FACULTAD DE VETERINARIA
CAMPUS DE LUGO
FACULTADE DE VETERINARIA.
Campus de Lugo
E-27002 Lugo
Tel. 982 822 641 ext. 22641
Correo electrónico: ccvsec@usc.es
I N F O R M A N:
MARCOS PÉREZ LÓPEZ, Profesor Titular de Universidad del área de Toxicología del
Departamento de Sanidad Animal de la Facultad de Veterinaria de la Universidad de
Extremadura,
Y para que conste a los efectos oportunos, firmamos el presente informe en Cáceres, a 15 de
Julio de 2013.
En primer lugar, mostrar mi más sincera gratitud a mis directores, los doctores Luis E. Fidalgo,
Ana Mª López y Marcos Pérez, por los consejos y paciencia que me han brindado durante todos estos
años.
Al profesor Luis Alberto Ramil Novo por la inestimable ayuda prestada en el diseño y por el
asesoramiento para llevar a cabo el estudio estadístico de los datos.
También me gustaría agradecer a todos los compañeros con los que me he iniciado en el
mundo clínico en el Hospital Veterinario Universitario Rof Codina, especialmente a mis compañeros
del Servicio de Medicina Interna, del Servicio Ambulatorio de Animales de Renta y Équidos,
haciéndolo extensible a todos y cada uno de los miembros del Hospital sin excepción.
No puedo olvidar mi agradecimiento a los profesores y compañeros con los que compartí mis
años en la Facultad de Veterinaria de Lugo, ya que contribuyeron a mi formación como profesional y
como persona.
A la Federación Galega de Caza y a todos sus afiliados por colaborar de forma desinteresada
en este proyecto.
A todos mis amigos de Lugo a los que por la distancia no puedo visitar con la frecuencia con
que me gustaría.
A Natalia y Bruno por animarme a perseguir los sueños aunque parezcan inalcanzables.
Y por último, me gustaría agradecer a toda mi familia, mis padres, hermanas, suegros, a mi
mujer y muy especialmente a mi hijo Germán, posiblemente lo mejor que he hecho en mi vida.
Gracias a todos por apoyarme en todos los proyectos que he emprendido y por aguantar mis defectos
y manías.
ÍNDICE
ÍNDICE GENERAL
1. INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................ 1
ANEXOS
ÍNDICE DE GRÁFICAS .............................................................................................................. 177
ÍNDICE DE IMÁGENES ............................................................................................................. 181
ÍNDICE DE TABLAS ................................................................................................................... 183
ABREVIATURAS
ABREVIATURAS UTILIZADAS
μl: microlitro
μg: microgramo
μg/g: microgramo/gramo
μg/l: microgramo/litro
Al: aluminio
As: arsénico
Ca: calcio
Cd: cadmio
Co: cobalto
Cr: cromo
Cu: cobre
Fe: hierro
g: gramo
3
g/cm : gramo/centímetro cúbico
g/ml: gramo/mililitro
g/mol: gramo/mol
Hg: mercurio
K: potasio
m: metro
M: molar
Mg: magnesio
mg/l: miligramo/litro
Mn: manganeso
Mo: molibdeno
mseg: milisegundo
mV: milivoltio
Na: sodio
ng/g: nanogramo/gramo
Ni: níquel
Pb: plomo
Pt: platino
Ru: rubidio
Sb: antimonio
Se: selenio
Sn: estaño
Ti: titanio
V: vanadio
Zn: zinc
INTRODUCCIÓN
1
2
Introducción
1. INTRODUCCIÓN
El género Vulpes agrupa a un conjunto de cánidos de talla mediana denominados
vulgarmente como zorros o raposos, estando representados en la actualidad por numerosas especies
y subespecies que se distribuyen por prácticamente todo el planeta, siendo un animal nativo en
Eurasia, América y África e introducido en otras regiones como en la Austral. Tanto en Galicia como
en el resto de la Península Ibérica se cuenta con una población estable de zorro común, Vulpes
vulpes, la única especie de este género presente en todo el territorio ibérico.
