Dominique Vargas

Enzimolog
[Capte la atencin del lector con un
resumen atractivo. Este resumen

a es una breve descripcin del

documento. Cuando est listo para
agregar contenido, haga clic aqu y
empiece ade
Recopilacin escribir.]

Preguntas
Actividad enzimtica y linealizacin
Problema 14
Qu relacin numrica existe entre Km y [S] cuando una reaccin enzimtica
alcanza el 87 % de la Vmax?

Problema 15
100 ug de una enzima a 25 C descomponen en 10 min el 1% de un sustrato 0,1 M.
La misma cantidad de enzima descompone en 1 min el 10% de un sustrato 10 -3 M.
Calular Vmax y ctividad especfica de la enzima.

Problema 16
Una enzima se ensayo con una [S] inicial de 2.10 -5 M. en 6 min la mitad del sustrato
haba reaccionado. Si la Km para el sustrato es 5x10 -3 M, calcular la Vmax y la
cantidad de producto formado en 10 min de reaccin.

Problema 17
Una enzima cataliza una reaccin con una velocidad mxima de 5 moles por
minuto, siendo su Km para el sustrato de 0.5 mM. Si la ponemos en presencia de
una concentracin 500 mM de sustrato. Qu cantidad de sustrato se lograr
transformar en 10 min?

Problema 18
La KM para el etanol de la enzima alcohol deshidrogenada de levadura es de
1.3x10-2 M. Si la concentracin de alcohol en el medio de reaccin es de 59.8 g/ml,
Qu proporcin de enzima estar libre y que proporcin estar combinada con el
sustrato? (PM etanol 46 g/mol).

Problema 19
Calcular que velocidad se obtendr en una reaccin enzimtica si la velocidad
mxima es igual a 100 y la concentracin de sustrato es igual a) 10 Km y b) Km/3.

Problema 20
Una enzima cataliza una reaccin a una velocidad de 35moles/min cuando la
concentracin de sustrato es 0.01M. La KM para el sustrato es 2x10 -5 M. Cul ser
la velocidad inicial a las concentraciones de sustrato: a) 3.5x10 -3 M, b)4x10-4 M, c)
2x10-4 M, d) 2x10-6 M y e) 1.2x10-6 M?

Problema 21
Calcular Km y Vmax de una enzima sabiendo que la recta obtenida en una
representacin de Lineaweaver y Burk corta el eje de ordenadas en 5x10 3
(moles/min)-1, y que la pendiente de dicha recta es 120 min/L.

Problema 23
25 L de una preparacin de Ribonucleasa A se lleva a ensayo a un volumen de
reaccin estndar de 1 mL y a temperatura y pH ptimos, pero con distintas
concentraciones iniciales de sustrato obtenindose las velocidades iniciales que se
indican

[S] x10-3 (mM) 303 149 128 100 80

v (nmol/min) 120 98 92.6 83.3
74.6

Determine la Km y Vmax y exprese tambin la cantidad de enzima en UI/mL.

Problema 24
La descarboxilacin enzimtica de -cetocido procede con las velocidades
iniciales para las concentraciones que se citan:

[cetocido] (mM) 2.500 1.000 0.714 0.526

0.250
v (mol CO2/2 min) 0.588 0.500 0.417 0.370
0.252
Determine la Km y Vmax.

Problema 25
Qu informacin puede obtenerse a partir de una representacin grfica del
mtodo de Lineaweaver & Burk cuando la recta obtenida, convenientemente
extrapolada, corta el eje de las abscisas en -40 Litros/mol?
Problema 26
La Km para el etanol de la enzima alcohol deshidrogenada de levadura es de
1.3x10-2 M. Si la concentracin de alcohol en el medio de reaccin es de 59.8
g/ml, Qu proporcin de enzima estar libre y que proporcin estar combinada
con el sustrato? (PM etanol 46 g/mol)
Problema 10:
La fructosa difosfatasa (que cataliza la hidrlisis de la fructosa difosfato a fructosa-
6-fosfato y fosfato) es inhibida por AMP. Los siguientes datos se obtuvieron a partir
de un estudio de la enzima del hgado de rata:

FDP (moles ml-1)

4 6 10 20 40

AMP (moles ml-1) Velocidad inicial (moles ml-1 min-1)

0 0,059 0,076 0,101 0,125 0,150

8 0,034 0,043 0,056 0,071 0,083
Comentar estos resultados en relacin a las constantes cinticas en cada caso.

