Tesis PDF
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TESIS
PARA OPTAR AL TTULO DE:
QUMICO FARMACUTICO
PRESENTADO POR:
Bach. Espinoza Peralta Elizabeth
Bach. Ojeda Pizarro Gianinna Merle
ASESORA
Mg. Q.F Vega Ramos Nelly
ICA-PER
2017
1
DEDICATORIA:
Elizabeth
2
DEDICATORIA:
Gianinna
3
AGRADECIMIENTOS
A nuestros Padres que con su gran paciencia y amor incondicional nos supieron orientar
hacia el camino de la superacin y el xito.
Por ultimo quedamos agradecidos a las personas y amigos que de una u otra manera nos
apoyaron en la presente investigacin
Muchas Gracias.
4
NDICE
Pg.
RESUMEN 7
SUMMARY 8
INTRODUCCiN 9
5
2.2 METODOLOGA ANAlTICA 29
2.2.1 Estudio Fitoqumico 30
2.2.2 Obtencin del extracto acuoso liofilizado del fruto de Physalis 32
peruviana L. "aguaymanto".
2.3 INVESTIGACiN CUALITATIVA DE METABOLlTOS 35
SECUNDARIOS y CUANTIFICACiN DE POLlFENOLES
TOTALES.
2.3.1 Screening fitoqumico preliminar 35
2.3.2 Determinacinde Compuestos Fenlicos 38
2.4 METODOLOGA DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE IN 41
VITRO
2.4.1 Mtodo de inhibicin frente al radical libre 1,1-Difenil-2- 41
picrilhidracilo (DPPH)
2.4.2 Mtodo del Poder Antioxidante de Reduccin Frrico (FRAP) 44
2.5 TECNICA PARA DETERMINARCONTENIDO DE VITAMINA C 45
2.5.1 Anlisis Estadstico 46
CAPTULO 111R.ESULTADOSy DISCUSiN 47
3.1. ESTUDIO FITOQuMICO 47
3.1.1 Porcentajede rendimiento del extracto acuoso liofilizado 47
3.1.2 Screening fitoqumico preliminar 48
3.2 CUANTIFICACiN DE POLlFENOLESTOTALES 49
3.3 EVALUACiN DE CONTENIDO DE VITAMINA C 50
3.4 EVALUACiN DE ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE IN VITRO 51
FRENTE AL RADICAL DPPH
3.5 EVALUACION DEL PODER ANTIOXIDANTE FRENTE AL 54
RADICAL FRAP
DISCUSiN 57
CONCLUSiNES 60
RECOMENDACIONES 61
REFERENCIASBIBLIOGRFICAS 62
ANEXOS 67
6
RESUMEN
7
SUMMARY
Objectives: To determine the secondary metabolites, the total polyphenol
content and the in vitro antioxidant activity of the Iyophilized aqueous extract
of Physalis peruviana L. "Aguaymanto" fruit. Design: Application Study
Descriptive Place: Faculty of Pharmacy and Biochemistry, National
University San Luis Gonzaga.
Biological Material: The fruits of aguaymanto were used, which were
macerated in an ethanol-water mixture, proportion (50:50), to obtain the
aqueous extract of the fruit undergoing a Iyophilization process, the main
secondary metabolites were determined Content of total polyphenols,vitamin
e and antioxidant activity against radicals DPPH and FRAP. The equation of
the line and the linear regression coefficient were used to determine the
respective values.
Results: The presence of phenolic compounds as the only secondary
metabolite was determined. The content of total polyphenols in the
Iyophilized aqueous extract was: 0.4496 0.032. mgEAG / 9 and Vitamin e
was: 0.213 0.008 mg vit e / 9 Iyophilized extract respectively. Antioxidant
activity against the DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl)radical showed an
le 50 = 0.048 mg / mL; While TEAC (Antioxidant Capacity Equivalent to
Trolox) -DPPH was 1.21 0.01 umo / 9 extract and TEAe-FRAP = 1.01
0.04 urnol / 9 extract.
Conclusion: The Iyophilized aqueous extract showed positive reaction with
ferric trichloride for the test of phenolic compounds, as well as a ponderable
amount of vitamin e and phenolic content and inhibition of radicals DPPH
and FRAP showing good antioxidant activity.
