Determinaciòn de Azúcares Reductores Método DNS

DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES MTODO DNS
INTRODUCCION
Entre los distintos componentes de los alimentos, despus del agua, los carbohidratos
son las sustancias ms abundantes y ms ampliamente distribuidas en la naturaleza;
siendo la celulosa la biomolcula que se encuentra en mayor cantidad en la biosfera, y el
almidn, la fuente energtica alimentaria ms empleada en el mundo. En todos los seres
vivos se encuentran presentes los carbohidratos ya que la ribosa y la desoxirribosa son
parte de su material gentico. De la misma forma, en las frutas y hortalizas los
carbohidratos cumplen funciones estructurales y energticas, constituyendo algunos la
estructura rgida o mecnica de los tejidos vegetales; en tanto que en las semillas, races
y tubrculos funcionan bsicamente como reservas energticas. Por otro lado, en algunos
animales estos compuestos son parte de sus reservas energticas (glucgeno) o
constituyen un componente esencial de su estructura externa (quitina). Adems de ser
componentes naturales de muchos alimentos, la industria alimentaria emplea los
carbohidratos en funcin de sus propiedades funcionales, usndolos como ingredientes
para mejorar la aceptabilidad, palatabilidad y vida til de diversos alimentos. Desde el
punto de vista qumico, los carbohidratos pueden definirse como polihidroxialdehidos y
polihidroxicetonas y sus derivados.
Hoy en da la industria licorera y alimenticia utiliza varios tipos de mtodos analticos para
la determinacin azcar y alcohol en los licores y/o bebidas a utilizar como medio de
venta. Uno de los mtodos ms acordes y con mejor resultados en la determinacin de
los azucares con carcter reductor, es el mtodo (DNS), mtodo que ha sufrido varias
modificaciones a travs de los aos para adecuarse al anlisis de diferentes materiales y
su principal ventaja radica en su alta sensibilidad y productividad debido a que es un
mtodo espectrofotomtrico; el procedimiento se basa en una reaccin redox que ocurre
entre el DNS y los azcares reductores presentes en la muestra, sin embargo a nivel
industrial no es recomendable utilizarlo cuando dicha trata sustancias tales como mieles y
caldos de fermentacin que lo contengan, esto debido a segn estudios realizados en la
materia, a los altos niveles de dispersin.
El presente informe desarrollara el procedimiento respectivo para la determinacin de
azucares permitiendo realizar y ajustar una curva de calibracin; por el mtodo del cido
3,5 dinitro saliclico (DNS).
OBJETIVO
Conocer y aplicar los principios de la curva patrn aplicada a la cuantificacin de
azucares reductores con el reactivo 3,5-dinitrosalicilico (3,5 DNS)
MATERIALES Y REACTIVOS
Fiola
Pipetas
Vaso de precitado
Bao de Mara
Matraz
Espectrofotometra UV
Reactivo DNS
Agua Destilada
METODOS
Preparamos 5 mililitros de solucin estndar, Aadimos un volumen del reactivo

DNS a un volumen de la muestra a analizar.
Mantener la mezcla en un bao Mara, se mantiene la mezcla durante 5 min, luego
en agua ms hielo durante 3 min.
Se aade 1 ml de agua destilada ms 5 mil de la solucin
Dejar reposar 10 min, Homogenizar. Luego lectura de 540 nm.
RESULTADOS
Se utiliz una solucin patrn de glucosa (0.5 g/L). En la Tabla 1.0 se muestra las
cantidades de volumen de solucin de glucosa, agua destilada y solucin DNS necesarias
para la realizacin de las 5 soluciones y el blanco (que es la referencia de 0 para la toma
de absorbancia en el espectrofotmetro), para proceder a la toma de datos en el
espectrofotmetro.
Para la construccin de la curva de calibracin es necesario conocer las concentraciones
de azcar en cada solucin despus de haber realizado la dilucin con el agua destilada.
Esta concentracin se puede determinar con la ecuacin
Esta es la ecuacin, despejando de esta ecuacin la C2, que es la de inters se obtiene:
En los cuadros seleccionados con naranja se debe a que sea a establecido un leve
cambio debido a que se tom las muestras en diferente orden resultando una curva
diferente a la esperada, con este arreglo se pudo obtener un
R2 aceptable.
Figura 01. Curva de Calibrado

Con la curva obtenida se realiza una grfica de tendencia lineal que se ajusta a los datos,
el
obtenido para la ecuacin de la recta es de 0.9764. Teniendo en cuenta que el
es mayor a 0.95 los datos no tienen mucha dispersin y por lo tanto son aceptables.
CONCLUSIONES:
El DNS reacciona nicamente con los azcares reductores. La sacarosa es un
disacrido no reductor, pero tras su hidrlisis en medio cido se liberan glucosa y
fructosa que s son reductores y reaccionan con el DNS generando un producto
coloreado. La intensidad del color, que se puede medir por mtodos
espectrofotomtricos es proporcional a la concentracin de sacarosa.
El mtodo DNS (tcnica de miller) es una tcnica colorimtrica que emplea cido 3,5
dinitrosaliclico para la hidrlisis de polisacridos presentes en una muestra.
Determinamos las absorbancia por medio de un espectrofotmetro a 540nm. Esta
tcnica nos sirve para cuantificar los azucares reductores producidos durante una
fermentacin o para cuantificar los productos de una reaccin enzimtica. La curva de
calibracin en la representacin grfica, en un eje de coordenadas, de la Absorbancia

(eje de ordenadas: Y) frente a la Concentracin (eje de abscisas: X).Ensayamos
varias soluciones de concentraciones, y determinamos
sus absorbancias,
construyendo la curva de calibrado, que es una recta. Obteniendo un
R2
0.9764
aceptable. La concentracin de una solucin problema (desconocida), se averigua

por interpolacin de la Abs de la solucin en la curva de calibracin, o a travs de la
ecuacin de la recta (y = mx +b) donde: Absorbancia (y) = constante (m) x
concentracin + absorbancia del blanco.
Comprobamos que la Espectrofotometra es el mtodo de anlisis ptico ms
adecuado para la determinacin de una concentracin en una muestra. Dicho de otro
modo es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida
por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que
contiene una cantidad conocida de la misma sustancia en este caso la glucosa.
REFERENCIA BIBLIOGRAFICA:
http://es.slideshare.net/FranKlinToledo1/determinacion-de-azucares-reductorestotales-art
http://www.academia.edu/4403544/DETERMINACION_DE_AZUCARES_REDUCTOR
ES_METODO_DNS

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DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES MTODO DNS

Preparamos 5 mililitros de solucin estndar, Aadimos un volumen del reactivo

Se aade 1 ml de agua destilada ms 5 mil de la solucin

Dejar reposar 10 min, Homogenizar. Luego lectura de 540 nm.

Esta es la ecuacin, despejando de esta ecuacin la C2, que es la de inters se obtiene:

Figura 01. Curva de Calibrado

obtenido para la ecuacin de la recta es de 0.9764. Teniendo en cuenta que el

calibracin en la representacin grfica, en un eje de coordenadas, de la Absorbancia

aceptable. La concentracin de una solucin problema (desconocida), se averigua

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