Laboratorio Nº1

1
EXPERIMENTO No. 1
SISTEMAS BUFFER Y OTROS MECANISMOS DE

REGULACIÓN DEL pH CORPORAL
OBJETIVOS.
1. Comprobar que el pH de una solución cambia cuando varía la
concentración de iones hidrógeno.
2. Comprobar la acción amortiguadora de los sistemas buffer.
3. Valorar la importancia de los sistemas buffer en el mantenimiento del
equilibrio ácido base del organismo.
INTRODUCCIÓN
La molécula de agua tiene capacidad limitada para ionizarse en ión hidrógeno
(H+), llamado también protón y en ion hidroxilo (OH-).
H2O H+ + OH-
Agua Protón Ión hidroxilo
Las concentraciones de protones y de iones hidroxilo, en agua pura, son de

10-7M para cada uno de ellos, como muestra la siguiente expresión:
[H+] = [OH-] = 10-7M
Las concentraciones de ambos iones exponen una relación recíproca; cuando

la [H+] aumenta, la [OH-] disminuye, y viceversa. El producto de sus
concentraciones es una constante conocida como producto iónico del agua
(Kw), cuyo valor es de 1 x l0-14M
Kw = [H+] x [OH-] = 1 x l0-14M
2
Con el fin de facilitar los cálculos para determinar la concentración de [H+],

así como su interpretación, en 1909 el químico danés Sörensen definió el
potencial de hidrógeno (pH) como el logaritmo negativo de la concentración
de los iones hidrógeno.
pH = -log[H+]
Posteriormente, en 1923, Johannes Brönsted y Thomas Lowry, propusieron en

forma independiente, los conceptos de ácido: sustancias que ceden protones
en una solución acuosa y base como aquella sustancia que puede recibir
protones en solución acuosa. Las disoluciones acuosas se clasifican en: acidas
si presentan un pH menor que 7.0; básicas si el pH es mayor que 7.0 y
neutras sí el pH es igual a 7.0.
Por otro lado, no todos los ácidos o bases se disocian con la misma facilidad.
Los que se disocian por completo en una solución acuosa se consideran como
ácidos o bases fuertes, en tanto que a los que se disocian en forma parcial se
les denomina ácidos o bases débiles. Algunos ácidos o bases débiles tienen
importancia biológica, ya que evitan cambios bruscos de pH cuando se les
agrega pequeñas cantidades de ácidos o bases. A esta propiedad de ácidos o
bases débiles y su sal, que permite mantener la disolución en un intervalo de
pH estrecho se le conoce como capacidad amortiguadora.
Los líquidos biológicos de interés en clínica (suero, plasma, orina, líquido
cefalorraquídeo, etc.) son soluciones que contienen algunas sustancias en
estado casi completo de ionización.
El conocimiento de la concentración de esos iones y de la fisicoquímica que

describen sus interrelaciones, es fundamental para poder entender muchos
problemas fisiológicos y patológicos en el hombre.
3
El pH de los líquidos corporales depende de la concentración de iones H+ y es

mantenido casi constante por medio de la operación de varios mecanismos
fisiológicos. Cada persona que trabaja en áreas relacionadas con la salud debe
conocer las formas por las cuales es mantenido el balance ácido – básico de
los fluidos corporales, ya que una desviación de éste conlleva a un desbalance
que puede conducir a un estado patológico e incluso producirá la muerte.
El ion hidrógeno o protón (H+) tiene gran importancia bioquímica, ya que

altera las cargas de las biomoléculas y por ende, su comportamiento
fisicoquímico. La concentración de este ion se representa por medio del pH.
Dado que el estricto control del pH es vital, el organismo lo mantiene
constante en los líquidos intracelulares y extracelulares mediante
amortiguadores, como el buffer bicarbonato HCO3 /H2CO3 y el buffer fosfato
HPO4= /H2PO4.
El buffer bicarbonato se regula por ventilación pulmonar y a nivel renal y el

buffer fosfato exclusivamente a nivel renal, conservando el pH del líquido
extracelular en 7.4. Cuando lo anterior no se logra, se producen estados
patológicos conocidos como desequilibrios acidobase, de los que existen
cuatro tipos fundamentales: 1) acidosis respiratoria; 2) alcalosis
respiratoria; 3) acidosis metabólica y 4) alcalosis metabólica. Cada uno de
ellos puede acompañarse de una respuesta compensatoria cuyo objetivo es
mantener el pH en los límites normales.
A. SOLUCIONES BUFFER ó SOLUCIONES TAMPÓN: ACCIÓN DE