Key words: Physalis peruviana L., "aguaymanto", antioxidant, secondary
metabolites, phenolic compounds, DPPH and FRAP.
8
INTRODUCCiN
molecular. 1
compuestos antioxidantes. 2
las frutas, verduras, y ts. Las plantas son la base de toda terapia de
9
antioxidantes en frutas y verduras. Hay un inters creciente por conocer la
dao celular.5
"aguaymanto"?
especficos correspondientes:
OBJETIVO GENERAL:
10
medir la actividad antioxidante in vitro del extracto acuoso liofilizado de los
OBJETIVOS ESPECFICOS:
captacin del radical DPPH Y FRAP del extracto acuoso liofilizado de los
11
CAPITULO I
ASPECTOS GENERALES
12
Flor: La corola de la flor es circular (20 mm de dimetro),
1,80 cm; los pesos de los frutos varan grandemente de acuerdo a los
13
y la fruta caen a la tierra juntas (por efecto de la gravedad), el fruto se
variable en cada fruto que van desde 150 a 320 semillas por fruto; la
14
siendo caracterizada por ser una excelente fuente de provitamina A,
flavonoides.11.12
REINO : PLANTAE
DIVISIN : MAGNOLIOPHYTA
CLASE : MAGNOLIOPSIDA
SUBCLASE : ASTERIDAE
ORDEN : SCROPHULARIALES
FAMILIA : SOLANACEAE
GNERO : Physalis
15
1.1.3. Composicin qumica y usos tradicionales.
nutriente que bloquea parte del dao causado por los radicales
libres16.
16
De todas las sustancias, el -caroteno (presente en el
antidiabticos y antioxidantes18.
17
muestras de sangre a los 30, 60, 90 y 120 minutos, despus a ambos
grupos.
mg/dl, 109.1 13.69 mg/dl, 96.8 12.12 mg/dl y 86.3 13.22 mg/dl
(p < 0.05) entre los valores de glicemia de ambos grupos. Por lo que
jvenes19.
18
citotxicas en relacin al 5-FU en la lnea 3T3. Estos estudios
Datos actuales:
19
La mayora de las empresas peruanas exportan aguaymanto
kilogramo.24
20
despus del proceso de estabilizacin de radicales libres. Ante los
lipoflicos.
21
1.4. DETERMINACIN DE CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
de reaccionar.
22
23
1.4.2 Mtodo de inhibicin frente al radical libre 2,2-
28
Difenil-1- picrilhidraizil (DPPH)
Entre las ventajas de usar este mtodo, se tiene que el ensayo DPPH
similar al DPPH.
Williams, 1995)
24
1.4.3 Trolox.
25
1.5 CONTENIDO DE POLlFENOLES TOTALES POR EL
resultante.
26
CAPITULO II
MATERIALES Y MTODOS
2.1 MATERIALES
"aguaymanto.
"aguaymanto" .
Aro de soporte
Celdas de cuarzo
Desecador
Embudos
Esptulas de metal
Fiolas
Gradillas
Luna de reloj
Matraces Erlenmeyer
Micro pipetas
27
Pinzas metlicas
Pipetas Pro
pipeta Porta
embudo
Probetas
Soporte universal
Tubos de ensayo
Tubos eppendorff
Varillas
Vasos de precipitacin
2.1.4 Reactivos:
DPPH (sigma)
TPTZ (sigma)
Reactivo de Liebermann-Burchard
Reactivo de Shinoda
Reactivo de Dragendorff
28
Reactivo de Mayer
Metanol (Fisher)
Etanol (Fisher)
Cloroformo (Merck)
- Estufa
2.2 METODOLOGIAANALTICA
29
Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional "San
Recoleccin y seleccin.
(Figura 8)
30
,
Clasificacin Taxonmica de la especie vegetal.
Anlisis Organolptico
Lavado
Licuado
31
2.2.2 Obtencin del extracto acuoso liofilizado del fruto
de Physalis peruviana L. "aguaymanto".
