MEDIOS DE USO COMN EN EL LABORATORIO

A continuacin se exponen los medios ms utilizados en el laboratorio de

Microbiologa con sus caractersticas.
AGAR SANGRE
Formacin:
Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos
microorganismos. Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y
cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de
una gran variedad de muestras, como para la observacin de reacciones de hemlisis (es
el fenmeno de la desintegracin de los glbulos rojos o hemates)
Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio
agar chocolate.

Frmula (en gramos por litro)

Infusin de msculo de corazn

375.0

Peptona

10.0

Cloruro de sodio

5.0

Agar

15.0

pH final: 7.3 0.2

Aadir en forma asptica un 5% de sangre estril desfibrinada a temperatura ambiente, el

agar debe estar a 45C.
Siembra: Por inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de
cultivo.
Incubacin: El tiempo, temperatura y atmsfera de incubacin, dependern del
microorganismo que se quiera aislar.
Tipo de bacterias:
Microorganismos

Crecimiento

Hemlisis

E. coli

Abundante

--

S. aureus

Abundante

Beta

S. pyogenes

Abundante

Beta

S. pneumoniae

Abundante

Alfa

S. pneumoniae

Abundante

Alfa

Crecen grmenes aerobios y anaerobios rpidamente, as como los del gnero Cndida.
Tambin permite el crecimiento de algunos grmenes exigentes como estreptococos,
pneumococos, Brucella, corinebacterias, Erysipelothrix y Pasteurella.
Medio preparado: mbar.
Medio preparado con 5% de sangre de carnero: rojo cereza.
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

AGAR CHOCOLATE
Formacin:
Este medio utiliza la misma base que el Agar Sangre.
Frmula (en gramos por litro)

Infusin de msculo de corazn

375.0

Peptona

10.0

Cloruro de sodio

5.0

Agar

15.0

pH final: 7.3 0.2

Despus de aadir la sangre y agitando frecuentemente se mantiene el medio de

cultivo a 80C por 10 minutos hasta que adquiera un color pardo chocolatado.
Cmo acta:
La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo,
que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, an de aquellos
nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10 %, aporta
nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemlisis.

Tipo de bacterias:
Permiten el aislamiento de gonococos y meningococos, por en el que pueden
crecer muchos otros microorganismos exigentes de la mayor parte de los
grmenes encontrados en patologa humana o veterinaria
Tambin, para el aislamiento de las Neisserias patgenas y de los Haemophilus.
Microorganismos

Crecimiento

Hemlisis

E. coli

Abundante

--

S. aureus

Abundante

Beta

S. pyogenes

Abundante

Beta

S. pneumoniae

Abundante

Alfa

S. pneumoniae

Abundante

Alfa

Siembra: Por inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de
cultivo.
Incubacin: El tiempo, temperatura y atmsfera de incubacin, dependern del
microorganismo que se quiera aislar.

AGAR MCCONKEY
Formacin:
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo,
aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa
en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo. Los microorganismos no fermentadores de
lactosa producen colonias incoloras. Se incluye tambin cristal violeta para inhibir el
crecimiento de las bacterias Gram positivas, especialmente estafilococos y enterococos.

Cmo acta:
Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Peptona

17.0

Pluripeptona

3.0

Lactosa

10.0

Mezcla de sales biliares

1.5

Cloruro de sodio

5.0

Agar

13.5

Rojo neutro

0.03

Cristal violeta

0.001

Suspender 50 g del polvo por litro de agua

destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta
uniformar. Calentar suavemente y hervir 1 a 2
minutos hasta disolver. Esterilizar en autoclave
a 121C durante 15 minutos.

pH final: 7.1 0.2

Siembra

- Sembrar en superficie.
- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar aproximadamente
15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 C.

Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica

Bacterias:
Microorganismos

Colonias

Escherichia coli

Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae

Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium

Incoloras, transparentes

Shigella flexneri

Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis

Incoloras, transparentes

Enterococcus faecalis

Diminutas, incoloras, opacas

Caractersticas del medio

Medio preparado: rojo prpura
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

AGAR SLMONELLA-SHIGELLA
Formacin:
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, est dada por la sales
biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la
mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico
a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa
capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH,
obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Cmo acta:

Se dise para diferenciar fermentadores de lactosa de los que no la fermentan,

proporcionando buena inhibicin de coliformes sin restringir el crecimiento de otros bacilos
Gram-negativos (BGN) patgenos.

Instrucciones

Frmula (en gramos por litro)

Pluripeptona

5.0

Extracto de carne

5.0

Lactosa

10.0

Mezcla de sales biliares

8.5

Citrato de sodio

8.5

Tiosulfato de sodio

8.5

Citrato frrico

1.0

Agar

13.5

Verde brillante

Rojo neutro

Suspender 60 g del polvo por litro de agua

destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta
homogeneizar. Calentar a ebullicin durante 2 o 3
minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.
Enfriar a 45-50C y distribuir unos 20 ml por placa.
Secar la superficie del medio unos minutos en la
estufa.