UN SISTEMA BUFFER.
Son mezclas de un ácido débil y una sal de ese ácido, o de una base débil y
su sal. Este tipo de mezclas reaccionan tanto con ácidos como con bases, por
4
lo que la adición de ácidos o bases fuertes a dichas mezclas casi no produce

variaciones en el valor de pH. Un ejemplo de solución buffer es la solución
acuosa de ácido acético y acetato de sodio.
Esta solución contiene una gran cantidad de moléculas del ácido débil
(CH3 – COOH) y de su base conjugada (CH3 – COO-) que proviene de la
disociación del acetato de sodio. Si se añaden pequeñas cantidades de un ácido
fuerte a esta solución buffer, su mecanismo de acción es que los iones H+
provenientes del ácido reaccionan con la base conjugada del sistema buffer,
como se indica en la siguiente reacción:
H+ + CH3 – COO- CH3 – COOH
Por lo tanto, la mayoría de protones agregados al medio no permanecen como

tales, sino que forman el ácido débil (CH3 – COOH) y el pH varía
ligeramente.
Si se agregan iones (OH-) al sistema buffer, su mecanismo de acción es
reaccionar con moléculas de ácido acético para formar iones acetato y agua.
OH- + CH3 – COOH CH3 – COO- + H2O
El equilibrio estará desplazado a la derecha y en consecuencia la mayoría de

iones hidroxilo no se encuentran libres en la solución y el valor de pH casi no
cambia. En resumen, la adición de pequeñas cantidades de ácido fuerte o de
base fuerte a una solución buffer casi no ocasiona cambios en el valor del pH
de la solución. Por el contrario, las mismas adiciones hechas al agua producen
una notable variación en el pH, de modo que la adición de pequeñas
5
cantidades de un ácido fuerte, por ejemplo a soluciones que no son un buffer,

produce alteraciones importantes en el valor de pH de dichas soluciones.
Como tendrá la oportunidad de discutir posteriormente, la capacidad de una
solución buffer para reaccionar con ácidos o bases sin variar el pH es sin
embargo, limitada.
PARTE EXPERIMENTAL
Reactivos:
 Ácido acético 0. 1 N
 Hidróxido de sodio 0. I N
 Buffer Fosfato 0.05 M pH 7.4
 Azul de bromotimol 0.02%
 Ácido clorhídrico 0. 1 N
 Acetato de sodio 0. 1 N
Material:
 1 Gradilla para tubos
 6 Tubos de ensayo
 1 Aspirador de pipetas
 Pipetas graduadas de 1 mL, 5 mL y 10 mL
 Papel pH
PROCEDIMIENTO
1. Rotule cuatro tubos de ensayo limpios y secos, con los números 1, 2, 3 y 4
respectivamente. Recuerde utilizar los aspiradores de pipeta en los
pasos que siguen.
2. En los tubos Nº1 y Nº2: vierta 9.0 mL de agua destilada a cada tubo
(mídalos con una pipeta graduada de 10 mL)
6
3. En el tubo Nº3: vierta 4.5 mL de ácido acético 0.1N (mídalo con una
pipeta graduada de 5.0 mL); con otra pipeta de 5.0 mL mida 4.5 mL de
acetato de sodio 0.1N y lo vierte en el mismo tubo. Mezclar bien.
4. En el tubo Nº4: vierta 4.5 mL de ácido acético 0.1N (mídalo con una
pipeta graduada de 5.0 mL); con otra pipeta de 5.0 mL mida 4.5 mL de
acetato de sodio 0.1N y lo vierte en el mismo tubo. Mezclar bien.
5. Mida el pH (inicial) de los tubos No. 1 y 3 con papel pH, anote el valor
que observó en el cuadro de resultados.
6. En los tubos Nº1 y Nº3: agregue lentamente 1.0 mL de solución de ácido
Clorhídrico 0.1N. Mezcle bien agitando suavemente. Con el papel pH
mida el pH (final); anote el valor que observó en el cuadro de resultados.
7. Mida el pH (inicial) de los tubos No. 2 y Nº4 con papel pH, anote el valor
que observó en el cuadro de resultados.
8. En los tubos Nº2 y Nº4: agregue 1.0 mL de Hidróxido de sodio 0.1N.
Mezcle bien agitando suavemente. Mida con el papel pH el pH (final) en
cada uno; anote el valor que observó en el cuadro de resultados.
CUADRO DE RESULTADOS
Tubos pH inicial pH final Observaciones
1
2
3
4
PREGUNTAS:
1. ¿Observa alguna diferencia en el comportamiento de los tubos 1 y 3 frente
a la adición de una misma cantidad de ácido clorhídrico 0.1N?
7
2. ¿Cuál es la explicación bioquímica de los resultados obtenidos en los

