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Rev Biomed 2004; 15:33-48.

Transactivación de receptores
con actividad de cinasa de
tirosina (RTK’s) por receptores Revisión
acoplados a proteínas G.

Enrique Sánchez-Lemus, José A. Arias-Montaño.

Departamento de Fisiología, Biofísica y Neurociencias, Centro de Investigación y de Estudios Avanzados

(Cinvestav), México, D.F., México.

RESUMEN. mecanismos responsables de su activación y los

Los efectos de los factores de crecimiento y de procesos involucrados en el fenómeno de
ciertas hormonas se deben a la activación de receptores transactivación de RTK’s por activación de GPCR’s.
con actividad intrínseca de cinasa de tirosina (o RTK’s, (Rev Biomed 2004; 15:33-48)
por receptor tyrosine kinases), cuya estimulación inicia
cascadas de señalización intracelular que regulan eventos Palabras clave: Cinasa de tirosina, receptores de
transcripcionales esenciales para la proliferación y la cinasa de tirosina, proteinas G, receptores acoplados
diferenciación celulares. Entre los efectos debidos a la a proteina C.
estimulación de los RTK’s, destaca la activación de la
familia de cinasas de proteína activadas por mitógeno o
MAPK’s (mitogen-activated protein kinases). SUMMARY.
Existen evidencias que indican que la estimulación Transactivation of tyrosine kinase receptors
de algunos receptores acoplados a proteínas G (o (RTK’s) by G protein-coupled receptors
GPCR’s, por G protein-coupled receptors) resulta (GPCR’s).
en la activación de RTK’s en ausencia de un ligando The effects of growth factors and those of some
para estos últimos. Este proceso ha sido denominado hormones are mediated by the activation of receptors
transactivación, y depende de señales intracelulares with an intrinsic activity of tyrosine kinase (receptor
inducidas por la estimulación de GPCR’s en las que tyrosine kinases, RTK’s); whose stimulation triggers
participan tanto las subunidades a como los complejos signalling cascades that regulate transcriptional events
bg de las proteínas G, así como fenómenos de crucial for cell growth and differentiation. Among the
fosforilación mediados por diferentes cinasas. En este effects that follow RTK stimulation, the activation of
artículo se revisan las características estructurales de the family of mitogen-activated protein kinases
ambos tipos de receptores (GPCR’s y RTK’s), los (MAPK´s) bears particular relevance.

Solicitud de sobretiros: Dr. José A. Arias-Montaño, Departamento de Fisiología, Biofísica y Neurociencias, Cinvestav, Apartado Postal 14-
740, C.P. 07000, México, D.F., México.
Tel. (55) 57 47 39 64 Fax: (55) 57 47 37 54 E-mail: jaarias@fisio.cinvestav.mx
Recibido el 29/Abril/2003. Aceptado para publicación el 30/Octubre/2003.
Este artículo está disponible en http://www.uady.mx/sitios/biomedic/revbiomed/pdf/rb041516.pdf
Vol. 15/No. 1/Enero-Marzo, 2004
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E Sánchez-Lemus, JA Arias-Montaño.

There is evidence that the stimulation of several INTRODUCCIÓN.

G protein-coupled receptors (GPCR’s) results in RTK La unión de los neurotransmisores, hormonas
activation in the absence of ligands for the latter. This o factores de crecimiento (ligandos) a sus receptores
phenomenon is known as transactivation, and relies on membranales, produce cambios bioquímicos en el
intracellular signals induced by GPCR stimulation, in interior de la célula, que conducen a una respuesta
which both the a subunit and the bg complexes of the específica para el estímulo recibido. Existen tres
corresponding G proteins, as well as phosphorylation grandes grupos de receptores membranales, definidos
processes mediated by different kinases are involved. por sus mecanismos de transducción de señales: a)
Herein we review the mechanisms responsible for the receptores que son canales iónicos o ionotrópicos; b)
activation of GPCR’s and RTK’s, as well as the receptores acoplados a proteínas G o GPCR’s (por
characteristics of RTK transactivation by GPCR’s. G protein-coupled receptors) y c) receptores con
(Rev Biomed 2004; 15:33-48) actividad de cinasa de tirosina o RTK’s (por receptor
tyrosine kinases).
Key words: Tyrosine kinase, receptor tyrosine kinase, Los RTK’s son activados de manera primaria
G protein, G protein-coupled receptors. por factores de crecimiento y su estimulación inicia
cascadas de señalización que regulan eventos
Abreviaturas transcripcionales esenciales para la proliferación y la
aa Aminoácidos
AC adenilil ciclasa diferenciación celulares, en las que participa de manera
AMPc monofosfato cíclico de adenosina relevante la familia de cinasas de proteína activadas por
CRE elemento de respuesta al AMPc
CREB proteína de unión a CRE mitógenos (mitogen-activated protein kinases,
DAG Diacilglicerol MAPK’s). Por otra parte, los GPCR’s se encuentran
EGF factor de crecimiento epidérmico
EGF-R receptor para EGF involucrados en la activación de un gran número de
ERK’s cinasas reguladas por señales extracelulares cascadas de señalización, que en última instancia
(extracellular signal-regulated kinases)
GAP’s proteínas estimuladoras de la actividad de GTPasa modifican la función de canales iónicos, receptores y
(GTPase activating proteins) enzimas, así como la transcripción de genes.
GNRP’s proteínas liberadoras de nucleótidos de guanina
(guanine-nucleotide releasing proteins) Desde mediados de la década de los 90 se han
GPCR’s receptores acoplados a proteínas G generado evidencias que muestran que la estimulación
(G protein-coupled receptors)
GPCR’s-Gq receptores acoplados a proteínas Gq de GPCR’s resulta en la activación de RTK’s en
GPCR’s-Gs receptores acoplados a proteínas Gs ausencia de un ligando de estos últimos. Este proceso
GPCR’s-Gi/o receptores acoplados a proteínas Gi/o
HB-EGF EGF unido a heparina ha sido denominado transactivación, y depende de
Ins(1,4,5)P3 1,4,5-trifosfato de inositol señales intracelulares, en las que participan tanto las
JAK’s cinasas Janus
MAPK’s cinasas de proteína activadas por mitógenos subunidades a como los complejos bg de las proteínas
(mitogen-activated protein kinases) G, como fenómenos de fosforilación debidos a la cinasa
MEK cinasa de ERK/MAPK
PI3-K 3-cinasa del fosfatidil inositol C de proteína (PKC) y a cinasas de tirosina, diferentes
PKA cinasa A de proteína de los propios RTK’s (1-3). En este artículo se revisan
PKC cinasa C de proteína
cPKC PKC’s convencionales los mecanismos de activación de ambas familias de
nPKC PKC’s nuevas receptores (acoplados a proteínas G y con actividad
PLC fosfolipasa C
RTK’s receptores con actividad de cinasa de tirosina intrínseca de cinasa de tirosina), así como las evidencias
(receptor tyrosine kinases) más relevantes del fenómeno de transactivación de
SH2 región 2 de homología a Src
SNC sistema nervioso central RTK’s por estimulación de GPCR’s.
STAT’s transductores y activadores de la señal de transcripción
(signal transducers and activators of transcription)

Revista Biomédica
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Receptores de cinasa de tirosina y receptores acoplados a proteínas G.

SEÑALIZACIÓN INTRACELULAR ME- carboxilo terminal y las asas intracelulares i2 e i3 son

DIADA POR RECEPTORES ACOPLADOS críticas para la transducción de la señal hacia el interior
A PROTEÍNAS G (GPCR’s). de la célula, ya que son los dominios de unión a la
proteína G correspondiente, responsable de iniciar la
RECEPTORES. señalización intracelular.
Son proteínas que conforman la familia más grande
(~1000 diferentes miembros) de receptores membranales PROTEÍNAS G.
involucrados en la transmisión de señales, activados por Son heterotrímeros presentes en todos los
una amplia variedad de ligandos, como neurotransmisores, organismos eucariotes. Tienen un papel esencial en la
hormonas, factores de crecimiento, moléculas odorantes transducción de señales ya que asocian al receptor con
y la luz. Sus funciones biológicas son múltiples y de suma las proteínas efectoras localizadas en el interior celular.
relevancia e incluyen la neurotransmisión, la regulación de Las subunidades que las conforman son a (39-46
la secreción endocrina y exócrina, la quimiotaxis, el control KDa), b (37 KDa) y g(8 KDa), con las subunidades
de la presión arterial, la embriogénesis, la percepción de la b y gfuncionando como una sola unidad al formar un
luz, el crecimiento y desarrollo celulares y la oncogénesis complejo estrechamente asociado.
(4). Si bien estos receptores presentan particularidades La subunidad a de las proteínas G posee un sitio
estructurales que les permiten reconocer a su ligando de unión con alta afinidad por nucleótidos de guanina
específico, comparten características similares que se
Extracelular
mencionan a continuación.
A e1 e3 B
Su estructura consiste de una sola cadena e2
H2N 7 NT
protéica de 550 a 1200 aminoácidos (aa), que cruza 6 5
1 7 6
siete veces la membrana celular (segmentos de 20-27 2
3
4 i2 1
5
aa cada uno) con el extremo amino terminal (7-595 3
2 4
i1
aa) en la región extracelular y el carboxilo terminal (12-
359 aa) en la intracelular. Los cruces repetidos en la HOOC i3
membrana plasmática dan lugar a seis asas de 5-230 Intracelular