0.00033

0.025

pH final: 7.0 0.2

Siembra: Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.

Recomendaciones: se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar E.M.B o de
agar Mac Conkey.

Incubacin
Durante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

Bacterias: Salmonella y Shigella (y otros no fermentadores de lactosa)

Bacteria
Salmonella enteritidis
Proteus mirabilis
Shigella flexineri
Enterococcus faecalis
Enterobacter aerogenes

Crecimiento bacterias
Bueno
Aceptable
Regular
Escaso
Regular

Color
Incolora
Incolora
Incolora
Incolora
Crema/rosa

Medio preparado: rojo naranja.

Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C.

AGAR NUTRITIVO
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de
microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos.
Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y
otros materiales de importancia sanitaria.
Formacin: Por las caractersticas de sus componentes es un medio usado para el
cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. No
contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y
nitrgeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el
enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de
microorganismos exigentes.

Frmula (en gramos por litro)

Pluripeptona

5.0

Extracto de carne

3.0

Cloruro de sodio

8.0

Agar

15.0

Instrucciones

Suspender 31 g de polvo por litro de agua

destilada. Mezclar y dejar reposar 5
minutos. Calentar suavemente agitando y
hervir 1 o 2 minutos hasta su disolucin.
Distribuir y esterilizar a 121C durante 15
minutos.

pH final: 7.3 0.2

Siembra: En superficie o por la tcnica de pour plate, segn el uso a que se destine.
Incubacin: En aerobiosis, a 35-37 C durante 24 horas.

Bacterias:
a-Agar nutritivo:

Microorganismos

Crecimiento

P. mirabilis

Bueno-excelente

E. coli

Bueno-excelente

S. aureus

Bueno-excelente

B. cereus

Bueno-excelente

E. faecalis

Bueno-excelente

P. aeruginosa

Bueno-excelente

b-Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero:

Microorganismos

Crecimiento

Hemlisis

S. pyogenes

Abundante

Beta

S. pneumoniae

Abundante

Alfa

Abundante

Alfa

S. pneumoniae

Medio preparado: mbar claro a medio ligeramente opalescente.

Medio deshidratado: a 10-35 C
Medio preparado: a 2-8 C.

AGAR CALDO NUTRITIVO

Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo de
microorganismos
con
escasos
requerimientos
nutricionales.
Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y
otros materiales de importancia sanitaria.
Formacin: Medio no selectivo, contiene pluripeptona y extracto de carne que
constituyen la fuente de carbono y nitrgeno, necesarias para el adecuado desarrollo
bacteriano.
Puede ser utilizado adems, como pre-enriquecimiento en la bsqueda de Salmonella
spp., a partir de alimentos, ya que permite recuperar clulas daadas, diluir metabolitos
txicos y sustancias inhibitorias.

Frmula (en gramos por litro)

Pluripeptona

5.0

Extracto de carne

3.0

Instrucciones

Emplear 8 g de polvo por litro de agua

destilada. Si es necesario, calentar
hasta disolver. Distribuir y esterilizar
en autoclave a 118-121C durante 15
minutos.

pH final: 6.9 0.2

Siembra: Por inoculacin directa de la muestra o del microorganismo en estudio.

Incubacin: En aerobiosis, a 35-37 C durante 24 horas.
Bacterias:
Examinar los tubos para evaluar el crecimiento por turbiedad. Cuando sea necesario,
subcultivar en medios slidos apropiados y realizar la identificacin bioqumica.
Microorganismos
Crecimiento
P. mirabilis
E. coli

Bueno
Bueno

S. aureus

Bueno

S. epidermidis

Bueno

S. typhimurium

Bueno

P. aeruginosa

Bueno

Medio preparado: mbar claro.

Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

AGAR SABOURAUD GLUCOSADO

Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos patgenos y
saprfitos. Tambin es til para el cultivo de levaduras.
.
Formacin:
Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos, particularmente
los asociados con infecciones cutneas (piel, pelo, etc.)
.
En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para el desarrollo
de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH
cido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias.
Adems, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento.

Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Pluripeptona

10.0

Glucosa

40.0

Cloranfenicol

0.05

Agar

15.0

Suspender 65 g del polvo por litro de agua

destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta
uniformar. Calentar agitando frecuentemente y
hervir 1 minuto hasta disolver. Distribuir y
esterilizar 15 minutos a 118-121C. Mantener en
lugar fresco, pues la exposicin al calor hidroliza
los componentes. Distribuir en placas o en tubos
con cierre hermtico

pH final: 5.6 0.2

Siembra: Depende del uso, puede ser tanto en tubo como en placa.
referencias de mtodos recomendados.

Consultar
.

Incubacin: El tiempo de incubacin depender del microorganismo que se est

buscando aislar.
.
Bacterias:

Microorganismos

Crecimiento

Saccharomyces cerevisiae

Bueno

Aspergillus niger

Bueno

Candida albicans ATCC 10231

Bueno

Medio preparado: mbar claro, ligeramente opalescente sin ningn precipitado.

Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C.
.
Medio preparado: a 2-8 C.

AGAR MANITOL salado

Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de
estafilococos. Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir
de muestras clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros materiales de importancia
sanitaria.Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas de
Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque
algunas especies pueden no desarrollar.

Formacin: Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin

salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las

colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa
negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias
sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles,
posteriormente, la prueba de la coagulasa. En el medio de cultivo, el extracto de carne y
la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el
manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta
concentracin) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y
el rojo fenol es el indicador de pH. Las bacterias que crecen en un medio con alta
concentracin de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se modifica el
pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.

Frmula (en gramos por litro)

Extracto de carne

1.0

Pluripeptona

10.0

d-Manitol

10.0

Cloruro de sodio

75.0

Agar

15.0

Rojo de fenol

0.025

Instrucciones

Suspender 111 g de polvo por litro de agua

destilada. Reposar 5 minutos y mezclar
calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos.
Distribuir y esterilizar en autoclave a 118121C durante 15 minutos.

pH final: 7.4 0.2

Siembra: Sembrar en superficie un inculo denso de la muestra.

Incubacin: De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C,
Se recomienda la incubacin durante 3 das a 32 C, en aerobiosis.

en

aerobiosis.

Bacterias:

Microorganismos

Crecimiento

Caractersticas de las colonias

Staphylococcus aureus

Excelente

Amarilla

Staphylococcus epidermidis

Bueno

Roja

Escherichia coli

Inhibido

Inhibido

Klebsiella pneumoniae

Inhibido

Inhibido

Medio preparado: rojo

Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

AGAR MULLER HINTON

Este medio de cultivo ha sido recomendado universalmente para la prueba de sensibilidad
a los antimicrobianos. Adems es til con el agregado de sangre para el cultivo y
aislamiento de microorganismos nutricionalmente exigentes.
Formacin:
El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National Committee for Clinical
Laboratory Standards (NCCLS), recomend su uso en forma rutinaria para la realizacin
del antibiograma en medio slido, debido a una serie de factores que se detallan a
continuacin: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad,
su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la
mayora de los patgenos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido
evaluados
y
avalados
usando
este
medio
de
cultivo.
Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es til para realizar las pruebas de
sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos.

Frmula (en gramos por litro)

Infusin de carne

300.0

Peptona cida de casena

17.5

Instrucciones

Suspender 37 g del medio deshidratado en un litro de agua

destilada. Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Calentar con
agitacin frecuente y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121C
durante 15 minutos. Enfriar a 45-50C y distribuir a cajas de
Petri (o agregar los suplementos que se desee) hasta un nivel
de 4 mm sobre una superficie horizontal (25-30 ml en placas de

Almidn

1.5

Agar

15.0

9 cm de dimetro).

pH final: 7.3 0.1

Siembra:
de
tipo
prueba
de
sensibilidad
a
los
antimicrobianos.
Incubacin: de tipo prueba de sensibilidad a los antimicrobianos, la metodologa
apropiada.
Bacterias:
Para el control de precisin y exactitud del agar de Mueller Hinton se usan las siguientes
cepas control:
S. aureus
E. coli
P. aeruginosa
E. faecalis
Para evaluar el desempeo de inhibidores de beta lactamasa, se utiliza la cepa control:
E. coli
Medio preparado: mbar.
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

AGAR BASE (Baird Parker)

Medio de alta especificidad diagnstica, selectivo y diferencial para el aislamiento y
recuento de estafilococos coagulasa positiva en alimentos y otros materiales de
importancia sanitaria. Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y
originan colonias de color grisceo-negro, y dan reaccin sobre la yema de huevo
produciendo alrededor de la colonia una zona opaca que a menudo tiene una zona clara
ms externa

Frmula (en gramos por litro)

Peptona de casena

10.0

Instrucciones

Suspender 60 g del medio deshidratado en 940ml de agua

destilada. Dejar en reposo 5 a 10 minutos. Calentar agitando

Extracto de carne

5.0

Extracto de levadura

1.0

Cloruro de litio

5.0

Agar

17.0

Glicina

12.0

Piruvato de sodio

10.0

frecuentemente y hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar

en autoclave a 121C (15 libras) durante 15 minutos. Enfriar a
45-50C y agregar 50 ml de la emulsin de yema de huevo y
10ml de la solucin de telurito (Cdigo B03-601-61).
Homogeneizar y distribuir en cajas de Petri.

pH final: 6.8 0.2

Siembra: Dejar secar la superficie de la placa preparada y extender 0.1 ml de la dilucin

de la muestra a analizar.
Incubacin: 24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Bacterias:
Microorganismos

Crecimiento

Apariencia

E. coli

Inhibido

---

P. mirabilis

Bueno

Colonias marrones sin zona clara u opaca alrededor

S. aureus

Bueno a excelente

Colonias negras con borde incoloro, convexas, rodeadas

de una zona opaca, con una zona clara externa.

