de ensayo 1: agregarle a lo ya preparado 1 ml de solucin de
formaldehdo

- Tubo de ensayo 2: agregarle a lo ya preparado 1 ml de solucin de glucosa.

- Tubo de ensayo 3: agregarle a lo ya preparado 1 ml de acetona.

- Se calientan los tres tubos en un bao de agua hirviente. Anote los cambios
observados.

3 - Reacci n de oxi daci n con permanganato de potasi o

Material es

Pipeta Formaldehdo
Gradilla cido sulfrico
Pera de goma
Vaso de precipitados
Solucin diluida de permanganato de
potasio
Mechero
Tubo de ensayos
Tela metlica

Caractersticas del ci do sulfrico

Es un lquido incoloro, inodoro, de consistencia oleosa. Muy custico e
higroscpico. Densidad: 1.836-1.840 g/cm
3
(comparar con la densidad del
agua).
Advertencia: se disuelve en agua con gran desarrollo de calor. Si se desea
preparar una dilucin, tener en cuenta que SIEMPRE SE AGREGA
SULFRICO AL AGUA (Y NO AL REVS) mientras se agita con varilla el
lquido acuoso, muy cautelosamente. Es corrosivo y txico.

Procedimiento

- Se colocan en un tubo de ensayos 5 ml de una solucin diluda de
permanganato de potasio, se acidulan con dos gotas de cido sulfrico y se
agrega 1 ml de solucin de formaldehdo. Se calienta el tubo en un bao de
agua hirviente.
- Se observa el cambio de coloracin.
22
INFORME N

REACCIONES DE CARACTERIZACIN DE ALDEHDOS Y CETONAS



APELLIDO Y NOMBRE.......................................................................................

FECHA..........................................

TURNO.......................................... J EFE..............................



1- OBJ ETIVO DEL TRABAJ O PRCTICO





2- REACCIN DE FEHLING

a) con formaldehdo



b) con glucosa


c) con acetona




3- REACCIN DE TOLLENS

a) con formaldehdo



b) con glucosa



c) con acetona



4- REACCIN DE OXIDACIN CON PERMANGANATO DE POTASIO

23
CUESTIONARIO

1) Formule la reaccin de Fehling. Cul es la funcin del tartrato de sodio y
potasio en sta reaccin?
Si en la reaccin de Fehling el aldehdo se oxida, por qu se obtiene una
sal y no un cido? Cul es la seal positiva de la reaccin?

2) Formule la reaccin de Tollens. Cul es la funcin del agregado de
hidrxido de amonio? Cul es la seal positiva observable?

3) Por qu no reacciona la acetona frente a los reactivos de Fehling y
Tollens?

4) Cmo es la reaccin con KMnO
4
/H
2
SO
4
?Cul es la seal positiva?

5) Complete el siguiente cuadro:


Compuesto
Orgnico

Frmula
Qumica

Producto obtenido
en la reaccin de
Fehling

Producto obtenido
en la reaccin de
Tollens

Producto en la
reaccin con
KMnO
4
/H
2
SO
4

Ciclohexanona

Propanona

Fructosa

c
Acetaldehdo













24
Extraccin y anlisis de analgsicos por cromatografa
en capa delgada

Extraccin cido-Base

F Fu un nd da am me en nt t o os s t t e e r ri i c co os s
El mtodo de extraccin cido-base es muy utilizado cuando alguna de las
sustancias a recuperar presentan caractersticas cidas o bsicas.
Los compuestos orgnicos con carcter cido o bsico que estn disueltos en
un solvente orgnico pueden llevarse a una fase acuosa aprovechando sus
propiedades cido-base. Por lo tanto, este mtodo permite separar mezclas de
compuestos que difieran en sus caractersticas de acidez o basicidad.
El procedimiento de extraccin consiste en transformarlos secuencialmente en
su sal correspondiente hacindolos reaccionar con una solucin acuosa cida o
bsica.
Hay pocos grupos funcionales orgnicos suficientemente cidos o bsicos para
poder interactuar con bases o cidos inorgnicos. Los cidos carboxlicos y los
fenoles reaccionan con bases fuertes para dar las sales correspondientes,
segn representamos con las siguientes ecuaciones:
RCOOH +NaOH RCOO

Na
+
+H
2
O
PhOH +NaOH PhO

Na
+
+H
2
O
donde "Ph" representa al grupo fenilo (C
6
H
5
).
Los cidos carboxlicos, ms cidos que los fenoles, tambin reaccionan con
bicarbonato de sodio mientras que los fenoles no lo hacen.
RCOOH +NaHCO
3
RCOO

Na
+
+H
2
O +CO
2

PhOH +NaHCO
3
NO HAY REACCIN

Las aminas reaccionan con cidos inorgnicos fuertes para dar tambin sales
solubles en agua:
RNH
2
+HCl RNH
3
+
Cl


