ADN, ARN y extracción de proteínas: el pasado y el presente

Abstracto

La extracción de ADN, ARN y proteína es el método básico utilizado en biología

molecular. Estas biomoléculas se pueden aislar de cualquier material biológico para
posteriores procesos posteriores, analíticos o preparativos. En el pasado, el proceso de
extracción y purificación de ácidos nucleicos solía ser complicado, lento, laborioso y limitado
en términos de rendimiento global. Actualmente, existen muchos métodos especializados
que se pueden usar para extraer biomoléculas puras, como los protocolos basados en
soluciones y en columnas. El método manual ciertamente ha recorrido un largo camino con
varias ofertas comerciales que incluyen kits completos que contienen la mayoría de los
componentes necesarios para aislar el ácido nucleico, pero la mayoría requiere pasos de
centrifugación repetidos, seguidos de la eliminación de los sobrenadantes según el tipo de
muestra y tratamiento mecánico adicional. Los sistemas automatizados diseñados para
laboratorios de medianos a grandes han crecido en demanda en los últimos años. Es una
alternativa a los métodos manuales intensivos en mano de obra. La tecnología debería
permitir un alto rendimiento de las muestras; el rendimiento, la pureza, la reproducibilidad y
la escalabilidad de las biomoléculas, así como la velocidad, precisión y fiabilidad del ensayo,
deben ser máximas, al tiempo que se minimiza el riesgo de contaminación cruzada.

1. Introducción de biomoléculas

Extracción La extracción de biomoléculas, ADN, ARN y proteínas es el método más

importante utilizado en biología molecular [1]. Es el punto de partida para los procesos
posteriores y el desarrollo de productos, incluidos los kits de diagnóstico. El ADN, el ARN y
la proteína pueden aislarse de cualquier material biológico, como tejidos vivos o
conservados, células, partículas de virus u otras muestras con fines analíticos o
preparativos [1].

Dos categorías que participan en la purificación de ADN incluyen el aislamiento de

construcciones de ADN recombinante tales como plásmidos o bacteriófagos y el
aislamiento de ADN cromosómico o genómico de organismos procariotas o eucariotas
[2]. Generalmente, la purificación exitosa de ácidos nucleicos requiere cuatro pasos
importantes: interrupción efectiva de células o tejido;desnaturalización de complejos de
nucleoproteína; inactivación de nucleasas, por ejemplo, RNasa para extracción de ARN y
DNasa para extracción de ADN; lejos de la contaminación [2]. El ácido nucleico diana debe
estar libre de contaminantes, incluyendo proteínas, carbohidratos, lípidos u otros ácidos
nucleicos, por ejemplo, ADN libre de ARN o ARN libre de ADN [3]. La calidad y también la
integridad del ácido nucleico aislado afectarán directamente los resultados de todas las
investigaciones científicas posteriores [4].
Por otro lado, el ARN es una molécula inestable y tiene una vida media muy corta una vez
extraída de la célula o los tejidos [5]. Existen varios tipos de ARN de origen natural, incluido
el ARN ribosomal (ARNr) (80% -90%), ARN mensajero (ARNm) (2.5% -5%) y ARN de
transferencia (ARNt) [3]. Se requieren cuidados y precauciones especiales para el
aislamiento del ARN ya que es susceptible a la degradación [3, 6]. El ARN es especialmente
inestable debido a la presencia ubicua de RNasas que son enzimas presentes en la sangre,
en todos los tejidos, así como en la mayoría de las bacterias y hongos en el medio ambiente
[3, 5]. Los desnaturalizantes fuertes siempre se han usado en el aislamiento de ARN intacto
para inhibir las ARNasas endógenas [2]. La extracción de ARN se basa en una buena
técnica de laboratorio y una técnica libre de RNasa. RNAse es estable al calor y se vuelve
a doblar después de la desnaturalización por calor. Son difíciles de desactivar ya que no
requieren cofactores [2]. Los métodos de aislamiento más comunes se pueden dividir en
dos clases: la utilización de tiocianato de guanidinio 4 M y la utilización de fenol y SDS [2].

La purificación de proteínas es una de las partes más importantes en la investigación de

proteínas para comprender su función, ya que pueden participar parcial o completamente
en cualquier actividad de síntesis de ADN. La purificación de proteínas es necesaria para
determinar sus características únicas, incluido el tamaño, la carga, la forma y la función
[7]. La extracción basada en células es el paso de partida para casi todas las purificaciones
de proteínas. La proteína puede extraerse mediante algunos métodos, como lisis de
detergente, fuerza de cizallamiento, tratamiento con sal baja en sales iónicas y cambios
rápidos de presión, que tienen como objetivo debilitar y romper las membranas que rodean
la célula para permitir que escapen las proteínas [7 ] Se deben considerar algunos factores
al manipular proteínas. Normalmente, la extracción de proteínas se realiza a una
temperatura muy baja () ya que las proteínas se desnaturalizan fácilmente una vez que se
liberan de las células. La condición del buffer es uno de los principales factores que deben
considerarse. Se recomienda mantener las condiciones específicas del tampón debido a la
sensibilidad de las proteínas hacia los cambios del pH ambiental [4]. La pureza del agua
afectará el rendimiento de los productos finales ya que el agua no purificada contiene
muchos microorganismos o proteasas que darán como resultado la degradación de las
proteínas [4]. El inhibidor de proteínas, que puede existir en solución o tampones, causa la
hidrolización de proteínas. El detergente, otro factor importante que no puede descuidarse
en la purificación de proteínas, consiste en una porción hidrófoba de una "cola" de
hidrocarburos lineal o ramificada y una "cabeza" hidrofílica [4]. Ellos solubilizan la proteína
de la membrana y son moléculas anfipáticas que forman micelas con la cabeza hidrofílica
de las proteínas [4]. Los agentes reductores se agregarán a la solución o al tampón para la
extracción y purificación de proteínas para evitar la pérdida de actividad de proteínas o
enzimas causadas por la oxidación. El almacenamiento de proteínas es importante ya que
la vida media de la proteína depende comúnmente de la temperatura de almacenamiento
[4].
La purificación de proteínas requiere un ensayo específico. Debe conocerse un método de
ensayo rápido y fácil para la purificación de proteínas de manera que se pueda detectar un
peso molecular conocido, afinidad específica o inmunoafinidad de la proteína de interés no
enzimática utilizando un método apropiado [7]. Hay varios métodos usados comúnmente
en la purificación de proteínas. Son la cromatografía de intercambio iónico, la filtración en
gel, la cromatografía de afinidad y la electroforesis en gel [4].
2. Historia
2.1. Extracción de ácido nucleico El primer aislamiento de ADN fue realizado por un médico
suizo, Friedrich Miescher en 1869 [8]. Esperaba resolver los principios fundamentales de la
vida, determinar la composición química de las células. Trató de aislar las células de los
ganglios linfáticos para su experimento, pero la pureza de los linfocitos era difícil e imposible
de obtener en cantidades suficientes. Por lo tanto, cambió a leucocitos, donde los obtuvo
del pus en vendas quirúrgicas recolectadas.