S. epidermidis

Escaso o bueno

Colonias negras, de tamao irregular. Zona opaca

alrededor de la colonia (no hay zona clara).

Medio preparado: mbar claro opalescente (sin el agregado de yema de huevo).

Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

AGAR PSEUDOMONA P.
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento, la deteccin y la diferenciacin de especies
de Pseudomonas spp., en base a la produccin de piocianina. Conocido tambin como
medio King A.
Formacin:
En el medio de cultivo, la peptona de gelatina aporta los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la glicerina favorece la produccin de pigmentos, las sales de
magnesio y potasio estimulan la produccin de piocianina y piorrubina e inhiben la
produccin de fluorescena.
Frmula (en gramos por litro)

Peptona de gelatina

20.0

Sulfato de potasio

10.0

Cloruro de magnesio

1.4

Agar

15.0

Instrucciones

Suspender 46.4 g del polvo en un litro de agua destilada.

Agregar 10 ml de glicerina. Calentar con agitacin
constante para homogeneizar el producto. Llevar a
ebullicin para que se disuelva por completo. Distribuir y
esterilizar 15 minutos a 121 C.

pH final: 7.0 0.2

Siembra: A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, del cual se sospeche la presencia de
Pseudomonas spp., tomar una colonia y estriar la superficie del medio.
Incubacin: Durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis. Si no se observa
crecimiento, reincubar a 25-30 C, o dejar a 22 C y observar diariamente hasta 7 das.

Bacterias: Un resultado positivo es por observacin de los pigmentos piocianina y/o

piorrubina.
Cepa

Crecimiento

Produccin de Fluorescena

Produccin de Piocianina

P. aeruginosa

Bueno

P. fluorescens

Bueno

P. putida

Bueno

P. mallei

Bueno

P. stutzeri

Bueno

S. maltophilia

Bueno

B. cepacia

Bueno

Escherichia coli

Bueno

Limitaciones
- La ausencia de piocianina no descarta que el microorganismo aislado sea P. aeruginosa.
- Bajas cantidades de piocianina pueden no ser evidenciadas, por eso, ante la
sospechade su presencia, se recomienda agregar al medio de cultivo unas gotas de
cloroformo, para exaltar la visualizacin del pigmento.
.
- La presencia concomitante de piorrubina y/o piomelanina, puede afectar la visualizacin
del color caracterstico de la piocianina.
.
- La produccin de pigmento, puede aumentarse dejando los tubos conteniendo medio de
cultivo a 22 C luego de haberlos incubado previamente toda la noche a 35-37 C.
Medio preparado: color blanco-amarillo transparente

Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C.

Medio preparado: a 2-8 C.

AGAR E.M.B.
Este medio (tambin denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de
enterobacterias, bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias
nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
Formacin:
La diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos
que son incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno;
stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas
de Escherichia coli y Citrobacter spp., presentan un caracterstico brillo metlico. Las
cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada,
mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de
Candida spp. como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el
desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como
colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias
oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las
cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la
incorporacin de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene adems,
un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

Frmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Peptona

10.0

Lactosa

5.0

Sacarosa

5.0

Fosfato dipotsico

2.0

Agar

13.5

Eosina

0.4

Azul de metileno

0.065

Suspender 36 g del polvo en un litro de agua

destilada. Reposar 5 minutos; mezclar, calentando a
ebullicin durante 1 o 2 minutos hasta su disolucin.
Esterilizar en autoclave a no ms de 121C durante
15 minutos. Enfriar a 45C y distribuir agitando
suavemente.

pH final: 7.2 0.2

Siembra: En superficie, por estriado a partir de un inculo poco denso, para obtener
colonias aisladas. En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.
Incubacin: De 24 a 48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Bacterias:
Microorganismos

Tipo de Colonia

Escherichia coli

Verdosas con brillo metlico y centro negro azulado

Klebsiella pneumoniae

Mucosas, rosa prpura, confluentes

Proteus mirabilis

Incoloras

Enterococcus faecalis

Incoloras, pequeas, puntiformes

Shigella flexneri

Incoloras

Salmonella typhimurium

Incoloras

Placas preparadas: color prpura.