El mtodo de separacin de mezclas por extraccin cido-base consiste en:
1 Disolver la mezcla orgnica a separar en un solvente con las siguientes
caractersticas:
i. todos los componentes deben ser solubles en l
ii. debe ser inerte (no debe reaccionar con ninguno de los componentes de
la mezcla)
iii. debe ser inmiscible con el agua
iv. debe tener un punto de ebullicin lo suficientemente bajo como para
permitir recuperar las sustancias disueltas en l por evaporacin
25
2 Agregar una solucin cida o bsica para extraer a la fase acuosa el
componente deseado (como una de sus sales).
3 Neutralizar la fase acuosa
4 Extraer nuevamente con solvente orgnico.
5 Evaporar en forma separada las fracciones orgnicas hasta sequedad
para poder recuperar los compuestos
Los fundamentos de este procedimiento se resumen en lasiguiente tabla:

Categora Funcionalidad Se extrae con Reaccin cido-base

cidos orgnicos
fuertes
cido
carboxlico
Base dbil (5%
NaHCO
3
)
RCOOH RCOO
-
Na
+

cidos orgnicos
dbiles
Fenol Base fuerte (5%
NaOH)
ArOH ArO
-
Na
+

Bases orgnicas Amina cido fuerte
(5% HCl)
RNH
2
RNH
3
+
Cl
-
Neutros Otros No extrable
cido-base)
No hay reaccin

26

Cromatografa

F Fu un nd da am me en nt t o os s t t e e r ri i c co os s

La cromatografa es una tcnica que permite separar los componentes de una
mezcla mediante su distribucin diferencial entre una fase fija y una fase mvil.
Cada uno de los componentes puede ser separado de los dems; y tambin
puede determinarse la cantidad de cada uno en la mezcla. La cromatografa
puede utilizarse con fines analticos (cuali o cuantitativos) y preparativos.
La fase fija puede ser un slido poroso, finamente dividido como por ejemplo
en la cromatografa de adsorcin, o un lquido depositado como pelcula
delgada sobre un material poroso inerte como en la cromatografa de particin.
La fase mvil puede ser un lquido puro o una mezcla homognea puede ser
un gas como en la cromatografa gaseosa.
De acuerdo a sus caractersticas estructurales los compuestos pasarn
distintas fracciones de tiempo en la fase fija. El que pase ms tiempo en la fase
fija se mover ms lentamente y podr ser separado de los otros.
Existen varios tipos de cromatografa.

Cromatografa de adsorcin
Cromatografa de particin
Cromatografa de filtracin por geles (o tamices moleculares o
exclusin)
Cromatografa de intercambio inico
Cromatografa de afinidad

Existen tambin varias tcnicas que se aplican a algunos de los tipos mencionados,
por ejemplo:

Cromatografa en capa delgada (C.C.D.)
Cromatografa en columna
Cromatografa en papel
Cromatografa gaseosa

La tcnica en capa delgada es para uso analtico o preparativo y la columna es
siempre preparativa.
Segn la tcnica empleada hay consideraciones especiales para los distintos pasos
en el proceso cromatogrfico. Pero se puede decir que dicho proceso consta de
cinco etapas principales:

1 - Armado de la placa o columna: implica la disposicin espacial que adopta la
fase estacionaria.
2 - Siembra: se refiere al contacto inicial de la mezcla a separar con la fase
estacionaria, para su posterior desarrollo.





27

3 - Desarrollo: es el pasaje de la fase mvil a travs de la fase estacionaria.
4 - Deteccin: Implica la localizacin de cada compuesto.


Tipos de cromatografa

1 - Cromatografa de adsorci n

El proceso de cromatografa de adsorcin se basa en la separacin de un soluto
entre una fase slida de adsorbente y una fase mvil que es el solvente de elucin
El fenmeno de adsorcin ocurre en la superficie del grnulo de la fase fija, y se
fundamenta en la atraccin entre el soluto y el adsorbente por formacin de uniones
dipolo-dipolo y formacin de puentes de hidrgeno.
El soluto es adsorbido en la superficie del adsorbente y luego desorbido por el
solvente de elucin.
Es necesario que la fase estacionaria posea partculas que sean tan pequeas
como sea posible para que exista una superficie grande de modo que la adsorcin y
desorcin de los solutos se verifique frecuentemente.






















