Medios de Cultivo

MEDIOS DE CULTIVO
MEDIOS SIMPLES
Caldo Nutritivo - Caldo simple
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el desarrollo de
microorganismos con escasos requerimientos nutricionales.
Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y
otros materiales de importancia sanitaria.
Fundamento
Medio no selectivo, contiene pluripeptona y extracto de carne que constituyen la fuente
de carbono y nitrgeno necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano.
Puede ser utilizado adems, como preenriquecimiento en la bsqueda de Salmonella
spp. a partir de alimentos, ya que permite recuperar clulas daadas, diluir metabolitos
txicos y sustancias inhibitorias.
Frmula (en gramos por litro)
Instrucciones
Pluripeptona
5.0
Emplear 8 g de polvo por litro de
agua destilada. Si es necesario,
calentar hasta disolver. Distribuir
Extracto de carne
3.0
y esterilizar en autoclave a 118121C durante 15 minutos.
pH final: 6.9 0.2
Siembra: por inoculacin directa de la muestra o del microorganismo en estudio.
Incubacin: en aerobiosis, a 35-37 C durante 24 horas.
Resultados: examinar los tubos para evaluar el crecimiento por turbiedad. Cuando sea
necesario, subcultivar en medios slidos apropiados y realizar la identificacin
bioqumica.
Microorganismos
Crecimiento
P. mirabilis ATCC 43071
Bueno
E. coli ATCC 25922
Bueno
S. aureus ATCC 25923
Bueno
S. epidermidis ATCC 14990
Bueno
S. typhimurium ATCC 14028 Bueno
P. aeruginosa ATCC 27853
Bueno
Caractersticas del medio: medio preparado: mbar claro.
Almacenamiento: medio deshidratado: a 10-35 C; medio preparado: a 2-8 C.
Agar Nutritivo Agar simple

Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de
microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos.
Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y
otros materiales de importancia sanitaria.
Fundamento
Por las caractersticas de sus componentes es un medio usado para el cultivo de
microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene
inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y
nitrgeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el

enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de
microorganismos exigentes.
Instrucciones
Pluripeptona
5.0
Suspender 31 g de polvo por litro
de agua destilada. Mezclar y
Extracto de carne
3.0
dejar reposar 5 minutos. Calentar
Cloruro de sodio
8.0
suavemente agitando y hervir 1 o
2 minutos hasta su disolucin.
Agar
15.0
Distribuir y esterilizar a 121C
durante 15 minutos.
pH final: 7.3 0.2
Siembra: en superficie o por la tcnica de pour plate, segn el uso a que se destine.
Incubacin: en aerobiosis, a 35-37 C durante 24 horas.
Resultados
A- Agar nutritivo:
Microorganismos
Crecimiento
P. mirabilis ATCC 43071
Bueno-excelente
E. coli ATCC 25922
Bueno-excelente
Bueno-excelente
B. cereus ATCC 10876
Bueno-excelente
E. faecalis ATCC 29212
Bueno-excelente
P. aeruginosa ATCC 27853 Bueno-excelente
Caractersticas del medio:
Medio preparado: mbar claro a medio ligeramente opalescente.
Almacenamiento: medio deshidratado: a 10-35 C.; medio preparado: a 2-8 C.
B -Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero: (SE CONSIDERA
ENRIQUECIDO)
Microorganismos
Crecimiento
Hemlisis
S. pyogenes ATCC 19615
Abundante
Beta
S. pneumoniae ATCC 6305
Abundante
Alfa
Abundante
Alfa
MEDIOS ENRIQUECIDOS
Sangre Agar Base:
Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos
microorganismos.
Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y cultivo de
microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una
gran variedad de muestras, como para la observacin de reacciones de hemlisis.
Tambin, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el
medio agar chocolate.
Fundamento
La infusin de msculo de corazn y la peptona, otorgan al medio un alto valor
nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, an de

aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentracin final de 5-10 %, aporta
nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemlisis.
Infusin de msculo de corazn
375.0
Peptona
10.0
Cloruro de sodio
5.0
Agar
15.0
pH final: 7.3 0.2
Instrucciones
Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y
mezclar perfectamente hasta obtener una suspensin homognea. Calentar con
agitacin frecuente y hervir 1 minuto. Esterilizar 20 minutos a 121C. Enfriar a 45-50C
agregar sangre desfibrinada al 5%. Homogeneizar y distribuir en placas.
Preparacin de la placa de Agar Sangre: aadir en forma asptica un 5% de
sangre estril desfibrinada a temperatura ambiente, el agar debe estar a 45C.
AGAR CHOCOLATE: despus de aadir la sangre y agitando frecuentemente se
mantiene el medio de cultivo a 80C por 10 minutos hasta que adquiera un color pardo
achocolatado.
Siembra: por inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio
de cultivo.
Incubacin: el tiempo, temperatura y atmsfera de incubacin, dependern del
microorganismo que se quiera aislar.
Resultados
Microorganismos
E. coli ATCC 25922
Crecimiento
Abundante
Abundante
Abundante
Abundante
Abundante
Hemlisis
-Beta
Beta
Alfa
Alfa
Limitaciones
-Las reacciones hemolticas de muchos microorganismos son diferentes al usar sangre
de caballo respecto a la sangre de carnero, tal es el caso de algunas cepas de
estreptococos grupo D, que producen beta hemlisis en el agar suplementado con
sangre de caballo pero no en agar suplementado con sangre de carnero, y son mal
clasificados como Estreptococos Grupo A al usar sangre de caballo.
Caractersticas del medio
Medio preparado: mbar.
Medio preparado con 5% de sangre de carnero: rojo cereza.
Agar Cerebro Corazn Infusin
Es un medio slido muy apropiado para el cultivo de bacterias y hongos, incluyendo los
de difcil desarrollo.
Fundamento
Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo
microbiano. La infusin de cerebro de ternera, la infusin de corazn vacuno y la
peptona, son la fuente de carbono, nitrgeno, y vitaminas. La glucosa es el hidrato de
carbono fermentable, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el fosfato
disdico otorga capacidad buffer. El agar es el agente solidificante.
El agar cerebro corazn mantiene los mismos principios que el caldo para el cultivo de
estreptococos y otras bacterias exigentes. Con el agregado de 10% de sangre de
caballo desfibrinada, fue utilizado para el crecimiento de Histoplasma capsulatum y de
hongos patgenos. Por tratarse de un medio que contiene glucosa, no es un agar
sangre apropiado para la observacin de reacciones de hemlisis.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 40 g/ml de estreptomicina, se utiliza este
medio para el aislamiento de hongos patgenos.
Instrucciones
Infusin de cerebro de
200.0
ternera
Disolver 52 g de polvo en un litro
Infusin corazn vacuno 250.0
de agua destilada. Calentar a
Peptona
10.0
ebullicin hasta su disolucin
Cloruro de sodio
5.0
total. Esterilizar en autoclave
durante 15 minutos a 121C.
Glucosa
2.0
Fosfato disdico
2.5
Agar
15.0
pH final: 7.4 0.2
Siembra: de acuerdo a los fines de empleo.
Incubacin: el tiempo, la temperatura y la atmsfera de incubacin, sern las ptimas y
dependern del microorganismo que se est investigando.
Resultados
Microorganismos
Crecimiento
Aspergillus niger
Bueno
Neisseria meningitidis
Bueno
Streptococcus pyogenes ATCC
Bueno
19615
Streptococcus pneumoniae ATCC
Bueno
49619
Caractersticas del medio: medio preparado: mbar claro.
Almacenamiento: medio deshidratado: a 10-35 C. ; medio preparado: a 2-8 C.
Infusin Cerebro Corazn Medio Liquido enriquecido

