UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

LAB. DE QUIMICA ORGANICA I

LABORATORIO N4: TECNICAS DE SEPARACION E IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA 1. OBJETIVOS Dominar tcnicas de separacin e identificacin de pigmentos naturales por la tcnica de cromatografa. Tener conocimientos de los principios fisicoqumicos aplicados a la cromatografa. 2. FUNDAMENTO TEORICO

CROMATOGRAFIA Mtodo fsico de separacin en el que los componentes a separar se distribuyen en dos fases, una de las cuales constituye un hecho estacionario de gran desarrollo superficial y la otra un fluido que pasa a travs o a lo largo del lecho estacionario (fase mvil)." En todo proceso cromatogrfico la fase mvil es la que provoca un movimiento de las distintas especias para que abandonen el medio soporte, y la fase estacionaria la que suministra el efecto retardador, selectivo para cada componente, que condiciona que cada uno de ellos se desplace con distinta velocidad. CROMATOGRAFIA EN PAPEL La cromatografa en papel es la tcnica de separacin e identificacin de sustancias qumicas mediante un disolvente que se mueve sobre hojas o tiras de papel de filtro. Se toma una pieza de papel de filtro y cerca de uno de sus extremos se deposita una gota de la solucin que contiene la mezcla de las sustancias que se quieren separas. Se deja secar la gota y quedara la mancha de las sustancias mezcladas. El extremo del papel mas prximo a la mancha se introduce en un disolvente apropiado, pero sin que la mancha llegue a introducirse en l. CROMATOGRAFA DE ADSORCIN EN COLUMNA La fase estacionaria est constituida por un slido que se empaqueta en una columna, normalmente de vidrio. Los componentes a separar se aaden en forma soluble por la parte superior de la columna, quedando retenidos en la misma. Posteriormente los componentes se desplazan arrastrados por una fase mvil lquida.

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL

MAYO, 2013

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

LAB. DE QUIMICA ORGANICA I

Dependiendo de la absorcin selectiva de cada uno de ellos por la fase estacionaria se desplazan a distinta velocidad, efectundose la separacin. Para que haya una separacin efectiva de los componentes, su velocidad a travs de la columna debe ser suficientemente diferente y la longitud de la columna, adecuada. CROMATOGRAFA DE REPARTO EN COLUMNA En cromatografa de reparto la fase estacionaria es un lquido, poco miscible con la fase mvil. Los solutos se distribuyen entre las dos fases dependiendo de su solubilidad en cada una de ellas, es decir, segn su coeficiente de reparto. Aunque el mecanismo fundamental de la separacin es la extraccin o reparto, es prcticamente imposible evitar adsorciones por parte del slido soporte, por lo que muchas de las separaciones son empricas, no pudiendo realizarse un exacto tratamiento terico. Los slidos soportes ms utilizados son el silicagel, el polvo de celulosa y la tierra de diatomeas; menos aplicacin tiene el almidn y el relleno de bolas de vidrio. CROMATOGRAFA SOBRE GELES POROSOS Es un tipo de cromatografa que se aplica, fundamentalmente, a la separacin de productos macromoleculares sobre geles hinchables por agua o por cualquier otro lquido previamente escogido. El fundamento de este tipo de cromatografa consiste en que al hincharse el gel queda una cadena muy abierta con grupos terminales generalmente polares que son capaces de adsorber agua u otros disolventes polares. Segn el nmero de ligaduras entre las grandes cadenas existe un tamao crtico (lmite de exclusin) de molcula que puede entrar en el interior del gel, mientras que las molculas de mayor tamao pasarn a travs del mismo, con lo que, en principio, se origina una separacin de molculas de acuerdo con su diferente tamao. CROMATOGRAFA DE CAPA FINA La llamada capa fina consiste en una placa de vidrio, rectangular o cuadrada, denominadas cromatoplacas, o simplemente placas sobre cuya superficie se deposita una capa uniforme muy delgada (en ocasiones de algunas micras de espesor) de una substancia absorbente, casi siempre silicagel o almina, en condiciones tales que resulte uniformemente extendida y suficientemente adherida. En general, de hace una papilla acuosa con el adsorbente, que se deposita sobre la placa mediante un aplicador adecuado. Las placas se

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL

MAYO, 2013

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

LAB. DE QUIMICA ORGANICA I adsorbente y se

secan en estufa para activar la superficie del encuentran aptas para efectuar la cromatografa. CROMATOGRAFIA DE GASES

Esta tcnica es similar a la cromatografa de columna, con la diferencia de que el sistema es cerrado y la fase mvil es un gas. La separacin de los componentes gaseosos se produce por adsorcin selectiva sobre un slido (C.G.S.) o por reparto entre un gas inerte y un lquido no voltil que constituye la fase estacionaria (C.G.L.). En la actualidad esta tcnica (C.G.L.) es la ms empleada, aplicndose el anlisis de gases o de lquidos y slidos que puedan volatilizarse a temperatura no superior a 400C. L C.G.S. es anloga a la C.L.S. Los componentes del gas problema son sostenidos selectivamente por un slido absorbente dispuestos en columna metlica, recta o en espiral. El gas problema es inyectado en la corriente de un gas inerte que le conduce hasta la columna y que hace la fase mvil. En la distribucin de los componentes del problema entre el gas portador y el slido absorbente se verifica una separacin por lo que emergen de la columna a distintos tiempos pasando finalmente por un detector que los identifica y cuantifica. En la C.G.L. la fase estacionaria es un lquido no voltil absorbido en un soporte slido que rellena la columna. Los componentes de gas problema son desplazados selectivamente, como en la cromatografa de reparto, por el gas portador que fluye de manera continua. Los componentes de la muestra se separan de acuerdo con sus coeficientes de reparto entre las dos fases. CONSTANTE Rf El ltimo punto alcanzado por el disolvente en su avance se denomina frente del disolvente. Puede usarse como punto de referencia para expresar las distancias relativas recorridas por las diferentes sustancias en un cromatograma.