Los adsorbentes presentan diferente grado de polaridad. Unos son polares, como la
almina y la slica gel y otros menos polares, como el carbn activado.
Los solventes usados en la fase mvil deben ser de alta calidad, miscibles entre s
cuando se usan mezclas, no deben reaccionar con las sustancias a separar.
La capacidad de un solvente de movilizar a una sustancia se denomina poder
de elucin.
Series elutrpicas de solventes son ordenamientos de solventes segn su poder de
elucin para una determinada fase estacionaria. Por ejemplo, para adsorbentes
polares en orden creciente de poder eluyente se encuentran: ter de petrleo <
Visualizacin del proceso cromatogrfico



28
tolueno <acetato de etilo <acetona <metanol. O sea cuanto mayor sea la polaridad
del solvente, mayor ser su poder de elucin.

2 - Cromatografa de particin

En la cromatografa de particin, la fase estacionaria es lquida y la fase
mvil tambin es un lquido inmiscible con el anterior.
La separacin se basa en la distribucin selectiva de la sustancia entre
las fases, en funcin del coeficiente de particin o sea, este tipo de
cromatografa se basa en la diferente solubilidad de los compuestos en cada
una de las fases.

|soluto|
fase fija
Coeficiente de particin: =
|soluto|
fase mvil



3 - Cromatografa de fil traci n con geles (exclusi n)







4 - Cromatografa de intercambi o i ni co

La fase estacionaria consta de una matriz polimrica sobre cuya superficie se
han unido qumicamente grupos funcionales de tipo inico, por ejemplo, cidos
carboxlicos o sulfnicos (intercambio catinico) o amonios cuaternarios
(intercambio aninico). A medida que la fase mvil pasa sobre esta superficie,
los solutos inicos son retenidos por formacin de uniones electrostticas con
los grupos funcionales. Las fases mviles que se usan en la cromatografa de
intercambio inico son siempre lquidas.
La fase estacionaria es una
sustancia polimrica que
contiene numerosos poros de
dimensiones moleculares. Los
solutos cuyo tamao molecular
es suficientemente pequeo
dejan la fase mvil al difundir
dentro de los poros. Las
molculas ms grandes que no
penetran en esos poros quedan
en la fase mvil y no son
retenidas. Este mtodo es muy
adecuado para separar mezclas
en las cuales los solutos varan
considerablemente de tamao
molecular. Por ejemplo, la
cromatografa de exclusin es
una forma eficiente de separar
protenas diferentes entre s.

29

Res-COO

H
+
+ Na
+
Res-COO

Na
+
+ H
+


Res-SO
3

H
+
+ Na
+
Res-SO
3

Na
+
+ H
+


Res-NH
4
+
HO

+ CI

Res-NH
4
+
CI

+ HO




5 - Cromatografa de afinidad

Se utiliza para material biolgico, por ejemplo: fase fija antitrombina para
separar heparina de una mezcla de glicosaminoglicanos. Es muy especifica
para separar un compuesto determinado de una mezcla compleja.

Tcni cas cromatogrfi cas

a - Cromatografa en capa delgada

La cromatografa en capa delgada se puede realizar con fines analticos o
preparativos, y es de adsorcin o particin. En el primer caso, se extiende sobre
una placa de vidrio una capa delgada y uniforme de adsorbente mezclado con
una sustancia ligante, como por ejemplo sulfato de calcio, suspendido en un
solvente adecuado.
En una misma placa se pueden cromatografiar muestras diferentes, siempre
que la siembra de las mismas se realice sobre una misma lnea paralela al
borde del vidrio.
La placa una vez cargada se introduce en una cmara de vidrio con tapa, que
contiene al eluyente. Esta cmara debe estar saturada con los vapores del
solvente de desarrollo.
El nivel del eluyente debe ser tal, que est en contacto con el adsorbente pero
sin tocar la lnea de siembra. Para la eleccin del solvente de desarrollo es
necesario tener en cuenta, entre otros factores, el adsorbente utilizado y la
polaridad de las sustancias que se desean separar.
El solvente asciende a travs del adsorbente y cuando alcanza una altura
conveniente se retira la placa de la cmara y se deja evaporar el solvente. Si las
sustancias separadas son coloreadas se observan las manchas
correspondientes a cada una de ellas a simple vista. Cuando las sustancias no
son coloreadas es necesario revelar la placa una vez seca; para ello se
pulveriza con un reactivo que produzca con las sustancias que interesan
reacciones de coloracin.

Relacin de frente

Para poder medir el desplazamiento alcanzado por cada componente de la
mezcla y por el patrn, con una medida tal que resulte independiente del
tiempo y de las dimensiones de la placa, se utiliza el concepto de (R
F
)
Relacin de frente y se lo define como el cociente entre la distancia recorrida
por la sustancia y la distancia recorrida por el eluyente.