Medio lquido adecuado para el enriquecimiento y cultivo de bacterias aerobias y
anaerobias, de microorganismos exigentes como estreptococos, neumococos y otros
microorganismos de difcil desarrollo.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 100 g/ml de amicacina, se utiliza este medio
para el cultivo de hongos patgenos.
Fundamento
Es un medio muy rico en nutrientes, que proporciona un adecuado desarrollo
microbiano. La infusin de cerebro de ternera, la infusin de corazn vacuno y la
peptona, son la fuente de carbono, nitrgeno, y vitaminas. La glucosa es el hidrato de

carbono fermentable, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico y el fosfato
disdico otorga capacidad buffer.
Los nutrientes de este caldo son muy apropiados para los hemocultivos, ya que en esta
infusin desarrollan todas las especies de estreptococos excepto los tiol y piridoxal
dependientes.
Los estafilococos que crecen en esta infusin suelen dar mejores reacciones en la
prueba de la coagulasa.
Con el agregado de 20 Ul de Penicilina y 100 g/ml de amicacina, se inhibe la flora
bacteriana cuando se utiliza este medio para el cultivo de hongos patgenos.
Instrucciones
Infusin de cerebro de
Suspender 37 g del polvo en un
200.0
ternera
litro de agua destilada. Calentar a
Infusin corazn vacuno 250.0 ebullicin hasta disolver
completamente. Esterilizar en
Peptona
10.0
autoclave a 121C durante 15
Cloruro de sodio
5.0
minutos. Los tubos que no se
Glucosa
2.0
usen inmediatamente debern
calentarse en un bao hirviendo
para la eliminacin del oxgeno
Fosfato disdico
2.5
retenido. Enfriar rpidamente sin
agitar.
pH final: 7.4 0.2
Siembra: por inoculacin directa de la muestra o del microorganismo en estudio.
Incubacin: el tiempo, la temperatura y la atmsfera de incubacin, sern las ptimas y
dependern del microorganismo que se est investigando.
Resultados
Examinar los tubos para evaluar el crecimiento por turbidez. Cuando sea necesario,
subcultivar en medios slidos apropiados y realizar la identificacin bioqumica.
Microorganismos
Crecimiento
Neisseria meningitidis
Bueno a excelente
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226
Bueno a excelente
Streptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno a excelente
Streptococcus pneumoniae ATCC
Bueno a excelente
6305
Control Negativo
Resultado
Medio sin inocular
Sin cambio
Caractersticas del medio: medio preparado: mbar claro, sin precipitado.
Almacenamiento: medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.
MEDIOS SELECTIVOS
Agar Manitol Salado Staphylococcus
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de
estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir de muestras
clnicas, alimentos, productos cosmticos y otros materiales de importancia sanitaria.
Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas de Vibrio, si
no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas
especies pueden no desarrollar.
Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los
estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias
aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa
negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias
sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles,
posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de
carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono
fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el agente
selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador
de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el
manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de
pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el
manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias
amarillas rodeadas de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas,
rodeadas de una zona del mismo color o prpura.

Instrucciones
Extracto de carne
1.0
Suspender 111 g de polvo por
litro de agua destilada. Reposar 5
Pluripeptona
10.0
minutos y mezclar calentando a
d-Manitol
10.0
ebullicin durante 1 o 2 minutos.
Cloruro de sodio
75.0
Distribuir y esterilizar en
Agar
15.0
autoclave a 118-121C durante
Rojo de fenol
0.025 15 minutos.
pH final: 7.4 0.2
Siembra: en superficie un inculo denso de la muestra.
Incubacin: De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin durante 3
das a 32 C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos
Crecimiento
Caractersticas de las
colonias
Staphylococcus aureus ATCC

Excelente
Amarilla
25923
Staphylococcus epidermidis
Bueno
Roja
ATCC 14990
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido
Inhibido
Klebsiella pneumoniae ATCC
Inhibido
Inhibido
700603
Caractersticas del medio: Medio preparado: rojo
Agar Mac Conkey Agar selectivo para Enterobacterias
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo,
aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no,
lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia
Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de
sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de
gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce
un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la
precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
Instrucciones
Peptona
17.0
Pluripeptona
3.0
Suspender 50 g del polvo por litro
de agua destilada. Reposar 5
Lactosa
10.0
minutos y mezclar hasta
Mezcla de sales biliares 1.5
uniformar. Calentar suavemente
Cloruro de sodio
5.0
y hervir 1 a 2 minutos hasta
Agar
13.5
disolver. Esterilizar en autoclave
a 121C durante 15 minutos.
Rojo neutro
0.03
Cristal violeta
pH final: 7.1 0.2
0.001
Siembra: sembrar en superficie.

- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar
aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 C.
Incubacin: durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica
Resultados
Microorganismos
Escherichia coli ATCC 25922
700603
Salmonella typhimurium ATCC
14028
Colonias
Rojas con halo turbio
Rosadas mucosas
Incoloras,
transparentes
Incoloras,
Shigella flexneri ATCC 12022
transparentes
Incoloras,
Proteus mirabilis ATCC 43071
transparentes
Diminutas, incoloras,
Enterococcus faecalis ATCC 29212
opacas
Medio preparado: rojo prpura
Agar SS - Salmonella Shigella

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies
de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se
sospeche su presencia.
Fundamento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.

La selectividad, est dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el
desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayora de los coliformes y el desarrollo
invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido
sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican
el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o
rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen
bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.
La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro debido
a la formacin de sulfuro de hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en
Selenito caldo.
Pluripeptona
5.0
Extracto de carne
5.0
Lactosa
10.0
Mezcla de sales biliares
8.5
Citrato de sodio
8.5
Tiosulfato de sodio
8.5
Citrato frrico
1.0
Agar
13.5
Verde brillante
0.00033
Rojo neutro
0.025
pH final: 7.0 0.2
Instrucciones
Suspender 60 g del polvo por litro de
agua destilada. Reposar 5 minutos y
mezclar hasta homogeneizar.
Calentar a ebullicin durante 2 o 3
minutos. NO ESTERILIZAR EN
AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y
distribuir unos 20 ml por placa. Secar
la superficie del medio unos minutos
en la estufa.
Siembra: por estriado (dispersin y agotamiento) la superficie del medio de cultivo.

Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar E.M.B o
de agar Mac Conkey.
Incubacin: durante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Shigella flexneri
Shigella sonnei
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
Enterococcus faecalis ATCC 29212
Colonias
Transparentes, centro negro
Incoloras
Incoloras
Transparentes, centro negro
Rosadas a rojas
Rosadas cremosas y mucosas
Incoloras, de muy escaso
crecimiento
Medio preparado: rojo naranja.