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL

MAYO, 2013

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA 3. DATOS Y RESULTADOS Solvente hexano puro Componente: caroteno amarillo

LAB. DE QUIMICA ORGANICA I

Rf=distancia recorrida por un compuesto/distancia recorrida por el solvente Rf=1.2/5.4=0.22 Solvente hexano (1.2) Componente: caroteno amarillo Rf=distancia recorrida por un compuesto/distancia recorrida por el solvente Rf=(2+1.3)/5.4=0.6111 Componente: clorofila verde Rf=distancia recorrida por un compuesto/distancia recorrida por el solvente Rf=2/5.4=0.3703 Solvente hexano (1:3) Componente: caroteno amarillo Rf=distancia recorrida por un compuesto/distancia recorrida por el solvente Rf=(2.4+1.2)/5.4=0.667 Componente: clorofila verde Rf=distancia recorrida por un compuesto/distancia recorrida por el solvente Rf=2.4/5.4=0.44 4. DIAGRAMA DE FLUJO 5. OBSERVACIONES Siendo la silica gel nuestra fase estacionaria en lacapa fina, un polvillo blanco. Se prepar la papilla y luego se calent en la estufa para la activacin. En nuestra placa queda nuestra silica gel seca adherida a la superficie. Una vez armado nuestro equipo para la cromatografa de columna, percibimos que al aadir nuestro pigmento en medio de hexano, la almina se coloreo amarilla; esto nos indicaba la presencia de carotenos.

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL

MAYO, 2013

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

LAB. DE QUIMICA ORGANICA I

Evitando la formacin de burbujas aadimos hexano-acetona, con este solvente se observ que en la columna de almina se coloreo verde, nos indicaba la presencia de clorofila.

Al realizar la cromatografa de capa fina con las placas activadas, se not que el hexano puro nos sealaba la presencia de carotenos, mientras que en las otras mezclas de acetona-hexano percibimos el color amarillo carotenos y verde clorofila.

6. CONCLUSIONES En este laboratorio se puede concluir que a medida que aumentamos la polaridad de los solventes en ambas cromatografas se llega a separar mayor cantidad de pigmentos de la solucin muestra (en nuestro caso se recolecto un pigmento verde y un pigmento amarillo). El pigmento verde es una combinacin de varios tipos de clorofila pero la clorofila a y b en mayor cantidad. El pigmento amarillo de debe a las xantfilas en menor cantidad en las plantas verdes como la espinaca.

7. BIBLIOGRAFIA Galagovsky Kurman, Lydia. QUIMICA ORGANICA, FUNDAMENTOS TEORICO- PRACTICOS PARA EL LABORATORIO. Argentina, Ed. Universitaria de Buenos Aires, 5ta Edicin, Pg. 19, 23,39-40. Fieser, Louis F. EXPERIMENTOS ORGANICOS. Ed.Reverte S.A,1 Edicin, Ao 1967, Pg. 4-8,22-28 Brewster, Ray Q; Vanderwert, Calvin A; Mc Ewen, William. CURSO PRACTICO DE QUIMICA ORGANICA. Ed. Alhambra, Tercera edicin, Ao 1977, Pg. 32-38, 40-48. 8. APENDICE

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL

MAYO, 2013

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

LAB. DE QUIMICA ORGANICA I

APLICACIONES INDUSTRIALES DE LA CROMATOGRAFIA EN LA INDUSTRIA 1. Separaciones de componentes de plantas medicinales. 2. Separacin de componentes de una sntesis orgnica. 3. Separacin de colorantes. 4. Separacin e identificacin de hioscina y de morfina. 5. Separacin de cido actico, alcohol etlico y metil-etil cetona. 6. Separacin e identificacin de los compuestos intermedios de una sntesis orgnica, por ejemplo en la sntesis del naftaleno, identificacin de cido oftlico, anhdrido oftlico, benceno. 7. En la produccin sinttica de acetaminofn, identificacin de la imina de la N-acetilbenzoquinona. 8. Identificacin de levo-alfa-cido aminoadipico, durante la biosntesis de penicilina. 9. Identificacin de 8-nitroisoquinolina, durante la sntesis de Ciprofloxacina, un antibitico. FUENTE: http://organica1.org/1345/Cromatografia-Fundamentos-yAplicaciones COMENTARIO Nos podemos dar cuenta que la tcnica de cromatografa es una tcnica utilizada para el reconocimiento y anlisis de componentes de ya sea de una mezcla o solucin. En nuestra experiencia de laboratorio la utilizamos para identificar la clorofila y los carotenos. Existen otros tipos de aplicaciones industriales de la cromatografa del tipo LIQUIDA DE ALTA RESOLUCION utilizada casi en su totalidad para el anlisis de alimentos.

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA Y TEXTIL

MAYO, 2013