La esterilizacin del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color
prpura se restaura por agitacin. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado
es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del mismo.
Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
AGAR ENTEROCOCUS Pyr - A
Prueba rpida, utilizada fundamentalmente para la identificacin de Streptococcus
pyogenes y Enterococcus spp.
Es til para la caracterizacin preliminar de
Streptococcus,
Enterococcus
y
de
microorganismos
smil
estreptococos.
Fundamento:
Los discos contienen el sustrato: pirrolidonil-beta-naftilamida, y la prueba consiste en
determinar la presencia de la enzima l-pirrolidonil arilamidasa. Los microorganismos que
contienen dicha enzima, pueden hidrolizar el sustrato presente en los discos en forma

rpida, con liberacin del grupo pirrlico, el cual, reacciona con el reactivo revelador: N-N
dimetilamino cinamaldehdo. Esta es una prueba presuntiva especfica tanto para los
estreptococos b hemolticos del grupo A, como para los Enterococcus spp; y permite
diferenciar los estreptococos del grupo A de otras especies de Streptococcus.
Siembra: A partir de un cultivo puro, hacer una suspensin densa en 50 l de solucin
fisiolgica estril, y agregar un disco de PYR-A-ENTEROCOCOS.
.
Incubacin: Durante 30 minutos a 35-37 C, en aerobiosis. Cuando se utiliza para
diferenciar Staphylococcus, la incubacin se debe realizar, segn algunos investigadores,
durante 2 horas a 3537 C, en aerobiosis.
.
-Agregar una gota de reactivo revelador.
.
-Dejar a temperatura ambiente, hasta 5 minutos.
Bacterias:
Positivo: observacin de color rosa-rojo en el disco.
Negativo: la suspensin y/o el disco permanecen incoloros o de color amarillo.
Microorganismos

Hemlisis

PYRasa

VANCOMICINA (30ug)
Disposicin

Estreptococo grupo A

Pares o cadenas

Estreptococo grupoB

, g, a

Pares o cadenas

Estreptococo grupo C

Pares o cadenas

Estreptococo grupo G

Pares o cadenas

S. grupo viridans

a, g

Pares o cadenas

Enterococcus spp.

a, , g

Pares o cadenas

Gemella spp.

a, g

Pares,tetradas, cadenas,
acmulos

Aerococcus viridans

a, g

Pares, tetradas, acmulos

Pediococcus spp.

a, g

Pares, tetradas, acmulos

Lactococcus spp.

a, g

-(2)

Pares o cadenas

Leuconostoc spp.

a,g

Pares o cadenas

Observaciones +: Ms del 90% de las cepas presentan reaccin positiva.

:
-: Menos del 10% de las cepas presentan reaccin positiva.
* (2) Lactococcus garviae es la nica especie de Lactococcus que da la prueba del PYR
positiva.
* Cualquier zona de inhibicin alrededor del disco de vancomicina se considera sensible.

Almacenamiento: Conservar a 2-8 C

AGAR ESTAFILOCOCO medio 110

Es un medio selectivo para el aislamiento y diferenciacin presuntiva de estafilococos, en
base a la produccin de pigmentos, la fermentacin de manitol y la hidrlisis de gelatina, a
partir de alimentos y otras muestras.
.
Formacin:
Staphylococcus aureus es un microorganismo que puede causar intoxicacin alimentaria.
En el medio de cultivo, el extracto de levadura y la triptena aportan los nutrientes para el
desarrollo de microorganismos. La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa. La
lactosa y el manitol son los hidratos de carbono fermentables. El cloruro de sodio, se
encuentra en alta concentracin, para inhibir el desarrollo de la flora acompaante
excepto Staphylococcus spp., logrndose as un medio selectivo para el desarrollo de
estos microorganismos.
.

Frmula (en gramos por litro)

Extracto de levadura

2.5

Triptena

10.0

Gelatina

30.0

Lactosa

2.0

D-Manitol

10.0

Cloruro de sodio

75.0

Instrucciones

Suspender 149 g del medio en un litro de agua destilada.

Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullicin
durante 1 o 2 minutos. Esterilizar en autoclave durante 15
minutos a 121C. Verter en placas y mezclar para dispersar
el precipitado.

Fosfato dipotsico

5.0

Agar

15.0

pH final: 7.0 0.2

Siembra:
Directa,
en
superficie,
por
estriado
Incubacin: Durante 48 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.

por

extensin.
.

Bacterias:
1-Fermentacin de manitol: agregar unas gotas de prpura de bromocresol a las zonas
donde se encuentran las colonias sospechosas y en una zona de la placa donde no hay
desarrollo bacteriano. Comparar el color desarrollado entre estas dos zonas.
Prueba positiva: cambio de color del indicador del medio en la zona de crecimiento
bacteriano. El medio sin desarrollo de microorganismos permanece sin cambio.
Prueba negativa: no hay diferencias de color entre las zonas de crecimiento bacteriano y
la zona sin inocular.
.
2-Hidrlisis de la gelatina: cubrir la placa 5 ml de una solucin saturada de sulfato de
amonio y colocar en estufa, a 35-37 C, en aerobiosis durante 10 minutos.
Positiva: halo transparente alrededor de las colonias.
.
Negativa: ausencia de halo transparente alrededor de las colonias.

Microorganismo

Pigmento

Fermentacin de manitol

Hidrlisis de la
gelatina

Prueba de la
coagulasa

S. aureus

S. aureus

S. epidermidis

Medio preparado: mbar claro, opalescente con precipitado.

Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
AGAR SUERO DE NARANJA

Medio utilizado para el cultivo y recuento de microorganismos acidricos, particularmente

los asociados con el deterioro de jugos de fruta, especialmente de ctricos. Tambin es til
para el cultivo de hongos saprfitos y patgenos.
Formacin:
En el medio de cultivo, la triptena y el extracto de levadura aportan los nutrientes
necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono
fermentable, y el suero de naranja le otorga un ambiente cido, favorable para el
desarrollo de microorganismos tolerantes a las condiciones de acidez.

Frmula

Agar

15 g

Suero de naranja

200 ml

Extracto de levadura

3.0 g

Triptena

10.0 g

Glucosa

4.0 g

Fosfato dipotsico

2.5 g

Agua Desmineralizada

800 ml

pH final: 5.5 0.2

Siembra: A partir de la muestra original o de diluciones apropiadas, sembrar 1 ml y

agregar 12-15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 C.
Incubacin: A 30 C durante 48-72 horas, en aerobiosis y anaerobiosis.
Si se busca el desarrollo de hongos, extender la incubacin hasta 5 das.
Bacterias:
Efectuar el recuento y determinar la morfologa de las colonias.

Microorganismos

Crecimiento

Aspergillus niger

Bueno

Lactobacillus fermentum

Bueno

Sacharomyces cerevisiae

Bueno

Limitaciones: Este medio no es diferencial, por lo tanto es necesario realizar la

identificacin bioqumica a los cultivos positivos.
Medio preparado: mbar, ligeramente opalescente.
Almacenamiento: Conservar entre 2 8 C.

AGAR CASOY (PROTEOSA PEPTONA N 3)

Medio que por su alta calidad nutricional, ha sido recomendado como uno de los ms
adecuados para el cultivo de diferentes bacterias, especialmente exigentes, tales como
Neisseria
gonorrhoeae,
Neisseria
meningitidis,
Haemophilus
spp.,
etc.
Formacin:
El estudio sobre los valores nutricionales de estas peptonas, indica que la proteosa
peptona N 3, es la mejor de las tres proteosas peptonas para propsito nutricional en la
mayora de las frmulas de medios de cultivo para microorganismos exigentes. Esta
peptona puede tambin sustituir a la combinacin de peptona-infusin de carne en los
medios de infusin.
Frmula (en gramos por litro)
Proteosa peptona N 3

20.0

Glucosa

0.5

Cloruro de sodio

5.0

Fosfato disdico

5.0

Instrucciones
Suspender 45 g del medio deshidratado en un litro de agua
destilada. Mezclar bien. Dejar reposar de 10 a 15 minutos.
Calentar agitando frecuentemente y hervir durante un minuto.
Distribuir y esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.
Enfriar y agregar los suplementos que se deseen.

Agar

15.0
pH final:7.3 0.2

Siembra: Directa, estriando la superficie del medio.

Incubacin: El tiempo, temperatura y atmsfera de incubacin, dependern del
microorganismo que se est investigando.
Bacterias:

Microorganismo
N. gonorrhoeae

Crecimiento (*)
Bueno

S. pneumoniae

Bueno

S. pneumoniae

Bueno

S. pyogenes

Bueno

(*) Agar chocolate preparado con agar proteosa peptona N 3.

Medio preparado: de mbar claro a medio opalescente sin el agregado de sangre.
Almacenamiento: Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

AGAR PARA ANAEROBIOS

T.A.B.
La recoleccin de muestras para la investigacin de bacterias anaerobias, requiere una
metodologa particular para lograr que se mantenga un bajo Eh hasta el momento del
cultivo. Los mtodos convencionales no proporcionan una recuperacin ptima de estos
microorganismos. La accin del oxgeno atmosfrico puede ser anulada si la muestra es
bien recogida y procesada en forma adecuada en el laboratorio, empleando sistemas
anaerbicos que impidan el efecto letal del anin superxido que aparece cuando existe
oxgeno en el medio. Es por ello que el transporte de las muestras en frascos o tubos con
atmsfera inerte libre de oxgeno, se ha difundido en el mundo entero. Laboratorios
Britania presenta el frasco T.A.B., que constituye un medio universal de transporte, porque
todo tipo de microorganismos aerobios y anaerobios facultativos o estrictos, pueden
sobrevivir perfectamente en l.
.
Composicin: El frasco T.A.B. contiene solucin Ringer pH 7, adicionado de un agente
reductor (Cistena) y SPS (Polianetol sulfonato de sodio) como anticoagulante, y
atmsfera balanceada.
.
Metodologa: La muestra (pus, lquido cefalorraqudeo, etc.) se inyecta a travs del tapn
de goma previamente desinfectado con tintura de yodo al 2% o Povidona yodada,
teniendo la precaucin de eliminar el aire contenido en la jeringa y aguja, despus de
haber obtenido el material, y antes de introducirlo en el frasco T.A.B. Una vez recibida la
muestra en el laboratorio, se desinfecta nuevamente el tapn, se aspira con jeringa y
agujas estriles y se inocula en los medios de cultivo apropiados, incubando en
condiciones aerbicas y anaerbicas.
.
Mtodos recomendados para la recoleccin de muestras para cultivos anaerbicos.
PULMONAR: Aspiracin transtraqueal, puncin pulmonar directa, fibrobroncoscopa,
lavado broncoalveolar.
.
PLEURAL: Toracocntesis.
.
APARATO URINARIO: Puncin suprapbica.
.
ABSCESOS: Puncin y aspiracin.
.
APARATO GENITAL FEMENINO Y PELVIPERITONITIS: Utilizar la culdocentesis para
obtener la muestra, cuando ello sea posible, despus de descontaminar la vagina.
ENDOMETRITIS: Utilizar jeringa y pequeo catter de plstico a travs del orificio cervical
descontaminado, para aspirar.
.
TRACTO SINUSAL O DRENAJE DE HERIDA: Aspiracin con jeringa y pequeo catter
de plstico, lo ms profundamente posible, a travs de un orificio de la piel
descontaminada.