Los hábitos tróficos del zorro poseen especial interés para la investigación (enfermedades
infectocontagiosas, zoonosis, ecotoxicología, etc.), ya que no resulta infrecuente detectar su
presencia cerca de asentamientos humanos y explotaciones ganaderas, siendo habituales las visitas
a basureros y centros de acumulación de residuos, donde pueden encontrar alimento con relativa
facilidad. Es este hecho, el característico comportamiento del zorro, lo que condiciona que una parte
importante de la dieta esté integrada por restos y desperdicios urbanos.
Así mismo la cercanía de muchos ejemplares a las poblaciones humanas despierta gran
interés a la hora de iniciar este proyecto, en el cual se intentará valorar su utilidad como bioindicador
de la contaminación ambiental, sirviendo para cuantificar el impacto del hombre, de sus poblaciones y
centros de acumulación de residuos sobre la fauna y flora gallegas.
El término Ecotoxicología fue acuñado por Truhaut en el año 1969 en respuesta a la creciente
preocupación por los problemas de contaminación medioambiental generados por la polución.
Posteriormente, a mediados de los años 80 del siglo XX, se hacen evidentes otros efectos
secundarios como la bioacumulación, proceso ambiental asociado a la capacidad de incrementar los
problemas de toxicidad en los organismos vivos. Así pues, la Ecotoxicología es una ciencia que
estudia el origen de los contaminantes, su transporte entre distintos compartimentos ambientales, las
transformaciones que tienen lugar en estos y, finalmente, los efectos que originan en el ecosistema.
3
contaminación potencial debida a una gran diversidad de compuestos químicos (plaguicidas, dioxinas,
hidrocarburos, etc.) y fenómenos físicos (radioactividad, etc.); más aún, estos indicadores pueden y
deben constituir instrumentos de gran utilidad que permitan un control regular de la contaminación
ambiental, permitiendo detectar alteraciones en el ecosistema y adoptar las medidas de gestión
oportunas de forma temprana.
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Objetivos
OBJETIVOS
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Objetivos
2. OBJETIVOS
El objetivo principal del presente estudio consiste en valorar la idoneidad del zorro (Vulpes
vulpes) como bioindicador de la contaminación del medio por metales pesados. Para la consecución
de este objetivo, en este trabajo, se consideran diferentes hábitats en relación con las actividades
antropomorfas (agroforestal, monte y periurbano). Para ello se tomará como referencia la mayor o
menor cercanía de los animales a asentamientos humanos y/o centros de acumulación de residuos.
A partir de este objetivo principal, se plantean, por tanto, los siguientes objetivos secundarios
concretos:
Determinar las concentraciones de metales pesados en distintos órganos y tejidos de zorro
común.
Estudiar las posibles correlaciones que puedan establecerse entre los elementos químicos
analizados y que puedan ser de utilidad en futuros estudios de biomonitorización ambiental
de tales contaminantes.
Determinar si existe una relación directa entre la presencia o concentración de metales
pesados en los órganos y tejidos del zorro y el diferente aprovechamiento del hábitat.
Establecer si la concentración de metales pesados guarda relación con el sexo y la edad del
animal.
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REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
Revisión bibliográfica
3. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
3.1. EL ZORRO
3.1.2. TAXONOMÍA
FAMILIA CANIDAE
Atelocynus
Canis
Cerdocyon
Chrysocyon
Cuon
Dusicyon
Lycalopex
Lycaon
Nyctereutes
Otocyon
Speothos
Urocyon
Vulpes
La especie Vulpes vulpes fue descrita taxonómicamente por primera vez en el año 1758 por
Linneo, siendo descrita con posterioridad por otros autores la existencia de 45 subespecies ( ITIS,
2010), cada una de las cuales presenta una distribución geográfica bien definida. Se cree que esta
gran variedad de subespecies se debe a la introducción y reintroducción del zorro en diversas
regiones del planeta a lo largo de los siglos, asociada a su alta capacidad adaptativa ( IUCN, 2004).