30

distancia recorrida por la sustancia
R
F
=
distancia recorrida por el eluyente

La distancia recorrida por la sustancia se mide desde la lnea de siembra hasta
el centro de la mancha; y la distancia recorrida por el eluyente se mide desde la
lnea de siembra hasta la lnea del frente del solvente. El R
F
depende de la
sustancia y del sistema cromatogrfico utilizado. Los R
F
son siempre menores
o iguales a 1.

b - Cromatografa en columna

Se utiliza un tubo de vidrio que se llena con la fase fija correspondiente. Por
ejemplo, en la cromatografa de adsorcin en columna se llena con el
adsorbente suspendido en solvente de elucin. La mezcla a analizar se siembra
sobre la parte superior del adsorbente, disuelta en el mismo solvente. Los
componentes de la mezcla se separan mediante la elucin que consiste en el
pasaje de solvente (fase mvil) a travs de la columna.
Los diferentes procesos cromatogrficos descriptos (adsorcin, particin,
intercambio inico, filtracin con geles, afinidad) pueden realizarse en columna.
La cromatografa en columna es siempre preparativa.

c - Cromatografa en papel

La cromatografa en papel es una cromatografa de particin en la cual la fase
fija es el agua que hidrata la fibra de celulosa de un papel cromatogrfico.
Las muestras se siembran siguiendo un procedimiento similar al empleado
para cromatografa en capa delgada. Se coloca la hoja de papel en una cubeta
de vidrio hermtica que se halla saturada con los vapores del solvente con el
que se va a eluir. Se deja saturar el papel con los vapores del solvente y recin
entonces se agrega el eluyente. La cromatografa puede ser ascendente
cuando se sumerge el borde del lado sembrado del papel en el solvente y este
asciende por capilaridad a travs de l o descendente cuando el eluyente se
coloca en una cubeta, de la que cuelga el papel y el solvente baja a travs de
l.


Cromatografa i nstrumental

1 - Cromatografa gaseosa

El trmino cromatografa gaseosa se aplica a los procesos en los cuales la fase
mvil es un gas y en los que la distribucin de los componentes de una mezcla
se logra mediante cualquiera de los procesos cromatogrficos de adsorcin o
particin.
Si el principal mecanismo que produce la distribucin es la adsorcin en un
sustrato slido, el mtodo se denomina cromatografa gas-slido. Si el
mecanismo principal involucra la particin entre la fase gaseosa y una fina
31
pelcula de un lquido depositado sobre un slido inerte, el mtodo es una
cromatografa de particin gas-lquido (CGL).
En esta tcnica la fase mvil es un gas llamado carrier; los ms comnmente
usados son: nitrgeno o argn. (figura 6).
El gas debe ser inerte a la muestra y a la fase fija. Debe ser trmicamente
estable.

Esquema de un cromatgrafo gaseoso


Las columnas de cromatografa gaseosa son tubos muy finos. Habitualmente se
utilizan columnas capilares.

Caractersticas de las columnas capilares

Dimetro
Gran longitud (Pueden llegar hasta 50 metros)
El sustrato lquido (fase estacionaria) cubre la pared interior de la columna.
Alto poder de resolucin.

La muestra se inyecta en un cromatgrafo donde se vaporiza y es arrastrada por el
gas trasportador a travs de la columna donde se produce la separacin de los
componentes.

A la salida de la columna existe un dispositivo que permite detectar los diferentes
componentes de la mezcla inyectada llamado detector.

Tiempo de retencin
El modo caracterstico de interaccin entre una determinada carga de columna, y los
componentes que se cromatografan, se expresa en trminos de tiempos de
retencin, que es el tiempo que transcurre entre el instante en que la mezcla se
introduce en la columna y el momento en que se detecta su aparicin.
Cuanto mayor sea la interaccin entre el soluto y la fase estacionaria, mayor ser su
tiempo de retencin.

2 - Cromatografa gas - lquido - espectometra de masa (cgl-
em)

En una cromatografa gas-lquido CGL, luego de separados los compuestos se
pueden identificar con un detector de espectometra de masa. La EM es una tcnica
destructiva. En la fuente inica, se transfiere energa a la molcula produciendo su
32
ionizacin. El exceso de energa de la molcula ionizada permite su
descomposicin, generndose fragmentos neutros y cargados. El esquema de
fragmentacin, basado primariamente en la deteccin de iones positivos, constituye
el espectro de masa. El espectro de masa brinda dos tipos de informacin; la masa
de los iones obtenidos y su abundancia y permite la identificacin de los
compuestos.

3 - Cromatografa lqui da de al ta resoluci n (clar)

La fase mvil en la CLAR es un lquido.
Los procesos para la retencin de las molculas de la muestra en la fase
estacionaria son los ya descriptos para la cromatografa tradicional: particin,
absorcin, Intercambio inico, exclusin (geles).
En CLAR se usa tambin la fase reversa como fase estacionaria. Este es un tipo
de cromatografa de particin en el cual las sustancias se eluyen en orden inverso a
su polaridad.
Las caractersticas de la fase mvil, pueden cambiarse durante el anlisis. En
cromatografa gaseosa se usan programas de temperatura. En cromatografa lquida
se usan programas de solvente.