Almacenamiento: medio deshidratado: a 10-35 C.; preparado 4 a 8 C
XLD Agar (Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar)
XLD Agar (agar de xilosa, lisina, desoxicolato) es un medio moderadamente selectivo y

de diferenciacin para el aislamiento y la diferenciacin de patgenos entricos gram
negativos (Salmonella y Shigella) a partir de muestras clnicas. Es adecuado en especial
para el aislamiento de la especie Shigella.
Fundamento:
Mtodo microbiolgico. XLD Agar fue desarrollado por Taylor para aumentar la eficacia
del aislamiento y la identificacin de patgenos entricos, en especial Shigella1. No
slo se diferencian los patgenos de los organismos fermentadores de lactosa no
patgenos, sino tambin de muchos organismos no patgenos que no fermentan la
lactosa ni la sacarosa. Adems, el medio fue formulado para favorecer el crecimiento
de Shigella1, que a menudo no creca en otras frmulas debido a inhibidores txicos.
Los resultados obtenidos en diversas evaluaciones clnicas ha apoyado la afirmacin de
la eficacia relativamente alta de XLD Agar en el aislamiento primario de Shigella y
Salmonella 2-6. XLD Agar es uno de los medios utilizados en las pruebas de lmites
microbianos en USP y EP. 9, 10 XLD Agar es un medio selectivo y de diferenciacin.
Contiene extracto de levadura como fuente de nutrientes y vitaminas. Utiliza el
desoxicolato de sodio como agente selectivo y, por consiguiente, inhibe los
microorganismos gram positivos. La xilosa se incorpora en el medio dado que la
fermentan prcticamente todos los entricos, excepto Shigella, y esta propiedad hace
posible la diferenciacin de dicha especie. La lisina se incluye para permitir la
diferenciacin del grupo Salmonella de los organismos no patgenos, dado que, sin
lisina, Salmonella fermentara rpidamente la xilosa y no se distinguira de las especies
no patgenas. Cuando la Salmonella agota el suministro de xilosa, la lisina es atacada
por la enzima lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio a un pH alcalino que imita
la reaccin de Shigella. Para evitar el cambio similar en los organismos coliformes
positivos a la lisina, se aaden lactosa y sacarosa para producir cido en exceso1. Para
aumentar la capacidad de diferenciacin de la frmula, se incluye un sistema indicador
de H2S, formado por tiosulfato sdico y citrato frrico amnico, para la visualizacin del
cido sulfhdrico producido, lo que origina la formacin de colonias con centros de color
negro. Los organismos no patgenos no productores de H2S no descarboxilan la lisina;
por tanto, la reaccin cida producida por dichos organismos evita el oscurecimiento de
las colonias, lo que sucede slo con pH alcalino o neutro1.
Frmula* por litro de agua purificada
Xilosa
L-Lisina
Lactosa
Sacarosa
Cloruro sdico
Extracto de levadura
Rojo fenol
Desoxicolato de sodio
Tiosulfato sdico
Citrato frrico de amonio
Agar
pH
3,5 g
5,0
7,5
7,5
5,0
3,0
0,08
2,5
6,8
0,8
13,5
7,4 0,2 *
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento

Resultados:
Inocular muestras representativas con las cepas).
Incubar las placas en condiciones aerobias a una temperatura entre 35 y 37 C, por un
perodo de 18 a 24 horas.
Resultado:s en la tabla siguiente se indica la morfologa caracterstica de las colonias:
E.M.B. Agar Eosina Azul de Metileno

Fundamento
El medio de cultivo combina las frmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para
obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras
especies de bacilos Gram negativos. Es nutritivo por la presencia de peptona que
favorece el desarrollo microbiano. La diferenciacin entre organismos capaces de
utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por
los indicadores eosina y azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre una
amplia variedad de bacterias Gram positivas. El agar es el agente solidificante. Muchas
cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un caracterstico brillo metlico.
Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada,
mientras que las que no lo hacen son incoloras. Tambin, pueden crecer especies de
Candida y se observan como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad
permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en este
medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y
otras bacterias oxidativas se observan como colonias de color azul lavanda; esto puede
ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello
se debe a la incorporacin de azul de metileno a sus membranas. En este medio se
obtiene adems, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.
Incubacin: En aerobiosis, a 35-37 C durante 18-24 horas. Interpretacin de los

resultados Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: colonias de color
negro azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metlico.
Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa: colonias del color del medio,
incoloras.
Limitaciones - En el caso de los microorganismos fermentadores, no se puede

diferenciar el carbohidrato metabolizado. - Este medio de cultivo es moderadamente
inhibitorio ya que las cepas de Enterococo y Candida pueden desarrollar en el mismo,
observndose como colonias de tamao puntiforme
Para la identificacin de gnero o especie microbiana se deben realizar pruebas
bioqumicas adicionales. - Algunas cepas de Salmonella y Shigella no crecern en EMB
Agar. Durante la esterilizacin el azul de metileno puede precipitar. Es importante
resuspender el precipitado mientras se distribuye en placas de Petri estriles el medio
preparado. Conservar el medio preparado en placas a 2-8 C y protegido de la luz ya
que los indicadores presentes son fotosensibles y pueden inhibir el desarrollo de

algunas especies de Proteus si no se conservan apropiadamente.
TCBS Medio Vibrio

Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio parahemolyticus
y otras especies de Vibrio a partir de heces, agua y alimentos contaminados.
Tambin es conocido como Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa, o como Agar Selectivo
para Vibrios.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y la triptena
aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano. Es este, el medio selectivo ms
adecuado para el aislamiento de las especies de Vibrio, e inhibidor para la mayora de
las enterobacterias. Esta inhibicin se basa en las altas concentraciones de tiosulfato y
citrato, la presencia de bilis y un pH fuertemente alcalino. La degradacin de la
sacarosa es variable entre las especies de Vibrio y las colonias son verdes para las
cepas que no la utilizan y amarillas para aquellas que producen cido a partir de este
azcar. Esto es debido al viraje del color de los indicadores de pH azul de timol y azul
de bromotimol, del color azul al amarillo en medio cido. Es importante tener en
cuenta, que la proporcin de sacarosa en el medio est equilibrada de forma tal que no
inhiba el crecimiento bacteriano por exceso de cido.
El cloruro de sodio favorece el crecimiento de microorganismos. El tiosulfato de sodio
aporta azufre y junto con el citrato frrico permiten la deteccin de produccin de cido
sulfhdrico.
Aumentando la concentracin de cloruro de sodio y disminuyendo la temperatura de
incubacin, pueden aislarse especies marinas sin importancia sanitaria.
Instrucciones
5.0
Peptona de carne
5.0
Triptena
5.0
Citrato de sodio
10.0
Tiosulfato de sodio
10.0
litro de agua destilada. Calentar
Bilis de buey
8.0
hasta ebullicin y hervir de 1 a 2
minutos. NO AUTOCLAVAR.
Sacarosa
20.0
Distribuir en placas de Petri
Cloruro de sodio
10.0
estriles.
Citrato frrico
1.0
Azul de bromotimol
0.04
Azul de timol
0.04
Agar
15.0
pH final: 8.6 0.2
Siembra
1-Materiales clnicos:
a- Materia fecal: suspender 1 gramo de heces o el contenido del hisopo en 10 ml de
Agua Peptonada Alcalina (B02-159-05, B02-159-06) e incubar de 6 a 8 horas a 35-37C,
en aerobiosis.
b- Materiales provenientes de infecciones extraintestinales: no es necesario realizar
enriquecimiento previo en Agua Peptonada Alcalina.
c- Agua: Filtrar de 1 a 10 litros (el volumen deseado) de agua con membrana de