De todas estas subespecies, dos son las de mayor interés para el presente estudio: el zorro
común europeo (Vulpes vulpes crucigera) y el zorro común ibérico (Vulpes vulpes silacea). Aunque no
se conocen con exactitud los límites geográficos de distribución de ambas, la segunda se considera
una subespecie endémica de la Península Ibérica ( Cabrera, 1914; Wandeler y Lüps, 1993; De Camps, 2004).
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Revisión bibliográfica
CLASIFICACIÓN CIENTÍFICA
Reino Animalia
Filo Chordata
Clase Mammalia
Orden Carnivora
Suborden Caniformia
Familia Canidae
Aunque aún existen lagunas que impiden aclarar el origen y evolución del género Vulpes, los
estudios moleculares parecen demostrar que su origen data del Mioceno Medio ( Garrido y Arribas, 2008).
En el Pleistoceno Medio, aproximadamente hace 400.000-180.000 años, surgen ya las líneas
evolutivas que darán lugar a las dos formas actuales del zorro en Europa: el zorro (Vulpes vulpes)
que proviene del Vulpes alopecoides y el zorro polar (Alopex lagopus) que inicia su diferenciación a
partir del Vulpes (Alopex) praeglacialis (Castaños, 1990).
Las poblaciones de Vulpes alopecoides que habitaron la Península Ibérica desde finales del
Plioceno Superior hasta hace 10.000 años, presentaban una distribución limitada a la cuenca del
Ebro, mientras que las poblaciones de Vulpes (Alopex) praeglacialis se centraban durante el
Pleistoceno Inferior en el sureste peninsular. El zorro común (Vulpes vulpes) se extendió por toda la
Península desde el Pleistoceno Medio hasta la actualidad (Arribas y Palmqvist, 2010).
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Revisión bibliográfica
Estudios recientes han revelado la existencia de restos óseos de zorro ártico (Alopex lagopus)
en yacimientos paleolíticos cantábricos, lo que demuestra la presencia en el norte de la Península
Ibérica en el pasado de una especie denominada fría, indicadora de las condiciones climáticas
existentes en ese período ( Altuna, 2004). Aunque no se sabe con exactitud el momento de su extinción
en nuestro país, este debiera ser próximo al cambio climático que acaece al final del Pleistoceno
(Castaños, 1990).
.
Imagen 1. Distribución de los yacimientos españoles con fósiles de zorro (adaptado de
Arribas y Palmqvist, 2010).
Todavía existen dudas acerca del origen y evolución de las distintas subespecies eurasiáticas,
pero se cree que la subespecie Vulpes vulpes silacea podría haberse diferenciado ya en el Neolítico
(Castaños, 1990).
El raposo es el carnívoro silvestre más cosmopolita como consecuencia, entre otros aspectos,
de la intervención humana sobre el medio y sobre las poblaciones vulpinas ( IUCN, 2004; Palomo et al.,
2007). Se distribuye por todo el hemisferio norte, desde el Círculo Polar Ártico hasta el norte de África,
incluyendo las estepas asiáticas. Está presente en la práctica totalidad de Europa y Asia, con
excepción de las regiones más septentrionales como Islandia y las islas del Ártico.
Las subespecies europeas se introdujeron en el este de los EE.UU. y Canadá en el siglo XVII,
mezclándose con las subespecies autóctonas (IUCN, 2004). En el siglo XIX se liberó en Australia y
13
Revisión bibliográfica
Nueva Zelanda con fines cinegéticos y para el control de la población cunícola ( Rolls, 1969).
Actualmente esta especie se considera una plaga en el país austral, ya que ha contribuido al deterioro
o extinción de especies nativas, particularmente herbívoros de pequeño tamaño y aves que anidan en
el suelo (Morton, 1990; Catling y Burt, 1995; Lunney, 2001).