Esquema de un cromatgrafo lquido de alta resolucin


La bomba que impulsa a la fase mvil para que pueda atravesar la columna a una
velocidad adecuada: debe suministrar un flujo continuo y constante. La CLAR puede
ser analtica o preparativa.


33


Extraccin y anlisis de analgsicos por cromatografa en
capa delgada


Los analgsicos comprenden una gran variedad, entre los cuales se
encuentran la aspirina, el paracetamol y el ibuprofeno. A veces se agrega
cafena como estimulante en estos compuestos, adems del almidn, la lactosa
y otros excipientes.














T Tr ra ab ba aj j o o e ex xp pe er ri i m me en nt t a al l

Extracci n cido / base

Material es

Ampolla de decantacin cido clorhdrico
Tubos de ensayos Diclorometano
Erlenmeyer Metanol
Cafiaspirina
Solucin 5% NaOH


Procedimiento

- Pulverizar el contenido de 20 (veinte) tabletas de Cafiaspirina y transferirlo a
un erlenmeyer de 125 ml.
- Agregar 20 ml de una solucin diclorometano /

metanol (1:1). Agitar durante
un minuto.
- Filtrar la suspensin obtenida.
- Separar 1ml de la solucin en un tubo de ensayo. Solucin A
- Transferir el volumen restante (19 ml) a una ampolla de decantacin.
- Agregar 15 ml de NaOH 5%. Agitar siguiendo la tcnica de extraccin.
- Separar la fase acuosa (superior). Repetir con otros 15 ml de NaOH 5%.
34
- Reunir los extractos acuosos. Reservar la fase orgnica (solucin B).
- Acidificar la fase acuosa (papel pH) con HCl diluido. Extraer dos veces con 15
ml de diclorometano.
- Separar la fase orgnica (solucin C).

Cromatografa en capa del gada

Material es

Cuba Acetato de etilo
Placa de slica gel cido actico

Metanol

Tolueno
Yodo


Procedimiento

- Tomar una alcuota de las soluciones A, B y C.
- Sembrar dichas alcuotas en una placa de slica gel (adsorcin).
- Desarrollar con mezcla de tolueno- acetato de etilo- cido actico- metanol
(20:10:3:0,2)
- Revelar en cuba de Yodo.
- Comparar los Rf de las manchas observadas.

35
INFORME N

EXTRACCIN Y ANLISIS DE ANALGSICOS POR CROMATOGRAFA EN
CAPA DELGADA



APELLIDO Y NOMBRE.......................................................................................

FECHA..........................................

TURNO.......................................... J EFE..............................



OBJ ETIVO DEL TRABAJ O PRCTICO



ESQUEMA DE LA EXTRACCIN CIDO - BASE






REACCIN CIDO BASE





CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA

Revelado en cuba de yodo

i) Solucin A

ii) Solucin B

iii) Solucin C

Clculo de los Rf

i) Solucin A

ii) Solucin B

iii) Solucin C

36
CUESTIONARIO

Extraccin cido-base

1) En qu se basa el mtodo de extraccin cido base para separar mezclas?

2) Se dispone en el laboratorio de una mezcla de los siguientes compuestos:





Cmo procedera para separarla?

3) Cmo procedera para purificar un fenol que se encuentra mezclado con un cido
carboxlico?

4) Se tienen los siguientes compuestos para hacer reaccionar con NaOH(aq) 5%.
Cul de ellos dar reaccin positiva? J ustifique.
Compare los resultados que obtendra si los hiciera reaccionar con Na.
a) etanol b) ciclohexanol c) terbutanol.

Cromatografa

1) Explique brevemente en que se basa la cromatografa de adsorcin.

2) Explique brevemente en que se basa la cromatografa de particin.

3) Explique en qu se basa la separacin de sustancias en la cromatografa de
intercambio inico.

4) Explique en qu se basa la separacin de sustancias en la cromatografa de
exclusin por tamao.

5) Qu entiende por Rf?Cmo lo determina?Cmo detecta la presencia de una
sustancia por cromatografa en placa?Podra llegar a cuantificarla?

6) En la cromatografa lquida de alta resolucin (CLAR)
a) La fase mvil es lquida o gaseosa?
b) Qu entiende por gradiente de elucin?