aa (figura 1A), 3 intracelulares (i1-i3) y 3 extracelulares

GTP GDP
(e1-e3). Tres de los segmentos transmembranales (1, 4
C α βγ
y 7) son altamente hidrofóbicos, mientras que los α + βγ
segmentos 2, 3, 5 y 6 contienen residuos hidrofóbicos, GDP GTP
Pi

iónicos y neutros. En consecuencia, los segmentos 1, 4 Proteína G Proteína G

y 7 permanecen en la parte externa del receptor y en inactiva activa
contacto estrecho con la membrana, y los segmentos Figura 1.- Estructura de los receptores acoplados a proteínas G
2, 3, 5 y 6 se mantienen en el centro de la estructura, (GPCR’s) y activación de proteínas G. A) Estructura típica de un
GPCR con siete dominios transmembranales (1-7), tres asas
donde forman un núcleo transmembranal que en la
intracelulares (i1-i3) y tres extracelulares (e1-e3), con el extremo
mayoría de los receptores participa en la unión del amino terminal en la región extracelular y el carboxilo terminal en
ligando (5) (ver figura 1B). la región intracelular. Las asas i2 e i3 y el extremo carboxilo terminal
participan en el acople a la proteína G. B) Vista extracelular del
La localización de las regiones amino y carboxilo
receptor donde se esquematiza el núcleo transmembranal (NT),
terminales permiten también regular la funcionalidad del sitio de unión del ligando en la mayoría de los receptores. C) Al
receptor, ya que la región amino puede ser glicosilada ser activada por el receptor, la subunidad a de la proteína G
intercambia el GDP por GPT y se disocia del complejo bg. Tanto
y la región carboxilo está expuesta a otras moléculas
la subunidad a–GTP como el complejo bg actúan sobre diversos
de señalización, como cinasas y las proteínas arrestinas, sistemas efectores. Posteriormente, la actividad intrínseca de
responsables de procesos de sensibilización, GTPasa de la subunidad a hidroliza el GTP generando GDP y
pirofosfato (Pi), lo que inactiva a la subunidad a e induce el
desensibilización e internalización (6). Además, la región
reacoplamiento del trímero abg.
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E Sánchez-Lemus, JA Arias-Montaño.

(GTP o GDP), así como actividad de GTPasa que lo que inicialmente el complejo bg fue considerado
hidroliza el GTP a GDP (7). Debido a esta sólo como una entidad de anclaje de la proteína G; sin
característica, las proteínas G pueden encontrarse en embargo, en la actualidad es evidente que las subunidades
dos estados: con la subunidad a asociada a GDP y bg actúan directamente sobre otras proteínas, como
unida al complejo bg (estado inactivo), y con la canales iónicos o enzimas (cuadro 1) (8).
subunidad asociada a GTP y disociada del complejo
bg (estado activo; figura 1C). En el estado activo, tanto SEÑALIZACIÓN.
la subunidad como el complejo actúan sobre proteínas La señalización mediada por GPCR’s se inicia
efectoras. Por ejemplo, las proteínas Gq estimulan a la al formarse el complejo ligando-receptor-proteína G,
fosfolipasa C (PLC) induciendo la formación de dos conocido también como “complejo ternario”. Un
segundos mensajeros, el 1,4,5-trifosfato de inositol modelo sencillo que representa la activación de un
[Ins(1,4,5)P3 ó IP3] y el diacilglicerol (DAG), mientras GPCR es el modelo extendido del complejo ternario
que las proteínas Gas y Gai estimulan e inhiben, que propone que el receptor existe en dos estados,
respectivamente, la formación del monofosfato cíclico uno inactivo (R), no acoplado a proteínas G, y un estado
de adenosina (AMPc) por acción sobre la enzima (R*) que puede acoplarse a la proteína G
adenilil ciclasa (AC) (ver cuadro 1 para más correspondiente (R*G) y que es el que eventualmente,
información). Los efectos sobre la PLC y la AC se al unirse el ligando (L), induce una respuesta funcional:
deben básicamente a la acción de la subunidad a, por R ® R* ® R*G ® R*GL ® Respuesta
Cuadro 1
Familias de las subunidades a, b y gque conforman a las proteínas G.

Familia Subtipos y distribución Funciones

as as: ubicua AC (+); VDCC (+); canales de Na+ (+);

aolf: cerebro / neuroepitelio olfatorio canales de Cl- (+)

ai/o ai1, ai2, ai3: amplia AC (-); canales de K+ (+); VDCC (-);
aoA, aoB: cerebro canales de Na+ (-); canales de Cl- (-)

at at1, at2: retina PDE (+)

aq, a11 aq, a11: amplia PLC-b (+)
a14: pulmón / riñón / hígado
a15: células B / células mieloides
a16: células T / células mieloides

a12/13 a12: amplia PGP (+); KTnR (+)

a13: amplia

bg b1-b4: amplia ACII y IV (+); ACI (-); PLC-b (+);

g1-g7: amplia VDCC (-); PI3-K (+); PGP (+); KTnR (+)

AC, adenilil ciclasa; VDCC, canales de Ca2+ dependientes de voltaje; PDE, fosfodiesterasa; PLC-b, fosfolipasa C b; PGP,
proteínas G pequeñas; KTnR, cinasas de tirosina no receptores; PI3-K, 3-cinasa del fosfatidil inositol. (+), estimulación;
(-), inhibición. Elaborada a partir de las referencias 64-66.

Revista Biomédica
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Receptores de cinasa de tirosina y receptores acoplados a proteínas G.

Un agonista (ligando que se une al receptor y los adrenoceptores a1 (SNC, músculo liso y cardiaco
produciendo una respuesta funcional) estabiliza al e hígado). Al formarse estos segundos mensajeros, por
receptor en su estado activo generando dicha respuesta su naturaleza hidrofílica el Ins(1,4,5)P3 difunde al citosol
en la célula, mientras que un antagonista (ligando que mientras que el DAG permanece en la membrana
se une al receptor sin inducir una respuesta celular) se plasmática debido a su naturaleza lipofílica. El Ins (1,4,5)
une a R o R* impidiendo que el receptor pase al estado P3 se une a receptores ionotrópicos localizados el
activo. Este modelo es útil también para explicar el retículo sarcoendoplásmico, induciendo su apertura y,
efecto de diversos ligandos como agonistas completos, debido al gradiente de concentración existente, la salida
agonistas parciales, antagonistas neutrales y agonistas al citosol de iones de Ca2+. Por su parte, el DAG, por
inversos (para una revisión más amplia ver refs. 9 y 10). sí mismo o en combinación con iones de Ca2+, activa a
Una vez activado el receptor, se inicia una serie las isoformas nuevas o convencionales de la PKC,
de eventos intracelulares (cascadas de señalización) que respectivamente. La PKC fosforila canales iónicos y
modulan la función celular. Estos eventos dependen de enzimas en residuos de serina y treonina contenidos en
la proteína G a la que se encuentre acoplado el receptor secuencias específicas (por ejemplo, Ser/Thr-X-Arg/
y de la maquinaria molecular con la que cuente la célula. Lis ó Arg/Lis-X-X-Ser/Thr)1 modulando así su función
La interacción del ligando con el receptor produce (11,12).
cambios conformacionales en el receptor, que a su vez
modifican a la subunidad a de la proteína G. Este cambio AMPc. Los receptores involucrados en la
conformacional repercute en la afinidad de la subunidad cascadas de señalización del AMPc están acoplados a
a por los nucleótidos de guanina, haciéndola más afín
por GTP. Al intercambiar GDP por GTP, la subunidad A