Inicialmente, Miescher se centró en los diversos tipos de proteínas que componen los
leucocitos y demostró que las proteínas eran los componentes principales del citoplasma
de la célula. Durante sus pruebas, notó que una sustancia precipitó de la solución cuando
se agregó ácido y se disolvió nuevamente cuando se agregó álcali. Esto fue, por primera
vez, que había obtenido un precipitado bruto de ADN.

Para separar el ADN de las proteínas en sus extractos celulares, Miescher desarrolló un
nuevo protocolo para separar los núcleos de las células del citoplasma y luego aislar el
ADN. Sin embargo, su primer protocolo no produjo suficiente material para continuar con
un análisis posterior. Tuvo que desarrollar un segundo protocolo para obtener mayores
cantidades de nucleina purificada, que había sido nombrada como 'ácido nucleico' más
tarde por su alumno, Richard Altman [8].

2.2. Extracción de proteínas En el siglo XVIII, las proteínas se conocían como una clase
distinta de moléculas biológicas por Antoine Fourcroy y otros. Ellos distinguieron esta
molécula por su capacidad de coagulación bajo tratamiento con calor o ácido. Sin embargo,
la primera descripción de la proteína fue llevada a cabo por Gerhardus Johannes Mulder,
un químico holandés, en 1893 [9]. Sus estudios sobre la composición de sustancias
animales, principalmente fibrina, albúmina y gelatina, mostraron la presencia de carbono,
hidrógeno, oxígeno y nitrógeno [9]. Además, reconoció que el azufre y el fósforo estaban
presentes a veces en sustancias animales que consistían en un gran número de átomos y
estableció que estas "sustancias" eran macromoléculas [9].

La mayoría de los primeros estudios se centraron en proteínas que podrían purificarse en

grandes cantidades. Por ejemplo, sangre, clara de huevo y varias toxinas. La mayoría de
las proteínas son difíciles de purificar en cantidades de más de miligramos, incluso con los
métodos altamente avanzados de la actualidad. La mayoría de las técnicas para la
purificación de proteínas se desarrollaron en un proyecto dirigido por Edwin Joseph Cohn,
un científico de proteínas, durante la Segunda Guerra Mundial. Fue responsable de purificar
la sangre y desarrolló las técnicas para aislar la fracción de albúmina sérica del plasma
sanguíneo, que es importante para mantener la presión osmótica en los vasos sanguíneos,
lo que ayuda a mantener vivo al soldado [10].

3 Tendencia actual

Después del evento predestinado en el que Miescher logró obtener ADN de la célula,
muchos otros siguieron su ejemplo, lo que llevó a un mayor avance en el protocolo de
aislamiento y purificación del ADN. Los procedimientos de laboratorio de rutina iniciales
para la extracción de ADN se desarrollaron a partir de estrategias de centrifugación con
gradiente de densidad. Meselson y Stahl utilizaron este método en 1958 para demostrar la
replicación semiconservativa del ADN [3]. Los procedimientos posteriores hicieron uso de
las diferencias en la solubilidad del ADN cromosómico grande, plásmidos y proteínas en
tampón alcalino [3].

Actualmente, hay muchos métodos especializados para extraer ADN, ARN o proteínas
puros. En general, se dividen en protocolos basados en soluciones o en columnas. La
mayoría de estos protocolos se han desarrollado en kits comerciales que facilitan los
procesos de extracción de biomoléculas.

3.1. Tipo de extracción de ácido nucleico 3.1.1. Método convencional Extracción de

tiocianato de guanidinio-fenol-cloroformo La sal es la impureza común en las muestras de
ácido nucleico. Siempre se ha requerido que se elimine de las muestras de ácidos nucleicos
antes de que se puedan realizar procesos y análisis posteriores. Por lo tanto, se necesitan
etapas simples o múltiples de separación y / o purificación para desalar la muestra que
comprende el ácido nucleico [11]. Los pasos generales de la purificación de ácidos
nucleicos incluyen la lisis celular, que interrumpe la estructura celular para crear un lisado,
inactivación de nucleasas celulares tales como DNasa y RNasa, y separación del ácido
nucleico deseado de restos celulares [2]. La extracción con disolvente orgánico-fenol-
cloroformo es uno de los ejemplos, que se usa ampliamente para aislar ácido
nucleico. Aunque el fenol, un ácido carbólico inflamable, corrosivo y tóxico puede
desnaturalizar las proteínas rápidamente, no inhibe por completo la actividad de la RNAsa
[12]. Este problema se puede resolver usando una mezcla de fenol: cloroformo: alcohol
isoamílico (25: 24: 1). Las proteínas, los lípidos, los carbohidratos y los restos celulares se
eliminan mediante la extracción de la fase acuosa con la mezcla orgánica de fenol y
cloroformo [12, 13]. Una emulsión bifásica se forma cuando se agregan fenol y
cloroformo. La capa hidrofóbica de la emulsión se depositará en el fondo y la capa hidrófila
en la parte superior mediante centrifugación [3]. Se recoge la fase superior que contenía
ADN y se puede precipitar el ADN del sobrenadante mediante la adición de etanol o
isopropanol en proporciones de 2: 1 o 1: 1 y una alta concentración de sal [3]. El precipitado
de ADN se recoge por centrifugación, y el exceso de sal se enjuaga con etanol al 70% y se
centrifuga para descartar el sobrenadante de etanol. El sedimento de ADN se disuelve
luego con tampón TE o agua destilada estéril [3]. El uso de isotiocianato de guanidinio en
la extracción de ARN fue mencionado por primera vez por Ulrich et al. (1977). El método
fue laborioso. Por lo tanto, ha sido desplazado por una técnica de un solo paso, que se
conoce como extracción de guanidinio tiocianato-fenol-cloroformo, por Chomczynski y
Sacchi (1987) [12], por lo que el homogeneizado se extrae con fenol / cloroformo a pH
reducido. El tiocianato de guanidinio es un agente caotrópico utilizado en la degradación de
proteínas. El principio de esta técnica de un solo paso es que el ARN se separa del ADN
después de la extracción con una solución ácida que consiste en tiocianato de guanidinio,
acetato de sodio, fenol y cloroformo [13]. En las condiciones ácidas, el ARN total
permanecerá en la fase acuosa superior de la mezcla completa, mientras que el ADN y las
proteínas permanecen en la fase orgánica interfásica o inferior. La recuperación del ARN
total se realiza luego por precipitación con isopropanol [12].