tubos 1 y 3, frente a la adición de una misma cantidad de ácido clorhídrico
0.1N?
3. ¿Observa alguna diferencia en el comportamiento de los tubos 2 y 4 frente
a la adición de NaOH 0.lN?
4. ¿Cuál es la explicación bioquímica de los resultados obtenidos en los
tubos 2 y 4 frente a la adición de NaOH 0.1 N.?
5. Escriba la reacción que ocurre en el tubo 3
6. Escriba la reacción que ocurre en el tubo 4
B. ACCIÓN AMORTIGUADORA EN LOS LÍQUIDOS CORPORALES
Los ácidos o las bases producto del catabolismo de carbohidratos, lípidos y

aminoácidos dan lugar a la producción de una gran cantidad de compuestos
que potencialmente podrían modificar el pH fisiológico. Sin embargo, existen
sistemas amortiguadores que evitan cambios bruscos del pH. Ejemplo de éstos
es el sistema bicarbonato/ácido carbónico, que mantiene el pH del líquido
extracelular en valores próximos a 7.4. La combustión completa de
carbohidratos y lípidos genera bióxido de carbono y agua, los cuales se
combinan para producir ácido carbónico a nivel tisular. El ácido carbónico en
solución acuosa se disocia para formar su base conjugada, el bicarbonato, lo
que genera un sistema amortiguador, como se muestra en la siguiente
reacción:
Anhidrasa pKa = 6.1

carbónica
CO2 + H2O H2CO3 HCO3- + H+

bióxido de agua ácido ión protón
carbono carbónico bicarbonato
8
Si aumenta la concentración de protones en el medio por cualquier proceso

químico, el equilibrio se desplaza a la izquierda y se elimina el exceso de CO2
producido. Por lo contrario, si disminuye la concentración de protones del
medio, el equilibrio se desplaza a la derecha, para lo cual se utiliza CO2 del
producido constantemente por el metabolismo.
Las proteínas, y en forma específica las enzimas, son sensibles a los cambios
bruscos de pH. Así, el pH sanguíneo debe conservarse en un intervalo entre
7.35 y 7.45 con el fin de mantener la homeostasis.
En esta parte reproduciremos una de las formas en que el sistema renal

participa en mantener el equilibrio ácido – base del organismo, analizando el
papel que juega la solución Buffer Fosfato presente en el filtrado glomerular
(pH 7.4), el cual acepta los iones hidrógeno eliminados por el riñón durante el
proceso de formación de orina (pH 6).
El fosfato monosustituido (H2PO4-) y el fosfato disustituido (HPO4=) forman

una solución buffer; o sea, un par ácido débil – base conjugada que puede
actuar como un amortiguador de pH. El riñón durante la formación de la orina
elimina H+ los cuales reaccionan así:
H+ + HPO4= H2PO4-
En esta forma, al irse formando la orina irá variando la relación:
HPO4= con cambios correspondientes en el pH de la orina.

