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    Diagrama de Proceso: Caracterización Metabólica de Bacterias

    Cargado por

    Fernanda Martinez
    El documento describe los resultados de pruebas bioquímicas realizadas para caracterizar el metabolismo de dos bacterias de referencia (Enterobacter spp y Salmonella sps) y dos bacterias aisladas (una Gram positiva y una Gram negativa). Las pruebas incluyeron hemólisis, caseinasa, catalasa, amilasa, utilización de sacarosa y manitol, ureasa, fermentación de glucosa y lactosa, citrato, oxidación/fermentación de glucosa y otras. Los resultados permitieron hacer una aproximación para identificar las bacterias aisladas.

    Copyright:

    Attribution Non-Commercial (BY-NC)

    Diagrama de Proceso: Caracterización Metabólica de Bacterias

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    Fernanda Martinez
    132 vistas6 páginas
    El documento describe los resultados de pruebas bioquímicas realizadas para caracterizar el metabolismo de dos bacterias de referencia (Enterobacter spp y Salmonella sps) y dos bacterias aisladas (una Gram positiva y una Gram negativa). Las pruebas incluyeron hemólisis, caseinasa, catalasa, amilasa, utilización de sacarosa y manitol, ureasa, fermentación de glucosa y lactosa, citrato, oxidación/fermentación de glucosa y otras. Los resultados permitieron hacer una aproximación para identificar las bacterias aisladas.

    Título original

    Diagrama de proceso: Caracterización metabólica de bacterias

    Derechos de autor

    © Attribution Non-Commercial (BY-NC)

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    El documento describe los resultados de pruebas bioquímicas realizadas para caracterizar el metabolismo de dos bacterias de referencia (Enterobacter spp y Salmonella sps) y dos bacterias aisladas (una Gram positiva y una Gram negativa). Las pruebas incluyeron hemólisis, caseinasa, catalasa, amilasa, utilización de sacarosa y manitol, ureasa, fermentación de glucosa y lactosa, citrato, oxidación/fermentación de glucosa y otras. Los resultados permitieron hacer una aproximación para identificar las bacterias aisladas.

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    El documento describe los resultados de pruebas bioquímicas realizadas para caracterizar el metabolismo de dos bacterias de referencia (Enterobacter spp y Salmonella sps) y dos bacterias aisladas (una Gram positiva y una Gram negativa). Las pruebas incluyeron hemólisis, caseinasa, catalasa, amilasa, utilización de sacarosa y manitol, ureasa, fermentación de glucosa y lactosa, citrato, oxidación/fermentación de glucosa y otras. Los resultados permitieron hacer una aproximación para identificar las bacterias aisladas.

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    Caracterizacin metablica de bacterias

    Diagrama de proceso: Caracterizacin metablica de bacterias

    Cultivo puro

    Hacer Gram

    Suspensin

    Sembrar

    Estra recta

    Asada Caldo nitratos

    Picadura y estra recta

    Picadura Gelatina nutritiva

    Agar Sangre

    Agar Kligler Rojo fenol + carbohidrato

    Agar leche descremada

    SIM

    Agar DNA

    Caldo urea

    MIO/LIA

    Agar Nutritivo

    Rojo de metilo/ Voges Proskawer

    Hugh & Leifson

    Agar almidn

    Agregar aceite mineral estril

    Citrato de Simmons

    Incubar a 37C/ 24h

    Interpretar resultados

    Objetivos Caracterizar fisiolgicamente, mediante pruebas bioqumicas una bacteria aislada y una bacteria de referencia. Interpretar adecuadamente pruebas especficas y relacionarlas con las pruebas metablicas.

    Resultados. Observaciones microscpicas de las cepas.

    Microscopio: Z-10 Fecha: 22/10/2013 Muestra: cepa pura Gram (+) Tincin: Gram Aumento: 1000 veces Descripcin: Se observan cocos Gram (+) Agrupados en forma racimos

    Microscopio: Z-10 Fecha: 22/10/2013 Muestra: cepa pura Gram (-) Tincin: Gram Aumento: 1000 veces Descripcin: Se observan bacilos alargados Gram (-) agrupados en redes.

    Microscopio: Z-10 Fecha: 22/10/2013 Muestra: Enterobacter spp Tincin: Gram Aumento: 1000 veces Descripcin: Se observan bacilos cortos Gram (-)

    Microscopio: Z-10 Fecha: 22/10/2013 Muestra: Salmonella spp Tincin: Gram Aumento: 1000 veces Descripcin:

    Tabla 1. Caracterizacin fisiolgica de dos bacterias de referencia. Cepa referencia Nombre: Enterobacter spp Resultados obtenidos + + + + + + Anaerobio facultativo -* / + Resultados en la bibliografa Cepa referencia Nombre: Salmonella sps Resultados obtenidos + + + Anaerobio facultativo + -* / + + Resultados en la bibliografa

    Prueba bioqumica

    Hemlisis Caseinasa DNA-asa Catalasa Amilasa Utilizacin de sacarosa Utilizacin de manitol Ureasa Fermentacin de Glucosa Kliger Fermentacin de Lactosa Produccin de H2S Oxidacin/Fermentacin de Glucosa Citrato Gelatinasa Produccin de H2S SIM Indol Movilidad Reduccin de NO3VP Hidrlisis de Fenilalanina Descarboxilacin Rojo de Metilo *No concluyente.

    + + + Anaerobio facultativo + + -

    + + +/+ + Anaerobio facultativo + + + -

    + +

    Tabla 2. Caracterizacin fisiolgica de dos bacterias aisladas.