7) Los compuestos A y B se sometieron a una cromatografa de adsorcin en capa delgada
en slica gel. Se utiliz tolueno: etanol (3:1) como solvente de extraccin. Indique:
a)Cul de las dos sustancias tiene mayor Rf?
b) Efecte un esquema simple de la placa que obtendra segn su criterio, aclarando la
posicin de cada punto. J ustifique su respuesta.
A B
COOH

OH NH
2
COOH
37
Hidrlisis de lecitina y reconocimiento de
sus componentes


Las lecitinas son Fosfolpidos en las cuales el cido fosfrico se halla
esterificado con la colina.
En la hidrlisis se introduce una molcula de agua en cada una de las uniones
steres, provocando la ruptura de las mismas. La hidrlisis puede ser en medio
cido en medio bsico o catalizada por enzimas La hidrlisis de lpidos en
medio bsico se conoce con el nombre de saponificacin.
Como productos de la hidrlisis bsica de las lecitinas se obtienen: glicerol,
sales de sodio o potasio de los cidos grasos (jabones), ortofosfato de sodio y
colina.

T Tr ra ab ba aj j o o e ex xp pe er ri i m me en nt t a al l

Saponi ficacin de l a l eci ti na

Material es

Agarradera Etanol
Baln
Varilla de vidrio
Vaso de precipitados
Lecitina
Solucin de cloruro de sodio
Solucin de hidrxido de sodio al 30 %
Doble nuez

Mechero
Tubos de goma

Refrigerante

Soporte universal

Tela metlica

Trpode



Procedimiento

- Se colocan en un baln de 125 cm
3
, 5 g de lecitina, 7 cm
3
de solucin de
hidrxido de sodio al 30% y 7 cm
3
de etanol. Mediante una varilla se mezcla
bien la pasta, se adosa un refrigerante a reflujo (figura 1) y se calienta sobre
tela metlica hasta ebullicin. Se mantiene la ebullicin durante 30 minutos,
agitando peridicamente.

- Se vierte la solucin caliente sobre 50 cm
3
de solucin saturada de cloruro de
sodio helada contenida en un vaso de precipitados de 250 cm
3
.

- El jabn as obtenido se filtra al vaco.


38
Equipo de calentamiento a reflujo






Soporte Universal






Figura 1:
Reacci ones de reconocimi ento

a) Reconocimiento del gli cerol

Material es

Esptula Sulfato cido de potasio
Pinza de madera
Tubo de ensayo


Procedimiento

Advertencia: - usar pinza de madera
- correcta direccin del tubo
- no oler en forma directa

- Se colocan en un tubo de ensayos unas gotas del filtrado, se mezclan con
una punta de esptula de sulfato cido de potasio y se calienta el tubo a fuego
directo hasta que se produzcan vapores blancos. Estos tienen un olor muy
irritante debido a la formacin de acrolena.

b) Reconocimiento del fsforo

39

Material es

Cpsula de porcelana cido ntrico
Mechero Molibdato de amonio 10%
Tubo de ensayos Nitrato de amonio 30%

Procedimiento

- Se colocan 2 ml del filtrado en una cpsula de porcelana y se llevan a
sequedad.
- Se retira el mechero y se deja enfriar.
- Se disuelve el residuo con cido ntrico concentrado.
- Se trasvasa a un tubo de ensayos y se agregan 2 ml de nitrato de amonio al
30% y 2 ml de molibdato de amonio al 10%.
- Un precipitado amarillo de fosfomolibdato de amonio demuestra la presencia
de fsforo en el filtrado.

c) Reaccin del jabn

Material es

Esptula o varilla Cloruro de Calcio 10%
Pipeta
Pera de goma

Tubo de ensayos

Procedimiento

- Se disuelve una punta de esptula en un tubo de ensayos en 5 ml de agua
caliente
- Se agregan 3 gotas de solucin de CaCl
2
al 10 %.
- Se observa el precipitado obtenido.
40
INFORME N

RECONOCIMIENTO DE LOS COMPONENTES DE LECITINA


Apellido y Nombre.............................................................................................

Fecha.........................

Turno.......................... J efe........................................



1 - Objetivo del Trabajo Prctico



2 - Esquema del equipo utilizado



3 - Reaccin de saponificacin de la lecitina


4 - Reconocimiento del glicerol

a- Reaccin


b- Caracterstica observada


5 - Reconocimiento del fsforo

a- Reaccin


b- Caracterstica observada


6 - Reconocimiento del jabn

a- Reaccin

b- Caracterstica observada
41
CUESTIONARIO

1)Por qu se utiliza en la reaccin de saponificacin una mezcla de agua y
alcohol?

2) Formule la reaccin de saponificacin de la lecitina.

3)Por qu es necesario efectuar el calentamiento a reflujo?

4) Por qu se vierte la solucin obtenida de la saponificacin de la lecitina en
una solucin saturada de cloruro de sodio helada?

5) Formule la reaccin de reconocimiento del glicerol. Indique la seal
positiva.

6) Formule la reaccin de reconocimiento del fsforo. Indique la seal
positiva.

