PRACTICA N 7

AGLUTINACION PASIVA
FACTOR REUMATOIDEO

Objetivo

Al termino de la practica el alumno tendr la habilidad de identificar la presencia de
anticuerpos dirigidos contra inmunoglobulina en procesos inflamatorios



Introduccin

En el suero de personas con ciertos padecimientos inflamatorios como puede ser artritis y
fiebre reumtica aparecen anticuerpos dirigidos contra las inmunoglobulinas del individuo a
estos anticuerpos se les denomina Factor Reumatoide. la especificidad de esta reaccin es
variable y se puede ver tres formas caractersticas

a.- Reaccin de inmunoglubulinas extraas de conejo o de caballo
b.- Reaccin de inmunoglubulinas humanas desnaturalizada
c.- Inmunoglobulinas antlogas

El factor reumatoide por lo general es un anticuerpo de la clase IgM que puede reaccionar
con uno o ms antgenos especficos

La produccin del factor Reumatoide es resultado de respuesta del individuo hacia uno o
ms determinantes antignicos especficos presentes en sus propias gammaglobulinas.
El factor Reumatoide reacciona con complejos Ag-Ab, en casi todos los casos el factor
Reumatoide forma complejos solubles con IgG in vivo los cuales pueden ser eliminados de
la circulacin sin causar ninguna alteracin por el sistema retculo endotelial. en raros casos
el complejo factor reumatoide-inmunoglobulinas son solubles a temperatura corporal, pero
en fro se pueden precipitar en el suero por el fro ( crioglobulinas ) los individuos que
presentan crioglubulinas son ms predispuestos a sufrir lesiones secundarias . Los niveles
sricos de FR guardan relacin con la aparicin de ndulos subcutneos. Por lo general el
factor Reumatoide est constituido por inmunoglobulinas con especificidad par los
fragmentos FC de la IgG la mayora de los mtodos de laboratorio detectan el Factor
Reumatoide IgM pero tambin hay reaccin en las inmunoglobulinas de la clase IgM, IgG
y de la IgA. El Factor Reumatoide est presente en los siguientes padecimientos artritis,
Lupus eritematoso, esclerosis, Mononucleosis infecciosa y algunos casos de poliomielitis la
determinacin del factor Reumatoide no es muy especfica pero si es muy sensible lo cual
puede dar positiva en los siguientes padecimientos hipergamaglubulinemia,
hepatopatas, sfilis padecimientos infecciosos crnicos como son lepra y tuberculosis pero
se hacen negativas cuando el individuo mejora. En investigaciones se a visto que un
reducido nmero de personas sanas dan positiva la prueba y personas enfermas con
artritis dan negativa la prueba. El principio de la prueba se basa en la reaccin del
ltex sensibilizado con gama globulina humana y el factor Reumatoide.




La granulosidad del ltex puede confundir con una prueba positiva, sueros lipmicos
pueden dar resultados falsos positivos.

Material

Ltex sensibilizado
Solucin amortiguadora
Aplicadores
Placa de aglutinacin
Tubos de ensayo
Metodologa
CUALITATIVA
1.- Tomar una muestra sangunea y dejar que se retraiga el coagulo separa el suero
2.- Preparar una dilucin 1:20 del suero problema con la solucin amortiguadora
3.- Marcar una placa de la siguiente manera

Testigo Positivo Problema Testigo Negativo





3.- Colocar 0.05 ml del dilucin del suero en la marca Prob.
4.- Colocar 0.05 ml de testigo positivo en la primer marca
5.- Colocar 0.5 ml de testigo negativo en la tercer marca
6.- Adicionar 1 gota de reactivo de ltex a cada uno de los controles y del problema
7.- Con ayuda de un aplicador mezclar las gotas y con movimientos circulares
homogeneizar
8.- Al cabo de dos minutos ver la reaccin de los testigos y el problema (buscar presencia
de aglutinacin)

CUANTITATIVA


1.- Prepara una serie de Diluciones con factor de 2 partiendo del suero diluido hasta una
dilucin final de 1:640
2.- Colocar 0.05 ml de cada dilucin en un laminilla
3.- Adicionar a cada dilucin 1 gota de partculas de ltex
4.- Con ayuda de un aplicador mezclar y homogeneizar con movimientos circulares
5.- Al cabo de dos minutos buscar la presencia de aglutinacin
6.- El ttulo de factor Reumatoide se expresa como la reciproca de la dilucin ms alta
donde se presente aglutinacin



PRACTICA N 8

PROTENA C REACTIVA

Objetivo

Al trmino de la practica el alumno adquirir la habilidad para identificar por medio de una
reaccin la presencia de la protena c reactiva en el suero de un paciente con una infeccin
bacteriana de tipo agudo

Introduccin

El nombre de protena C reactiva deriva de que en personas que padecan neumona lobular
se extraa suero y el extracto era un carbohidrato que se le denomino c y al protena humana
capas de precipitarlo se le denomino PCR

La protena c reactiva aparece en el plasma en individuas que padecen procesos patolgicos
donde hay inflamacin o necrosis como sucede en la fase aguda de infecciones bacterianas
de ah que la protena c reactiva se puede detectar de 18 a 24 hrs. despus del inicio de la
enfermedad alcanzando un mximo durante la fase aguda disminuyendo cuando el paciente
sana.