a se activa y se desensambla tanto del receptor como GPCR-Gαq GPCR-Gαs ó Gαi

del complejo bg para actuar así sobre su molécula
PLC AC
blanco.
αq αs
Dos ejemplos típicos de cascadas de señalización A GTP GTP B
iniciadas por GPCR’s son las que conducen a la αi
formación de Ins(1,4,5)P3/DAG y AMPc como Ins(1,4,5)P3 DAG GTP
AMPc
segundos mensajeros (figura 2). Para las subunidades
Ca2+
aq la molécula blanco es la fosfolipasa C (PLC), enzima
que hidroliza fosfoinosítidos de membrana generando nPKC
cPKC PKA
Ins(1,4,5)P3 y DAG como segundos mensajeros. Para
Figura 2. Vías de señalización clásicas inducidas por receptores
las subunidades as ó ai la molécula blanco es la adenilil
acoplados a proteínas G (GPCR’s). A) Al ser estimulado por el
ciclasa, enzima que cataliza la conversión de ATP a agonista (A) el receptor activa a su vez a la proteína G
AMPc. correspondiente (Gaq, Gas ó Gai en este ejemplo). La subunidad
aq activa a la fosfolipasa C la cual hidroliza fosfoinosítidos de
membrana formando 1,4,5-trifosfato de inositol Ins(1,4,5)P3 y
Ins(1,4,5)P3/DAG. Esta vía es utilizada por los diacilglicerol (DAG). El Ins(1,4,5)P3 aumenta la concentración
receptores acoplados a proteínas Gaq, como los intracelular de Ca2+ por vaciamiento de los depósitos intracelulares,
mientras que el DAG activa a las isoformas nuevas de la cinasa C
receptores muscarínicos M1, M3 y M5 (abundantes en
de proteína (nPKC’s) o, en conjunto con iones de Ca 2+, a las
SNC y en el músculo liso y cardiaco), el receptor isoformas clásicas de la PKC (cPKC’s). B) En el caso de los
histaminérgico H1 (SNC, músculo liso, tracto receptores acoplados a proteínas Gas o Gai, las subunidades a
de estas proteínas estimulan (Gas) o inhiben (Gai) a la adenilil
gastrointestinal, sistemas genitourinario y cardiovascular)
ciclasa (AC), enzima que produce AMP cíclico (AMPc) a partir
de ATP. El AMPc activa a la cinasa A de proteína (PKA). Tanto
1
la PKC como la PKA fosforilan a múltiples y diversas proteínas
Ser, serina; Lis, lisina; Arg, arginina; Thr, treonina; X representa (receptores, canales iónicos, enzimas, factores de transcripción)
cualquier aminoácido. regulando así el metabolismo celular.
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proteínas Gas o Gai, las cuales inducen o inhiben poseen dos dominios ricos en cisteínas (receptores tipo
respectivamente la formación del segundo mensajero. El I y II), o bien 5 ó 3 repetidos de dominios semejantes a
receptor histaminérgico H2 (SNC, células gástricas, tejido los presentes en las inmunoglobulinas (receptores tipo
cardiaco, músculo liso), la familia D1 de receptores III y IV respectivamente) (14). En varios casos no se
dopaminérgicos (SNC), los adrenoceptores b (SNC, conoce con certeza la función de los residuos de cisteína,
músculo liso y cardiaco, hígado) y numerosos receptores pero en algunos receptores (a insulina o EGF por ejemplo)
a hormonas, están acoplados a proteínas Gas. Los participan de manera crucial en la formación de dímeros
receptores muscarínicos M2 y M4 (SNC, músculo liso y (15). Además, el extremo amino terminal presenta también
cardiaco), el receptor histaminérgico H3 (SNC), la familia sitios de glicosilación que pueden regular la unión del
D2 de receptores dopaminérgicos (SNC) y los ligando al receptor.
adrenoceptores a2 (arteriolas, glándulas salivales, El extremo carboxilo terminal se orienta hacia el
intestinos, páncreas), se acoplan a proteínas Gai. La interior de la célula y estructuralmente posee dos
cascada de señalización continúa cuando el AMPc se componentes importantes que definen la cascada de
une a las dos subunidades reguladoras de la cinasa A de señalización intracelular: 1) un dominio con actividad de
proteína (PKA), que se separan de las dos subunidades cinasa de tirosina, y 2) un número importante de residuos
catalíticas. De manera similar a la PKC, las proteínas (v. de tirosina, susceptibles de ser fosforilados, lo que
gr. canales iónicos o enzimas) que contengan residuos conduce a la activación de diversas proteínas mediante
de serina o treonina en las secuencias específicas el mecanismo que se describe a continuación (figura 3A).
reconocidas por la PKA (Arg-Arg-X-Ser/Thr ó Arg-
X-Arg-X-X-Ser/Thr) pueden ser fosforiladas, SEÑALIZACIÓN.
modificando así su función (figura 2B). Un ejemplo Activación del receptor. Requiere tres pasos
relevante es la transcripción de genes iniciada por la PKA secuenciales: 1) unión del ligando al receptor, 2) la
al fosforilar a CREB (proteína de unión a CRE, nombre dimerización del receptor, y 3) la autofosforilación del
dado a una secuencia de DNA localizada en la región receptor en residuos de tirosina. La unión del ligando
promotora del inicio de la transcripción) (11,13). induce cambios conformacionales en el receptor, los
cuales favorecen su interacción con otro receptor para
SEÑALIZACIÓN INTRACELULAR POR formar un dímero. La unión del ligando activa también al
RECEPTORES CON ACTIVIDAD DE CINASA dominio de cinasa de tirosina del receptor, por lo que al
DE TIROSINA (RTK’S). formar el dímero cada receptor fosforila múltiples residuos
de tirosina de su homólogo (figura 3B). A este fenómeno
RECEPTORES. se le conoce como autofosforilación, ya que en ese
Estructuralmente los RTK’s difieren de manera momento ambas moléculas se encuentran formando un
considerable de los receptores acoplados a proteínas G nuevo receptor dimérico, que se fosforilaría a sí mismo.
(GPCR’s). Los RTK’s son proteínas de membrana de Sin embargo, algunos autores prefieren denominar a este
600 a 1100 aa, con un solo dominio transmembranal y proceso transfosforilación (14).
dominios catalíticos con actividad intrínseca de cinasa Una vez activado el receptor, la señalización
de tirosina. Los RTK’s son activados predominantemente continúa mediante los residuos de tirosina fosforilados,
por factores de crecimiento como el EGF (factor de que se contituyen en el sitio de unión y activación de
crecimiento epidérmico), el PDGF (derivado de diversas proteínas. Las proteínas que pueden ser activadas
plaquetas) y el ILGF-1 (factor de crecimiento semejante por fosfotirosinas (como la PLC-g) requieren tener en
a insulina tipo 1), aunque algunos receptores a citocinas su estructura dominios de reconocimiento de las mismas.
y hormonas son también RTK’s (11). Estos dominios están altamente conservados y son
La región amino terminal de estas proteínas se conocidos como SH2 (región 2 de homología a Src,
orienta hacia el lado extracelular y los receptores típicos por haber sido descrito inicialmente en la proteína Src
Revista Biomédica
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Receptores de cinasa de tirosina y receptores acoplados a proteínas G.