Método de extracción alcalina La lisis alcalina se ha utilizado para aislar ADN plasmídico y
E. coli [12]. Funciona bien con todas las cepas de E. coli y con cultivos bacterianos que
varían en tamaño de 1 ml a más de 500 ml en presencia de dodecil sulfato de sodio
(SDS). El principio del método se basa en la desnaturalización alcalina selectiva de ADN
cromosómico de alto peso molecular mientras que el ADN circular cerrado covalentemente
permanece bicatenario [14]. Las proteínas bacterianas, las paredes celulares rotas y el
ADN cromosómico desnaturalizado se enredaron en grandes complejos que están
recubiertos con dodecil sulfato. El ADN plasmídico puede recuperarse del sobrenadante
después de que el material desnaturalizado se haya eliminado por centrifugación.

Método de extracción de CTAB Para la extracción de plantas, el paso inicial que se debe
realizar es moler la muestra después de congelarla con nitrógeno líquido. El objetivo de
este paso es descomponer el material de la pared celular de la muestra y permitir el acceso
al ácido nucleico, mientras que las enzimas celulares y los productos químicos nocivos
permanecen inactivados. Después de moler la muestra, puede resuspenderse en un
tampón adecuado como CTAB. El bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) es un detergente
no iónico que puede precipitar ácidos nucleicos y polisacáridos ácidos a partir de soluciones
de baja concentración iónica [15]. Mientras tanto, las proteínas y los polisacáridos neutros
permanecen en solución en estas condiciones. En soluciones de alta fuerza iónica, CTAB
no precipitará ácidos nucleicos y formará complejos con proteínas. CTAB es por lo tanto útil
para la purificación de ácido nucleico de organismos que producen grandes cantidades de
polisacáridos como plantas y ciertas bacterias Gram-negativas [15]. Este método también
utiliza disolventes orgánicos y la precipitación de alcohol en pasos posteriores [12]. Las
partículas insolubles se eliminan mediante centrifugación para purificar el ácido
nucleico. Las proteínas solubles y otros materiales se separan mediante la mezcla con
cloroformo y centrifugación. El ácido nucleico debe precipitarse después del sobrenadante
y lavarse a fondo para eliminar las sales contaminantes. El ácido nucleico purificado se
resuspende y se almacena en tampón TE o agua destilada estéril.
Bromuro de etidio () - El centrifugado con gradiente de centrifugación de gradiente de
cloruro de potasio () es un método complicado, costoso y lento en comparación con otros
protocolos de purificación.Requiere cultivo bacteriano a gran escala. Por lo tanto, no es
adecuado para la minipreparación de ADN plásmido [4]. Los ácidos nucleicos se pueden
concentrar por centrifugación en un gradiente después de la precipitación del alcohol y la
resuspensión. La intercalación altera la densidad de nado de la molécula en molar alto. Las
moléculas circulares covalentemente cerradas se acumularán a densidades más bajas en
el gradiente porque incorporan menos por par de bases en comparación con las moléculas
lineales. El hidrofóbico se elimina luego con disolventes hidrófobos apropiados después de
la extracción. El ácido nucleico purificado será reprecipitado con alcohol [1].

Purificación de Poly RNA por Oligp (dT) -Cromatografía de celulosa Poly RNA es la plantilla
para la traducción de proteínas y la mayoría de los eucariotas mRNAs llevan tractos de la
misma en su 3 'termini [4, 15]. Constituye del 1 al 2% del ARN total y se puede separar
mediante cromatografía de afinidad en oligo (dT) -celulosa. Las colas poli (A) forman
híbridos estables de ARN-ADN con cadenas cortas de oligo (dT) que se unen a varias
matrices de soporte [4, 15]. Se debe agregar alta cantidad de sal al tampón de
cromatografía para estabilizar los dúplex de ácido nucleico ya que solo se forman unos
pocos pares de bases dT-A. Se usa un tampón de baja sal después de que los ARN no
poliadenilados se hayan lavado de la matriz. Este buffer ayuda a desestabilizar las
estructuras bicatenarias y eluir los poli ARN de la resina [15]. Hay dos métodos usados
comúnmente en la selección de cromatografía en columna de poli ARN en columnas de
oligo (dT) y cromatografía discontinua. La cromatografía en columna se usa normalmente
para la purificación de grandes cantidades (> 25 g) de ARN poli (A) + no radiactivo aislado
de células de mamífero. La cromatografía en lote es el método preferido cuando se trabaja
con pequeñas cantidades (<50 g) de ARN total de mamífero. Se puede usar cuando se
procesan muchas muestras de ARN, ya sean radiactivas o no. La cromatografía
por lotes se lleva a cabo con un grado fino de celulosa oligo (dT) a temperaturas óptimas
para la unión y elución [15].

3.1.2. Extracción de ácido nucleico en fase sólida La purificación de ácido nucleico en fase
sólida se puede encontrar en la mayoría de los kits de extracción comercial disponibles en
el mercado. Permite una purificación rápida y eficiente en comparación con los métodos
convencionales [16]. Muchos de los problemas que están asociados con la extracción
líquido-líquido, como la separación de fases incompleta, pueden evitarse. El sistema de
fase sólida absorberá el ácido nucleico en el proceso de extracción dependiendo del pH y
el contenido de sal del tampón. El proceso de absorción se basa en los siguientes
principios: interacción de unión a hidrógeno con una matriz hidrófila en condiciones
caotrópicas, intercambio iónico en condiciones acuosas por medio de un intercambiador de
aniones y mecanismos de exclusión por afinidad y tamaño.
La purificación en fase sólida normalmente se realiza mediante el uso de una columna
giratoria, operada bajo fuerza centrífuga [17]. Este método puede purificar el ácido nucleico
rápidamente en comparación con los métodos convencionales. Las matrices de sílice, las
partículas de vidrio, la tierra de diatomeas y los portadores de intercambio aniónico son
ejemplos que se han utilizado en el método de extracción en fase sólida como soporte
sólido. Cuatro pasos clave involucrados en la extracción en fase sólida son la lisis celular,
la adsorción de ácidos nucleicos, el lavado y la elución [6].

El paso inicial en un proceso de extracción en fase sólida es acondicionar la columna para

la adsorción de la muestra. El acondicionamiento de la columna puede realizarse usando
un tampón a un pH particular para convertir la superficie o los grupos funcionales en el
sólido en una forma química particular. [17]. A continuación, la muestra que se ha
degradado mediante el uso de tampón de lisis se aplica a la columna. El ácido nucleico
deseado se absorberá a la columna con la ayuda de un pH alto y la concentración de sal
de la solución de unión [17]. Otros compuestos, como la proteína, también pueden tener un
enlace específico fuerte con la superficie de la columna. Estos contaminantes pueden
eliminarse en la etapa de lavado utilizando un tampón de lavado que contiene un agente
competitivo [17]. Para la etapa de elución, se introduce tampón TE o agua para liberar el
ácido nucleico deseado de la columna, de modo que pueda recogerse en un estado
purificado [17]. Normalmente, se requiere centrifugación rápida, filtración a vacío o
separación de columna durante las etapas de lavado y elución del proceso de purificación.