0.22.Colocar la membrana en un recipiente conteniendo Agua Peptonada Alcalina e
incubar de 6 a 8 horas a 35-37C, en aerobiosis.
d- Alimentos: Licuar 25 g de la muestra con 225 ml de Agua Peptonada Alcalina (B02159-05, B02-159-06) e incubar de 6 a 8 horas a 35-37C, en aerobiosis.
En todos los casos sembrar una alcuota del caldo de enriquecimiento en la superficie
de una placa de TCBS, por estriado, para el aislamiento de colonias.
Incubacin: en aerobiosis, durante 18-24 horas a 35-37C.
Resultados
Microorganismo
Crecimiento
Vibrio cholerae
Bueno
V. parahaemolyticus
Bueno
Caractersticas de las
colonias
Amarillas de 2-3 mm de
dimetro, de borde
traslcido
Centro verde azulado,
borde traslcido
Amarillas grandes
---
V. alginolyticus
Bueno
Aeromonas spp.
Inhibido
E. coli
Inhibido
Medio preparado: verde azulado.
MEDIO LIQUIDO PARA DEMOSTRAR NECESIDADES DE OXIGENO

Medio Tioglicolato USP Con Indicador
Medio de cultivo preparado de acuerdo con la Farmacopea Norteamericana para el
control de esterilidad de productos biolgicos y farmacuticos. Adems es utilizado
para cultivar microorganismos anaerobios, microaerfilos y aerobios, y tambin para
detectar la presencia bacteriana en materiales normalmente estriles.
Fundamento
Este medio de cultivo tiene una composicin bastante similar a la del medio
Tioglicolato sin indicador. Permite el desarrollo de una amplia variedad de
microorganismos, incluidos los nutricionalmente exigentes y se observa que las
bacterias estrictamente aerobias, crecen en la parte superior, mientras que las
anaerobias facultativas o anaerobias estrictas crecen en las profundidades del medio.
La presencia de grupos -SH- (aportados por cistena, tioglicolato, glutatin, etc.) en
medios de cultivos con digestos proteicos facilita el aislamiento de diversas bacterias
anaerobias. El tioglicolato de sodio disminuye el potencial redox del medio de cultivo y
neutraliza el efecto antibacteriano de conservadores mercuriales. La resazurina acta
como un indicador de xido-reduccin, que es de color rosado fucsia en presencia de
oxgeno y la glucosa facilita el desarrollo microbiano al brindar una buena fuente de
energa. La presencia de una baja cantidad de agar, retarda la dispersin de CO 2 y O2.
Instrucciones
Triptena
15.0
Suspender 29,5 g del medio
deshidratado en un litro de agua
5.0
destilada. Calentar y agitar con
Glucosa
5.5
Cloruro de sodio
Tioglicolato de sodio
Agar
L-cistina
Resazurina
2.5
0.5
0.75
0.5
0.001
frecuencia hasta disolucin total.

Distribuir en recipientes
adecuados y esterilizar a 121C
durante 15 minutos. Enfriar y
guardar a temperatura ambiente
pH final: 7.1 0.2

Siembra: generalmente con pipeta Pasteur en el fondo del tubo para demostrar:
desarrollo de aerobiosis. microaerofilia y anaerobiosis
Incubacin: el tiempo, temperatura y condiciones de incubacin dependern del
microorganismo que se quiera recuperar.
Resultados
Microorganismos
Crecimiento
Streptococcus pyogenes ATCC 19615
Bueno
Clostridium perfringens
Bueno
Bueno
Bacteroides fragilis ATCC 25285
Bueno
Medio preparado: mbar claro ligeramente opalescente y con un anillo ligeramente
rosado en la superficie
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO
Caldo Tetrationato
Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella spp. a partir

de heces, orina, alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.
Fundamento
El medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y absorbe metabolitos
txicos.
La selectividad est dada por la presencia de tiosulfato de sodio, tetrationato
(generado en el medio por el agregado de la solucin iodo-iodurada) y sales biliares, los
cuales permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato
reductasa, como ser la Salmonella spp. e inhiben el desarrollo de la flora acompaante.
Para evitar la proliferacin de especies de Proteus spp., se recomienda agregar 40 mg/l
de Novobiocina, antes de la solucin iodada
Instrucciones
Peptona
5.0
Suspender 46 g del polvo en 1 litro de agua
destilada. Mezclar vigorosamente y llevar a
Sales biliares
1.0
ebullicin. Enfriar a 45C o menos. Agregar
Carbonato de calcio
10.0
Tiosulfato de sodio
30.0
pH final: 8.4 0.2
Solucin iodo iodurada
Iodo
6.0
20 ml de solucin iodurada. Mezclar y
distribuir 10 ml por tubo, en tubos
Ioduro de potasio
5.0
estriles. No debe calentarse luego de
Agua
20.0
agregar la solucin iodada. El medio base
Siembra: puede realizarse la siembra partiendo de un caldo de preenriquecimiento o en
forma directa conservando la proporcin 1:10.
Incubacin: durante 12-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis
Resultados
Microorganismos
Crecimiento
Salmonella typhi
Escaso
Bueno-excelente
Salmonella enteritidis ATCC 13076
Bueno-excelente
Escaso
Medio preparado: suspensin blanco lechosa.
Caldo Selenito
Medio de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella spp. a partir de materiales
clnicos, especialmente heces.
Fundamento
Este caldo selectivo favorece el crecimiento de Salmonella spp.
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el selenito de
sodio inhibe la flora Gram positiva y la mayora de la flora entrica excepto Salmonella
spp. durante las primeras 8-12 horas de incubacin.
Instrucciones
Peptona
5.0
litro de agua destilada. Mezclar
Lactosa
4.0
bien y calentar ligeramente hasta
Fosfato de sodio
10.0
su disolucin completa. Evite el
calentamiento excesivo.
No esterilizar en autoclave.
Distribuir en tubos estriles un
Selenito de sodio
4.0
volumen no menor a 5 ml. Se
recomienda guardar en heladera
si no se usa de inmediato.
pH final: 7.0 0.2
Siembra
-Materia fecal: a un tubo con 10-15 ml de caldo selenito, agregar 1-2 ml de una
suspensin de materia fecal.
-Tejido infectado: macerar 1-2 g de tejido en 10-15 ml de caldo selenito, usando una
varilla estril.
-Orina: a un tubo con unos 5 ml de caldo selenito doble concentracin, agregar igual
volumen de orina.
Incubacin: a 35-37 C, durante 16-24 horas, en aerobiosis.