Sol.: Km 8 moles ml-1; Vmx sin inhibidor 0.185 moles ml-1 min-1; Vmx
con inhibidor 0.102 moles ml-1 min-1

49. Un enzima con Km=3x10-4 M se ensay con una concentracin inicial de sustrato de 10 -6 M. En un
minuto, el 5% del sustrato haba reaccionado. a) Qu porcentaje de sustrato habr reaccionado
en 5min?. b) Si la concentracin inicial de sustrato fuese de 8x10 -7 M, qu porcentaje de
sustrato habr reaccionado en 5min?. c) Calcular Vmax. d) A concentracin 9x10 -7 M, cunto
tardar en reaccionar el 50% del sustrato?. e) A concentracin 10 -6 M, cunto tardar en
reaccionar el 75% del sustrato?.
Sol: a) 23%. b) 23%. c) 1,5x10-5 mol/lxmin. d) 13,58 min. e) 27,15 min.
50. Una enzima se ensay con una concentracin inicial de sustrato de 10 -5M. La Km para el sustrato
era de 2x10-3 M. Despus de transcurrido 1min, el 2% del sustrato se haba convertido en
producto. a) Qu porcentaje del sustrato se habr convertido en producto despus de 3min?.
Cules sern las concentraciones de producto y sustrato en ese momento?. b) Si la
concentracin inicial de sustrato fuese de 10 -6 M, qu porcentaje de sustrato se habr
convertido en producto tras 3min de reaccin?. c) Cul es la Vmax alcanzable con la
concentracin de enzima dada?. d) Con qu concentracin de sustrato, aproximadamente se
observar Vmax?. e) Con esta concentracin de sustrato, qu porcentaje de sutrato se
convertir en producto en 3min?.
Sol: a) 6%, 0,6x10-6 M, 9,4x10-6 M. b) 6%. c) 40 moles/lxmin. d) 0,2 M. e) 0,0603%.
51. Una enzima con una Km para el sustrato de 1,2x10 -4 M se ensay con una concentracin inicial de
sustrato de 0,02 M. En 30seg se obtuvo una cantidad de producto de 2,7mol x l -1. Qu
 cantidad se obtendr en: a) 1min, b) 95seg y c) 5,3min?. d) Cul es el porcentaje del sustrato
original que habr reaccionado a esos tiempos?.
Sol: a) 5,4x10-6 M. b) 8,55x10-6 M. c) 28,62x10-6 M. d) 2,7x10-2 %, 4,27x10-2%, 14,31x10-2%.
52. Un volumen de 0,1ml de una preparacin homognea de nitrato reductasa (pm=500.000
mg/mmol), que contiene 0,5mg de protenas ml -1, cataliza la produccin de 20moles de NO 2- en 5
min, utilizando una mezcla de reaccin cuyo volumen final es de 1ml. Calcular: a) la actividad de la
preparacin enzimtica en U/ml, b) la actividad especfica c) la actividad total en katales, de 100
ml de preparacin enzimtica,;d) la actividad molar de la preparacin; e) la actividad por centro
activo, sabiendo que la nitrato reductasa tiene dos sitios para la reduccin del nitrato; y f) el
tiempo requerido para que se transforme una molcula de sustrato en producto.
Sol: a) 40U/ml. b) 80U/mg. c) 66,6x10-6 katales. d) 40.000 min-1. e) 20.000 min-1. f) 3 mseg.