Se ha divulgado una extracción de ácido nucleico en fase sólida de lecho mixto y su uso en
el aislamiento de ácido nucleico [18]. Las fases sólidas de lecho mixto de esta invención
son las mezclas de al menos dos fases sólidas diferentes, pueden ser sólidas o semisólidas,
porosas o no porosas. Cada fase sólida puede unirse al ácido nucleico diana en diferentes
condiciones de solución y liberar el ácido nucleico en condiciones de elución similares [18].

Matrices de sílice La base para la mayoría de los productos relacionados con la purificación
de ácidos nucleicos son las propiedades únicas de las matrices de sílice para la unión
selectiva de ADN. Tipos de materiales de sílice que incluyen partículas de vidrio, como
polvo de vidrio, partículas de sílice y microfibras de vidrio preparadas por molienda de
papeles de filtro de fibra de vidrio, y que incluyen tierra de diatomeas [19]. La matriz de
sílice hidratada, que se preparó calentando a reflujo dióxido de silicio en hidróxido de
sodio o hidróxido de potasio en una relación molar de aproximadamente 2: 1 a 10: 1 durante
al menos aproximadamente 48 horas, se había introducido en la purificación de ADN. El
ADN se une a la matriz inorgánica y se libera en agua caliente [20]. El principio de la
purificación de matrices de sílice se basa en la alta afinidad de la columna vertebral de ADN
con carga negativa hacia las partículas de sílice cargadas positivamente [21]. El sodio
desempeña un papel como puente catiónico que atrae el oxígeno cargado negativamente
en la cadena principal de fosfato del ácido nucleico [22]. Los cationes de sodio rompen los
enlaces de hidrógeno entre el hidrógeno en el agua y los iones de oxígeno con carga
negativa en la sílice en condiciones de alta sal (pH ≤7) [22]. El ADN está fuertemente unido,
y el lavado extensivo elimina todas las contaminaciones. Las moléculas de ADN purificadas
pueden eluirse con baja fuerza iónica (pH ≥7) más tarde mediante el uso de tampón TE o
agua destilada [21]. Además de las matrices de sílice, también se sabe que las membranas
de nitrocelulosa y poliamida, como matrices de nylon, se unen con ácidos nucleicos, pero
con menos especificidad. Estos materiales se utilizan a menudo como matrices de
transferencia de ácidos nucleicos en fase sólida e hibridación [23]. Las matrices de
poliamida son más duraderas que la nitrocelulosa y se sabe que unen los ácidos nucleicos
de forma irreversible. Los ácidos nucleicos se pueden inmovilizar en matrices de poliamida
en tampón de baja concentración iónica [23].

Partículas de vidrio Las partículas de vidrio, el polvo y las perlas son útiles para la
purificación de ácidos nucleicos. Por ejemplo, el aislamiento del ADN de los geles de
agarosa implica el uso de sales caotrópicas para facilitar la unión del ADN al vidrio de
silicato común, vidrio de sílex y vidrio de borosilicato (filtro de fibra de vidrio). La adsorción
de ácido nucleico sobre el sustrato de vidrio se basa muy probablemente en el mecanismo
y el principio de que es similar a la cromatografía de adsorción [24]. La purificación de
ácidos nucleicos también puede realizarse en gel de sílice y en una mezcla de vidrio
[19]. Esta invención ha descubierto que se puede usar una mezcla de gel de sílice y
partículas de vidrio para separar el ácido nucleico de otras sustancias en presencia de una
solución de sales caotrópicas.

Tierra de diatomeas La tierra de diatomeas, que también se conoce como kieselguhr o

diatomita, tiene un contenido de sílice tan alto como 94% [25]. Se ha usado para filtración
y en cromatografía y es útil para la purificación de plásmidos y otros ADN mediante la
inmovilización de ADN en sus partículas en presencia de un agente caotrópico. El ADN
unido a tierra diatomácea resultante se lava a continuación con un tampón que contiene
alcohol. El tampón que contiene alcohol se descarta y el ADN se eluye en un tampón con
bajo contenido de sal o en agua destilada [25].

Purificación de ácido nucleico basada en perlas magnéticas La separación magnética es

