PRACTICA 1

AISLAMIENTO DE HONGOS DEL SUELO

ANA LUCIA ROMERO

KATHERIN HERNANDEZ
LAURA GUERRERO BUSTILLO
MARIA DELFINA FARELO

ADRIANA SANDON
DOCENTE

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR (U.P.C)

FACULTAD DE LA SALUD
MICROBIOLOGIA
2016-I

INTRODUCCIN
La microbiota del suelo tiene una gran variedad de microorganismos; formada por
una mezcla microscpica formada de miles y millones de bacterias,
actinomycetos, hongos, protozoos, etc., por cada gramo de suelo. (Ma de Lourdes,
1991) que cumplen un rol esencial en los procesos biogeoqumicos de la materia.
Entre las actividades de los microorganismos entre ellos los hongos, bacterias y
otros microorganismos, est el mantenimiento de la fertilidad del suelo; siendo los
responsables de la degradacin de toda la materia orgnica muerta para formar el
humus, retornando al suelo y a la atmsfera las sustancias transformadas por
otros seres vivientes. No obstante, los hongos que se encuentran en el suelo tiene
gran importancia en otros aspectos, ya que muchos son fitopatogenos que atacan
a plantas de inters econmico a travs de la raz o nivel del suelo (George
,S.1963).
En el presente trabajo realizaremos el aislamiento de hongos en tres diferentes
tipos de suelos, superficial, rizoplano y rizosferico mediante el mtodo de dilucin
y el mtodo de warcup.

1.0 MARCO TEORICO

1.1 GENERALIDADES
El suelo es un hbitat o ecosistema, y no un sustrato; esta caracterstica complica
las definiciones y la metodologa, porque el suelo representa una mezcla compleja
de fracciones orgnicas e inorgnicas con agua y organismos vivos. Las
fracciones orgnicas se componen de material de plantas en diferentes fases de
descomposicin,

races

vivas,

exudados,

microorganismos,

pequeos

invertebrados y contenidos intestinales. Por esta razn, el suelo alberga una parte
considerable de la biodiversidad total de hongos, y no existe ninguna estimacin
( 246 Manual de biologa de suelos tropicales fidedigna del nmero de especies de
hongos del suelo (Hawksworth, 1991; Hawksworth y Rossman, 1997). Los hongos
del suelo juegan un papel clave en los procesos de descomposicin,
mineralizando y reciclando los nutrientes de las plantas (Wainwright, 1988; Lodge,
1993; Beare et al., 1997). Los saprfitos tienen una especificidad limitada por
sustratos; por ejemplo, los zygomycetes usan carbohidratos simples, mientras los
ascomycetes descomponen principalmente celulosa y hemicelulosa (Domsch et
al., 2007; Zak y Visser, 1996; Lodge, 1997). En sistemas agrcolas, los patgenos
de plantas y sus antagonistas son particularmente importantes. Los patgenos de
plantas actan en el suelo, en la rizsfera o infectan tallos, causando que las
plntulas se marchiten y, por tanto, provocan grandes prdidas. stos pueden ser
especficos, aunque la mayora ataca una amplia gama de plantas hospederas.
Existen evidencias de que las prcticas agrcolas causan ms alteraciones
cuantitativas que cualitativas en la comunidad de microhongos del suelo
(Pfenning, 1997; Rodrigues-Guzman, 2001). La supresin de patgenos de
plantas puede resultar intrnseca en los suelos, pero tambin es posible que se
mantenga o incremente con algunas prcticas agrcolas especficas, tales como la
incorporacin de materia orgnica, plantas utilizadas como cubierta vegetal y la
diversificacin de cultivos. Algunos elementos biolgicos han sido identificados

como los principales factores de la supresin de enfermedades (Chet y Baker,

1980;

Schneider,

1984;

Mazzola,

2002,

2004).