7) Formule la reaccin de reconocimiento del jabn. Indique la seal positiva.

8) Explique las diferencias en las propiedades fsicas y qumicas entre los
jabones y los cidos grasos.

9) Explique la diferencia estructural entre jabones y detergentes e indique cmo
influye la estructura en la biodegradabilidad.

10)Por qu se diferencian jabones y detergentes en su accin limpiadora?
42
Ai slamiento de las protenas de la leche
reacciones de reconocimiento

La leche es una secrecin lquida heterognea, que contiene sustancias
elaboradas por la glndula mamaria y sustancias que difunden a travs del
epitelio glandular. Presenta las siguientes caractersticas:

Densidad promedio: 1,030 1,032 g/cm
3
(a 15,5C)
pH: 6,5 6,6
Descenso crioscpico: 0,55C
Agua: 87,6 %
Sustancias grasas: 2,8 5 %
Hidratos de carbono:
Lactosa: 4,75 5,5 %
Protenas:
Casena: 2,7 3 %
Albminas: 0,4 0,5 %
Globulinas: 0,05 0,1 %
Minerales: 0,7 0,9 % (Ca, P, Mg, K, Na)
Vitaminas: A, B1, B2, B6, PP, H, C, D, E, F.
Gases: dixido de carbono, nitrgeno, oxgeno.
Enzimas: amilasa, fosfatasa, galactasa, lipasa, catalasa.
Contiene tambin leucocitos, clulas epiteliales, bacterias.

La composicin de la leche vara segn la especie animal y an dentro de una
misma especie experimenta variaciones debidas a la raza, individuo, nmero de
partos, poca de lactacin, alimentacin, etc.

Composicin de las principales leches (en gramos por litro):


Mujer Vaca Yegua Cabra Oveja

Extracto seco total 117-120 125-130 95-100 125-145 170-185
Materia grasa 32-35 35-40 9-15 35-50 55-70
Azcares 65-70 47-52 60-65 40-50 43-50
Casena 10-12 27-30 10-12 30-32 45-50
Albmina y globulina 5-6 4-5 7-8 5-7 8-10
Sales 2-3 9-9.5 3-4 7-9 9-10


Durante los 3 o 4 das que preceden al parto y los 5 o 7 das que le siguen, la
mama segrega un lquido viscoso, amarillento, amargo y poco abundante que
se denomina calostro. Este se diferencia de la leche por su pobre contenido
en lactosa y casena, siendo en cambio muy rico en sales y otras protenas
como inmunoglobulinas; cuyas funciones son otorgarle inmunidad a las cras,
las cuales en las primeras horas de vida poseen su intestino permeable a estas
protenas sin ser previamente digeridas en el estmago.

43
Composicin comparada de la leche de vaca y el calostro (en gramos por litro):


Calostro Leche

Materia seca 252 130
Grasas 50 39
Protenas totales 160 35
Casenas 30 27
Albminas 40 4.5
Globulinas 80 0.7
Lactosa 30 49
Minerales 12 7.5

Los componentes orgnicos ms importantes de la leche son:

1- Lpidos
Los lpidos que se encuentran en mayor proporcin en la leche son: grasas
propiamente dichas, lecitinas, colesterol y carotenos. Estas sustancias forman
un sistema en emulsin.

2- Hidratos de carbono
El principal azcar de la leche es la lactosa, disacrido reductor formado por
una molcula de glucosa y una de galactosa. Es seis veces menos dulce que la
sacarosa y su proporcin en la leche es muy constante.

3- Protenas
Las protenas ms abundantes de la leche son las casenas albminas y
globulinas. Las casenas son por definicin las protenas que precipitan de la
leche descremada a pH 4,6 y a 20 C. Son protenas conjugadas tienen grupos
fosfato generalmente esterificando los hidroxilos libres de las serinas. Las
diferentes molculas de casena se encuentran asociadas en micelas y
constituyen el 80 % del contenido proteico de la leche. Las protenas del suero
constituyen el 20 % restante, son globulares y solubles en un intervalo de pH
amplio, incluso a pH cido siempre que no se hayan desnaturalizado por calor.
En las protenas del suero se encuentran lactoglobulinas y lactoalbminas entre
otras.

T Tr ra ab ba aj j o o e ex xp pe er ri i m me en nt t a al l

Material es


Embudo Acido actico al 10%
Mechero Hidrxido de sodio al 10%
Papel de filtro
Pera de goma
Solucin de fenolftalena
Pipeta
Plato poroso

44
Tejido de nylon para filtrar
Tela metlica
Termmetro
Trpode
Varilla de vidrio
Vaso de precipitados


Caractersticas de la fenolftal ena

Polvo blanco, cristalino, inodoro, casi insoluble en agua, soluble en alcohol.
Uso: en solucin es un indicador de pH. Su color vara entre pH 8,2 y 9,8. En
medio cido es incoloro y en medio alcalino es color rojo violceo.
Caractersticas: es laxante y purgante en humanos, carece de accin purgante
en perros y gatos.