una forma simple y eficiente que se utiliza en la purificación de ácido nucleico en la
actualidad. Muchos portadores magnéticos ahora están disponibles comercialmente. Las
partículas que tienen una carga magnética se pueden eliminar mediante el uso de un imán
permanente en la aplicación de un campo magnético.Con frecuencia, los portadores
magnéticos con ligandos de afinidad inmovilizados o preparados a partir de biopolímero que
muestran afinidad por el ácido nucleico diana se usan para el proceso de aislamiento. Por
ejemplo, partículas magnéticas que se producen a partir de diferentes polímeros sintéticos,
biopolímeros, vidrio poroso o partículas magnéticas basadas en materiales magnéticos
inorgánicos tales como óxido de hierro modificado en la superficie. Los materiales con un
área de superficie grande se prefieren para ser usados en la unión de ácidos nucleicos. Los
materiales particulados magnéticos, como las perlas, son más preferibles para ser un
soporte en el proceso de aislamiento debido a su mayor capacidad de unión. El proceso de
unión a ácido nucleico puede ser asistido por el ácido nucleico que "envuelve" el
soporte. Se puede aplicar un imán al costado del recipiente, que contiene la mezcla de
muestra para agregar las partículas cerca de la pared del recipiente y verter el resto de la
muestra [26]. Las partículas que tienen propiedades magnéticas o paramagnéticas se
emplean en una invención en la que están encapsuladas en un polímero tal como celulosa
magnetizable [27]. En presencia de ciertas concentraciones de sal y polialquilenglicol, la
celulosa magnetizable puede unirse a ácidos nucleicos. El ácido nucleico pequeño requería
concentraciones más elevadas de sal para una unión fuerte a las partículas de celulosa
magnetizables. Por lo tanto, la concentración de sal puede manipularse selectivamente
para liberar ácido nucleico unido a celulosa magnetizable sobre la base del tamaño. La
celulosa magnetizable que se une con ácido nucleico se lavará con tampón de lavado
adecuado antes de ponerse en contacto con un tampón de elución adecuado para separar
el ácido nucleico deseado con celulosa. La separación de la celulosa magnetizable del
sobrenadante durante todos los pasos de purificación se puede hacer aplicando un campo
magnético para atraerlos hacia un lado del vaso [27]. La celulosa magnetizable usada en
esta invención tiene un contenido de óxido de hierro de hasta aproximadamente 90% en
peso de la masa total de la celulosa. El componente magnético de la celulosa también
puede ser sustituido por otros compuestos magnéticos, como óxido ferroso u óxido de
níquel [27]. Un kit de extracción basado en el principio de purificación de ácido nucleico
basado en perlas magnéticas está disponible comercialmente en el mercado [28]. La parte
especial de este kit es que los reactivos proporcionados están destinados para su uso con
herramientas magnéticas. Se recomienda esta herramienta magnética si se trabaja en
formato de microtubo. Es un dispositivo práctico para realizar separaciones basadas en
tecnología de partículas magnéticas. El kit no requiere ningún solvente orgánico y elimina
la necesidad de centrifugación repetida, filtración al vacío o separación de columna. El
protocolo se basa en un procedimiento de lisis alcalina modificado seguido por la unión del
ácido nucleico a partículas magnéticas. La herramienta magnética se utiliza para capturar
partículas magnéticas con el ácido nucleico unido y los contaminantes se eliminan mediante
lavado con el tampón de lavado provisto. El ácido nucleico luego se eluye de las partículas
magnéticas con el tampón de elución [28]. Otro kit de extracción tiene el mismo principio
que la extracción descrita anteriormente, que utilizó la tecnología de partículas magnéticas
para la purificación de ácidos nucleicos [29]. Combina la velocidad y eficiencia de la
purificación de ADN a base de sílice con el manejo conveniente de partículas
magnéticas. Una varilla magnética protegida por una cubierta de varilla se utiliza para la
captura de partículas magnéticas. Entra en un recipiente que contiene las muestras y atrae
las partículas magnéticas. Luego, la cubierta de la varilla magnética se coloca encima de
otro vaso y se liberan las partículas magnéticas [29]. La purificación de ácidos nucleicos
mediante el uso de perlas de zirconia es otro tipo de purificación basada en perlas
magnéticas. Estas perlas paramagnéticas microesféricas tienen una gran superficie de
unión disponible y se pueden dispersar en solución. Esta característica permitió la unión, el
lavado y la elución del ácido nucleico completo. El kit de aislamiento de ácidos nucleicos,
que utiliza esta tecnología para la purificación de ácidos nucleicos, utiliza la disrupción
mecánica de muestras con perlas de zirconia en una solución basada en tiocianato de
guanidinio que no solo libera ácido nucleico sino que también inactiva la nucleasa en la
matriz de muestra [ 30]. Después de la etapa de lisis, la dilución de las muestras se realiza
usando isopropanol. Las perlas paramagnéticas se agregan a las muestras para el
propósito de unión al ácido nucleico. La mezcla de perlas y ácido nucleico se inmoviliza en
imanes y se lava para eliminar proteínas y contaminantes. La eliminación de la solución de
unión residual se realiza con una segunda solución de lavado y, finalmente, el ácido
nucleico se eluye en un tampón de baja sal [30]. La tecnología basada en perlas
paramagnéticas de inmovilización reversible en fase sólida se ha utilizado para un sistema
de purificación de PCR para suministrar ADN de calidad. Requiere un protocolo simple sin
centrifugación y filtración. Los amplicones de PCR se unen a partículas paramagnéticas
que los extraen de la solución, lo que permite eliminar contaminantes como dNTP,
cebadores y sales [31]. El cordón de oligo (dT) magnético es una alternativa a otras
matrices de oligo (dT) para la purificación de poli ARN a partir de la muestra de ARN total
[4]. El poli ARN se puede extraer mediante la introducción de perlas magnéticas recubiertas
con oligo (dT). El ARN con una cola de poli-A se une al oligo (dT). Las perlas serán atraídas
al fondo de un tubo para eliminar el ARNm directamente del ARN total. Las perlas
magnéticas que se tratan especialmente minimizan la unión inespecífica de otros ácidos
nucleicos y aseguran la pureza del ARNm [32].

Anión intercambio de resina de intercambio de aniones es uno de los ejemplos populares

que utilizan el principio de intercambio aniónico [33]. Se basa en la interacción entre grupos
de dietilaminoetil celulosa cargados positivamente (DEAE) en la superficie de la resina y
fosfatos cargados negativamente de la cadena principal del ADN. La resina de intercambio
aniónico consiste en perlas de sílice definidas con un tamaño de poro grande, un
revestimiento superficial hidrófilo y tiene una alta densidad de carga [34]. La gran superficie
de resina permite un acoplamiento denso de los grupos DEAE. La resina funciona en un
amplio rango de condiciones de pH (pH 6-9) y / o concentración de sal (0.1-1.6 M) que
pueden optimizar la separación del ADN del ARN y otras impurezas [34]. Por lo tanto, la
concentración de sal y las condiciones de pH de los tampones son uno de los principales
factores que determinan si el ácido nucleico se une o se eluye de la columna. El ADN se
puede unir al grupo DEAE en un amplio rango de concentración de sal. Las impurezas tales
como la proteína y el ARN se lavan de la resina mediante el uso de tampones de media sal,
mientras que el ADN permanece unido hasta que se eluye con un tampón con alto contenido
de sal [34]. El método de utilizar materiales de intercambio aniónico para aislar ácido
nucleico se ha descrito en una invención [35], donde los materiales intercambiadores de
aniones con carga positiva fuerte o débil comercialmente disponibles se usaron con
soluciones seleccionadas de fuerza iónica conocida para adsorción y elución. La mayoría
de los componentes solubles en agua, tales como proteínas, se pueden lavar a través de
la columna empleando una solución con una fuerza iónica conocida para la unión de ácidos
nucleicos a los materiales de la columna de intercambio aniónico. La fuerza iónica para la
elución se genera mediante el uso de la concentración de sal conocida, que se mezcla con
un tampón para controlar la intensidad del pH, idealmente correspondiente a la menor
fuerza iónica a la que los ácidos nucleicos se eluirán por completo [35].

3.2. Tipo de método de extracción de proteínas El primer paso en la purificación de

proteínas es la lisis celular. Para purificar y analizar las proteínas de manera eficiente,
primero deben liberarse de su célula huésped en forma soluble. La membrana plasmática
de las células de mamíferos, compuesta de fosfolípidos y proteínas, es fácil de romper
[36]. En comparación, la extracción de proteínas de hongos y bacterias parece ser más
desafiante debido a su pared celular estable que es más fuerte que la membrana
plasmática.