Se

ha

demostrado

experimentalmente que la introduccin de antagonistas especficos como

Trichoderma spp. o Coniothyrium minitans pueden reducir la incidencia de una
variedad de enfermedades en el suelo (Whipps et al., 1993). Con relacin al papel
de los organismos descomponedores, cabe mencionar que los hongos son
responsables de la degradacin de xenobiticos y contaminantes orgnicos
introducidos en el suelo (Bordjiba et al., 2001; Barratt et al., 2003; Silva et al.,
2003). Los hongos tambin constituyen una parte importante de la cadena
alimenticia dentro del suelo, especialmente en el caso de la mesofauna
(Bonkowski et al., 2000). El mantenimiento de la diversidad de hongos del suelo
debera, por ende, beneficiar directamente la agricultura sustentable, mediante el
suministro de nutrientes, una mejor estructura fsica del suelo y el control de
antagonistas de los patgenos de las plantas en el suelo.
1.2 HONGOS DEL SUELO
Los hongos del suelo pueden agruparse en tres grupos generales segn la forma
de obtener la energa. Los descomponedores -hongos saprofticos- convierten la
materia orgnica muerta en biomasa fungal, bixido de carbono y pequeas
molculas, tales como cidos orgnicos. Estos hongos, generalmente, utilizan
sustratos complejos, tales como la celulosa y la lignina en la madera, y son
esenciales en la descomposicin de estructuras de anillos de carbono en algunos
contaminantes. Unos cuantos hongos reciben el nombre de "hongos del azcar"
porque descomponen las mismas sustancias que muchas bacterias. Al igual que
las bacterias, estos hongos son importantes inmovilizando, o reteniendo,
nutrientes en el suelo.
Los mutualistas -los hongos micorrizales- colonizan las races de las plantas. A
cambio del carbono proveniente de la planta, los hongos micorrizales ayudan a
hacer soluble el fsforo, y atraer nutrientes del suelo (fsforo, nitrgeno,
micronutrientes y, tal vez, agua) a la planta. Un grupo principal de micorrizos, los
ectomicorrizos, crecen en las capas superficiales de las races, y se asocian
comnmente con rboles.El segundo grupo principal de micorrizos son los
endomicorrizos, los cuales crecen dentro de las clulas de la raz, y, comnmente,
se asocian con yerbas, cosechas en hileras, vegetales y arbustos.

El tercer grupo de hongos, los patgenos o parsitos, causan producciones

reducidas o la muerte cuando colonizan races y otros organismos. Los hongos
patgenos en las races causan prdidas econmicas muy importantes en la
agricultura todos los aos. Los hongos del suelo son organismos aerbicos. El
suelo que se vuelve anaerbico por perodos largos, generalmente, pierde su
componente fngico. Las condiciones anaerbicas suelen ocurrir en suelo
inundado y en suelo compactado.
1.3 CAPAS DE SUELOS
SUELO SUPERFICIAL, HORIZONTE A O ALUVIAL
Es la capa ms superficial, que contiene una capa oscura y rica en humus y
sustancias minerales. El humus es el componente frtil de los suelos, que los
hace aptos para los cultivos. En este horizonte hay gran cantidad de
microorganismos, hongos y bacterias.
SUELO RIZOPLANO
Es la capa donde se acumulan los materiales lavados del horizonte A que llegan
por procesos de infiltracin. Predominan las partculas minerales y los
componentes orgnicos procedentes de restos de plantas y materiales en
descomposicin.
SUELO RIZOSFERICO
Es la porcin de suelo ntimamente asociada a las races de plantas en
crecimiento y est constituida por la superficie inmediata de las races junto con el
volumen de suelo con el que interacciona.
La rizosfera es un nicho propicio para gran cantidad de microorganismos puesto
que se benefician de compuestos como azcares, hormonas, aminocidos y
vitaminas, excretados por las races de las plantas en crecimiento. Por tanto, la
rizosfera es una regin del suelo con intensa actividad microbiana, siendo el
nmero de bacterias encontradas en suelo rizosfrico mucho mayor al del suelo
no rizosfrico.

OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL

Aislar y observar las caractersticas macroscpicas y microscpicas de los

hongos que se encuentran en los diferentes tipos de suelo, superficial,
rizoplano y rizosferico.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Aislar hongos de suelo mediante el mtodo de dilucin y el mtodo de

warcup.

Observar las caractersticas de los cultivos realizados macroscpica y

microscpicamente

Identificar las caractersticas macroscpicas y microscpicas de cada

hongo que creci en el medio de cultivo

MATERIALES

Muestra de suelo: rizosfrico, superficial y material vegetal senescente.

5 cajas petri con (medios naturales preparados la clase anterior: arroz,
avena, arveja y papa, si no es posible la utilizacin de medios complejos, se
usarn medios comerciales)
3 tubos de ensayo de 16 *150 con 9 ml de solucin salina estril por grupo
1 erlenmeyer con 90 ml de solucin salina estril
Gotero
Asas de Hokey
Azul de lactofenol
Laminas y laminillas
Asa micolgica
Microscopio

PROCEDIMIENTO
METODO POR DILUCIONES
1. Tomar la muestra de suelo, homogenizarla y pesar 10 gr.
2. Adicionar la muestra a 90ml de solucin salina estril. Homogenizar y dejar
sedimentar
3. Tomar 1ml de la suspensin anterior y pasarlo a 9ml de solucin salina
estril, homogenizar y dejar sedimentar; esta es la dilucin 10 -1. Realizar
4. este paso sucesivamente hasta alcanzar la dilucin 10 -5.
5. Tomar 0,1ml de las diluciones 10 -1, 10-3 y 10-5 y sembrarlo en superficie
sobre los medios en placa con ayuda del asa de Hokey o del asa curva.
6. Incubar a T ambiente por 8 das bajo observacin diaria del crecimiento
para reportar recuento y describir micro y macroscpicamente las colonias.
METODO DE WARCUP