A B de manera tal que dichas proteínas adaptadoras se unen

1 3 a las fosfotirosinas del receptor y posteriormente se
Glicosilación
NH 2
2
acoplan y activan a otras proteínas (figura 3B) (11).
Dominios ricos
en cisteínas
Ras y cascada de ERK’s. Frecuentemente la
RTK
activación de RTK’s genera señales que inducen
proliferación y diferenciación celulares a través de las
Dominios
cinasas de proteína activadas por mitógenos (mitogen-
Y
SH2
catalíticos Y
Y
activated protein kinases; MAPK’s), más
Y Y
recientemente denominadas cinasas reguladas por señales
COOH PA 4 extracelulares (extracellular signal-regulated kinases;
ERK’s). El intermediario que conecta a la cascada de
MB señalización generada por la activación de un RTK con
MB
Figura 3. Mecanismo de activación de los receptores con actividad las ERK’s es la proteína Ras, que puede unir nucleótidos
de cinasa de tirosina (RTK’s). A) Representación esquemática de de guanina y que posee también actividad de GTPasa.
la estructura del receptor para EGF (factor de crecimiento
epidérmico), característica de los RTK’s del grupo I con un solo Ras es una GTPasa pequeña (similar a la subunidad de
dominio transmembranal, el extremo amino terminal orientado al la proteína G, pero con actividad 100 veces menor),
lado extracelular y el carboxilo al intracelular. El extremo amino se que es regulada por proteínas liberadoras de nucleótidos
encuentra muy glicosilado y expresa dos dominio ricos en cisteínas;
en el extremo carboxilo se encuentran residuos de tirosina (Y) y los de guanina (GNRP’s) y por proteínas estimuladoras de
dos dominios catalíticos con actividad de cinasa de tirosina. B) La la actividad de GTPasa (GAP’s). Las proteínas
unión del ligando al receptor (1) induce la dimerización (2) y la liberadoras de nucleótidos de guanina activan a Ras al
autofosforilación en los residuos de tirosina (3). Los residuos de
tirosina fosforilados sirven como centros de activación para favorecer el intercambio de GDP por GTP, mientras que
proteínas con dominios SH2 (4) o bien como sitios de unión para las proteínas estimuladoras de la actividad de GTPasa
proteínas adaptadoras (PA), que continúan la señalización hacia finalizan la señalización al aumentar la actividad de GTPasa
las moléculas blanco (MB).
intrínseca a Ras y que hidroliza el GTP unido a GDP
(figura 4) (17). Es importante señalar que tanto las
(figura 3B). Los dominios SH2 se unen no sólo a las proteínas liberadoras de nucleótidos de guanina como
fosfotirosinas sino también a ciertos aminoácidos las estimuladoras de la actividad de GTPasa son proteínas
adyacentes a las mismas. Esta característica le que se activan por unión a fosfotirosinas presentes en
proporciona especificidad a la activación por RTK´s activados.
fosfotirosinas de las proteínas de señalización, ya que En el estado activo, Ras activa a la cascada de
una proteína con dominios SH2 sólo se activará si las ERK’s al unirse y activar a Raf, una cinasa de
reconoce a la fosfotirosina con la secuencia correcta de serina/treonina que a su vez fosforila y activa a la
aminoácidos a ambos lados. Por ejemplo, el receptor cinasa de ERK/MAPK (denominada MEK), enzima
para el factor de crecimiento derivado de plaquetas que fosforila residuos de serina/treonina y de tirosina.
(PDGF) activa a la 3-cinasa de fosfatidil inositol (PI3- La activación de ERK’s requiere de su fosforilación
K) cuando ésta se une a las fosfotirosinas 708 y 719, en un residuo de treonina y en uno de tirosina,
mientras que la PLC-g se activa por unión a las separados únicamente por un aminoácido. Esta
fosfotirosinas 977 y 989 (16). función sólo puede ser realizada por una enzima
Interesantemente, existe un mecanismo alterno por altamente especializada, por lo que se considera que
el cual pueden activarse proteínas que carecen de MEK es la enzima limitante en la activación de
dominios SH2. Este proceso requiere de pequeñas ERK’s, haciendo altamente específico este proceso.
proteínas adaptadoras que poseen dominios SH2 así Finalmente la ERK fosforilada pasa del citoplasma
como dominios de unión a otras proteína de señalización, al núcleo y regula por fosforilación a otras cinasas y
Vol. 15/No. 1/Enero-Marzo, 2004
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E Sánchez-Lemus, JA Arias-Montaño.

GTP TRANSACTIVACIÓN DE RTK’s.

GDP
Como se mencionó antes, las respuestas celulares
GNRP mitogénicas son generadas principalmente por
estimulación de RTK’s que activan la vía Ras ® Raf
® MEK ® ERK, la cual ha sido ampliamente
Ras Ras estudiada. La activación de la vía por GPCR’s había
GDP GTP sido poco estudiada hasta hace una década,
conociéndose sólo que el mecanismo involucraba
GAP proteínas G sensibles a la toxina de Bordetella pertusis
Pi (ai/o), y que dependía fuertemente del complejo bg
de la proteína G y de cinasas de tirosina no identificadas
(1-3). No obstante, tan sólo un par de años después el
Efector número de investigaciones orientadas a este tópico
Figura 4. Activación de la proteína Ras. El mecanismo es similar
creció significativamente y varios estudios indicaron que
a la activación de la subunidad a de una proteína G, con intercambio
de GDP por GTP, favorecido por proteínas liberadoras de en ausencia de ligandos para RTK’s, la activación de
nucleótidos de guanina (GNRP). La inactivación se debe a la receptores acoplados a proteínas Gaq (GPCR’s-Gaq)
hidrólisis del GTP a GDP, debida a la actividad de GTPasa intrínseca
inducía la fosforilación de la proteína Shc y la formación
a Ras. Este último proceso es acelerado por proteínas estimuladoras
de la actividad de GTPasa (GAP). del complejo Shc-Grb2 (23-25), siendo ambas

a proteínas reguladoras de la transcripción (figura 5)

(18-19). Dado que MEK es la cinasa de ERK’s (o
MAPK’s), también se le identifica como MAPKK
(cinasa de MAPK’s). De manera análoga, como Raf es RTK

la cinasa de MEK (o MAPKK), también se le denomina

MAPKKK (cinasa de la cinasa de MAPK’s). 1 SOS Ras
GDP

JAK’s/STAT’s. Otro mecanismo que sigue a la Grb2 Pi

Ras
estimulación de los RTK’s es la activación de las cinasas GTP
Janus (JAK’s) y de los transductores y activadores de la
señal de transcripción (STAT’s), descrito más ERK 2 Raf

recientemente (en la década de los 90, a diferencia de las 2ADP

MEK MEK
ERK’s que fueron descritas en los 80). El mecanismo de 2ATP
Núcleo ADP ATP
ERK
activación es relativamente sencillo, ya que al unirse el
ligando a un RTK que tenga JAK’s unidas a su extremo Figura 5. Activación de las cinasas de proteína activadas por
señales extracelulares (ERK’s). 1) Una vez que un receptor con
carboxilo terminal, se induce la dimerización y la actividad de cinasa de tirosina (RTK) se ha dimerizado y
autofosforilación del dímero, así como la fosforilación de autofosforilado, las fosfotirosinas reclutan a Grb2, una proteína
las JAK’s asociadas. Este evento recluta a los STAT´s acopladora que posee dominios SH2, los cuales sirven de sustrato
para la unión de secuencias ricas en prolina presentes en el extremo
que se unen a fosfotirosinas a través de su dominio SH2 y carboxilo terminal de la proteína SOS, una proteína liberadora de
se activan por fosforilación en residuos de tirosina, lo que nucleótidos de guanina. La proteína SOS induce la activación de la
induce su dimerización y translocación al núcleo celular, proteína Ras, al favorecer el cambio al estado activo, unida a GTP.
2) La proteína Ras-GTP se une y activa a la proteína Raf, una
donde se unen a factores de transcripción y/o al DNA en cinasa de serina/treonina. A su vez la proteína Raf fosforila y
sitios específicos activando así la transcripción de genes activa a MEK, una cinasa de serina/treonina y tirosina, la cual
(para una revisión más amplia ver refs. 20-22). fosforila y activa a diferentes subtipos de ERK’s, que se traslocan
al núcleo celular donde fosforilan factores de transcripción que
modifican la expresión de genes.
Revista Biomédica
 41

Receptores de cinasa de tirosina y receptores acoplados a proteínas G.

proteínas adaptadoras involucradas en la activación de fenómeno restringido a determinado tipo o tipos

la vía Ras-Raf-MEK-ERK a través de su unión a las celulares y/o a ciertas especies; b) si la activación de un
fosfotirosinas de un RTK activado (figuras 5 y 6), GPCR particular transactivaba específicamente a un
sugiriendo que el RTK había sido activado sin necesidad RTK determinado o si cualquier GPCR podía
de interactuar con su ligando. transactivar a cualquier RTK que se encuentre en el
La activación de un RTK en ausencia del ligando área donde se promovía la cascada de señalización; c)
respectivo no era un concepto completamente nuevo. si todos los GPCR’s podían inducir transactivación o
Anteriormente los grupos de Greenberg, de Rahmsdorf, sólo los GPCR’s-Gaq; y de manera relevante y
de Kruijer y de Herrlich, entre otros, habían mostrado obligada, d) ¿cuáles eran las moléculas involucradas en
que el receptor para el factor de crecimiento epidérmico este fenómeno?
(EGF-R) podía ser regulado al activarse canales de
Ca2+ dependientes de voltaje (26), y que el EGF-R y A) Amplitud del fenómeno de
los receptores para insulina y para el factor de transactivación. El fenómeno de transactivatión
crecimiento derivado de plaquetas eran activados por ocurre en diferentes especies y tipos celulares. Por
la radiación ultravioleta (27-29). Sin embargo, el mencionar sólo algunos ejemplos, se ha observado
hallazgo de que los GPCR’s, la familia más grande de transactivación en la rata: en la línea celular Rat-1 de
receptores membranales, podía inducir la activación de fibroblastos (30), en cultivo primario de células de
RTK´s y por lo tanto generar señales mitogénicas, músculo liso vascular (31-32); en el humano: en las
condujo a una oleada de trabajos enfocados a discernir líneas celulares de próstata PC12 (33) y PC3 (34),
los puntos clave de este fenómeno, denominado ahora en la línea celular T84 de colon (35) y en la línea celular
transactivación. HaCaT de queratinocitos (36); en el ratón: en cultivo
El fenómeno de transactivación fue elegantemente primario de astrocitos y en la línea celular L de músculo
expuesto por el grupo de Ullrich (30) utilizando la línea esquelético (37); y en el mono: en la línea celular COS-
celular de fibroblastos Rat-1 que expresa diversos 7 de riñón del mono verde africano (36).
GPCR’s y al EGF-R. En este estudio se muestra que la Como puede advertirse, una cantidad importante
activación de GPCR’s para endotelina, ácido de las evidencias del fenómeno de transactivación ha
lisofosfatídico y trombina indujo en todos los casos la sido obtenida en líneas celulares (30,34,36,37), las
fosforilación del EGF-R en ausencia de ligando para cuales permiten estudiar diversos fenómenos
este último. Además, dicha fosforilación se bloquea intracelulares con la gran ventaja de conocer los tipos
totalmente si se transfecta un EGF-R mutante que carece de receptores, canales iónicos y vías de señalización
del dominio citoplasmático, es decir un receptor que presentes, y de aislar un efecto usando fármacos
no es capaz de formar dímeros funcionales, lo cual selectivos para bloquear un receptor, un canal o una
también eliminó la idea de que en estos casos el receptor vía de señalización, además de la relativa facilidad para
se fosforilaba sin necesidad de dimerizarse. La transfectar material genético que codifique para proteínas
fosforilación del EGF-R fue también prevenida al incubar específicas. El uso de líneas celulares conlleva sin
a las células con tirfostín AG-1478, un inhibidor embargo la desventaja de que se estudian células con
selectivo de la actividad de cinasa de tirosina del EGF- alteraciones en su ciclo de vida que las hace inmortales,
R. En conjunto, estos datos indican que existen por lo que no es posible descartar que presenten otras
fenómenos intracelulares originados por la activación alteraciones en su funcionamiento. No obstante, las
de GPCR’s, que inciden sobre RTK’s induciendo la líneas celulares generan información que frecuentemente
dimerización y autofosforilación necesarias para su es confirmada en otras preparaciones. En particular,
activación. para el fenómeno de transactivación destaca el que
Lo anterior abrió un campo de estudio muy amplio muchas líneas celulares utilicen esta vía de señalización,
con preguntas como: a) si la transactivación era un ya que podría ser uno de los factores que participen en
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E Sánchez-Lemus, JA Arias-Montaño.