El zorro común está presente en toda la Península Ibérica, desde nivel del mar hasta la alta
montaña, pero ausente en las Islas Baleares y Canarias (García-Perea y Gisbert, 1997). Es más abundante
en zonas urbanas, periurbanas y cerca de basureros y vertederos, por suponer una fuente accesoria
de alimento (García et al., 2009). Como ya se ha comentado, la subespecie que habita la Península
Ibérica es V.v. silacea, que se distingue por detalles en su pigmentación de la del resto de Europa, V.v.
crucigera (cuyo límite de distribución meridional se sitúa en los Pirineos). No obstante, algunos
autores no consideran que estas disparidades tengan valor taxonómico ( Palomo et al., 2007). A estas dos
subespecies podemos añadirle el V.v. ichnusae descrita en las islas de Córcega y Cerdeña, que se
originó a partir de V.v. crucigera como consecuencia del aislamiento geográfico (Riga, 2007).
Imagen 2. Mapa de distribución de Vulpes vulpes. Azul: población nativa. Rojo: población
introducida (adaptado de Fidalgo et al., 2009).
El zorro común (también denominado rojo) es un cánido de talla media, el de mayor tamaño
de todas las subespecies del género Vulpes (López-Martín et al., 2007). Esta especie se caracteriza por su
larga y poblada cola, que puede llegar a medir hasta un 70% de la longitud del resto de su cuerpo
(Palomo et al., 2007), si bien este tamaño se reduce considerablemente (hasta el 54%) en los ejemplares
vulpinos estudiados en Galicia (Fidalgo et al., 2009). Los raposos presentan un hocico fino y alargado,
acabado en un belfo blanco. Las orejas son triangulares, móviles y erguidas, con su dorso negro. Sus
extremidades son largas y esbeltas, con manos y pies pequeños ( Fidalgo et al., 2010).
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Revisión bibliográfica
El pelaje, suave y espeso, exhibe una coloración variable abarcando desde formas casi
melánicas hasta ejemplares con un cromatismo pálido-amarillento (Palomo et al., 2007). Habitualmente
se encuentran tres capas predominantes: roja, plateada (negra con destellos plateados) y gris-marrón
con largos pelos negros en la parte caudal del dorso y atravesando la región de la cruz (Johnson y
Hersteinsson, 1993). Las extremidades poseen distalmente una pigmentación bruna. En algunos
individuos la cola remata con pelos blancos (IUCN, 2004).
Los cachorros nacen con un pelaje pardo oscuro uniforme, pero al mes de vida las zonas
ventrales de la cabeza y tronco así como las caras mediales de las extremidades adquieren una
coloración clara. Sin embargo, los extremos (orejas, hocico, pies y manos) permanecen negros y la
cola suele tener una banda terminal de pelos blancos (Palomo et al., 2007). Los ojos son redondos, de
color marrón avellana en adultos y azulados en cachorros, proporcionalmente pequeños respecto al
tamaño de su cabeza, y con la pupila ligeramente alargada en un plano vertical en condiciones de
gran iluminación y circular con poca luz (Larivière y Pasitschniak-arts, 1996).
La fórmula dental del Vulpes vulpes es: I 3/3 C 1/1 PM 4/4 M 2/3 (x 2) = 42 ( Schmidly, 2004).
La dentadura de los zorros se emplea para estimar la edad del animal en base al recuento de bandas
en el cemento de las piezas dentarias (el método más preciso), al estudio de la cavidad pulpar en los
caninos o al desgaste general de toda la dentadura (Zapata et al., 1995).
3.1.5. HÁBITAT
El zorro presenta cierta predilección por zonas heterogéneas en las que se alternan matorral,
bosque y extensiones agrarias; aprovechando también las proximidades de asentamientos humanos,
áreas urbanas y periurbanas, donde se alimenta fácilmente y puede perder su comportamiento
territorial (Mac Donald, 1980; Harris, 1981b; Blanco, 1998a).
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Revisión bibliográfica
A pesar de presentar predilección por entornos como los mencionados anteriormente, lo cierto
es que el zorro habita todo tipo de ambientes, desde el subártico hasta el desierto, tanto en medios
forestales como en espacios abiertos, e incluso en grandes núcleos urbanos como Londres, París o
Estocolmo, gracias a la capacidad de adaptación a cualquier medio capaz de ofrecer refugio y
alimento (Blanco, 1998a; IUCN, 2004; Fidalgo et al., 2009). La disponibilidad trófica es el factor que más
condiciona la distribución de esta especie ( Mac Donald, 1980; Harris, 1981b; Blanco, 1998a).
