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CRECIMIENTO MICROBIANO

En condiciones controladas, en el laboratorio, se puede seguir la evolución del


número de células a lo largo del tiempo de un cultivo microbiano en un sistema cerrado.
Si representamos los resultados obtenidos obtendremos la denominada curva de
crecimiento que comprende cuatro fases: fase de latencia o de adaptación, fase de
crecimiento exponencial o logarítmico, fase estacionaria y fase de muerte.

LATENCIA EXPONENCIAL ESTACIONARIA MUERTE

LAG LOG
Log N

Crecimiento neto 0 >0 0 <0

tiemp
o
inóculo

El concepto de crecimiento microbiano y las expresiones matemáticas que lo definen


pueden consultarse en cualquier texto de Microbiología (Brock Biology of
Microorganisms 2012, Prescott's Microbiology 2011).

Fase de crecimiento exponencial es la fase de crecimiento propiamente dicha y,


simplificando el desarrollo matemático,

dN/dt = N

N=N0 eµ(t-t0)

se caracteriza mediante la siguiente ecuación:

Ln N-Ln N0 = µ (t-t0) ó log N - log N0= µ / 2,303 (t-t0)

N= Número de células a un determinado tiempo.


No= Número de células iniciales
siendo la constante de proporcionalidad µ, un índice de la velocidad de
crecimiento que se denomina constante específica de velocidad de
crecimiento (velocidad de crecimiento por unidad de biomasa) y tiene
unidades de tiempo (h-1).

Es posible utilizar otros parámetros como por ejemplo, el tiempo que tarda
en duplicarse la población o tiempo de generación, g.

g = 0,693/µ

Al inverso del tiempo de generación se le denomina velocidad de


crecimiento (K) y sus dimensiones son generaciones/hora.

K = 1/g

Podemos calcular el valor de max (velocidad máxima) de crecimiento para


un microorganismo y un sustrato dado. Para ello se realizan curvas de
crecimiento con concentraciones crecientes de sustrato y se determinan

 = max S/(Ks + S)

los valores de para cada concentración estudiada.

siendo, Ks la constante de saturación para ese sustrato e igual a la


concentración de sustrato para la cual µ= ½ µmax.

También podemos utilizar la siguiente transformación de la ecuación:

1/ = 1/max + (Ks/max) (1/S)


En la fase estacionaria se pueden determinar dos parámetros
interesantes: cosecha máxima y rendimiento.

Cosecha máxima es la biomasa máxima obtenida. Su cálculo se


realiza mediante la expresión siguiente:

M = Mt – M0

siendo, Mt la biomasa en el tiempo t y se calcula en el momento en de la


fase estacionaria en el que el número de células es más elevado y M 0 la
biomasa del inóculo. El resultado se expresa en gramos, miligramos, etc

Rendimiento es la biomasa producida por cantidad de sustrato


consumida. Para su cálculo se utiliza la siguiente expresión:

Y = Biomasa producida/Sustrato consumido = (M t – M0)/(S0 – St)

siendo, S0 la cantidad de sustrato al inicio del cultivo y St la cantidad de


sustrato en el tiempo (t) en el que se obtiene el número de células más
elevado. El resultado se expresa como g de células/g de sustrato
consumido.
EJERCICIOS

4.1.Se parte de un cultivo que contiene 106 UFC/ml en con un tiempo de generación
de 1.5 h, ¿cuántas células cultivables tendremos al cabo de 8, 24 y 48 h de cultivo?

4.2.¿Cuál es el tiempo de generación de un cultivo que tiene una constante específica


de velocidad de crecimiento de 0,04 min-1? ¿Cuál será su velocidad de
duplicación?

4.3.Si se quiere conseguir que un cultivo crezca hasta una densidad celular de 10 9
células/ml en 4.5 h, y el tiempo de generación es de 20 min., ¿cuál debe ser la
densidad celular al comienzo del cultivo?

4.4.Tenemos un cultivo de densidad 105 células/ml, con un tiempo de generación de


30 min. Si la densidad inicial fue de 102 células/ml, ¿que tiempo de incubación ha
sido necesario para alcanzar la densidad final mencionada?Supongamos un
cultivo en fase exponencial que en un momento dado tiene 10.000 células/ml y
cuatro horas más tarde 100.000.000 células/ml. Calcular µ y g.

4.5. En una comida campestre se contaminó el paté con 38 células de Salmonella


cholerae suis. Si S. cholerae suis tiene un tiempo de generación de 80 minutos y
una fase de latencia (fase lag) de 1,25 h ¿cuántas células de esta bacteria estarán
presentes en la paella al cabo de 18 h?

4.6. Un carnicero, portador asintomático de Salmonella, picó carne sin proteger sus
manos con guantes. La carne picada se contaminó con 18 células de Salmonella
spp. y con 43 células de S. enterica. Sabiendo que Salmonella spp. Tiene un
tiempo de generación de 20 minutos y una fase de latencia de 2.5 h y que la
constante específica de la velocidad de crecimiento de S. enterica en la carne es
0,19 h-1 y la duración de su fase de latencia 4 h calcule el número de células del
género Salmonella que habrá en la carne 12 h después de ser picada.
4.7. En Semana Santa un turista defecó en una playa. La densidad de E. coli y de
Enterococcus faecalis en las heces fecales es de 8.2 109 y 4.8 107 células/100 ml,
respectivamente. El factor de dilución del vertido al incorporarse a la playa es de
1/1000. Dado que la concentración de nutrientes en la playa es baja, el crecimiento
de ambos microorganismos está ralentizado. El tiempo de generación de E. coli es
de 2.5 horas mientras que la constante específica de la velocidad de crecimiento
de Ent. faecalis es 0,13h-1. Con los datos que se indican
¿cuál será el número de células por mililitro, de cada una de estas bacterias, en
el agua de la playa 24 horas después del vertido?

4.8. Calcular el rendimiento de producción de biomasa por gramo de carbono


consumido de un cultivo que produce 18 gramos por litro de células cuando utiliza
como única fuente de carbono una solución de glucosa al 10% (peso/volumen).

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