Maceracin
700 g del material licuado, masa semilquida, fue puesto en
Liofilizado y almacenado
33
El equipo utilizado fue un liofilizador marca Freeze Dryers ,
modelo FD 5512.
respectivamente (Figura 9)
33
Fluxograma de operaciones para obtener liofilizado de Physalis
Seleccin-clasificacin
Lavado
Licuado
Macerado
Filtrado
Desecado
Centrifugado
Liofilizado
Almacenado
34
2.3 INVESTIGACIN CUALITATIVA DE METABOLITOS
a) Determinacin de saponinas
Prueba de espuma:
35
b) Determinacin de Flavonoides
Reaccin de Shinoda:
de magnesio metlico.
presencia de flavonoides.
compuestos fenlicos.
d) Determinacin de Alcaloides
respectivo y 1 mL de HClcc.
36
e) Determinacin de Triterpenos y/o Esteroides
Reaccin de Lieberman-Burchard:
f) Determinacin de Taninos
Reaccin de la Gelatina
gelatina al 0,1 %.
g) Determinacin de Quinonas
Reaccin de Borntrger
metabolito.
Reaccin de la Ninhidrina
37
2.3.2 Determinacin De Compuestos Fenlicos
Procedimiento:
38
cido glico de 100 ug/mL. Luego se procedi a seguir los pasos de la
tabla 1.
c) Reacciones
39
Tabla 02. Batera de reaccin final del estndar de polifenoles
d) Preparacin de la muestra:
de los frutos:
ensayo respectivamente.
40
-Se dej reposar 30 minutos en oscuridad, para ser llevado al
espectrofotmetro UV/VIS.
41
Preparacin de las soluciones:
517 nm est ente 0,6 y 0.7. El matraz aforado se cubri con papel de
agua destilada.
42
Dilucin 1: 0,125 mM 1 mL de Solucin 0.25 mM + 1 mL de agua
destilada.
Reaccin.
Volumen Volumen
Trolox
TUBO trolox (mM) de trolox de DPPH
M
uL uL
1 0.125 300 2700 12.5
2 0.0625 300 2700 6.25
3 0.03125 300 2700 3.125
4 0.015625 300 2700 1.56
5 0.0078125 300 2700 0.78
Fuente: Datos de los autores.
43
1 mL de solucin madre + 9 ml de agua destilada. (60 ug/mL) = solucin B
1mL de solucin B + 1 mL 1mL de solucin C + 1 mL 1mL de solucin D + 1 mL
de agua destilada de agua destilada de agua destilada
44
Posteriormente se agregaron 100 uL de una de las diluciones
durante 30 segundos.
de TROLOX.
45
la muestra se encuentre dentro del rango de las de los estndares),
46
CAPTULO III
RESULTADOS Y DISCUSIN
150 g
%EAL= X 100
700 g
47
3.1.2 SCREENING FITOQUIMICO PRELIMINAR DEL EXTRACTO
ACUOSO LIOFILIZADO DEL FRUTO DE Physalis Peruviana
L. "Aguaymanto.
48
3.2 CUANTIFICACIN DE POLlFENOLES TOTALES PRESENTES EN
EL EXTRACTO ACUOSO LIOFILIZADO DEL FRUTO DE Physalis
peruviana L. "Aguaymanto".
0.600
0.500
0.400
0.300 y = 0.0709x + 0.2104
0.200 R = 0.9998
0.100
0.000
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Concentracin de Acido glico (ug/mL)