H2PO4-
9
Por este mecanismo el riñón elimina H+ y reabsorbe HCO3- hacia la sangre;

por cada ion H+ eliminado por las células tubulares hacia la luz del túbulo, un
ion Na+ es liberado del Na2HPO4, el cual acompaña al ion HCO3- que también
es devuelto a la sangre como se explicó antes.
PARTE EXPERIMENTAL
1. Utilizando una pipeta serológica de 5 mL mida 5 mL, de una solución
buffer fosfato pH 7.4 y transfiéralos a un tubo de ensayo (Este buffer
fosfato en esta práctica representa el buffer del filtrado glomerular).
2. Agregue al tubo 5 gotas de indicador azul de bromotimol, agitar.
3. Titule la solución del tubo agregando gota a gota y agitando suavemente
ácido clorhídrico (HCl) 0.1N, utilizando para ello una pipeta serológica de
5 mL hasta obtener un color amarillo, esto ocurre aproximadamente a pH
6.0 (ya no seguir agregando). Anote en su plan de trabajo el volumen
gastado (mL) de HCl 0.1N en la titulación. (No contar gotas).
Los H+ que se agregan por medio del HCl 0.1N para cambiar el pH del buffer
fosfato desde 7.4 hasta 6, representan a los H+ que el riñón agrega al
filtrado glomerular para eliminarlos en la orina intercambiándolos con Na+;
recuperando, en esta forma base (HCO3-).
PREGUNTAS:
1. ¿Cuál es el papel que desempeña la solución buffer fosfato y la solución
HCl 0.1N en este experimento?
2. ¿Cómo son eliminados los iones H+ por las células renales a la luz del
túbulo?
3. En el experimento la especie del buffer fosfato que amortigua los H+ que
se eliminan en la orina es ________________________
10
4. Los H+ eliminados en la orina son intercambiados por el ión

____________________ y la base restaurada es _____________________
5. Calcule cuántos mEq de base (NaHCO3) son restaurados a la sangre (pH
7.4) por la excreción de 1 litro de orina (pH 6.0) haciendo uso de datos
obtenidos en la titulación del buffer fosfato con la solución de HC1 0.1N.
Haga los cálculos utilizando la fórmula siguiente para encontrar los mEq
de HCl (H+) utilizados en dicha titulación (recordando que N= Eq/L ó
también N=mEq/mL):
N = mEq .
mL (Volumen gastado)
Y tomar en cuenta que en el experimento se utilizan 5mL de Buffer fosfato

pH 7.4.

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SISTEMAS BUFFER Y OTROS MECANISMOS DE

Las concentraciones de protones y de iones hidroxilo, en agua pura, son de

Las concentraciones de ambos iones exponen una relación recíproca; cuando

Con el fin de facilitar los cálculos para determinar la concentración de [H+],

Posteriormente, en 1923, Johannes Brönsted y Thomas Lowry, propusieron en

El conocimiento de la concentración de esos iones y de la fisicoquímica que

El pH de los líquidos corporales depende de la concentración de iones H+ y es

El ion hidrógeno o protón (H+) tiene gran importancia bioquímica, ya que

El buffer bicarbonato se regula por ventilación pulmonar y a nivel renal y el

A. SOLUCIONES BUFFER ó SOLUCIONES TAMPÓN: ACCIÓN DE

lo que la adición de ácidos o bases fuertes a dichas mezclas casi no produce

H+ + CH3 – COO- CH3 – COOH

Por lo tanto, la mayoría de protones agregados al medio no permanecen como

OH- + CH3 – COOH CH3 – COO- + H2O

El equilibrio estará desplazado a la derecha y en consecuencia la mayoría de

cantidades de un ácido fuerte, por ejemplo a soluciones que no son un buffer,

2. ¿Cuál es la explicación bioquímica de los resultados obtenidos en los

B. ACCIÓN AMORTIGUADORA EN LOS LÍQUIDOS CORPORALES

Los ácidos o las bases producto del catabolismo de carbohidratos, lípidos y

Anhidrasa pKa = 6.1

CO2 + H2O H2CO3 HCO3- + H+

Si aumenta la concentración de protones en el medio por cualquier proceso

En esta parte reproduciremos una de las formas en que el sistema renal

El fosfato monosustituido (H2PO4-) y el fosfato disustituido (HPO4=) forman

En esta forma, al irse formando la orina irá variando la relación:

HPO4= con cambios correspondientes en el pH de la orina.

Por este mecanismo el riñón elimina H+ y reabsorbe HCO3- hacia la sangre;

4. Los H+ eliminados en la orina son intercambiados por el ión

Y tomar en cuenta que en el experimento se utilizan 5mL de Buffer fosfato

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