AGAR ANAEROBIO
Es un medio no selectivo utilizado para el aislamiento y cultivo de microorganismos
anaerobios.
Composicin:
Digerido pancretico de casena 20,0 g
Cloruro de sodio 5,0 g
Dextrosa 10,0 g
Agar 20,0 g
Tioglicolato de sodio 2,0 g
Sulfoxilato formaldehido de sodio 1,0 g
Azul de metileno 2,0 mg
Agua destilada c.s.p. 1000 mL
pH final 7,2 0,2
Preparacin:
Suspender 58 g de medio deshidratado en un litro de agua destilada. Mezclar
vigorosamente. Calentar agitando frecuentemente y dejar hervir durante 1 minuto para
disolver completamente los ingredientes. Esterilizar a 121C durante 15 minutos.
Distribuir y enfriar a temperatura ambiente antes de su utilizacin. Fundamento
Este medio contiene tioglicolato de sodio y el sulfoxilato formaldehido de sodio como
agentes reductores.
El azul de metileno sirve como un indicador de anaerobiosis, ya que este compuesto
cuando est en presencia de oxgeno es de color azul, e incoloro en su ausencia. Este
medio debe ser incubado en condiciones anaerbicas.

AGAR PATATA GLUCOSA

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento y recuento de hongos y levaduras en
muestras clnicas, alimentos, cosmticos y otros materiales.

Formacin:
Tanto la glucosa presente como la infusin de papa favorecen el desarrollo exuberante de
hongos y levaduras, mientras que el desarrollo bacteriano es inhibido con el agregado de
cido tartrico luego de la esterilizacin hasta alcanzar un pH: 3.5 0.2. Una vez
agregado el cido no se puede recalentar ya que el agar se hidroliza.

Siembra: Tcnica De PourPlate: sembrar 0.1 o 1 ml y agregar 15 ml del Papa Glucosado

Agar fundido y enfriado a 45-50 C.
- En superficie: por estriado.
Incubacin: En aerobiosis, a 22-25 C 30-32 C segn el mtodo seguido, durante 5
das o mayor tiempo.
Bacterias:

Microorganismos

Crecimiento

Aspergillus niger

Bueno

Candidaalbicans

Bueno

Sacharomycescerevisiae

Bueno

AGAR EXTRACTO DE ARROZ

Modo de accin:
El medio de cultivo contiene extracto de arroz como nica base nutritiva. La falta de
nutrientes junto con lascondiciones de cultivo pobres en oxgeno (bajo un cubreobjetos!)
crea un ambiente, que induce la formacinde formas morfolgicas especficas
(clamidosporas y pseudomicelios en particular) en algunas levaduras.
Composicin (g/litro)
Extracto de arroz, concentrado 0,7; agar-agar 14,3.
Preparacin y conservacin
Agar Extracto de arroz (20 placas de 18 ml cada una)
Utilizable hasta la fecha de caducidad cuando se conserva entre: +12 y +15C.
Las placas son claras y de color blanco con matices blanco amarillentos.

Empleo e interpretacin
Utilizar un asa de siembra de platino para obtener una pequea cantidad de material a
partir de un cultivopreliminar que contenga colonias sospechosas de contener Candida y
extender en fina capa sobrela superficie del Agar Extracto de arroz en 3-4 lneas en zigzag.
Cubrir la superficie sembrada con cubreobjetosestriles. Si el material est
abundantemente infectado con Candida, puede extenderse directamentesobre Agar
Extracto de arroz.
Los frotis vaginales obtenidos mediante hisopos pueden extendersedirectamente sobre la
superficie del medio de cultivo (TAUBERT y SMITH 1960).
Incubacin hasta 4 das a 28C aerobia.

Deben evitarse temperaturas elevadas ya que las clamidosporas pueden no formarse.