En España, como en el resto del mundo, se ha descrito su presencia en regiones a nivel del
mar e incluso en zonas de alta montaña, viéndose favorecida su expansión por la existencia de
ambientes heterogéneos (Fidalgo et al., 2009).
3.1.6. ETOLOGÍA
El zorro posee los sentidos del olfato, oído y vista muy desarrollados, lo que condiciona sus
patrones de comportamiento (Larivière y Pasitschniak-Arts, 1996). Su actividad es fundamentalmente
nocturna, con picos en el orto y el ocaso ( Palomo et al., 2007), si bien puede mostrar un comportamiento
más diurno en aquellas zonas donde no es incomodado por la presencia humana; así, la actividad
diurna es mayor en áreas poco frecuentadas y cuando las noches son cortas ( Rau et al., 1985; IUCN,
2004).
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Revisión bibliográfica
3.1.6.b. Rastros
Tanto el tejón como el zorro fabrican madrigueras muy similares en su estructura interna,
pudiendo este último cavar las propias o agrandar las de otras especies ( Serrano y Cicuéndez, 1997). Su
estructura va desde un simple agujero con una cavidad espaciosa a una ramificación extensa de
galerías, en algunos casos de más de 20 m. La diferencia principal es que el zorro acumula la tierra
extraída alrededor de la entrada quedando un abanico claramente visible y el tejón la amontona fuera
de su guarida (Ballesteros, 1998). En época de cría en la guarida del zorro, frecuentemente, habrá restos
del alimento consumido (Serrano y Cicuéndez, 1997).
Sus deyecciones son de tamaño muy variable (5-20 cm de longitud y 1,5-2,5 cm de grosor) y
suelen estar divididas en varios cuerpos. El color varía con el tipo de alimento ingerido, así como su
olor. Es habitual la presencia de huesos, pelos, escamas, plumas, restos de frutos, élitros y trozos
quitinosos de insectos en sus deposiciones ( Harris, 1984; Serrano y Cicuéndez, 1997; Barja et al., 2001;
Hernández, 2001).
El zorro posee, tanto en las extremidades anteriores como posteriores cinco dedos, de los
que en su huella sólo marca cuatro, debido a que el primer dedo está situado en ambos casos en una
posición más proximal y no contacta con el suelo. En las huellas de todas las extremidades se
marcan la almohadilla plantar, de mayor tamaño, y las cuatro almohadillas digitales (Fidalgo et al., 2010).
Las huellas son similares a las de los perros, con un tamaño de 5 cm de largo y 3-4 cm de
ancho. Generalmente se desplaza al trote y con las huellas en posición oblicua a la dirección en que
camina. La separación entre dos huellas consecutivas es de unos 30 cm ( Harris, 1984; Serrano y Cicuéndez,
1997; Ballesteros, 1998). Se puede diferenciar la huella del zorro de la de los perros trazando una línea
recta que atraviese entre el punto más caudal de las almohadillas centrales y el más craneal de las
laterales. En el zorro esta línea no corta ninguna almohadilla, mientras que en el perro sí ( Murie y
Elbroch, 2005; Arnosky, 2008).
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Revisión bibliográfica
3.1.7. REPRODUCCIÓN
La madurez sexual se alcanza en el primer año de vida, a los 9-10 meses de edad, pero en
áreas de elevada densidad poblacional muchas de las hembras jóvenes no entran en celo, abortan o
abandonan su camada (McIlroy et al., 2001; IUCN, 2004; Palomo et al., 2007).
La cópula tiene lugar entre los meses de diciembre y febrero ( Jeanne, 1987, IUCN, 2004; Gentle,
2005). Las hembras son receptivas durante un periodo de 1 a 6 días, que es la duración estimada del
estro (Cavallini y Santini, 1996; IUCN, 2004).