Los tejidos vegetales contienen una amplia gama de proteínas que varían en sus
propiedades. Algunos factores específicos deben tenerse en cuenta al desarrollar el
protocolo de extracción de proteínas para la planta [37]. Por ejemplo, la presencia de una
pared celular de celulosa rígida debe cortarse para liberar el contenido celular. Compuestos
contaminantes específicos tales como fenólicos y una gama de proteinasas pueden dar
como resultado la degradación o modificación de proteínas. Por lo tanto, se requieren
condiciones específicas para la extracción y purificación de proteínas de la planta [38].

Las técnicas de disrupción mecánica, como French Press o las perlas de vidrio se utilizan
para eliminar la pared celular, seguidas de la extracción a base de detergente de la proteína
total [39].

3.2.1. Cromatografía de intercambio iónico Cromatografía de intercambio de iones separa

las proteínas en función de su carga iónica superficie usando resina que están modificados
con grupos químicos ya sea positiva o negativamente cargados-cargadas-[4, 7]. La mayoría
de las proteínas tienen una carga negativa o positiva en general en función de su punto
isoeléctrico (pI) a un pH dado, que los hace posible interactuar con un opuesto cargado
matriz cromatográfica [7]. Si la carga neta de la proteína es positiva a un pH por debajo del
valor pI, la proteína se unirá a un intercambiador de cationes; a un pH por encima del valor
pI la carga neta de la proteína es negativo y la proteína se unirá a un intercambiador
aniónico [38].

Las proteínas que interaccionan débilmente con las resinas, por ejemplo, una débil proteína
cargada positivamente pasó sobre resina modificada con un grupo cargado negativamente,
se eluyen a cabo en un tampón bajo en sal. Por otro lado, las proteínas que interaccionan
fuertemente requieren más sal a ser eluida. Las proteínas con características de carga muy
similares se pueden separar en diferentes fracciones a medida que se eluyen de la columna
aumentando la concentración de sal en el tampón de elución [7].

columna de intercambio iónico es una de las tecnologías que utilizan el principio de la

cromatografía de intercambio iónico [33]. Utiliza la tecnología de membrana absorbente
como una matriz cromatográfica para separar las proteínas. Los absorbentes de membrana
en columnas se estabilizan celulosa-basado con estructura altamente porosa que
proporciona proteínas de acceso a la superficie cargada fácilmente. sucedieron Las
interacciones entre moléculas y sitios activos sobre la membrana en convectivo a través
de-poros. Por lo tanto, las membranas adsorbentes tienen el potencial para mantener altas
eficiencias cuando la purificación de biomoléculas grandes con baja difusión [33].

3.2.2. cromatografía de filtración en gel de cromatografía de filtración en gel, también

llamado de exclusión por tamaño o cromatografía de permeación en gel, separa las
proteínas de acuerdo con tamaños moleculares y la forma y las moléculas no se unen al
medio de cromatografía [39]. Es un proceso en el que las moléculas grandes pasan a través
de la columna más rápidamente que las moléculas pequeñas. Las moléculas pequeñas
pueden entrar en todos de los pequeños orificios de la matriz y acceder a más de la
columna. proteínas de pequeño tamaño pasarán a través de esos agujeros y tomar más
tiempo para salir corriendo de la columna en comparación con las proteínas de gran tamaño
que no pueden entrar en los agujeros, pero agotado directamente de la columna a través
del espacio vacío en la columna [4, 7].

Gel kit cromatografía de filtración se aplica el principio de la cromatografía de filtración en

gel [40]. El objetivo de la muestra se aplica en la parte superior de la columna que contenía
perlas porosas, un ejemplo de matriz de la columna. Las moléculas se separan cuando las
moléculas pasan a través de la columna de perlas porosas. La separación de moléculas
puede dividirse en tres principales tipos: exclusión total, permeación selectiva, y límite total
de la permeación. exclusión total es la parte que moléculas grandes no pueden entrar en
los poros y se eluye rápido. Para la región permeación selectiva, moléculas intermedias
pueden entrar en los poros y pueden tener un tiempo de residencia medio en las partículas
en función de su tamaño y forma. En cuanto a límite total de permeación, moléculas
pequeñas tienen el tiempo de residencia más largo, una vez que entran en los poros de la
columna [40]. Una ventaja de la cromatografía basada en la filtración en gel es que es
adecuado para biomoléculas que pueden ser sensibles a los cambios de pH, concentración
de iones metálicos, y las duras condiciones ambientales [39].

3.2.3. Cromatografía de afinidad La cromatografía de afinidad depende de una interacción

específica entre la proteína y la fase sólida para afectar a la separación de los
contaminantes. Se compone de los mismos pasos como la cromatografía de intercambio
iónico [38]. Se permite la purificación de una proteína sobre la base de su función biológica
o la estructura química individuo [41]. Las proteínas que tienen una alta afinidad hacia los
grupos químicos específicos, tales como ligandos se covalentemente adjuntar y se unen a
la matriz de la columna mientras que otras proteínas pasan a través de la columna [38].
interacciones electrostáticas o hidrófobas, fuerzas de van der Waals y enlaces de hidrógeno
son las interacciones biológicas entre ligandos y las proteínas diana [41]. Las proteínas
unidas se eluyeron de la columna mediante una solución que contiene una alta
concentración de la forma soluble del ligando [36].
Un ligando bioespecífica que se puede unir a una matriz de cromatografía covalente es uno
de los requisitos para la purificación por afinidad exitosa. La unión entre las moléculas de
proteína ligando y de destino debe ser reversible para permitir que las proteínas para ser
eliminados en una forma activa [41]. Tras eliminar por lavado los contaminantes, el ligando
acoplado debe conservar su afinidad de unión específica para las proteínas diana. Algunos
ejemplos de interacciones biológicas que se utilizan por lo general en la cromatografía de
afinidad se enumeran en la Tabla 1 (ver [41]).
La separación cromatográfica por afinidad diferencial de ligandos inmovilizados en una
resina porosa rebordeado es fundamental para la investigación de proteínas [42]. Un kit
completo que contiene columnas de resina de afinidad paquete moldeado basado en el
principio de cromatografía de afinidad se ha introducido en el mercado [42]. Una resina de
afinidad se puede utilizar en lotes o formato de columna de microcentrífuga de giro
dependiendo de la escala y el tipo de experimento para llevarse a cabo. Además, puede
ser embalado en una especie de columna de flujo por gravedad más grande así como [42].