la proliferación celular desmedida, y que por lo tanto a transactivación, al determinar los aspectos comunes
través del bloqueo de GPCR’s determinados pueda en las cascadas de señalización de los diferentes
controlarse el crecimiento tumoral. GPCR’s. Es por ello que uno de los primeros objetivos
fue determinar si otras proteínas G podían inducir
B) Especificidad de la transactivación. No transactivación, y en este sentido varios estudios han
sólo se ha observado el fenómeno para el EGF-R mostrado que los GPCR’s acoplados a proteínas Gai
sino también para otros receptores a factores de (GPCR’s-Gai) son también capaces de transactivar
crecimiento. Por ejemplo, en células de cultivo a RTK’s (36,38,39). En contraste, hasta la fecha no
primario de músculo liso vascular el receptor para el existe evidencia concluyente de que los GPCR’s
factor de crecimiento derivados de plaquetas (PDGF- acoplados a proteínas Gas (GPCR’s-Gas) induzcan
R) se fosforila en ausencia de ligando si se estimulan fosforilación de RTK’s, excepto para el caso
receptores a angiotensina II, acoplados a proteínas G particularmente interesante del adrenoceptor b2. Este
(31). De manera análoga, el receptor para el factor 1 receptor se acopla normalmente a proteínas Gs por
de crecimiento semejante a insulina (ILGF-1-R), así lo que al ser estimulado se activa la PKA (figura 2B),
como el sustrato-1 del receptor de insulina (IR-S1) y que fosforila al mismo receptor promoviendo así su
la PLC-g(moléculas de señalización para el ILGF- acople a proteínas Gai (40). De esta manera, aun
1-R) se encuentran fosforilados después de la cuando la activación de los adrenoceptores b2 induce
exposición a trombina (32). Por ello se ha propuesto transactivación en células COS-7, ésta es totalmente
que la transactivación se ejerce sobre diferentes dependiente de proteínas Gai (41). Se ha mostrado
RTK’s, representando una nueva dimensión para la que este fenómeno de estimulación dual lo utilizan tanto
señalización a través de GPCR’s. los adrenoceptores b como los receptores para el
Además, existe evidencia de que la estimulación péptido intestinal vasoactivo (VIP) presentes en células
de un GPCR no activa de manera específica a un solo de los acinos pancreáticos y del conducto
tipo de RTK. En este sentido, Herrich y col. (37) submandibular, por lo que se ha propuesto que puede
mostraron que la activación de receptores para el
ácido lisofosfatídico induce fosforilación del PDGF- A A
R en células L (que expresan el PDGF-R, pero no el
GPCR-Gαq RTK GPCR-Gαi
EGF-R), mientras que en células COS-7 (que
expresan el EGF-R pero no el PDGF-R), el mismo βγ
βγ
agonista induce fosforilación del EGF-R. Es interesante
αq Gab1
PI3-K αi
señalar que el efecto muestra preferencia por Grb2
GTP
GTP Shc
diferentes RTK’s, ya que cuando se encuentran
Grb2

presentes ambos receptores, PDGF-R y EGF-R, sólo

se activa este último. Lo anterior plantea que los Ras Raf
SOS
GPCR’s pueden transactivar a diferentes RTK’s y que GTP

aun cuando podrían tener preferencia por alguno de Ras

GDP
ellos, la carencia de un RTK dado pueda ser suplida
por un RTK similar, de tal manera que no se anule la Figura 6. Mecanismos de transactivación de RTK’s por receptores
acoplados proteínas Gaq y Gai. La activación de proteínas Gaq
inducción de la señal mitogénica mediada por RTK’s. induce transactivación de RTK’s a través de procesos mediados
tanto por la subunidad aq como el complejo bg, mientras que los
C) Transactivación y proteínas G. El receptores acoplados a proteínas Gai inducen la transactivación
sólo a través de los complejos bg. Una vez que el RTK se
establecer si GPCR’s diferentes de los acoplados a autofosforila, la cascada de señalización es idéntica a la que seguiría
Gaq inducían también la activación de RTK’s podía un RTK activado por ligando, con la unión de proteínas que posean
dar indicios sobre las moléculas involucradas en la dominios SH2 a las fosfotirosinas del receptor y la activación
subsecuente de la vía RasRafMEKERK’s.
Revista Biomédica
 43

Receptores de cinasa de tirosina y receptores acoplados a proteínas G.

ser un mecanismo que la célula utiliza normalmente síntesis de DNA (46).

(42). Si esta idea es cierta, es probable entonces que La segunda posibilidad, un efecto directo de
diversos GPCR’s acoplados a proteínas Gas puedan los complejos bg de las proteínas G-aq y G-ai, se
activar vías mitogénicas por transactivación a través ve apoyada por la observación de que la expresión
de la estimulación dual. aumentada de complejos bg incrementa la
fosforilación del EGF-R en células COS-7 (47),
D) Cascada de señalización involucrada en mientras que el uso de moléculas que secuestran al
la transactivación. El que dos proteínas G diferentes complejo bg (v.gr. bARKCT) reduce sustancialmente
(Gaq y Gai) activaran la misma vía mitogénica sugería la transactivación inducida por receptores para ácido
dos posibilidades: 1) De manera semejante a la lisofosfatídico (37), D2 para dopamina, A1 para
subunidad a de la proteína Gaq, el complejo bg de las adenosina (2), M 2 para acetilcolina (2,3) y
proteínas Gai activaba a la fosfolipasa C originando adrenoceptores a2 (3); pero no modifica la activación
Ins(1,4,5)P3 y DAG, induciendo la activación de la de ERK’s inducida por receptores a1B y M1 (43). El
PKC (figura 2A), lo que podía dirigir la señalización primer grupo son receptores que ejercen su efecto
hacia la transactivación de RTK’s; 2) los complejos bg mediante proteínas Gai (excepto aquellos para el ácido
de ambos tipos de receptores (GPCR’s-Gaq y -Gai) lisofosfatídico, acoplados también a proteínas Gaq
podrían inducir, directamente o a través de otras (36) y los segundos corresponden a GPCR’s-Gaq.
moléculas, la dimerización y autofosforilación de RTK’s. En resumen, estas evidencias sugieren que los
Para la primera posibilidad es relevante que en receptores acoplados a proteínas Gai inducen
células CHO la expresión aumentada de las transactivación a través de los complejos bg, y que
subunidades aq, ai ó as no induce por sí misma la los receptores acoplados a proteínas Gaq pueden
activación de ERK2 (43). Sin embargo, en células hacerlo tanto a través de la subunidad aq como a
HEK-293 la fosforilación de ERK1/2 producida por través de los complejos bg en función de la maquinaria
activación de adrenoceptores a1B no se modifica por célular; es decir, el efecto depende de la variedad de
el secuestro del complejo bg (44) lo cual sugiere la moléculas presentes (receptores, proteínas efectoras
participación de la subunidad a q. Otro aspecto en y cinasas como la PKC, figura 6). Así, en un estudio
este sentido radica en la participación de la PKC, que realizado en células COS-7 la estimulación simultánea
resulta relativamente incierta. Hawes y col. (43) y Tsai de receptores para bombesina (acoplados a proteínas
y col. (45) demostraron en diferentes tipos celulares Gaq) y M2 para acetilcolina (acoplados a proteínas
(células HEK-293 de embrión humano, COS-7 de Gai), resultó en un efecto aditivo en la autofosforilación
mono verde africano, y CHO de hámster chino), que del EGF-R (36), sugiriendo que en este tipo celular la
la activación de la PKC era imprescindible para la acción de los GPCR´s-Gaq depende de la subunidad
transactivación del EGF-R y la activación de ERK’s aq, que se suma al efecto de los complejos bg
generadas por la estimulación de los receptores producidos por la activación de GPCR’s-Gai.
acoplados a proteínas Gaq (M1 para acetilcolina y Un descubrimiento importante tuvo lugar en
adrenoceptores a1). En contraste, Keely y col. (35) 1999, cuando se demostró que la transactivación del
observaron que en células T84 la activación de ERK’s EGF-R por receptores acoplados a proteínas Gaq o
generada por carbacol (un agonista muscarínico Gi involucraba la liberación al medio extracelular de
inespecífico) es mimetizada por un activador de la un ligando endógeno (34, 48). En la membrana celular
PKC pero no es afectada por un inhibidor de la misma. el ligando se encuentra asociado a heparina (HB-
Además, en células NIH-3T3 transfectadas con el EGF), y el complejo puede ser hidrolizado por
receptor muscarínico m1, la activación de Raf-1 y metaloproteasas (dependientes Ca2+ o Zn2+) liberando
ERK2 inducida por carbacol disminuye en un 20-50% así al EGF al medio extracelular (figura 7), donde
en presencia de un inhibidor de la PKC, y no afecta la puede activar a receptores presentes en la misma célula
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44