Caractersticas del ci do ntrico

Lquido lmpido, incoloro, humeante al aire, colorea epidermis y albminas en
general.
Advertencia: corrosivo. Los frascos en que se conserva el cido ntrico deben
estar llenos slo hasta los 9/10 con objeto de evitar que los gases que se
desprenden hagan saltar el tapn o estallar el frasco.
Manjese con precaucin: no lo ponga nunca en contacto con vasos metlicos.
Antes de mezclarlo reflexione sobre la reaccin que pueda producir.


Separaci n de l a casena de l a l eche

Procedimiento

- Se colocan 250 ml de leche descremada en un vaso de precipitados de 500 ml
y se calienta en bao de agua a 40C.
- Se agrega con una pipeta de 10 ml cido actico al 10 % gota a gota hasta
que no se observe formacin de precipitado (aproximadamente 10 ml).
- Se filtra el precipitado obtenido y se reservan las aguas madres para la
obtencin de lactoalbmina.
- Se lava el precipitado con poca agua fra.
- Se coloca la casena en un plato poroso, se seca y se reserva para realizar las
reacciones de reconocimiento.

Separaci n de l a lactoalbmina

Procedimiento

- Se coloca el filtrado procedente de la separacin de la casena en un vaso de
precipitados de 500 ml.
- Se agregan tres gotas de solucin de fenolftalena y se neutraliza con solucin
de hidrxido de sodio al 10 % (aprox. 10 ml) hasta ligero color rosado. Luego se
45
aade gota a gota solucin de cido actico al 10 % hasta desaparicin del
color.
- Se calienta a ebullicin el contenido del vaso de precipitados durante 20
minutos agitando con varilla de vidrio.
- Se deja enfriar y se filtra el slido empleando un embudo comn y papel de
filtro plegado.
- Se reserva el slido obtenido para las reacciones de reconocimiento.


Reacci ones de reconocimiento

a) Reacci n xantoprotei ca


Material es

Esptula cido ntrico (c)
Pinza de madera
Pipeta
Pro-pipeta
Tubos de ensayos
Varilla de vidrio



Procedimiento

Recuerde la advertencia sobre el calentamiento de tubos de ensayos:
1- Uso de la pinza de madera.
2- Direccionar el tubo.

- Se coloca en un tubo de ensayos una punta de esptula de casena.
- Se agrega sobre la protena 0.5 ml de cido ntrico concentrado, se calienta
suavemente y se observa el color.
- Se repite la reaccin utilizando lactoalbmina.

b) Reacci n del Bi uret


Material es

Esptula Hidrxido de sodio 10 %
Pipeta Sulfato de cobre 1 %
Pro-pipeta
Tubos de ensayos
Varilla de vidrio



Procedimiento

- Se coloca en un tubo de ensayos una punta de esptula de casena.

46
- Se disuelve la casena en hidrxido de sodio al 10 % y se aaden unas gotas
de solucin de sulfato cprico al 1 %. Se observa el cambio de color.
- Se repite la reaccin utilizando lactoalbmina.

___________________________________________________________________

INFORME N

SEPARACIN DE PROTENAS DE LA LECHE
REACCINES DE RECONOCIMIENTO


APELLIDO Y NOMBRE..................................................................................

FECHA..........................................

TURNO.......................................... J EFE....................................


OBJ ETIVO DEL TRABAJ O PRCTICO

OBSERVACIONES


REACCIONES DE RECONOCIMIENTO DE LAS PROTENAS

a) REACCIN XANTOPROTEICA

color observado con casena:

color observado con lactoalbmina:


REACCIN DEL BIRUET

Color observado con casena:

Color observado con lactoalbmina:



Frmula del complejo obtenido








47
CUESTIONARIO

1) Explique qu significa punto isoelctrico de una protena.

2) Explique en qu consiste la desnaturalizacin de una protena.

3) Explique qu diferencia hay entre desnaturalizacin e hidrlisis de una protena.

4) Cules son las reacciones que permiten reconocer la presencia de protenas?

5) A qu se debe el cambio de coloracin en la reaccin xantoproteica?Cul es el
reactivo?

6) Por qu queda una mancha amarilla al quemarse la piel con cido ntrico?

7) A qu se debe el cambio de coloracin en la reaccin de Biuret?Cul es el
reactivo y en qu medio se realiza?

8) Para qu se usa la fenolftalena?

9) En qu se fundamenta la precipitacin de la casena y de la lactoalbmina?

10) Las reacciones xantoproteicas y de Biuret, sirven como identificacin de las
protenas de la leche?