3.2.4. Electroforesis en gel

La electroforesis en gel es un método para separar proteínas de acuerdo con sus
propiedades de tamaño y de carga. La proteína parcialmente purificada a partir de las
separaciones de cromatografía puede ser purificado adicionalmente con desnaturalizante
electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE), o electroforesis en gel nativo [4]. En PAGE,
las proteínas son accionados por la corriente aplicada a través de una matriz gelificada [43].
El movimiento de la proteína a través de este gel depende de la densidad de carga (carga
por unidad de masa) de las moléculas. Las moléculas con carga alta densidad migran
rápidamente. El tamaño y forma de la proteína son otros dos factores importantes que
influyen PÁGINA fraccionamiento [43]. El tamaño de poro acrilamida desempeña un papel
como un tamiz molecular para separar los diferentes tamaños de las proteínas [4]. Cuanto
mayor sea la proteína, más lento a medida que se desplaza más enredado en el gel [43].
La forma es también uno de los factores porque las proteínas globulares compactas
mueven más rápido que las proteínas fibrosas alargadas de masa molecular comparable
[43].

PAGE se lleva a cabo usualmente en presencia del dodecil sulfato de sodio (SDS) [44]. Una
proteína tratada con SDS por lo general eliminar la estructura secundaria, terciaria y
cuaternaria de la proteína [4, 7]. Las proteínas se despliegan en una forma similar a modo
de varilla a causa de la repulsión electrostática entre las moléculas de SDS encuadernados.
El número de moléculas de SDS que se unen a una proteína es aproximadamente
proporcional a la masa molecular de la proteína (alrededor de 1,4 g SDS / g proteína) [43].
Cada especie proteína tiene una densidad de carga equivalente y es accionado a través
del gel con la misma fuerza [43]. Además, PÁGINA puede minimizar la desnaturalización
de las proteínas. Muchas proteínas todavía retienen sus actividades biológicas después de
ejecutar PÁGINA [7]. Sin embargo, las proteínas más grandes se llevan a cabo hasta un
grado mayor que las proteínas más pequeñas debido a que la poliacrilamida es altamente
reticulado [43].En consecuencia, las proteínas se separan por SDS-PAGE sobre la base de
su masa molecular. SDS-PAGE se puede utilizar para determinar la masa molecular de la
mezcla de proteínas mediante la comparación de las posiciones de las bandas a los
producidos por las proteínas de tamaño conocido [43]. SDS utiliza en electroforesis mezcla
de determinación de proteínas de acuerdo con la longitud de las cadenas de polipéptidos
individuales [7].

Una técnica llamada electroforesis en gel bidimensional fue desarrollado por Patrick
O'Farrell en 1975. Se utiliza para fraccionar mezclas complejas de proteínas mediante el
uso de dos técnicas de isoelectroenfoque y SDS-PAGE [43] diferentes. En primer lugar, las
proteínas se separan en función de su punto isoeléctrico en un gel tubular. Después de esta
separación, el gel se retiró y se puso en la parte superior de una losa de poliacrilamida
saturado con SDS. Las proteínas se mueven en la placa de gel y se separaron de acuerdo
con su masa molecular [43]. electroforesis en gel de dos dimensiones es adecuado para
detectar cambios en las proteínas presentes en una célula en condiciones diferentes, en
diferentes etapas de desarrollo o el ciclo celular, o en diferentes organismos [43].

3.2.5. Sudoeste Blotting (Immunoblotting) sudoeste blotting es un método que se utiliza para
aislar, identificar y caracterizar las proteínas de unión al ADN por su capacidad en la unión
a sondas de oligonucleótidos específicos [44, 45]. Muchas de las proteínas de unión al ADN
en la célula necesita ser aislado individualmente y caracterizado para definir la función de
genes [44]. Tres pasos están involucrados en este método. En primer lugar, los extractos
de proteínas nucleares se separan mediante electroforesis SDS-PAGE. A continuación, las
proteínas separadas se transfieren a un filtro de nitrocelulosa, difluoruro de polivinilideno
(PVDF) o membrana de nylon catiónico [12]. El filtro se incubarán después con sondas de
oligonucleótidos para analizar las proteínas adsorbidas [44, 45]. Sin embargo, esta técnica
está plagado de problemas, tales como grandes cantidades de proteínas nucleares se
requiere (típicamente 50-100 mg),la degradación de proteínas durante el aislamiento, frente
a dificultades para lograr la separación electroforética eficiente y la transferencia de una
amplia gama de tamaño molecular de las proteínas [45].

3.3. All-in-One Biomoléculas Extracción general, las técnicas de extracción o purificación o

kits disponibles en el mercado sólo puede permitir la extracción de un tipo de ácido nucleico,
ya sea ADN o ARN, o una proteína de un organismo objetivo. Cuando el material celular es
limitante, es deseable extraer el ADN, ARN y proteínas de la misma fuente.

Una variación en el método de aislamiento de una sola etapa de Chomczynski y Sacchi

(1987), que el homogeneizado de guanidinio thyicyanate se extrajo con fenol: cloroformo a
pH reducido, permite la preparación de ADN, ARN y proteínas a partir de tejido o células.
Este método implica la lisis de las células con isotiocianato de guanidina y fenol en una
solución de fase única. Una segunda formas de fase después de la adición de cloroformo
donde se extrajeron el ADN y las proteínas, dejando de ARN en el sobrenadante acuoso.
El ADN y las proteínas se pueden aislar de la fase orgánica por precipitación con etanol o
isopropanol y el ARN se precipitó de la fase acuosa con isopropanol [15].

Varios kits de extracción de todo-en-uno se han introducido en el mercado hoy en día. Por
ejemplo, un kit de extracción basado en columnas que diseñó para purificar ADN genómico,
el ARN total y de proteína total a partir de una única muestra biológica de forma simultánea,
sin el uso de sustancias tóxicas tales como fenol o cloroformo y precipitación con alcohol
[46]. Es compatible con pequeñas cantidades de una amplia gama de células cultivadas y
tejido recogido de origen animal y humano. La muestra objetivo no necesita ser separado
en 3 partes antes de la purificación de ADN, ARN y proteína [46].

Un kit de extracción de 3-en-1 basado en la solución que está disponible en el mercado es

otro ejemplo de kit soluciones no orgánicos que puede extraer y purificar ADN, ARN y
proteínas, a partir de diferentes organismos en cualquier tipo y tamaño [47]. Su protocolo
de tres simples pasos, que toma alrededor de 15 a 30 minutos, proporciona una manera
rápida y fácil de hacer la extracción de diferentes biomoléculas. Por lo tanto, un mayor
rendimiento puede esperarse como menos pasos conduce a menos pérdida [47].

3.4. Sistema de extracción automatizada sistema de extracción automatizada, una

instrumentación grande, caro y complejo diseñado para el procesamiento de muestras de
alto rendimiento, ha ayudado a simplificar el aislamiento de ácidos nucleicos [48]. Este
sistema fue diseñado para medianas y grandes laboratorios que ha crecido en presencia
en los últimos años [49]. La automatización de proceso de extracción de ácido nucleico es
potencialmente beneficioso para un número de razones, entre ellas para reducir el tiempo
de trabajo, disminuir los costes de mano de obra, aumentar la seguridad del trabajador y en
el medio proporciona la oportunidad en el aumento de la reproducibilidad y la calidad de los
resultados [50]. Además, es una solución clave para aumentar la eficiencia de laboratorio
[48].