E Sánchez-Lemus, JA Arias-Montaño.

(transactivación autócrina) o en células vecinas del EGF-R y después de la activación de la proteína Gai,
(transactivación parácrina). La cantidad de EGF y que su participación es determinante para la hidrólisis del
liberado debe ser muy pequeña ya que no es posible complejo EGF-heparina, además de modular la activación
medirla por métodos convencionales como Western de ERK’s a nivel de la cinasa MEK (41, 48) (figura 7).
blot (45) y el efecto de la transactivación sobre la Esto situa a la cinasa de tirosina Src como un mediador
fosforilación del EGF-R y la activación de proteínas muy importante para la activación de ERK’s a través de
adaptadoras (como Shc y Grb2), es mucho menor al receptores acoplados a proteínas G ya que la modula a
que se obtiene utilizando EGF exógeno a una dos niveles, en la activación de MEK y en la liberación de
concentración de 0.3 nM (30,36), 8 veces menor que EGF a partir del complejo EGF-heparina.
la concentración efectiva media (EC50) del EGF para Por otra parte, inicialmente se consideró que la
inducir dimerización del receptor (2.5 nM) (49). Sin endocitosis de los RTK’s dependiente de b-arrestinas
embargo, aunque la concentración extracelular de EGF y de clatrina formaba parte de los mecanismos
sea mucho menor que la EC50 y que la concentración celulares para apagar la señal iniciada por la unión del
fisiológica reportada (3-5 nM) (50), el EGF podría ligando al receptor. Sin embargo, evidencias más
activar a los receptores cercanos al sitio de liberación, recientes muestran que la internalización de los RTK’s
funcionando eficientemente en los microdominios puede, además de atenuar la señal, desencadenar y
adyacentes. modular otras cascadas de señalización (54, 55). Dado
Sin embargo, para la transactivación de los que algunos receptores acoplados a proteínas G como
receptores para los factores de crecimiento semejante los adrenoceptores b2 (40, 41), para ácido
a insulina y derivado de plaquetas no se ha descrito lisofosfatídico (47), muscarínicos (56) y para opioides
un proceso de liberación de ligandos. Es posible que µ y d (57), requieren internalizarse para activar
la transactivación de estos receptores no requiera de eficazmente a las ERK’s, se sugirió que la endocitosis
la formación de dímeros, o bien que la dimerización Parácrina
sea independiente de ligandos, mediante sus dominios 2
con actividad de cinasa de tirosina presentes en el A
1
extremo amino terminal, como ha sido demostrado in Metaloproteasas
Autócrina
vitro para el receptor para EGF (51). Zn2+ o Ca2+ EGF-R

Una vez que el RTK ha sido estimulado por

transactivación, la señalización parece ser idéntica a βγ HB-EGF

la generada por la unión del ligando correspondiente. α Src

Esto es, el receptor activado une proteínas con GTP

dominios SH2 como Shc, Grb2, Gab1 y Src. En

3
particular Shc y Grb2 participan en la activación de la
ERK MEK Raf Ras
proteína SOS (una GNRP, proteína liberadora de Núcleo
GTP
nucleótidos de guanina) que induce la activación de
Figura 7. Transactivación del receptor para el factor de crecimiento
Ras e inicia la cascada Ras ® Raf ® MEK ® ERK epidérmico (EGF-R) por liberación de EGF inducida por la
(52) (figuras 5 y 6), mientras que Gab1 puede activar activación de receptores acoplados a proteínas G. 1) Al activarse
receptores acoplados a proteínas Gaq o Gai, los complejos bg de
a la 3-cinasa de fosfatidil-inositol (PI3-K), que a su
estas proteínas activan a la cinasa de tirosina Src, la cual activa a su
vez activa a Ras por un mecanismo aún no descrito (36, vez a metaloproteasas dependientes de Ca2+ o Zn2+ las que al
53) (figura 6). Por otra parte, Src es una cinasa de tirosina actuar sobre el complejo EGF-heparina (HB-EGF), presente en la
membrana celular, inducen el desprendimiento del EGF al medio
que se activa al unirse a las fosfotirosinas de RTK’s y que
extracelular. 2) El EGF liberado activa a receptores localizados en
induce la transcripción de genes. Aunque no se conoce la la misma célula (transactivación autócrina) o en células vecinas
vía completa, recientemente un ingenioso estudio con co- (transactivación parácrina). 3) La señalización prosigue hacia la
vía RasRafMEKERK’s, que puede ser también modulada
cultivos mostró que Src se activa antes de la fosforilación
directamente por Src.
Revista Biomédica
 45

Receptores de cinasa de tirosina y receptores acoplados a proteínas G.

de los receptores acoplados a proteínas G podría ser CONCLUSIONES.

necesaria para la transactivación de RTK’s. En relación La evidencia actual indica que la transactivación
a este punto, se mostró que la transactivación por de RTK’s por receptores acoplados a proteínas G y
adrenoceptores b2 del EGF-R no requería de la la generación de las señales mitogénicas que sigue a
endocitosis del receptor b2 para la dimerización y dicha activación presentan las siguientes características:
autofosforilación del RTK, pero que la endocitosis a) Tiene lugar en diferentes tejidos de diversas
(mediada por b-arrestinas y clatrina) del complejo especies, así como en tejidos nativos y en líneas
formado por ambos receptores era imprescindible celulares;
para la activación de ERK’s (41) (fig. 8). b) No presenta especificidad, pero sí selectividad
En este mismo sentido y en relación a la para ciertos RTK’s;
participación de Src en la transactivación, la actividad c) Se debe a la activación de receptores
de cinasa de Src es necesaria para la internalización acoplados a proteínas Gai y Gaq. En el caso de las
del adrenoceptor b2 (58) y para ensamblar el proteínas Gai el efecto se debe a la acción de los
complejo adrenoceptor b2/EGF-R (41). Además, Src complejos bg, mientras que para las proteínas Gaq
podría regular, mediante fosforilación, el arreglo de la el efecto está mediado tanto por las subunidades aq
clatrina (59). Sin embargo, el mecanismo de como por los complejos bg.
endocitosis conjunta de un GPCR con un RTK Una vez transactivado, el RTK inicia una cascada
transactivado parece no ser relevante para aquellos de señalización idéntica a la generada por activación
GPCR’s que no se regulan por endocitosis como el exógena, es decir, activación de ERK’s a través de la
adrenoceptor a 1, que induce la dimerización y vía Ras ® Raf ® MEK ® ERK, siendo en algunos
autofosforilación del EGF-R y activa ERK’s aún en casos necesaria la endocitosis mediada por b-
presencia de un inhibidor de la endocitosis (48). arrestinas y clatrina.
Un mecanismo interesante y relevante de
regulación de las cascadas de señalización generadas
A por activación de receptores acoplados a proteínas
G, corresponde a la llamada señalización cruzada
GPCR-Gαi EGF-R
(cross-talk), donde una o más cascadas pueden
entrecruzarse y modificarse entre sí (ya sea
αi βγ estimulándose o inhibiéndose). Este mecanismo
βarr
3 confiere a la señalización por receptores acoplados a
1 proteínas G una modulación precisa y fina, como ha
2 sido expuesto en diferentes revisiones (ver por ejemplo
4 ref. 60-65). No obstante, el conocimiento del
ERK
fenómeno de transactivación ha aumentado y
Núcleo
profundizado nuestra comprensión de la regulación
Figura 8. Endocitosis de receptores membranales y
transactivación. La transactivación por adrenoceptores b2 del de los efectos inducidos por la activación de
receptor para el factor de crecimiento epidérmico (EGF) requiere receptores acoplados a proteínas G, que van más allá
de la internalización del complejo receptor a EGF-adrenoceptor
de la formación de segundos mensajeros.
b2, mediada por b-arrestinas y clatrina. 1) La activación del
adrenoceptor b2 induce su fosforilación por cinasas de receptores Se ha sugerido que el receptor para EGF, así
acoplados a proteínas ó GRK’s, lo que permite la unión de b- como otros receptores a factores de crecimiento,
arrestinas (arr) a los residuos de serina/treonina fosforilados. 2)
participan en la patogénesis del cáncer (particularmente
Activación del RTK, al cual se le asocian proteínas adaptadoras
como Shc. 3) Formación del complejo GPCR-RTK y reorganización de las neoplasias de mama, esófago, páncreas, ovario
de la clatrina para formar el endosoma conteniendo ambos y pulmón), ya que diversos estudios clínicos han
receptores. 4) Endocitosis y generación de la vía de activación de
mostrado que el tejido afectado presenta una
ERK’s.
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46