Purificacin
kjjj

Inhibicin
Una determinada enzima de peso molecular 10 0000 es sensible a una molcula
inhibidora de peso molecular 150 que se une a un residuo presente en el centro
activo de la protena. Sabiendo que se precisan 0.012 mg de inhibidor para inhibir
2ml de una solucin enzimtica purificada a homogeneidad con un valor de protena
de 2 mg/ml, se desea conocer cuntas subunidades catalticas presenta la enzima

Con una preparacin purificada de

glutamate deshidrogenasa se lleva a cabo
un estudio por inhibicin por cido
isoftlmico. En presencia de este inhibidor
se una concentracin de sustrato se
4x10-3M y la concentracin ptima del
inhibidor de 4,3x104M.
a) Calcular la constante de inhibicin de este inhibidor
b) Determine el tipo de inhibidor correspondiente, justifique las respuestas
 52. Un volumen de 0,1ml de una preparacin homognea de nitrato reductasa (pm=500.000
mg/mmol), que contiene 0,5mg de protenas ml -1, cataliza la produccin de 20moles de NO 2- en 5
min, utilizando una mezcla de reaccin cuyo volumen final es de 1ml. Calcular: a) la actividad de la
preparacin enzimtica en U/ml, b) la actividad especfica c) la actividad total en katales, de 100
ml de preparacin enzimtica,;d) la actividad molar de la preparacin; e) la actividad por centro
activo, sabiendo que la nitrato reductasa tiene dos sitios para la reduccin del nitrato; y f) el
tiempo requerido para que se transforme una molcula de sustrato en producto.
Sol: a) 40U/ml. b) 80U/mg. c) 66,6x10-6 katales. d) 40.000 min-1. e) 20.000 min-1. f) 3 mseg.
53. a) Qu concentracin de inhibidor competitivo se requiere para dar un 75% de inhibicin,
cuando la concentracin de sustrato es de 1,5 x 10-3 M, sabiendo que la Km de la enzima por dicho
sustrato vale 2,9 x 10-4 M, y que la Ki para el inhibidor es de 2 x 10 -5 M?. b) Hasta que
concentracin debe elevarse el sustrato para restablecer el valor de velocidad obtenido en
ausencia del inhibidor?.
Sol: a) 3,7x10-4 M. b) 2,93x10-2 M.
54. La actividad de una aminocido descarboxilasa puede ensayarse manomtricamente siguiendo el
desprendimiento de CO2. En un experimento realizado con esta enzima en presencia o ausencia
de un hidroxicido (0,05 M) se obtuvieron los siguientes resultados:
[aa] (M) 12,5 16,67 25 50 100
V (u.a.) -Hidroxicido 13,3 17,2 22,2 33,3 40
+Hidroxicido - 4,6 6,4 11,8 20,0
Se pide: a) indicar el tipo de inhibicin que ejerce el hidroxicido en la reaccin enzimtica, y b)
calcular los valores de Km, Vmax, y Ki.
Sol: a) inhibicin competitva. b) Km=39M, Km=179 M, V=60 unidades arbitrarias y
Ki=13,92mM.
55. Una isomerasa tiene, en ausencia de inhibidor, una Km para su sustrato de 6,7 x 10 -4 M, y su
Vmax es de 300 mol/min. Calclese la Ki y el porcentaje de inhibicin para un inhibidor
competitivo, sabiendo que con [S]= 2 x 10 -5 M y [I]= 10-5 M, se obtiene una velocidad inicial de 1,5
mol/min.
Sol: 2,02x 10-6M, 82%.