En laboratorios clínicos, la purificación de biomoléculas de alta calidad, tales como ADN,

ARN y proteína a partir de una variedad de material de partida se utiliza en aplicaciones de
pruebas de aguas abajo. Es crucial para obtener muestras purificadas en suficiente calidad
y pureza [48]. Por lo tanto, extracciones automatizadas deberían ser más consistente y
reproducible. La velocidad, precisión y fiabilidad de todo el proceso de extracción debe ser
máxima y al mismo tiempo minimizar el riesgo de contaminación cruzada [49]. Una solución
tiene que ser introducido para aumentar la eficiencia de preparación de muestras sin
sacrificar la calidad. La posibilidad de contaminación cruzada debe ser reducida y los
sistemas son susceptibles de seguimiento de la muestra [51] con código de barras.

Un sistema de extracción que está disponible en el mercado se ha cumplido con los

requisitos indicados anteriormente. Ofrece laboratorios forenses de procesamiento de
muestras rápida y fiable a lo largo con la purificación de ADN automatizado de alta calidad
[52]. Es un sistema de manipulación paramagnético de partículas para procesar la muestra
y proporcionar un rendimiento constante y pureza ya que no hay detectable la
contaminación cruzada entre las muestras. El proceso de extracción toda toma alrededor
de 20 minutos desde el comienzo hasta el final porque sólo se necesitan tres pasos simples:
añadir muestras líquidas al reactivo de cartucho; colocar cartuchos de reactivos en la
máquina; Presiona el botón de inicio. ADN se eluyó en tampón de elución al final del proceso
[52].

Otro ejemplo de sistema automatizado que es flexible y eficiente para la extracción de

ácidos nucleicos y proteínas se ha introducido [53]. Diversos materiales de partida se
pueden procesar mediante el uso de este sistema, que está diseñado para el flujo de
muestras pequeñas y medianas. Se utiliza partículas paramagnéticas funcionalizados en la
superficie para adsorber el ácido nucleico aislada [53]. La flexibilidad de este sistema
permite la extracción de ácido nucleico a partir de hasta doce muestras simultáneamente. El
proceso de extracción requiere alrededor de 20 a 40 minutos dependiendo de la
aplicación. Los kits que optimizados para este sistema puede extraer el ADN genómico, el
ARN celular, los ácidos nucleicos virales o bacterianas [53].
4. Posible dirección futura
extracción de biomoléculas es el primer paso que necesita ser realizada para el siguiente
proceso de análisis o manipulación. El requisito de tratamiento de líquidos es el aspecto
más desafiante. Por lo tanto, cualquier sistema automático debe incluir no sólo un equipo
automático para cada etapa de extracción, sino también equipos para la automatización de
la transferencia de líquido entre las máquinas. La automatización ha ayudado a aumentar
el rendimiento y mejorar la fiabilidad del proceso, pero estos sistemas todavía están
diseñados para su uso en un entorno de laboratorio solamente. Algunos de los sistema de
extracción de ácido nucleico que están disponibles en el mercado son grandes y requieren
etapas manuales pre-procesamiento por parte del personal de laboratorio con experiencia
técnica [54]. Por lo tanto, las estaciones de trabajo robotizadas para la extracción de ácidos
nucleicos deben cumplir una verdadera automatización “walk-away”,lo que significa un
proceso totalmente automatizado [49]. Una combinación de la solución de extracción
biomoléculas todo-en-uno y el método con sistema de extracción totalmente automatizado
puede ser un estudio prospectivo invención en el futuro. La purificación de ADN, ARN o
proteína a partir de varios organismos puede realizarse simultáneamente utilizando este
tipo de sistema de extracción con un solo método de extracción.

A menudo es un inconveniente que dirige muestra biomoléculas de un animal, planta o

incluso una muestra clínica debe ser enviado a un laboratorio para que pueda ser extraído
y analizado [54]. Las muestras, muestra especialmente clínica tal como sangre, necesitan
ser refrigerados y se transfiere al laboratorio más cercano para la extracción y el análisis.
Por lo tanto, un sistema de extracción de biomoléculas portátil, que aporta varias ventajas,
tales como mano de obra reducida, reducción de residuos y el aumento de la velocidad de
proceso de extracción, puede ser un desarrollo potencial en el futuro [54]. La combinación
de sistema de extracción portátil con ADN, ARN, o un analizador de proteínas puede ser
acumule en el futuro para ayudar a los investigadores en la reducción del tiempo de trabajo
y el aumento de la eficiencia en el trabajo.

La mejora continua en la miniaturización será la tendencia futura de automatización robótica

en el laboratorio [28]. Muchos laboratorios clínicos se están realizando análisis de flujo de
trabajo y descubriendo que los sistemas más pequeños con menor rendimiento son más
consistentes con la carga de trabajo del laboratorio clínico. Además, este sistema de
automatización se puede implementar un coste relativamente bajo, mejorando los tiempos
de respuesta y reducir los costos de mano de obra [55].

5. Conclusión
Desde el primer aislamiento del ADN se realizó con éxito por Friedrich Miescher en 1869 y
la extracción de ADN inicial se desarrolló a partir de gradiente de densidad estrategias de
centrifugación por Meselson y Stahl en 1958, ha sido desarrollado muchas técnicas para la
purificación de biomoléculas. De guanidinio extracción tiocianato-fenol-cloroformo a la
columna en la tecnología que se utiliza ampliamente en el ADN y la extracción de RNA, y
el método de purificación de cromatografía para la inmunotransferencia que utiliza para
extraer las proteínas, la extracción de biomoléculas ha ayudado a los investigadores y
científicos en la manipulación de análisis de biología molecular posterior con el fin para
tener una mejor comprensión de los materiales biológicos de la tierra.

El sistema de extracción de ácidos nucleicos automatizado se ha desarrollado debido a la

influencia de un rápido crecimiento de la tecnología de automatización de hoy en día. La
automatización de proceso de extracción de ácido nucleico es potencialmente beneficioso
para un número de razones, entre ellas para reducir el tiempo de trabajo, disminuir los
costes de mano de obra, aumentar la seguridad del trabajador y al mismo tiempo
proporciona la oportunidad en el aumento de la reproducibilidad y la calidad de los
resultados. Sin embargo, la mejora de las debilidades de algunos de los instrumentos debe
llevarse a cabo todo el tiempo. Por el momento, un sistema de extracción de biomoléculas
todo-en-uno, o la invención de un sistema de extracción en miniatura y portátiles pueden
convertirse en un desarrollo prospectivo en el futuro.