E Sánchez-Lemus, JA Arias-Montaño.

expresión aumentada tanto de los receptores como complex. Cell Signal 1998; 10: 447-55.
de los ligandos correspondientes, lo que daría lugar a
9.- Gether U, Kobilka B. G protein-coupled receptors. II.
una fuerte estimulación autocrina. Los mecanismos por Mechanism of agonist activation. J Biol Chem 1998; 273:
los que el EGF induce el crecimiento de tumores 17979-82.
incluyen inhibición de la apoptosis (muerte celular
programada), inducción de la angiogénesis y 10.- Strange PG. G-protein coupled receptors. Conformations
estimulación de la motilidad y adhesión celulares (66). and states. Biochem Pharmacol 1999; 58: 1081-8.
La gran diversidad de receptores acoplados a 11.- Alberts B, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts K, Watson
proteínas G y su amplia distribución, sumadas al JD. Molecular biology of the cell. 3a. ed. New York: Garland;
importante papel que tienen los factores de crecimiento 1994. pp. 721-785.
como el EGF en la proliferación celular, sugieren que
la transactivación de RTK’s puede estar involucrada 12.- Way KJ, Chou E, King GL. Identification of PKC-isoform-
specific biological actions using pharmacological
en la tumorigénesis y metástasis en múltiples tejidos, approaches. Trends Pharmacol Sci 2000; 21: 181-7.
por lo que la investigación de dicho mecanismo tiene
aún un amplio campo de desarrollo. 13.- Soria LE, Arias-Montaño JA. (1997). Señalización por
segundos mensajeros. En: Hiriart M, García E, García J,
Velázquez SJ, editores. Actualización en Fisiología. Morelia,
REFERENCIAS. SMCF/UMSNH; 1997. pp. 85-104.
1.- van Corven EJ, Hordijk PL, Medema RH, Bos JL,
Moolenaar WH. Pertussis toxin-sensitive activation of 14.- Ullrich A, Schlessinger J. Signal transduction by
p21ras by G protein-coupled receptor agonists in fibroblasts. receptors with tyrosine kinase activity. Cell 1990; 61: 203-12.
Proc Natl Acad Sci USA 1993; 90: 1257-61.
15.- Hurwitz DR, Emanuel SL, Nathan MH, Sarver N, Ullrich
2.- Faure M, Voyno-Yasenetskaya TA, Bourne HR. cAMP A, Felder S, Lax I, Schlessinger J. EGF induces incresed
and subunits of heterotrimeric G proteins stimulate the ligand binding affinity and dimerization of a soluble
mitogen-activated protein kinase pathway in COS-7 cells. J epidermal growth factor (EGF) receptor extracellular domain.
Biol Chem 1994; 269: 7851-4. J Biol Chem 1991; 266, 22035-43.

3.- Koch WJ, Hawes BE, Allen LF, Lefkowitz RB. Direct 16.- Pazin MJ, Williams LT. Triggering signaling cascades
evidence that Gi-coupled receptor stimulation of mitogen- by receptor tyrosine kinases. Trends Biochem Sci 1992; 17:
activated protein kinase is mediated by G activation of p21ras. 374-8.
Proc Natl Acad Sci USA 1994; 91: 12706-10.
17.- Matozaki T, Nakanishi H, Takai Y. Small G-protein
4.- Gutkind JS. The pathways connecting G protein-coupled networks. Their crosstalk and signal cascades. Cell Signal
receptors to the nucleus through divergent mitogen- 2000; 12: 515-24.
activated protein kinase cascades. J Biol Chem 1998; 273:
1839-42. 18.- Pelech SL, Sanghera JS. Mitogen-activated protein
kinases: versatile transducers for cell signalling. Trends
5.- Ji TH, Grossmann M, Ji I. G protein-coupled receptors. I. Biochem Sci 1992; 17: 233-8.
Diversity of receptor-ligand interactions. J Biol Chem 1998;
273: 17299-302. 19.- Treisman R. Regulation of transcription by MAP kinase
cascades. Curr Opin Cell Biol 1996; 8: 205-15.
6.- Lefkowitz RJ. G protein-coupled receptors. III. New roles
for receptor kinases and -arrestines in receptor signaling 20.- Pellegrini S, Dusanter-Fourt I. The structure, regulation
and desensitization. J Biol Chem 1998; 73: 18677-80. and function of the Janus kinases (JAKs) and the signal
transducers and activators of transcription (STATs). Eur J
7.- Hepler JR, Gilman AG. G proteins. Trends Biochem Sci Biochem 1997; 248: 615-33.
1992; 17: 383-7.
21.- Liu KD, Gaffen SL, Goldsmith MA. JAK/STAT signaling
8.- Gautam N, Downes GA, Yan K, Kisselev O. The G-protein by cytokine receptors. Curr Opin Immunol 1998; 10: 271-8.
Revista Biomédica
 47

Receptores de cinasa de tirosina y receptores acoplados a proteínas G.

22.- Carter-Su C, Smit LS. Signaling via JAK tyrosine kinases: signal generation. Curr Opin Genet Dev 1997; 7: 80-6.
growth hormone receptor as a model system. Recent Prog
Horm Res 1998; 53: 61-82. 34.- Prenzel N, Zwick E, Daub H, Leserer M, Abraham R,
Wallasch C, Ullrich A. EGF receptor transactivation by G-
23.- Cazaubon SM, Ramos-Morales F, Fischer S, protein-coupled receptors requires metalloproteinase
Schweighoffer F, Strosberg AD, Couraud PO. Endothelin cleavage of proHB-EGF. Nature 1999; 402: 884-8.
induces tyrosine phosphorylation and Grb2 association of
Shc in astrocytes. J Biol Chem 1994; 269: 24805-9. 35.- Keely SJ, Uribe JM, Barrett KE. Carbachol stimulates
transactivation of epidermal growth factor and mitogen-
24.- Chen Y, Grall D, Salcini AE, Pelicci PG, Pousségur J, van activated protein kinase in T84 cells. J Biol Chem 1998; 273:
Obberghen-Schilling E. Shc adaptor proteins are key 27111-7.
transducers of mitogenic signaling mediated by the G protein-
coupled thrombin receptor. EMBO J 1996; 15: 1037-44. 36.- Daub H, Ulrich-Weiss F, Wallasch C, Ullrich A. Role of
transactivation of the EGF receptor in signalling by G-
25.- Sadoshima J, Izumo S. The heterotrimeric Gq protein- protein-coupled receptors. Nature 1996; 379: 557-60.
coupled angiotensin II receptors activates p21ras via the
tyrosine kinase-Shc-Grb2-Sos pathway in cardiac myocytes. 37.- Herrich A, Daub H, Knebel A, Herrlich P, Ullrich A,
EMBO J 1996; 15: 775-87. Schultz G, Gudermann T. Ligand-independent activation of
platelet-derived growth factor receptor is a necessary
26.- Rosen LB, Greenberg ME. Stimulation of growth factor intermediate in lysophosphatidic acid-stimulated mitogenic
receptor signal transduction by activation of voltaje- activity in L cells. Proc Natl Acad Sci USA 1998; 95: 8985-90.
sensitive calcium channels. Proc Natl Acad Sci USA 1996;
93: 1113-8. 38.- Crespo P, Xu N, Daniotti JL, Troppmair J, Rapp UR,
Gutkind JS. Signaling through transforming G protein-
27.- Sachsenmaier C, Radler-Pohl A, Zinck R, Nordheim A, coupled receptors in NIH 3T3 cells involves c-Raf activation.
Herrlich P, Rohmsdorf J. Involvement of groth factor Evidence for a protein kinase C-independent pathway. J Biol
receptors in the mammalian UVC response. Cell 1994; 78: Chem 1994; 269: 21103-9.
963-72.
39.- Ptasznik A, Traynor-Kaplan A, Bokoch GM. G protein-
28.- Coffer PJ, Burgering BM, Peppelenbosch MP, Bos JL, coupled chemoattractant receptors regulate Lyn tyrosine
Kruijer W. UV activation of receptor tyrosine kinase activity. kinase-Shc adapter protein signaling complexes. J Biol Chem
Oncogene 1995; 11: 561-9. 1995; 270: 19969-73.