56. Una preparacin de glutamato deshidrogenasa (PM= 60.000 mg/mmol) contiene 10mg prot por
ml. Si 20l de esta preparacin se ensaya a concentracin saturante de piridn nucletido,
variando las concentraciones de glutamato, y en presencia o ausencia de un inhibidor, se obtienen
los siguientes resultados:
[S] (mM) 0,25 0,33 0,50 1,00
V (mmol x min-1) [I]= 0 2,00 2,48 3,33 5,00
[I]= 2mM 0,47 0,62 0,91 1,67
A partir de estos datos calcular: a) los valores de Vmax y Km en presencia y ausencia de
inhibidor, b) el tipo de inhibicin ejercida y el valor de Ki correspondiente, c) la actividad
enzimtica en U/ml y U/mg, as como el nmero de recambio, d) el grado de inhibicin cuando
[S]= 0,5 mM, e) la cantidad de sustrato desaparecido en 3 min, cuando se ensayan, en 1ml de
mezcla de reaccin, 50 l de la preparacin enzimtica en presencia de [S]= 0,5 M.
Sol: a) V=V=10mmoles/min, Km=1mM, Km=5mM. b) Inhibicin competitiva, Ki 0,5mM. c) 500.000
U/ml, 50.000 U/mg, 3x10-6 min-1. d) 72 %. e) 75.000 moles.
57. Al ensayar una fumarasa de levadura frente a un sustrato especfico en presencia o ausencia de
un inhibidor, se obtienen los siguientes resultados:
[S] (mM) 0,5 0,66 1,00 2,00 4,00
V(mmol x min-1) [I]=0 24,4 30,03 35,71 50,00 57,14
[I]= 0,1M 10,00 11,90 14,81 19,23 22,73
Se pide: a) determinar el tipo de inhibicin, b) calcular los valores de Km para el sustrato y de Ki
para el inhibidor, c) estimar la concentracin del inhibidor necesaria para inhibir un 50% la
reaccin, cuando la concentracin de sustrato es 3 mM.
Sol: a) Inhibicin no competitiva. b) Km 1mM, Ki 66x 10-2M. c) 0,06 M.
58. Una glutaminasa de hepatocito hidroliza distintas concentraciones de glutamina, en presencia o
ausencia de dos inhibidores diferentes, obtenindose los siguientes resultados:
[S] (mM) 0,2 0,4 0,8 1,6 3,2
[I]=0 1,67 2,86 4,44 6,15 7,62
-1
V (mmol x min ) [Ia]= 1,5 mM 0,63 1,18 2,11 3,48 5,16
[Ib]= 1,5 mM 0,83 1,43 2,22 3,08 3,81

Calcular: a) en cada caso el tipo de inhibicin existente, b) el valor de los correspondientes

parmetros cinticos (Km, Ki, Vmx).
Sol: a) Ia inhibidor competitivo, Ib inhibidor no competitivo. b) Km 1mM, Km(a) 3,33mM, km(b)
1mM, v=v(a)=10 mmol/min, v(b) 5 mmol/min, Ki(a) 0,64mM, Ki(b) 1,5mM.
59. Calcular la velocidad inicial que se obtendr en una reaccin enzimtica si la velocidad mxima es
de 10 mol/min y la concentracin de sustrato es a) 10Km, b)Km/3.
Sol: a) 9,09 mol/min. b) 2,5 mol/min.
60. La descarboxilacin enzimtica de un cetocido muestra las siguientes velocidades para las
concentraciones que se citan:

V0 (moles CO2/2min) [Cetocido](M)

0,588 2,500x10-3
0,500 1,000x10-3
0,417 0,714x10-3
0,370 0,526x10-3
0,252 0,250x10-3
A partir de estos datos calcular grficamente la Vmx y la KM de esta reaccin enzimtica.
Sol: Vmx 0,77moles /min , KM 5,8x10-4 M.
61. Calcular la velocidad y el grado de inhibicin de una reaccin enzimtica en presencia de 3,5x10 -
5
M de substrato. (KM=2x10-4M) y 4x10-5M de inhibidor no competitivo (KI=2x10-5M), sabiendo que
la velocidad observada a 0,03M de substrato en ausencia de inhibidor es de 295 moles /min.
Sol: 14,6 moles /min, 66%.
62. Calcular qu concentracin de substrato, expresada en funcin de la K M nos dar una velocidad
de reaccin igual al 60% de la Vmx.
Sol: 1,5 KM.
63. Calcular la relacin entre la concentracin de substrato necesaria para una velocidad 90% de la
Vmx y la requerida para una velocidad 10% de la V mx para una enzima cuya cintica sigue la
ecuacin de Michaelis-Menten.
Sol: 9KM, 0,11KM, 81,81.
64. Calcular la concentracin de un inhibidor competitivo (K I= 10-7M) necesaria para que la velocidad
sea un 20% de la Vmx de una reaccin enzimtica (KM=1,6x10-4M cuando la [S]=0,4 mM).
Sol: 9x10-7M.
65. Una enzima se ensay para distintas concentraciones de su substrato especfico, en ausencia y
presencia de un inhibidor ([I]=1mM),obtenindose los siguientes resultados:
[S] mM V (mol/min)+ Inhibidor V(mol/min)- Inhibidor
0,02 6,25 8,33
0,05 10 16,67
0,10 12,50 25
0,5 15,62 41,67
0,8 16 44,44