El parto tiene lugar en la madriguera tras una gestación de 49-55 días, teniendo lugar los
nacimientos entre marzo y mayo (Martorell y Gortázar, 1993; IUCN, 2004; Gentle, 2005; McDonald y Reynolds, 2005).
Las hembras pueden preparar varias madrigueras, pudiendo cambiar los cachorros de localización
varias veces durante la época de cría (Gentle, 2005).
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Revisión bibliográfica
En la Península Ibérica el tamaño de la camada puede variar entre uno y siete cachorros en
función de la disponibilidad de alimento y factores sociales ( Cavallini y Santini, 1996; IUCN, 2004; Palomo et al.,
2007). Este tamaño es inferior al observado en otras regiones europeas, lo que parece indicar que la
población vulpina ibérica está estabilizada en una densidad alta, otorgando a esta población una
elevada capacidad de respuesta ante posibles bajas poblacionales (Ceballos et al., 1991; Martorell y Gortázar,
1993: Gortázar, 1999; MMA, 2006).
Los zorros jóvenes se pueden emancipar del grupo entre los 6 y 12 meses de edad, ya con
talla adulta, teniendo lugar esta separación entre los meses de octubre y enero, momento en el cual
los animales más jóvenes comienzan la búsqueda de nuevos territorios ( Larevière y Pasitschniak-Arts,
1996).
3.1.8. ALIMENTACIÓN
El análisis de la dieta del raposo constituye un primer paso en el estudio de la ecología del
animal ya que la alimentación refleja el empleo de los recursos disponibles, permite valorar su
aprovechamiento y las interacciones competitivas intra y extraespecíficas ( Rau et al., 1987; Boitani y Fuller,
2000).
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Revisión bibliográfica
RECURSOS PRINCIPALES
RECURSOS SECUNDARIOS
RECURSOS PUNTUALES
Se incluyen otros recursos tróficos que son ingeridos de forma esporádica tales
como peces, cereales, erizos, topos, etc.
Para estimar su población se han propuesto métodos de estudio indirectos como el recuento
de huellas, número de excrementos u otros signos, que se realizan con un mínimo coste aún a riesgo
de presentar ciertas imprecisiones (Bookhout, 1994).
Además existen muchos otros métodos, con sus ventajas e inconvenientes, pudiendo elegir
entre uno u otro en función de las características del lugar, de la disponibilidad económica, del
personal, de las horas de trabajo y otras variables:
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Revisión bibliográfica
Extrapolaciones a partir del tamaño medio de las áreas de campeo (Lloyd et al., 1976).
Los resultados obtenidos por distintos autores muestran una gran variabilidad en la densidad
de población dependiendo del área geográfica, del uso del territorio y de la presencia de poblaciones
2
humanas. En el Reino Unido, ésta oscila entre 4 individuos/km en Escocia y hasta 1,17
2 2
individuos/km en Gales, si bien puede llegar a densidades de hasta 30 ejemplares por km (una de
las mayores densidades conocidas) en áreas urbanas en las que existe comida abundante ( Harris,
1981; Voigt, 1987; IUCN, 2004). Las densidades más bajas se han descrito en lugares de escasa
disponibilidad de presas y/o donde el zorro coexiste con especies competidoras de mayor tamaño
(Palomares y Ruiz-Martínez, 1994).
En la Península Ibérica no existen demasiados estudios, pero tal vez uno de los lugares
estudiados hasta ahora con mayor densidad es la Reserva Biológica de Doñana, con 1,2 ejemplares
2
adultos/km (Rau et al., 1985), llegando a 1,7 en el año 1993 según Travaini (1994). Otros autores
observan densidades aún mayores en zonas de regadío del Valle del Ebro, con 2,5 zorros
2
adultos/km (Gortázar, 1999). En la provincia de Burgos los ensayos ofrecen datos invernales de 0,77 a
2 2
0,92 zorros/km en encinares y 0,34-0,36 zorros/km en robledales (Tellería y Sáez-Royuela, 1986). En
Aragón se han estimado en poblaciones, antes del periodo de partos, densidades de entre 0,8
2
(estepa) y 2,5 (regadío) individuos por km .