Un elevado ttulo de protena c reactiva no es especfica de inflamacin, ya que resulta
positiva en todas las infecciones bacterianas y en algunos procesos neoplsicos as
como en destruccin de tejidos como es el caso de infarto al miocardio. esta determinacin
es de gran ayuda con fines epidemiolgicos ya que se puede monitorear la actividad
con pacientes con fiebre reumtica y artritis Reumatoide.

La velocidad de eritrosedimentacin se eleva con prueba positiva de PCR
aumentando primero la PCR despus la VSE pero la PCR retorna antes a la normalidad
despus de la VSE. La PCR es un glicoprotena que aparece en el suero con padecimientos
antes mencionados.

Esta determinacin se basa en el principio de que la PCR presente en el suero del paciente
sirve como anticuerpo y el ltex sensibilizados contra la glicoprotena que se encuentra en
el suero producindose un aglutinacin si est presente

Material

Ltex sensibilizado anti PC
Amortiguador salino de glicina
Suero control negativo
Suero control positivo
Aplicadores
Placa de aglutinacin
Centrifuga
Tubos de ensayo




Metodologa

1.- Tomar una muestra sangunea sin anticoagulante y esperar que se retraiga el coagulo
2.- Separar el suero
3.- Con el suero realizar una dilucin 1:20 con la solucin amortiguadora
4.- Poner 0.05 ml de la dilucin en la laminilla
5.- Colocar 0.05 ml de suero control positivo
6.- Colocar 0.05 ml de suero control negativo
7.- Agregar una gota de partculas de ltex sensibilizado a cada gota adicionada ( problema,
positivo, negativo )
8.- Con ayuda de un aplicador mezclar las gotas (utilizar aplicador diferente para cada
mezcla)
9.- Con movimientos circulares homogeneizar la laminilla
10.-Esperar dos minutos y verificar los controles por medio de aglutinacin en el control
positivo y no aglutinacin en el control negativo reportar el suero problema de acuerdo a
su comportamiento con los controles.


PRACTICA N 9


A.S.O.

Objetivo

Al trmino de la practica el alumno ser capaz de demostrar en un suero problema la
presencia de antiestreptolisinas

Introduccin

Las infecciones estreptoccicas son frecuentes en nios en edad escolar de ah que sea
posible detectar los anticuerpos en respectivos tal es el caso de la antiestreptolisina-
O (ASO) esta es una hemolisina lbil al oxgeno, pero es activa a eritrocitos humanos y a
los de conejo. La estreptolisina es producida por la mayora de las cepas Lancefield de
estreptococos del grupo A aunque algunas cepas del grupo C y G tambin la producen.

La determinacin de los ttulos de antiestroptolisina se basa en hacer reaccionar el antgeno
del estreptococo del grupo A con Diluciones del suero del paciente y glbulos rojos del tipo
O Rh positivo al 5% para valor la no hemolisis (que es donde se inactiva toda la
estreptolisina).

Los ttulos estreptolisina se elevan en pacientes que presentan infecciones estreptoccicas
no supurativa tal es el caso de Fiebre Reumtica y Glomerulonefritis aguda.

Los estreptococos no solamente producen reaccin Ag-Ab por antiestreptolisinas sino que
tambin producen otro tipo de enzimas tal es el caso de:

1.- Hialuronidas (AH)
2.- Antiestreptocinasa
3.- Antidesoxirribonucleasa B (anti-DNAasa)
4.- Antidifosfopiridinanucleotidasa ( anti-DPNasa )

En los pacientes que se sospecha de una infeccin no supurante por estreptococo la
determinacin de eleccin para detectarla es la ASO pero para descartar cualquier error se
recomienda realizar dos o ms determinaciones de las enzimas que producen reaccin Ag-
Ab.
Material

Ltex sensibilizado anti PC
Amortiguador salino de glicina
Suero control negativo
Suero control positivo
Aplicadores
Placa de aglutinacin
Centrifuga
Tubos de ensayo




Metodologa

1.- Tomar una muestra sangunea sin anticoagulante y esperar que se retraiga el coagulo
2.- Separar el suero
3.- Con el suero realizar una dilucin 1:20 con la solucin amortiguadora
4.- Poner 0.05 ml de la dilucin en la laminilla
5.- Colocar 0.05 ml de suero control positivo
6.- Colocar 0.05 ml de suero control negativo
7.- Agregar una gota de partculas de ltex sensibilizado a cada gota adicionada ( problema,
positivo, negativo )
8.- Con ayuda de un aplicador mezclar las gotas (utilizar aplicador diferente para cada
mezcla)
9.- Con movimientos circulares homogeneizar la laminilla
10.-Esperar dos minutos y verificar los controles por medio de aglutinacin en el control
positivo y no aglutinacin en el control negativo reportar el suero problema de acuerdo a
su comportamiento con los controles.