Location via proxy:   [ UP ]  
[Report a bug]   [Manage cookies]                
Scribd Logo
Cargar

¡Te damos la bienvenida a Scribd!

  • 133 vistas

    Clase 2. IDENTIFICACIÓN DE ACIDOS NUCLEICOS

    Cargado por

    Samuel Valdebenito
    Este documento describe métodos para identificar ácidos nucleicos, incluyendo la reacción de Feulgen para pentosas y absorción ultravioleta para bases nitrogenadas.

    Copyright:

    Attribution Non-Commercial (BY-NC)
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    Clase 2. IDENTIFICACIÓN DE ACIDOS NUCLEICOS

    Cargado por

    Samuel Valdebenito
    133 vistas32 páginas
    Este documento describe métodos para identificar ácidos nucleicos, incluyendo la reacción de Feulgen para pentosas y absorción ultravioleta para bases nitrogenadas.

    Título original

    clase 2. IDENTIFICACIÓN DE ACIDOS NUCLEICOS

    Derechos de autor

    © Attribution Non-Commercial (BY-NC)

    Formatos disponibles

    PDF, TXT o lea en línea desde Scribd

    ¿Le pareció útil este documento?

    ¿Este contenido es inapropiado?

    Este documento describe métodos para identificar ácidos nucleicos, incluyendo la reacción de Feulgen para pentosas y absorción ultravioleta para bases nitrogenadas.

    Copyright:

    Attribution Non-Commercial (BY-NC)
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    133 vistas32 páginas

    Clase 2. IDENTIFICACIÓN DE ACIDOS NUCLEICOS

    Cargado por

    Samuel Valdebenito
    Este documento describe métodos para identificar ácidos nucleicos, incluyendo la reacción de Feulgen para pentosas y absorción ultravioleta para bases nitrogenadas.

    Copyright:

    Attribution Non-Commercial (BY-NC)
    Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
    Descargar como pdf o txt
    Está en la página 1de 32

    9/2/2013

    IDENTIFICACIN DE CIDOS NUCLEICOS. C


    Prof. TM Laura Ochoa M
    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    IDENTIFICACION DE ACIDOS NUCLECOS.


    La pentosa (Reaccin de Feulgen) Bases nitrogenadas (Absorcin ultravioleta)

    Radical fosfato (Mtodo de Galocianina Cromalumbre, tincin con verde metiloPironina)

    cidos Nucleicos.
    Son macromolculas. Son polmeros formados por la repeticin de monmeros llamados nucletidos. Los nucletidos estn unidos por enlaces fosfodiester.

    Tienen carcter cido.


    Su funcin principal es almacenar y transmitir la informacin gentica.

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    ADN
    Ncleo mitocondrias

    ARN
    Nuclolo

    Citoplasma: ribosomas
    9/2/2013 Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    Bases Nitrogenadas.
    Son compuestos orgnicos que contiene uno o ms tomos de nitrgeno como lo indica su nombre. Existen cuatro bases nitrogenadas, clasificadas de la siguiente manera: PURINAS: Adenina - Guanina. PIRIMIDINA: Timina - Citosina.

    Existe una quinta base nitrogenada, que slo encontramos en ARN: uracilo. Esta reemplaza a la citosina. O sea, en ARN las bases nitrogenadas se clasifican de la siguiente manera:
    PURINAS: Adenina - Guanina. PIRIMIDINA: Timina - URACILO.
    9/2/2013 Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    PODEMOS IDENTIFICAR EN
    Cultivos celulares Frotis de biopsias Centrifugados de punciones
    Tejidos fijados

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    Reaccin de Feulgen.
    Feulgen y Rossenberg, 1921. Est basada en la identificacin de un elemento qumico en la pentosa. La hidrlisis cida moderada separa selectivamente del ADN las bases pricas (adenina y guanina) dando un producto de degradacin polinucleotdico: cido apurnico. La ruptura de este enlace glicosdico hace que aparezcan grupos pseudo aldehdicos en el C-1 de la desoxirribosa. Estos grupos aldehdos reaccionarn con el reactivo de Schiff.
    9/2/2013 Prof. TM Laura Ochoa M

    Hidrlisis cida moderada.

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    Factores de los que depende la Hidrlisis.


    Este es un paso crtico por lo que hay que tener en cuenta: El tiempo de exposicin a la hidrlisis cida. pH ([ H+]) al que se lleve a cabo la reaccin, Temperatura. Fijador utilizado en el tejido. Grado de compactacin de la cromatina que depende de la naturaleza del tejido.
    9/2/2013 Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    Reactivo de Schiff.
    pH 1,6-2,0 Si pH entre 0,8 y 1,2 intensidad disminuye. Si pH mayor que 2 intensidad es mayor e inespecfica. Por esto se debe guardar el reactivo en frasco mbar, muy bien tapado y refrigerado.
    9/2/2013 Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    El cido sulfuroso, que contiene el dixido de sulfuro, es


    preparado en el transcurso de la elaboracin del reactivo de Schiff, tras la reaccin del metabisulfito de sodio con el cido

    clorhdrico, el agua. La reaccin con el cido sulfuroso agrega un grupo cido


    sulfnico al carbono central de la estructura del trifenilmetano

    (fucsina bsica). En este punto, la molcula de fucsina bsica es reducida, destruyendo la estructura cromfora transformndose
    en su leucoderivado.
    9/2/2013 Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    Laboratoprio Ciencias Biomdicas Universidad de Valaparaso

    Fijacin en Bouin

    Fijacin en formalina

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    Controles.
    La efectividad de la R. de Feulgen puede ser chequeada de la siguiente manera: Omitir la hidrlisis cida. Determinar para cada muestra el tiempo de hidrlisis ptimo, es decir aquel que rinde un mximo de coloracin. Extraccin enzimtica de los ac. Nucleicos. Extraccin qumica de los ac. Nucleicos.
    9/2/2013 Prof. TM Laura Ochoa M

    Extraccin Qumica.
    TCA 4% a 80C por 15 minutos.(DNA y RNA). Ac. Perclrico, HClO4 10% a 60C minutos (ADN y RNA). Ac. Perclrico, HClO4 10% a 4C toda la noche (RNA). Los reactivos usados para la extraccin qumica son ms baratos pero menos especficos. Estos reactivos deben ser manipulados cautelosamente pues son altamente peligrosos.

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    9/2/2013

    Prof. TM Laura Ochoa M

    También podría gustarte