mg de extracto /mL 10 10 10
49
1.3 EVALUACIN DE CONTENIDO DE VITAMINA C DEL EXTRACTO
ACUOSO LIOFILIZADO DEI FRUTO DE Physalis peruviana
L. "Aguaymanto".
1
0.9
y = -0.1046x + 0.8712
0.8 R = 0.9937
0.7
0.6
ABS 515 nm
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
-0.10.000 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000
CONCENTRACIN DE VITAMINA C (ug/mL)
50
Tabla 07. Determinacin del contenido de vitamina C por
espectrofotometra
ug equivalente a
1,57 1,63 1,56
vitamina C
FD 30 30 30
ug equivalentes a
47,09 48 47
vitamina C/mL
mg equivalentes a
0,0471 0,0495 0,0461
vitamina C/mL
mg de extracto
223,2 223,2 223,2
acuoso/mL
mg de vitamina C/g de
extracto acuoso 0,213 0,008
liofilizado
51
Tabla 08. Determinacin de la CI50 del trolox mediante la
tcnica de captacin del radical DPPH
M ABS
12.5 0.051
6.25 0.162
Trolox
3.125 0.462
1.56 0.551
0.78 0.613
0 0.674
0.8
0.7
y = -0.0517x + 0.6276
0.6 R = 0.9134
absorbancia 517 nm
0.5
0.4
0.3
CI 50 = 5,69 uM
0.2
0.1
0
0 2 4 6 8 10 12 14
-0.1
Concentracin uM trolox
52
Tabla 09. Actividad antioxidante del extracto acuoso de
aguaymanto: Mtodo DPPH
60 0.248
30 0.435
15 0.55
7.5 0.605
3.75 0.636
0.00 0.674
0.8
0.7
0.6
Absorbancia 517 nm
0.3
0.2
0.1
0
0 10 20 30 40 50 60 70
Concentracin (ug/mL)
53
Mediante el mtodo de regresin lineal se determin una CISO
FRAP-trolox
0.8
0.7
Absorbancia 594 nm
0.6
0.5
0.4
0.3 y = 0.0495x + 0.1072
R = 0.9966
0.2
0.1
0
0 2 4 6 8 10 12 14
trolox M
54
En la determinacin de la capacidad antioxidante equivalente a Trolox
por el mtodo del FRAP se obtuvo un valor de 1,52 0,04 umol
trolox/g extracto acuoso liofilizado.
55
Figura N 18. Correlacin entre el contenido de polifenoles totales y la
actividad antioxidante frente al DPPH Y FRAP
56
DISCUSIN
entre las diferentes pruebas para discutir los resultados y tener una idea
analizadas.
orientacin para interactuar con los radicales libres, proteger los lpidos
57
efectividad a diferentes pH. Sin embargo, ninguna tcnica de medicin de
ensayo DPPH tienen una alta correlacin, por lo tanto, la tcnica del
58
vitamina C y los polifenoles totales. El ensayo FRAP est basado en la
indicado que ambas tcnicas, DPPH y FRAP, son adecuadas para medir
59
CONCLUSIONES
Fruto =0,048 mg/ml; mientras que el TEAC-DPPH fue 1,21 0,01 y TEAC-
60
RECOMENDACIONES
1. Considerando que las sustancias naturales presentes en el
61
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
dentro del estilo de vida. Rev Cubana Invest Biomed. 1999; 18(1): 12-
4.
4. Beltrn C., Oliva T., Velzquez G., Osorio G. Ascorbic acid, phenolic
43(2).
Cajamarca 2007.
62
8. Medina D. Una nueva especie de Physalis(Solanaceae) de Per.
and utilization. Kew: The Royal Botanic Gardens, Kew. 1999; 139-159.
11. Legge AP. Notes on the history, cultivation and uses of Physalis
13. Puente L., Pinto C., Castro E., y Corts M. Physalis peruviana L.
63
16. Encina C. Influencia del descerado y composicin del almbar en la
20. Quispe A., Callacondo D., Rojas J., Zavala D., Pos so M., Vaisberg A.
21. Mlaga R., Guevara A., Araujo M. Efecto del procesamiento de pur
L.): Manejo Tcnico en los Andes del Per. Cultivos Andinos. Gua
64
23. SIICEX (Sistema Integrado de Informacin de Comercio Exterior).
Internacionales. 2013.
27. Benzie IFF, Strain JJ. The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as
1996; 239:70-6.
35(5):523-534.
1965; 16:144-158.
65
31. Distancias entre, coracora latitud y longitud [sede
66
ANEXOS
67
68
ANEXO 2
SELECCIN-
1
RECOLECCIN
2 LICUADO 3 MACERADO
4 FILTRADO 5 DESECADO
69
ANEXO 3
CENTRIFUGADO
70
LIOFILIZADO
71
ANEXO 4
DETERMINACION DE FLAVONOIDES
72
DETEMRINACION DE COMPUESTOS FENOLICOS
73
ANEXO 5
PREPARACIN DE LA MUESTRA
74
RECOLECCION DE LA MUESTRA CON EL DPPH. LECTURA EN
EL
ESPECTROFOTOMETRO
75
ANEXO 6
PREPARACIN DE LA MUESTRA
76
RECOLECCION DE LA MUESTRA CON EL DPPH.
LECTURA EN EL ESPECTROFOTOMETRO
77
ANEXO 7
78