En Galicia, en un estudio realizado durante un período de tres años, se estima una densidad
2
media de la población invernal de zorros en 2,71 ejemplares por km , más elevada en zonas
periurbanas e inferior en zonas de monte (Fidalgo et al., 2009). La proliferación de esta especie en el
noroeste peninsular puede deberse, en gran parte, a la disponibilidad de recursos tróficos derivados
de la actividad antropomorfa (basureros, despojos de granjas, etc.); no obstante, la reciente política
21
Revisión bibliográfica
del cierre de la mayoría de los vertederos incontrolados ocasionará una reducción significativa en la
fuente de alimento, pudiendo provocar cambios en la dinámica poblacional de esta especie ( Tapia y
Domínguez, 2003).
La gran variabilidad en la composición de los grupos de edad que conforman las poblaciones
está influencia por la época del año en que se realiza el muestreo, las campañas de control de la
población y las extracciones intensas de ejemplares en los años anteriores a la realización del estudio
(Fidalgo et al., 2010). Las actuaciones que suponen una disminución del número total de ejemplares
implica que en años posteriores se incremente el porcentaje de individuos juveniles ( Larivière y
Pasitschniak-Arts, 1996).
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Revisión bibliográfica
Ciclo estral: el estudio mostró que en esta región la ovulación tiene lugar en
enero.
Los datos obtenidos de tamaño de la camada en el Parque de Doñana son inferiores a los
observados en otros estudios, lo cual podría deberse a que la población en este caso está
estabilizada en una densidad alta (Vos, 1995; McIlroy et al., 2001; MMA, 2006).
El esquema vital de la población vulpina se caracteriza por presentar una elevada mortalidad
de cachorros e individuos jóvenes, y una baja mortalidad de animales adultos. Aunque los datos
demográficos varían notablemente entre distintos núcleos poblacionales, aproximadamente el 75% de
los zorros muere en su primer año de vida; a partir de este momento la mortalidad de un animal
adulto es de aproximadamente un 50% (Ballesteros, 1998; IUCN, 2004).
Algunos zorros pueden vivir por encima de los ocho años en estado salvaje (se citan casos de
animales que llegan a los 12 años), aunque se estima que llega a esta edad tan sólo uno de cada
10.000 ejemplares. Pocos son los que viven 6 años y la mayor parte no pasa del primer invierno. En
las zonas rurales europeas se considera que el grueso de la población no alcanza los tres años
(Blanco, 1998).
23
Revisión bibliográfica
En un estudio realizado en EE.UU. observaron que las causas más frecuentes de ingreso en
el centro de recuperación de fauna salvaje de Virginia fueron: la orfandad (33%), los traumatismos
(27%), la sarna sarcóptica (17%), y otras de etiología no determinada (23%) ( Kelly y Sleeman, 2003). Los
zorros urbanos, debido a su mayor densidad poblacional, son más susceptibles a padecer epizootias
o enfermedades infectocontagiosas como la sarna sarcóptica ( Soulsbury et al., 2007). Por otra parte, el
incremento de la densidad de la población del zorro supone otorgar a esta especie un papel
epidemiológico de gran importancia dada su cercanía al entorno humano y ganadero, convirtiéndose
en un potencial reservorio de agentes infectocontagiosos (Richards et al, 1993; Willingham et al., 1996).
Entre las enfermedades que padecen los zorros deben citarse en primer lugar la rabia y la
sarna, tanto por la importancia zoonósica de la primera, como por ser ambas los procesos que
históricamente más han castigado a esta especie (Palomo et al., 2007; WHO, 2010). En 2013 tiene lugar el
primer caso de rabia en un perro en España peninsular tras más de 30 años sin casos registrados
(OIE, 2013).