Luego, subcultivar en medios selectivos: Salmonella Shigella Agar (B02-138-05/06),
Hektoen Entrico Agar (B02-110-05/06), Verde Brillante Agar (B02-124-05/06), Mac
Conkey Agar (B02-114-05/06).
Resultados
Microorganismos
Crecimiento
Salmonella enteritidis ATCC 13076
Bueno
Bueno
Regular-Escaso
Regular-Escaso
Limitaciones
-Se aconseja usar el medio el mismo da de la preparacin.
-No incubar el medio de cultivo sembrado por mas de 24 horas, debido a que el efecto
inhibitorio del selenito disminuye luego de las primeras 6-12 horas de incubacin, y
adems porque no es favorable para la mayora de las cepas de Salmonella, que
pueden no recuperarse.
-La nica ventaja de incubar durante 48 horas es el incremento de la recuperacin de
Salmonella pullorum.
Medio preparado: mbar claro, traslcido.
Agua Peptonada Alcalina.

Medio de enriquecimiento utilizado para la bsqueda de Vibro sp. a partir de muestras
clnicas y de alimentos.
Fundamento
La viabilidad de los vibrios se mantiene intacta a pH alcalino, y este medio ha sido
recomendado por numerosos autores para incrementar la recuperacin de los mismos
en materia fecal y otras muestras.
Instrucciones
Peptona de carne
10.0 Suspender 20 g de polvo en 1
bien y distribuir.Esterilizar en
Cloruro de sodio
10.0 autoclave a 121C durante 15
minutos.
pH final: 8.6 0.2
Siembra
Como pre-enriquecimiento:
Heces: suspender 1 g de materia fecal o el contenido del hisopo en 10 ml de
agua peptonada alcalina.
Alimentos: 25 g del alimento en 225 ml de agua peptonada alcalina.
Agua: filtrar por membrana el volumen deseado. Colocar la membrana en un
recipiente conteniendo agua peptonada alcalina.
Microorganismos: sembrar una colonia del microorganismo en 10 ml de agua
peptonada alcalina.
Incubacin: aerbica, a 35-37 C durante 5-8 horas. Luego transferir a T.C.B.S. Medio.
Resultados
Microorganismos
Crecimiento
V. cholerae
Bueno
V. parahaemolyticus
Bueno
V. fluvialis
Bueno
V. vulnificus
Bueno
Control Negativo
Resultado
Medio sin inocular
Sin cambio
Medio preparado: mbar claro.
MEDIOS DIFERENCIALES: IDENTIFICACION DE Enterobacterias

TSI Agar - Agar-hierro-triple azcar
Medio universalmente empleado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la
fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a la produccin de cido sulfhdrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes
adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos
de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la
produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones
Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de
color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el
balance osmtico.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del
indicador rojo de fenol,el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de
sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro
proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Instrucciones
Extracto de carne
3.0
Pluripeptona
20.0
Suspender 62,5 g del polvo por
Cloruro de sodio
5.0
bien y calentar con agitacin
Lactosa
10.0
frecuente, hervir 1 o 2 minutos
Sacarosa
10.0
hasta disolucin total. Llenar
Glucosa
1.0
hasta la tercera parte de los
Sulfato de hierro y
tubos de ensayo. Esterilizar a
0.2
amonio
121C por 15 minutos. Enfriar en
pico de flauta profundo.
Tiosulfato de sodio
0.2
Rojo de fenol
0.025
Agar
13.0
pH final: 7.3 0.2
Siembra: a partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo

sobre la superficie del medio.
Incubacin: a 35-37C durante 24 horas, en aerobiosis.
Resultados
1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente
fermenta la glucosa.
2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta
glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no
fermentador de azcares.
4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el
microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico.
Microorganismo
Pico/Fondo
Produccin de gas
Produccin
decido
sulfhdrico
E. coli ATCC 25922
A/A
+
K. pneumoniae ATCC
A/A
+
700603
P. mirabilis ATCC 43071 K/A
+
+
S. typhimurium ATCC K/A
+
14028
S. enteritidis ATCC
K/A
+
+
13076
S. flexneri ATCC 12022 K/A
P. aeruginosa ATCC
K/K
27853
A: cido
K: alcalino
Medio preparado: rojo
Simmons Citrato Agar

Medio utilizado para la diferenciacin de enterobacterias, en base a la capacidad de
usar citrato como nica fuente de carbono y energa.
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el
citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios
para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el
magnesio es cofactor enzimtico. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el
azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El
medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar
citrato como nica fuente de carbono, usan sales de amonio como nica fuente de
nitrgeno, con la consiguiente produccin de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato
permeasa, a travs del ciclo del cido tricarboxlico. El desdoblamiento del citrato da
progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo, en presencia de un medio
alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados como fuente de carbono,
producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es
indicativo de la produccin de citrato permeasa.
Instrucciones
Citrato de sodio
2.0
Suspender 24,2 g del medio
deshidratado por litro de agua
Cloruro de sodio
5.0
destilada. Dejar reposar 5
Fosfato dipotsico
1.0
minutos y mezclar calentando a
Fosfato monoamnico
1.0
ebullicin durante 1 o 2 minutos.
Sulfato de magnesio
0.2
Distribuir en tubos y esterilizar en
Azul de bromotimol
0.08
minutos. Enfriar en posicin
inclinada.
Agar
15.0
pH final: 6.9 0.2
Siembra: a partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inculo
ligero , usando una ansa sin arrastrar el agar.
Incubacin: a 35-37 C, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 das de incubacin.
Resultados
-Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo
bacteriano y no hay cambio de color.
Microorganismo
Citrato permeasa Color del medio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
Positivo
Azul
S. typhimurium ATCC 14028
Positivo
Azul
E. coli ATCC 25922
Negativo
Verde
S. flexneri ATCC 12022
Negativo
Verde
Limitaciones
-Si se usa un inculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede variar el color del
pico del verde al amarillo-amarronado.
Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la
visualizacin azul de un resultado positivo.
-Inculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.
-Cuando se siembra una serie de pruebas bioqumicas a partir del mismo cultivo, se
debe esterilizar la aguja de inoculacin antes de inocular la prueba del citrato o sino
inocularla primero. Cualquier arrastre de materia orgnica puede originar resultados
falsos positivos.
Medio preparado: verde.
Lisina Hierro Agar (LIA)