    Prueba bioqumica

    Cepa aislada Gram (+) Resultados obtenidos

    Cepa aislada Gram(-) Resultados obtenidos + + + +

    Hemlisis Caseinasa DNA-asa Catalasa Amilasa Utilizacin de sacarosa Utilizacin de manitol Ureasa Kliger Fermentacin de Glucosa

    + +

    Fermentacin de Lactosa Produccin de H2S Oxidacin/Fermentacin de Glucosa Citrato Gelatinasa Produccin de H2S SIM Indol Movilidad Reduccin de NO3VP Hidrlisis de Fenilalanina Descarboxilacin Rojo de Metilo

    / aerobio -* / / / -

    / Anaerobio facultativo + -* / / + / -

    *No concluyente

    Interpretacin de resultados
    La identificacin de un aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de caractersticas y diferentes criterios en la evaluacin de similitudes. Los ensayos bioqumicos tradicionalmente utilizados, llamadas pruebas bioqumicas, generalmente determinan la actividad de una va metablica (conjunto dereacciones qumicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo yque la bacteria al crecer transforma o no. En la prctica llevamos a cabo diferentes pruebas bioqumicas con la intencin de caracterizar y hacer una aproximacin de identificacin de dos cepas de bacterias, una Gram (+) y otra Gram (-). Las pruebas realizadas, arrojaron los siguientes resultados: En la prueba de hemlisis, tanto para las dos cepas de referencia, como para la bacteria Gram (+) y Gram (-) en estudio, los resultados fueron negativos. Muchos microorganismos son capaces de crecer en agar sangre y cuando lo hacen responden de diferente manera segn realicen o no la lisis de los glbulos rojos (hemlisis) producida por la accin de una enzima llamada hemolisina. En nuestro caso, ninguno de los microorganismos creci ni realiz la hemlisis (es una hemlisis gamma o no hemlisis). En la prueba de la caseinasa, slo la cepa aislada Gram (+) dio resultado positivo. Esta prueba determina la presencia de proteasas (enzima caseinasa), que actan sobre la casena presente en el medio generando polipptidos y/o aminocidos. La prueba DNA-asa result negativa en todas las cepas analizadas. Los m.o. DNAsa positivos degradan el DNA cuando son incubados en unmedio que lo contiene. La prueba de la catalasa dio positiva en las dos cepas de referencia y en la cepa Gram (+) de estudio, mas dio negativa en la Gram (-) en estudio. Esta prueba indica la presencia de la enzima catalasa. La prueba de amilasa fue positiva en las dos cepas de referencia y negativa para las dos cepas de estudio. Esto indica que nuestras cepas de estudio no poseen la enzima amilasa que realiza la hidrlisis del almidn. En las pruebas de utilizacin de sacarosa y manitol, slo la bacteria Gram (+) y Shigella sp. dieron resultados negativos en ambos casos. Las dems fueron positivas, indicando que pueden utilizar sacarosa y manitol como fuente de carbono. La prueba de ureasa fue negativa en todas las cepas analizadas. Esta prueba, determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea, formando dos molculas de amoniaco por accin del enzima ureasa. Esta

    degradacin produce amoniaco que har variar el color del indicador de amarillo a rojo, ponindose as de manifiesto la actividad ureasa. La prueba de fermentacin de glucosa fue positiva para todas las cepas y la de fermentacin de lactosa, slo fue positiva en Enterobacter spp. La prueba de citrato dio negativa para Enterobacter spp y la cepa Gram (+) aislada y dio positiva en Shigella spp y la Gram (-) aislada. Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como nica fuente de carbono y compuestos amoniacales como nica fuente de nitrgeno en su metabolismo, provocando una alcalinizacin del medio. Se cultiva el microorganismo en agar citrato de Simmons. Este medio contiene citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrgeno respectivamente y azul de bromotimol como indicador de pH. Todas las muestras, a excepcin de la Gram (+) aislada resultaron ser microorganismos anaerobios facultativos, de acuerdo con la prueba de Oxidacin/Fermentacin de Glucosa. La Gram (+) nos dio que era un microorganismo aerobio. La prueba de gelatinasa result negativa y no concluyente para todas las cepas. En esta prueba se pretende determinar la capacidad de un microorganismo de producir enzimas de tipo proteolticas (gelatinasas) que licuan/hidrolizan la gelatina o muestran cambios caractersticos debido a los productos de degradacin. Si luego de cierto tiempo de refrigeracin, la gelatina sigue en estado lquido, es indicativo de que la prueba result positiva y por tanto la bacteria tiene gelatinasa al licuar el medio. La prueba del indol arroj resultado negativo para la Enterobacter spp y no se pudo determinar en las dems muestras. Mediante esta prueba se detecta la liberacin de indol en un cultivo bacteriano. Dicha liberacin se debe a la degradacin del aminocido triptfano mediante el enzima triptofanasa. Debido a que algunos tubos se rompieron, no nos fue posible determinar algunas pruebas. No todas las pruebas se pudieron encontrar en la bibliografa. Por los resultados de las pruebas se piensa que la muestra Gram (+), de acuerdo con la bibliografa podra ser: S. cohnii spp

    Conclusiones Las pruebas bioqumicas realizadas, nos permitieron hacer una aproximacin para la identificacin del microorganismo presente en nuestras cepas aisladas Gram (+) y Gram (-). Las pruebas bioqumicas realizadas nos permiten hacer una caracterizacin del metabolismo que nuestras bacterias de estudio pueden realizar. Estas pruebas rpidas nos permiten hacer una aproximacin para identificar bacterias y nos muestran algunas caractersticas metablicas, mas no podemos saber an exactamente lo que tenemos.

    Bibliografa http://apps.who.int/medicinedocs/index/assoc/s16330s/s16330s.pdf Bailey, Scott, Diagnstico Microbiolgico, Editorial Panamericana, 1989

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