Evaluar el cultivo por examinacin directa en microscopio a travs del cubreobjetos.
Deben efectuarse ulteriores exmenes para confirmar los resultados obtenidos.

AGAR MALTOSA
Se emplea para el aislamiento y recuento de mohos y levaduras. Tambin se puede emplear para
pruebas de esterilidad en relacin a la presencia de estos microorganismos.
Fundamento:
En medio cido, el extracto de malta que es rico en glci-dos, es capaz de
aportar todos los nutrientes necesarios para el desarrollo de mohos y levaduras. Por
el carcter cido del medio, se inhibe el crecimiento de la mayor parte de los grmenes
contaminantes.
Frmula (por litro) del Agar
Extracto de Malta.....................................12,75g
Dextrina....................................................2,75g
Glicerina....................................................2,35g
Peptona de Gelatina.................................0,78g
Agar.. .. .. . .. .. . .. .. .. . .. .. . .. .. .. . .. .. . .. .. .. . .. .. . .. .. .. . .. . 15, 0g
pH final: 4 , 6 0 , 2
Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 min. No esterilizar por perodos ms
prolongados, ni sobrecalentar ya que el medio puede ablandarse. Este medio se utiliza
principalmente para el aislamiento de mohos y levaduras.

CONDICIONES ADECUADAS DE HUMEDAD

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible
para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que
prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C
proporcionando una fuente adecuada de agua que mantengan la humedad necesaria para
el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio.

PRESENCIA (O AUSENCIA) DE OXGENO Y OTROS GASES

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno
normal (aerobios estrictos). Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de varios
sustratos (anaerobios facultativos). Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se
desarrollarn adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto
intermedio, los microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas
parcialmente anaerbias (tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios
facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas
condiciones.

HUMEDAD
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en
los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las
estufas de cultivo a 35-37 proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as
que se deseque el medio.

LUZ AMBIENTAL
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.
pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos de los microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan
mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms o
menos cidos. No se debe olvidar que la presencia de cidos o bases en
cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo
o incluso alterar sus procesos metablicos normales.
TEMPERATURA
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y
43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los termfilos a 80C o incluso a
temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C,
y los saprofitos tienen rangos ms amplios.

SIEMBRA E INACULACIN
La siembra consiste en disponer las bacterias que queremos estudiar en un medio
de cultivo de una forma adecuada. La siembra puede ser: Para aislamiento, para
poder llevar a trmino el estudio de un microorganismo es condicin necesaria
aislarle del resto de microorganismos acompaantes.
Otras tcnicas, son pruebas que no permiten aislamiento, en este caso se pueden
utilizar tanto medios slidos como lquidos.

SIEMBRA EN TUBO EN MEDIO LQUIDO

Se puede realizar atendiendo al instrumento con que siembre, bien asa de
siembra, pipeta o hispo.

Asa de siembra, los tubos, del que se va a sembrar y el que contiene el

medio, se toman con la mano izquierda, colocando las bocas a la misma
altura. Con la mano derecha se toma el asa de siembra, se esteriliza en la

llama en posicin vertical hasta que se ponga incandescente. Se destapa

los tubos, tomando se esterilizan las bocas de los tubos pasndolos por la
llama, se introduce el asa en el material y se introduce en el medio de
cultivo hasta el borde del lquido. Por ltimo se esteriliza el asa y el tubo se
agita para una buena homogenizacin del inculo.
Tubo, se puede utilizar cualquier pipeta, pero generalmente se utiliza la
pipeta PASTEUR, se utiliza la tcnica expuesta anteriormente, pero esta
vez el inculo el lquido.
Hisopo, el hisopo o torunda debe de ser estril y viene protegido dentro de
un tubo de plstico.

SIEMBRA EN TUBO EN MEDIO SLIDO

Atendiendo al tipo de medio slido, nos podemos encontrar que sean en tubo,
placa PETRI.
Tubo
El agar tiene que estar en posicin inclinada, dejando una lengeta en la parte
superior y en la parte inferior una parte ms ancha. Se puede realizar dos
tcnicas, por estra y picadura, en ambos casos nos dice las caractersticas
bioqumicas de la bacteria a estudiar (fermentacin de azcares, movilidad,
reduccin de metales, etc.)
Placa petri
Se realiza en agar, se emplea para aislamiento de bacterias y para la realizacin
de antibiogramas. En este ltimo caso, previamente se tiene que realizar una
dilucin de la muestra (con la bacteria totalmente aislada) y se siembra con el
hisopo en el medio en el cual se va a realizar el antibiograma, generalmente
Mueller-Hinton, aunque atendiendo al tipo de bacterias podemos emplear agar
sangre (hemlisis) y agar chocolate (factores X y V).

BILBIOGRAFA:
www.educa.madrid.org/web/ies.../TEORIA_EM_alumnos.pdf
biblioteca.usac.edu.gt/tesis/05/05_8921.pdf

http://www.britanialab.com