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella
spp., basado en la decarboxilacin / desaminacin de la lisina y en la produccin de
cido sulfhdrico.
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para

el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es
el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y
deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de
la produccin de cido sulfhdrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el
cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor
a 6.8.
Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio
y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilacin de la lisina,
tiene lugar en medio cido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente
fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son
fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al
amarillo, pero a las 24 hs de incubacin se observa el pico de color violeta debido al
consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.
La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio
debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Las cepas de los gneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella,
desaminan la lisina, esto produce un cido alfa-ceto-carbnico, el cual, con la sal de
hierro y bajo la influencia del oxgeno forma un color rojizo en la superficie del medio.
Instrucciones
Peptona de gelatina
5.0
Suspender 35 g del medio
deshidratado en un litro de agua
3.0
destilada. Dejar embeber unos 15
Glucosa
1.0
minutos. Calentar
Lisina
10.0
cuidadosamente, agitando con
Citrato de hierro y
frecuencia y hervir durante un
0.5
amonio
minuto hasta la disolucin
completa. Distribuir y esterilizar a
Tiosulfato de sodio
0.04
121C durante 15 minutos.
Prpura de bromocresol 0.02
Enfriar en pico de flauta dejando
un fondo vertical apto para la
Agar
15.0
puncin.
pH final: 6.7 0.2
Siembra: por puncin profunda con aguja de inoculacin.
Incubacin: en aerobiosis, durante 24 horas a 35-37 C.
Resultados
1- Decarboxilacin de la lisina:
-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.
2-Desaminacin de la lisina:
Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del gnero Proteus, Providencia y
alguna cepas de Morganella spp.
3-Produccin de cido sulfhdrico:
-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el lmite del pico y
fondo)
Microorganismos
Salmonella typhimurium ATCC
Color en el pico de Color en la base Ennegrecimiento

flauta
del tubo
del medio
Rojo
Amarillo
Negativo
Prpura
Prpura
Positivo
14028
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Prpura
Prpura
Positivo
Providencia spp.
Rojo
Amarillo
Negativo
Citrobacter freundii
Prpura
Amarillo
Positivo
Morganella spp.*
Rojo
Amarillo
Negativo
Edwarsiella spp.
Prpura
Prpura
Positivo
Prpura
Prpura
Negativo
700603
Prpura
Prpura
Negativo
*Algunas especies de Morganella spp., pueden desaminar la lisina.
Caractersticas del medio: medio preparado: color violeta.
SIM Medio -
Sulfuro Indol Movilidad
Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de

sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo.
Es til para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.
Fundamento
El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y particularmente
de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para formar indol. En el
proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se
combina con el aldehido del reactivo de Kovacs o de Erlich, para originar un
compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la
turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellas
cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por la formacin de un precipitado negro
de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un pH
mayor a 7.2.
Instrucciones
Triptena
20.0
de agua destilada. Mezclar hasta
Peptona
6.1
disolver; calentar agitando y
Sulfato de hierro y
0.2
hervir durante un minuto.
amonio
Distribuir unos 4 ml en tubos de
Tiosulfato de sodio
0.2
hemlisis y esterilizar en
Agar
3.5

minutos. Solidificar en posicin
vertical.
pH final: 7.3 0.2

Siembra; A partir de un cultivo de 18-24 horas en medio slido, sembrar por puncin
profunda con aguja de inoculacin recta (no usar ansa con anillo). Se debe inocular el
centro del tubo, y la puncin debe abarcar 2 tercios de profundidad del medio de
cultivo desde la superficie. Es importante que la siembra se realice en lnea recta.
Incubacin: durante 24 horas, a 35-37 C, en aerobiosis.
Luego de la incubacin, agregar 3-5 gotas de reactivo de Kovacs o de Erlich.
Resultados
Cepas mviles: producen turbidez del medio, que se extiende mas all de la lnea de
siembra.
Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra.

Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de la lnea de siembra o en todo el
medio.
Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin cambio de color.
Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovacs o
de Erlich.
Cepas indol negativas: sin cambio de color.
Microorganismo
Movilidad
Indol
Produccin
de cido
sulfhdrico
E. coli ATCC 25922
+
+
K. pneumoniae ATCC
700603
P. mirabilis ATCC 43071 +
+
S. typhimurium ATCC +
+
14028
S. enteritidis ATCC
+
+
13076
S. flexneri ATCC 12022 Limitaciones
-En las bacterias aerobias estrictas, que slo crecen en superficie, la movilidad puede
ser difcil de observar.
-Algunas bacterias productoras de melanina como M. morganii, pueden dar un color
parduzco, que no debe confundirse con el color negro debido a la produccin de cido
sulfhdrico.
Medio preparado: mbar.
Almacenamiento: medio deshidratado: a 10-35 C. medio preparado: a 2-8 C.
MIO Medio. Movilidad Indol Ornitina

Medio usado para la identificacin de Enterobacteriaceae en base a su movilidad,
actividad de ornitina decarboxilasa y produccin de indol.
Fundamento
Medio de cultivo semislido, altamente nutritivo debido a la presencia de extracto de
levadura, peptona y triptena. Adems, la triptena aporta grandes cantidades de
triptfano, sustrato de la enzima triptofanasa, para la realizacin de la prueba del indol.
La dextrosa es el hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la
deteccin de la enzima ornitina decarboxilasa, el prpura de bromocresol es el
indicador de pH, que en medio alcalino es de color prpura y en medio cido es
amarillo.
Por su composicin, es posible detectar 3 reacciones en un mismo tubo: movilidad,
presencia de ornitina decarboxilasa e indol.
La movilidad se demuestra por un enturbiamiento del medio o por crecimiento que
difunde ms all de la lnea de inoculacin.
La reaccin positiva a la ornitina est dada por un color prpura del medio. Debido a la
fermentacin de la glucosa se reduce el pH produciendo una condicin cida y
originando que el indicador de pH prpura de bromocresol vire al amarillo. La presencia
de acidez, otorga condiciones ptimas para la actividad de la enzima ornitina
decarboxilasa, la cual decarboxila la ornitina presente. Por decarboxilacin, se alcaliniza

el medio, con el consecuente viraje del indicador hacia el color prpura.
El indol, es producido a partir del triptfano por los microorganismos que contienen la
enzima triptofanasa. El desarrollo de un color rojo luego de agregar unas gotas de
reactivo de Kovacs o de Erlich, indica un resultado positivo.
Instrucciones
Dextrosa
1.0
3.0
Peptona
10.0 litro de agua destilada. Calentar a
Triptena
10.0 ebullicin hasta completa
Clorhidrato de L-ornitina
5.0 disolucin. Distribuir en tubos y
esterilizar 15 minutos a 121C.
Agar
2.0
Prpura de bromocresol
0.02
pH final: 6.5 0.2
Siembra: a partir de un cultivo puro del microorganismo en estudio, inocular por
puncin profunda con asa recta.
Incubacin: en aerobiosis, durante 18-24 horas a 35-37 C.
Resultados
1-Movilidad:
-Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento ms all de la lnea de
siembra.
-Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra.
2-Ornitina decarboxilasa:
-Resultado positivo: color prpura.
-Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color violceo en la
superficie del medio.
3-Prueba del indol:
La prueba de indol se realiza una vez que se ha determinado la movilidad y la prueba
de ornitina.
-Resultado positivo: color rojo al agregar el reactivo revelador.
-Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento.
Microorganismo
Crecimi Movilidad
Indol
Ornitina
ento
decarboxilasa
E. coli ATCC 25922
Bueno
+
+
+
K. pneumoniae ATCC
Bueno
700603
P. mirabilis ATCC 43071 Bueno
+
+
Caractersticas del medio: medio preparado: prpura transparente a ligeramente
opalescente.
Christensen Medio (Urea Agar Base).

Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad uresica.
Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como Proteus spp., otras
enterobacterias y estafilococos.
Fundamento
En el medio de cultivo, la triptena y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo
de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el rojo de

fenol es el indicador de pH.
Algunas bacterias hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberando amonaco
y dixido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio haciendo virar el rojo de
fenol del amarillo al rojo. En este medio, la fermentacin de la glucosa activa la enzima
ureasa, acelerando la velocidad del metabolismo en aquellos organismos que hidrolizan
lentamente la urea, como especies de Enterobacter o Klebsiella.
Instrucciones
Triptena
1.0
Suspender 24 g de polvo en 950
ml de agua destilada. Dejar
Glucosa
1.0
reposar 2 minutos. Esterilizar en
Cloruro de sodio
5.0
Fosfato monopotsico
2.0
minutos. Enfriar a 50C y agregar
Rojo de fenol
0.012 50 ml de una solucin de urea al
40% previamente esterilizada por
filtracin o cloroformo. Fraccionar
en tubos de hemlisis y solidificar
Agar
15.0
en pico de flauta con fondo
profundo.
pH final: 6.8 0.2
Siembra: a partir de un cultivo puro de 18-24 horas, estriar la superficie del pico de
flauta. Algunos microorganismos pueden requerir mayor tiempo de incubacin.
Se recomienda no punzar la capa profunda para controlar el color.
Incubacin: en aerobiosis, durante 24-48 horas a 35-37 C.
Resultados
Microorganismo
Actividad uresica
Color del medio
Proteus mirabilis ATCC
Positiva
Rojo-Rosado
43071
K. pneumoniae ATCC
Positiva dbil
Rojo-Rosado
700603
Escherichia coli ATCC
Negativa
Amarillo
25922
Negativa
Amarillo
S. typhimurium ATCC
Negativa
Amarillo
14028
Limitaciones
-Bacterias que hidrolizan lentamente la urea, como ser Klebsiella, Enterobacter y
Citrobacter, viran al color rojo-rosado de todo el medio de cultivo luego de varios das
de incubacin.
-No calentar o sobrecalentar el medio de cultivo porque la urea se descompone
facilmente.
Caractersticas del medio: preparado: amarillo
MR-VP Medio Medio diferencial

Medio utilizado para la realizacin del ensayo de Rojo de Metilo y Voges Proskauer.
Es particularmente til para la clasificacin de enterobacterias.
Fundamento
En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a travs de distintas vas
metablicas. Segn la va utilizada, se originarn productos finales cidos (cido
lctico, cido actico, cido frmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol).
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podra ser reconocida por la adicin de
un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de productos cidos, y por
la adicin de alfa naftol e hidrxido de potasio para evidenciar la presencia de
productos finales neutros.
Voges y Proskauer, describieron una coloracin rojiza que apareca despus de
adicionar hidrxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con
glucosa. Esta coloracin se debe a la oxidacin del acetilmetil carbinol a diacetilo el
cual reacciona con la peptona del medio para dar un color rojo.
Instrucciones
Pluripeptona
7.0
de agua destilada. Calentar
Glucosa
5.0
suavemente agitando hasta
disolver. Distribuir y esterilizar en
Fosfato dipotsico
5.0
autoclave a 118-121C durante
15 minutos.
pH final: 6.9 0.2
Siembra: por inoculacin directa, a partir del cultivo en estudio.
Incubacin: en aerobiosis, a 35-37C por 3 das.
Revelado de pruebas bioqumicas
a-Prueba del rojo de metilo: aadir unas gotas de una solucin de rojo de metilo al
0.04%, observar el color del medio.
b-Prueba del Voges Proskauer: aadir 0,6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etlico
absoluto y 0.2 ml de hidrxido de potasio al 40% a 2.5 ml de cultivo. Agitar
vigorosamente el tubo, y dejar a temperatura ambiente durante 10-15 minutos.
Observar el color de la superficie del medio.
Resultados
1-Prueba del rojo de metilo:
Positivo: color rojo.
Negativo: color amarillo.
2-Prueba de Voges Proskauer:
Positivo: desarrollo de un color rojo en pocos minutos despus de una completa
agitacin del tubo.
Negativo: ausencia de color rojo.
Microorganismo
Crecimiento
RM
VP
E. coli ATCC 25922
Bueno
+
K. pneumoniae ATCC
Bueno
+
700603
P. mirabilis ATCC 43071 Bueno
+
S. typhimurium ATCC Bueno
+
14028
Citrobacter freundii
Bueno
+
Enterobacter
Bueno
+
aerogenes
Limitaciones
En algunas cepas positivas para la prueba VP, pueden no desarrollar el color rojo en la
superficie mediante el revelado por la metodologa descripta anteriormente. En estos

casos, se recomienda calentar el medio de cultivo para favorecer el desarrollo de color
rojo.
Caractersticas del medio: medio preparado: mbar claro, transparente sin precipitado.
MEDIOS DE TRANSPORTE
Cary Blair
Medio recomendado para la recoleccin, transporte y conservacin de muestras aptas
para estudios microbiolgicos.
Es especialmente til para la bsqueda de Vibrio spp. a partir de muestras fecales y
rectales.
Fundamento
El primer medio utilizado para el transporte de muestras para estudios microbiolgicos
fue el medio de Stuart. En 1964 Cary y Blair describieron un nuevo medio para el
transporte de muestras fecales. Tena un bajo contenido de nutrientes, un bajo
potencial de oxidoreduccin y un alto pH. En los estudios de Cary y cols., Salmonella y
Shigella fueron recuperadas luego de 45 das de inoculacin. Otros autores han
demostrado la eficacia de ese medio de transporte para estudios microbiolgicos en
gastroenteritis. El medio de transporte Cary-Blair, es semislido debido a la baja
concentracin de agar. Tiene un mnimo aporte de nutrientes que permite la
recuperacin de los microorganismos sin que haya replicacin. El tioglicolato de sodio
se incluye para proveer un bajo potencial redox; y el pH relativamente alto minimiza la
destruccin bacteriana por acidificacin.
Instrucciones
1.5 Suspender 12,6 g del polvo en
Fosfato disdico
1.1 991 ml de agua destilada.
Reposar 5 minutos y mezclar
Cloruro de sodio
5.0
hasta uniformar. Calentar
agitando frecuentemente y hervir
1 minuto hasta disolver. Enfriar a
50C y agregar 9 ml de una sol.
Agar
5.0 de CaCl2 al 1% preparada
recientemente. Ajustar el pH si es
necesario. Distribuir y esterilizar
15 minutos a vapor fluente.
pH final: 8.4 0.2
Siembra
1-Utilizando un hisopo estril, recolectar la muestra segn la metodologa apropiada
para ensayos microbiolgicos.
2-Colocar el hisopo en el tercio superior del medio de cultivo. Si una parte de la varilla
sobresale, cortarla e inmediatamente tapar el tubo. Enviar lo mas pronto posible al
laboratorio para su procesamiento, dentro de las 4-6 horas de recolectada la muestra.
Incubacin
Mantener a temperatura ambiente durante su envo al laboratorio.
Resultados
Los tubos con medio de transporte se subcultivan en medios slidos apropiados segn
la muestra y el microorganismo que se quiera aislar. Luego de la incubacin, debe
haber escasa o nula reduccin de la viabilidad de los microorganismos.
Microorganismos
Vibrio cholerae
Crecimiento
+
+
+
Control Negativo
Resultado
Medio sin inocular
Sin cambio
Caractersticas del medio: Medio preparado: mbar claro. Puede presentar escasa
opalescencia.
Stuart Medio de Transporte