De la muestra de suelo tomar 5 granos y espolvorearlos en la caja con los

medios ( en 5 puntos)
Incubar a T ambiente por 8 das bajo observacin diaria a fin de informar
morfologas.
Montaje de hongos para observaciones microscpicas
Sobre una lmina coloque una gota de azul de lactofenol o cido lctico
segn el hongo sea oscuro (dematiaceo) o de color blanco (hialino).
Transfiera el hongo con aguja y cbralo con laminilla
Observe al microscopio en 10x y 40x. Recuerde tomar fotos o dibujar las
estructuras que vea.

MTODO POR DILUCIN (SUELO RIZOSFERICO)

EXAMEN MACROSCPICO
DESCRIPCIN
COLONIA 1, 10-1

COLONIA 2, 10-2

COLONIA 3, 10-3

EXAMEN MICROSCPICO
COLONIA 1, 10-1

COLONIA 2, 10-2

DESCRIPCIN

COLONIA 3, 10-3

MTODO DE WARCUP
EXAMEN MICROSCPICO
DESCRIPCIN
COLONIA 1, SUPERFICIAL

COLONIA 2, RIZOPLANO

EXAMEN MACROSCPICO
DESCRIPCIN
COLONIA 1, SUPERFICIAL

COLONIA 2, RIZOPLANO

CUESTIONARIO
1. Para qu tipo de suelo (superficial, rizosferico o rizoplano) usara la
tcnica de diluciones y para cuales la tcnicas de Warcup.
Para el suelo rizsferico utilizaramos la tcnica de diluciones por que este
suelo se encuentra dotado de una mayor concentracin de materia orgnica lo
que facilita el crecimiento de muchos hongos adems en este suelo se dan
mayores interacciones bioqumicas entre diferente microorganismos. La
materia en descomposicin le brinda a los hongos los nutrientes necesarios
para su desarrollo y crecimiento, adems que la materia orgnica es fuente de
carbono para ellos, por esta razn es necesario realizar diluciones para
apreciar mejor el crecimiento fngico en las placas de agar. Para la tcnica de
Warcup utilizaramos muestras de suelo superficial y rizoplano porque se
encuentran hongos en menor cantidad debido a que estos tienen condiciones
especificas para el crecimiento de microorganismos, en el caso del rizoplano
predominan hongos capaces de interactuar con la planta como micorrizas y en
el superficial, hongos capaces de resistir condiciones adversas.

2. Nombre; describa macro y microscpicamente; consulte y anexe

imgenes de 5 de los hongos ms encontrados en muestras de suelo.

Aspergillus niger

Caracteristicas macroscopicas: Presenta micelio lanoso; en el anverso puede

ser de color blanco-amarillento que cambia a negro y en el reverso presenta un
color blanco amarillento.

Caractersticas microscpicas: Se forman conidiforos largos y lisos con fialides

biseriadas que cubren completamente la vescula; adems presenta hifas
septadas, ascosporas o conidias.

Mucor sp

Caractersticas microscpicas: Forman delicados filamentos tubulares blancos

hialinos y cenociticos adems esporangios negros esfricos.

Caracteristicas macroscopicas: Las colonias de este gnero de hongos son

tpicamente de color blanco a beige o gris velloso-algadonoso, seco y de rpido
crecimiento. Las colonias en medio de cultivo pueden crecer varios centmetros de
altura. Mayora de las colonias pueden convertirse en gris a color marrn debido al
desarrollo de las esporas.

Fusarium roseum:

Microscpicamente: Hongo filamentosos y las esporas de este son fcilmente

reconocibles al microscopio por su forma de media luna o de canoa. Tienen tres
tipos de espora:
Las microconidias que son esporas unilaterales, sin septos, hialinas, elipsoidales,
a cilndricas, rectas o curvas, se forman sobre fialides laterales, cortas, simples o
sobre conidiosforo poco ramificados.
Las macroconidias son espora de pared delgada, fusiforme, larga,
moderadamente curva, con varias clulas de tres a cinco septas transversales.
Clamidoesporas: Son esporas simples o en pares, terminales o intercaladas
formadas a partir de la condensacin de los contenidos de las hifas y
macroconidias, de paredes gruesas mediante las cuales el hongo sobrevive en
condiciones ambientales desfavorables.