Calcular la KM y la Vmx en ambos casos y la KI para el inhibidor. Qu clase de inhibicin se produce?.

Sol: Vmx 50 mol/min, KM 0,1mM, Vmx 19,23 mol/min, KM0,034 mM, KI 5,15x10-4M. Inhibicin
acompetitiva o incompetitiva.
66. Un enzima tiene un KM de 4,7x10-5M, y muestra una Vmx de 22x10-3 moles/lxmin. Para una [S] de
2x10-4M y [I] de 5x10-4M, qu velocidad y qu grado de inhibicin (i%) se observar en el caso
de que el inhibidor sea un:
a) inhibidor competitivo (KI= 3x10-4M).
b) inhibidor no competitivo (KI= 3x10-4M).
c) inhibidor acompetitivo (KI= 3x10-4M).
Sol: a) 13,5x10-3 mol/lxmin, 24%. b) 6,6x10-3 mol/lxmin, 63%. c) 7,6x10-3 mol/lxmin, 57%.

Problema 21
Calcular Km y Vmax de una enzima sabiendo que la recta obtenida en una
representacin de Lineaweaver y Burk corta el eje de ordenadas en 5x10 3
(moles/min)-1, y que la pendiente de dicha recta es 120 min/L.

Problema 22
Una reaccin enzimtica se lleva a cabo a diferentes concentraciones de sustrato en
ausencia y presencia de dos inhibidores diferentes: [Ia] = [Ib] = 1.5 mM. La
siguiente tabla muestra los datos obtenidos:
[S] (mM) v (mol/min) v (Ia) (mol/min)
v(Ib) (mol/min)

0.2 1.67 0.63

0.83
 0.4 2.86 1.18
1.43
0.8 4.44 2.1
2.22
1.6 6.15 3.48
3.08
3.2 7.62 5.16
3.81

a) determinar todos los parmetros cinticos de la enzima.

b) Qu tipo de inhibidor es Ia e Ib?

PH
La Kcat de una enzima no cambia con el pH en el rango de 5 a 8 y la protena es
estable, es decir, mantiene actividad enzimtica por varios da cuando se guarda en
un amortiguador a cualquier pH en dicho intervalo. Sin embargo, el valor del
cociente kcat/Km alcanza un mximo a Ph 6,5 y decae rpidamente y con una
tendencia semejante cuando PH disminuye o aumenta. Si la enzima se ensaya con
un acantidad muy abundante de sustrato la actividad ser..a pH
7.8, que a pH 5.8. Si la actividad se ensaya con una cantidad limitada de sustrato,
ser a pH 7.8, que a pH 5.8. (Conteste con palabras menor, igual o
mayor)En que se basa su respuesta? Explique:

0,010

Problema 11: 0,008

Una determinada enzima cataliza la

Km (M)

0,006
reaccin A B. Se ha observado
previamente que la Vmx de esta reaccin 0,004

0,002

0,000
5 6 7 8 9
pH
no vara dentro de un rango de pH entre 5 y
9: Vmx= 100 moles/min/g de enzima.
Por otra parte, la Km vara segn se muestra
en esta figura:
El ensayo fue realizado en presencia de 0,01
M sustrato, y 1 g de enzima, en cada uno
de los bufferes. Qu velocidad inicial se
esperara para pH 5.5 y 8? Explique.

Sol.: Para pH 5.5: 50 moles/min/g de

enzima

Para pH 8: 100 moles/min/g de

enzima