Medio destinado a la recoleccin, transporte y preservacin de muestras clnicas aptas
para exmenes bacteriolgicos. Es til para mantener la viabilidad de gonococos y de
otros microorganismos de difcil desarrollo.
Fundamento
Medio semislido, no nutritivo.
Contiene tioglicolato de sodio, el cual provee un ambiente reducido y es til para
suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte, y azul de metileno, que es el
indicador de oxido reduccin. De esta manera se favorece la viabilidad de los
microorganismos durante su envo al laboratorio. Cooper encontr que usando hisopos
impregnados con carbn bacteriolgico se recuperan en forma exitosa numerosos
patgenos entricos y respiratorios.
Instrucciones
0.9 Suspender 14,1 g del polvo por
Glicerofosfato de sodio
10.0 litro de agua destilada. Reposar 5
minutos. Calentar a ebullicin
Cloruro de calcio
0.1
hasta disolucin total. Distribuir
Azul de metileno
0.002 en tubos con cierre a rosca (para
Agar
evitar oxidacin) llenndolos

hasta 2/3 del tubo.
3.0 Esterilizar 15 minutos a 121C.
Dejar solidificar en posicin
vertical.
pH final: 7.4 0.2
Siembra
1-Utilizando un hisopo estril, recolectar la muestra segn la metodologa apropiada
para ensayos microbiolgicos.
2-Colocar el hisopo en el tercio superior del medio de cultivo. Si una parte de la varilla
sobresale, cortarla e inmediatamente tapar el tubo. Rotular, y enviar lo mas pronto
posible al laboratorio para su procesamiento, dentro de las 8 horas de recolectada la
muestra.
Se recomienda que las muestras transportadas se cultiven sin demora luego de ser
recibidas en el laboratorio.
Incubacin: mantener los hisopos a temperatura ambiente durante su envo al
laboratorio.
Resultados
Los tubos con medio de transporte se subcultivan en medios slidos apropiados segn
la muestra y el microorganismo que se quiera aislar. Luego de la incubacin, debe

haber escasa o nula reduccin de la viabilidad de los microorganismos.
Entre los microorganismos que han sido transportados con escasa o nula reduccin de
la viabilidad en el medio transporte de Stuart dentro de un perodo de 8 horas figuran:
Microorganismos
Crecimiento
N. gonorrhoeae ATCC 49226
+
+
H. influenzae tipo B
+
+
Control Negativo
Resultado
Medio sin inocular
Sin cambio
Los microorganismos ms resistentes pueden permanecer viables durante perodos
mayores a 72 horas.
Caractersticas del medio: medio preparado: ligeramente opalescente con tonalidad
azul dependiendo del grado de oxidacin.
Medio de Transporte AMIES sin/ con carbn activado
Este medio se obtuvo de una modificacin del medio Stuart al cual se le reemplaz el
glicerofosfato por un buffer inorgnico superior, la adicin de carbn permiti el
crecimiento de patgenos tratados con antibioterapia y mejorar el desarrollo de
fastidiosos en comparacin con el Stuart. Se le omiti el azul de metileno. Este medio
as modificado permiti recuperar un nmero mayor de patgenos que en el Medio de
Stuart. Bsicamente, cambia el glicerofosfato por un fosfato inorgnico y el azul de
metileno por carbn vegetal neutro farmacutico. Adems, aade iones Calcio y
Magnesio, que ayudan a conservar la permeabilidad de la clula bacteriana. El Medio
Amies es recomendado para secreciones de garganta, vagina, heridas y urogenital
causadas por flora fastidiosa o dificil de mantener viable como son: Neisserias,
Streptococcus, Haemophylus, Listeria ; mantenindolos en ptimas condiciones para el
cultivo hasta despus de 48 hrs , y Medio Amies con carbn activado se utiliza para
secreciones de heridas y urogenital , para el cultivo y aislamiento de grmenes
fastidiosos , tratados o en tratamiento con antimicrobianos y/o expuestos a metabolitos
txicos para su desarrollo, la presencia del carbn tiene afinidad por compuestos
orgnicos , descompone las formas reducidas de oxgeno y secuestra los radicales
libres . V.cholerae permanece viable y cultivable durante sesenta das en el medio de
transporte Amies con carbn.

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MEDIOS DE CULTIVO

Agar Nutritivo Agar simple

nitrgeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el

nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, an de

AGAR CHOCOLATE: despus de aadir la sangre y agitando frecuentemente se

Agar Cerebro Corazn Infusin

Infusin Cerebro Corazn Medio Liquido enriquecido

peptona, son la fuente de carbono, nitrgeno, y vitaminas. La glucosa es el hidrato de

Frmula (en gramos por litro)

Staphylococcus aureus ATCC

Agar Mac Conkey Agar selectivo para Enterobacterias

Siembra: sembrar en superficie.

Agar SS - Salmonella Shigella

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.

Siembra: por estriado (dispersin y agotamiento) la superficie del medio de cultivo.

Caractersticas del medio:

Medio preparado: rojo naranja.

XLD Agar (Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar)

XLD Agar (agar de xilosa, lisina, desoxicolato) es un medio moderadamente selectivo y

*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento

Resultado:s en la tabla siguiente se indica la morfologa caracterstica de las colonias:

E.M.B. Agar Eosina Azul de Metileno

Incubacin: En aerobiosis, a 35-37 C durante 18-24 horas. Interpretacin de los

Limitaciones - En el caso de los microorganismos fermentadores, no se puede

que los indicadores presentes son fotosensibles y pueden inhibir el desarrollo de

TCBS Medio Vibrio

c- Agua: Filtrar de 1 a 10 litros (el volumen deseado) de agua con membrana de

MEDIO LIQUIDO PARA DEMOSTRAR NECESIDADES DE OXIGENO

frecuencia hasta disolucin total.

pH final: 7.1 0.2

Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella spp. a partir

Incubacin: a 35-37 C, durante 16-24 horas, en aerobiosis.

Agua Peptonada Alcalina.

MEDIOS DIFERENCIALES: IDENTIFICACION DE Enterobacterias

Siembra: a partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo

Simmons Citrato Agar

Lisina Hierro Agar (LIA)

En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para

Color en el pico de Color en la base Ennegrecimiento

Sulfuro Indol Movilidad

Es un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol y de

autoclave a 121C durante 15

pH final: 7.3 0.2

Cepas inmviles: el crecimiento se observa solamente en la lnea de siembra.

MIO Medio. Movilidad Indol Ornitina

decarboxilasa, la cual decarboxila la ornitina presente. Por decarboxilacin, se alcaliniza

Christensen Medio (Urea Agar Base).

de microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el rojo de

MR-VP Medio Medio diferencial

superficie mediante el revelado por la metodologa descripta anteriormente. En estos

Stuart Medio de Transporte

evitar oxidacin) llenndolos

la muestra y el microorganismo que se quiera aislar. Luego de la incubacin, debe

Medio de Transporte AMIES sin/ con carbn activado

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