29.- Knebel A, Rahmsdorf HJ, Ullrich A, Herrlich P. 40.- Daaka Y, Luttrell LM, Lefkowitz RJ. Switching of the
Dephosphorylation of receptor tyrosine kinases as target coupling of the beta2-adrenergic receptor to different G
of regulation by radiation, oxidants or alkylating agents. proteins by protein kinase A. Nature 1997; 390: 88-91.
EMBO J 1996; 15: 5314-25.
41.- Maudsley S, Pierce KL, Zamah AM, Miller WE, Ahn S,
30.- Daub H, Wallasch C, Lankenau A, Herrlich A, Ullrich A. Daaka Y, Lefkowitz RJ, Luttrell LM. The 2-adrenergic receptor
Signal characteristics of G protein-transactivated EGF mediates extracellular signal-regulated kinase activation via
receptor. EMBO J 1997; 6: 7032-44. assembly of a multi-receptor complex with the epidermal
growth factor receptor. J Biol Chem 2000; 275: 9572-80.
31.- Linseman DA, Benjamin CW, Jones DA. Convergence
of angiotensin II and platelet-derived growth factor receptor 42.- Luo X, Zeng W, Popov S, Davignon I, Wilkie TM, Mumby
signaling cascades in vascular smooth muscle cells. J Biol SM, Muallem,S. Alternate coupling of receptors to Gs and
Chem 1995; 270: 12563-8. Gi in pancreatic and submandibular gland cells. J Biol Chem
1999; 274: 17684-90.
32.- Rao GN, Delafontaine P, Runge MS. Thrombin stimulates
phosphorylation of insulin-like growth factor-1 receptor, 43.- Hawes BE, van Biesen T, Koch WJ, Luttrell LM, Lefkowitz
insulin receptor substrate-1, and phospholipase C1 in rat RJ. Distinct pathways of Gi- and Gq -mediated mitogen-
aortic smooth muscle cells. J Biol Chem 1995; 270: 27871-5. activated protein kinase activation. J Biol Chem 1995; 270:
17148-53.
33.- Weiss FU, Daub H, Ullrich A. Novel mechanism of RTK
Vol. 15/No. 1/Enero-Marzo, 2004
48

E Sánchez-Lemus, JA Arias-Montaño.

44.- Della-Rocca, van Biesen T, Daaka Y, Luttrell LM, 55.- Chow JC, Condorelli G, Smith RJ. Insulin-like growth
Lefkowitz RJ. Ras-dependent motigen-activated protein factor-1 receptor internalization regulates signaling via the
kinase activation by G protein-coupled receptors. Shc/mitogen-activated protein kinase pathway, but not the
Convergence of Gi- and Gq-mediated pathways on calcium/ insulin receptor substrate-1 pathway. J Biol Chem 1998; 273:
calmodulina, Pyk2, and Src kinase. J Biol Chem 1997; 272: 4672-80.
31648-56.
56.- Vogler O, Nolte B, Voss M, Schimdt M, Jakobs KH, van
45.- Tsai W, Morielli AD, Peralta EG. The m1 muscarinic Koppen CJ. Regulation of muscarinic acetylcholine receptor
acetylcholine receptor transactivates the EGF receptor to sequestration and function by beta-arrestin. J Biol Chem
modulate ion channel activity. EMBO J 1997; 16: 4597-4605. 1999; 274: 12333-8.

46.- Crespo P, Xu N, Simonds WF, Gutkind JS. Ras-dependent 57.- Ignatova EG, Belcheva MM, Bohn LM, Neuman MC,
activation of MAP kinase pathway mediated by G-protein Coscia CJ. Requirement of receptor internalization for opioid
subunits. Nature 1994; 369: 418-20. stimulation of mitogen-activated protein kinase: biochemical
and immunofluorescence confocal microscopic evidence. J
47.- Luttrell LM, Della-Rocca GJ, van Biesen T, Luttrell DK, Neurosci 1999; 19: 56-63.
Lefkowitz RJ. G betagamma subunits mediate Src-dependent
phosphorylation of the epidermal growth factor receptor. A 58.- Ahn S, Maudsley S, Luttrell LM, Lefkowitz RJ, Daaka Y.
scaffold for G protein-coupled receptor-mediated Ras Src-mediated tyrosine phosphorylation of dynamin is
activation. J Biol Chem 1997; 272: 4637-44. required for beta2-adrenergic receptor internalization and
mitogen-activated protein kinase signaling. J Biol Chem 1998;
48.- Pierce KL, Tohgo A, Ahn S, Field ME, Luttrell LM, 274: 1185-8.
Lefkowitz RJ. Epidermal growth factor (EGF) receptor-
dependent ERK activation by G protein-coupled receptors. 59.- Wilde A, Beattie EC, Lem L, Riethof DA, Liu SH, Mobley
J Biol Chem 2001; 276: 23155-60. WC, Soriano P, Brodsky FM. EGF receptor signaling
stimulates SRC kinase phosphorylation of clathrin,
49.- Neelam B, Richter A, Chamberlin SG, Puddicombe SM, influencing clathrin redistribution and EGF uptake. Cell 1999;
Wood L, Murray MB, Nandagopal K, Niyogi SK, Davies 96, 677-87.
DE. Structure-function studies of ligand-induced epidermal
growth factor receptor dimerization. Biochem 1998; 37: 4884- 60.- Selbie LA, Hill SJ. G protein-coupled-receptor cross-
91. talk: the fine-tuning of multiple receptor-signalling pathways.
Trends Pharmacol Sci 1998; 19: 87-93.
50.- Porter TE, Wiles CD, Frawley LS. Lactotrope
differentiation in rats is modulated by a milk-born signal 61.- Hill SM. Receptor crosstalk: communication through
transferred to the neonatal circulation. Endocrinology 1993; cell signaling pathways. Anat Rec 1998; 253: 42-8.
133: 1284-91.
62.- Cordeaux Y, Hill SJ. Mechanisms of cross-talk between
51.- Murali R, Brennan PJ, Kieber-Emmons T, Breene MI. G-protein-coupled receptors. Neurosignals 2002; 11: 45-57.
Structural análisis of p185c-neu and epidermal growth factor
receptor tyrosine kinases: oligomerizations of kinase 63.- Hur EM, Kim KT. G protein-coupled receptor signaling
domains. Proc Natl Acad Sci USA 1996; 93: 6252-7. and cross-tal. Achieving rapidity and specificity. Cell Signal
2002; 14: 397-405.
52.- Downward J. The GRB2/sem-5 adaptor protein. FEBS
Lett 1994; 338: 113-7. 64.- Morris AJ, Malbon CC. Physiological regulation of G
protein-linked signaling. Physiol Rev 1999; 79: 1373-430.
53.- Holgado-Madruga M, Emlet DR, Moscatello DK, Godwin
AK, Wong AJ. A Grb2-associated docking protein in EGF- 65.- Marinissen MJ, Gutkind JS. G-protein-coupled receptors
and insulin-receptor signalling. Nature 1999; 379: 560-4. and signaling networks: emerging paradigms. Trends
Pharmacol Sci 2001; 22: 368-76.
54.- Vieira AV, Lamaze C, Schmid SL. Control of EGF receptor
signaling by clathrin-mediated endocytosis. Science 1996; 66.- Hong WK, Ullrich A. The role of EGFR in solid tumors
274: 2086-9. and implications for therapy. Oncology biotherapeutics.
Vol.1, No.1. Darmstadt: Gardiner-Caldwell, 2000. pp. 1-29.
Revista Biomédica