Macroconidias del Fusarium roseum.

Macroscpicamente: Se caracteriza por producir colonias de crecimiento rpido.
Su micelio es generalmente areo, abundante, algodonoso y con coloracin
variable de blanco a rosado durazno.

Fusarium roseum

Alternaria sp:

Microscpicamente: Los conidios pueden aparecer solitarios o encadenados y

son fcilmente reconocibles por su tabicacin longitudinal, transversal u oblicua y
presentan forma ovoide obclavada, con superficie lisa o rugosa y de coloracin
marron claro a oscuro, generalmente se forman en cadenas, adems presentan
hifas septadas coloreadas caf.

Alternaria sp.

Macroscpicamente: Presenta en cultivo colonias de color verde oscuro,

tornndose oscuras o casi negras a medida que envejece; polvorosas por el
desarrollo de un micelio areo, denso, bien desarrollado y de borde irregular,
adems el envs de la caja no presenta diferencias en la pigmentacin de la
colonia.

Alternaria sp.

Rhizoctonia solani:

Microscpicamente: Las hifas cuando son jvenes son hialinas, vacuolazas, con
tabiques gruesos, al envejecer adquieren color castao o castao rojizo, se

ramifican en ngulo recto; produce esclerocios en forma de masa miceliales color

blanco que se oscurecen a castao. Generalmente muestran una constitucin de
hifas entrelazadas de dimetro variable, cortas, elpticas semejantes a diminutos
barriles dispuestos en cadena.

Micelio Rhizoctonia solani

Macroscpicamente: Las colonias tpicas de este microorganismo se

caracterizan por ser blancas, algodonosas y planas; sin embargo dependiendo de
la especie pueden presentarse en tonalidades cremas amarillentas.

Rhizoctonia solani

3. Qu es un screening?

Son programas de ensayos que permiten la bsqueda y aislamiento de

microorganismos de inters industrial, para procedimiento selectivos o la
bsqueda de nuevos antibiticos para el aislamiento de mejores cepas
productoras de los mismos.
Screening Primario: Deteccin y aislamiento de microorganismos potencialmente
tiles. Para llevar a cabo un screening primario generalmente se parte de una
poblacin mixta (suelo, fermentaciones naturales, etc.) donde existe tanto una
gran cantidad como variedad de microorganismos potencialmente tiles que
debemos seleccionar. Para ello lo primero que hacemos es utilizar medios
selectivos donde crezca el tipo de microorganismo que nos interesa aislar. A este
medio se le pueden aadir inhibidores para eliminar los que no nos interesan.

Screening Secundario: Estudio de los microorganismos aislados en el screening

primario para separar los que tienen inters potencial de los que tienen inters real
y mejorar estas cepas seleccionadas.

4. A usted como futuro microbilogo, para que le sirve realizar

aislamiento de hongos del suelo, sea consciente de su respuesta?
La utilidad prctica que le vemos al ser profesional en microbiologa es que
trabajando en el aislamiento de suelos podemos determinar si este est afectado
por hongos patgenos o est en buenas condiciones para ser utilizado.
Adems es de gran importancia realizar el aislamiento de hongos en el suelo
porque podemos saber la composicin de un determinado ambiente o que tan rico
en minerales pueda ser el suelo que se est tratando; analizando y diferenciando
las morfologas de cada uno de los hongos del suelo.
Adems especficamente una de las tareas de la Microbiologa Industrial es
desarrollar procedimientos que permitan el aislamiento y seleccin de hongos
como por ejemplo en la agricultura como fertilizantes orgnicos y como cultivos de
conservacin que aumentan la actividad de estos.

BIBLIOGRAFA

www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/51habitats
%20de%20los%20microorganismos.htm
www.med.univangers.fr/GEIHP/Images/Fusarium.jpg

BAYONA Martin, MUOZ Patricia. MICROORGANISMOS DE INTERES

INDUSTRIAL. MANUAL DE LABORATORIO. Coleccin Apuntes. Centro
Editorial Javeriano.
EL
REINO
DE
LOS
hongosalergenicos.reviberoammicol.com/files/001.PDF.

HONGOS:

Aislamiento , identificacin y perfil biolgico de especies fungicas de tierras

. Pea Q. Shamun Carola. Lucana Victoria. Miranda Celia. Gimenez Maria.
Dispobible en http://www.ops.org.bo/textocompleto/rnbiofa98060603.pdf
C:\Users\JULIA PERPIAN\Documents\Silene\MICO\5b_Estudio de Hongos.mht

Siembra

www.infoagro.com/hortalizas/microorganismos_beneficiosos_cultivos.htm

CONCLUSIN

ANALISIS DE RESULTADOS