Otra enfermedad vírica importante para el zorro es el moquillo canino. Los estudios
epidemiológicos realizados en zorros y lobos en España indican que el contacto con el virus del
moquillo canino es habitual en nuestro país, pudiendo existir diferencias notables entre las distintas
regiones (Sobrino et al., 2008). La parvovirosis canina, enfermedad habitual en el perro, muestra una
seroprevalencia muy variable en el caso del zorro en las distintas regiones estudiadas. Algunos
autores afirman que el zorro en condiciones de vida libre es resistente a la parvovirosis, aunque
posiblemente no lo sea al virus de la panleucopenia felina ( Artois, 1989; Truyen, 2000; Sobrino et al., 2008).
Entre los agentes infecto-contagiosos que pueden afectar al zorro merecen citarse
Cryptosporidium spp., Giardia spp. y micobacterias del complejo Mycobacterium tuberculosis,
participando además como reservorios en otras epizootías, como la paratuberculosis y salmonelosis
(Beard et al., 2001; Machackova et al., 2004; Millán et al., 2004; Appelbee et al., 2005; Martín-Atance et al., 2005 y 2006;
Polley, 2005; Millán et al., 2008).
24
Revisión bibliográfica
Atendiendo a la lista roja de especies protegidas elaborada por la Unión Mundial para la
Conservación de la Naturaleza (IUCN), se considera que el zorro común es una especie con bajo
riesgo, es decir, ha sido evaluada y los resultados no indican que haya razones para considerarla en
alguna de las categorías más preocupantes. Con excepción de los animales domésticos y el ser
humano, no comprendidos en la clasificación, todas las especies no amenazadas se encuentran en
esta categoría de bajo riesgo. Ello implica que no requiere medidas especiales de protección y su
aprovechamiento cinegético está regulado legalmente ( IUCN, 2013).
En la Unión Europea, Canadá y Rusia, los métodos de captura están regulados por medio de
un acuerdo internacional firmado por estos países en 1997 ( IUCN, 2004). En España existe normativa
en la cual se describe al zorro como especie objeto de caza y como especie comercializable, entre las
cuales se pueden citar el Real Decreto 1095/1989, el Real Decreto 1118/1989 o la Ley 10/2002 entre
otras.
La Ecotoxicología es una rama de la Toxicología y podría definirse como la ciencia que busca
identificar los problemas derivados de la presencia de las más de 45.000 sustancias químicas
conocidas en el medio ambiente y en los seres vivos, así como los efectos que estos productos
ejercen sobre los mismos. La Ecotoxicología es, por lo tanto, la ciencia que estudia el origen de los
contaminantes, su transporte entre los distintos compartimentos ambientales, las transformaciones
que sufren dichos contaminantes y, finalmente, los efectos que producen sobre el ecosistema ( Marín,
2007). Por tanto, trata de identificar, evaluar, solucionar y predecir los efectos que los agentes
químicos pueden tener en nuestro entorno, pretendiendo evitar los efectos negativos sobre el
ecosistema, que en definitiva repercutirán tanto en la población humana como en sus producciones
animales.
Dentro de los compuestos estudiados por la Ecotoxicología, los metales pesados ocupan un
lugar destacado, tanto por su elevada persistencia en el medio ambiente como por su alta toxicidad
en todos los organismos vivos (Hermoso de Mendoza et al., 2008).
Actualmente se considera que no existe en nuestro planeta ningún ecosistema libre de los
efectos de la actividad humana, llegando los productos derivados de ésta a zonas muy alejadas de
cualquier núcleo habitado por personas, debido a su dispersión por las masas de aire, corrientes
marinas o fluviales, así como por acción de otros fenómenos naturales ( Hermoso de Mendoza et al., 2008).
25
Revisión bibliográfica
Estudiar los patrones de evolución que van a presentar estos contaminantes en el futuro.
Establecer, en resumen, si las medidas de control de los agentes químicos están siendo
efectivas.
Gracias a esta nueva herramienta, es posible recoger y analizar gran cantidad de información
sobre los efectos de los agentes químicos en los seres vivos a lo largo de su existencia. Esto permite,
así mismo, hacer comparaciones entre distintos estados fisiológicos, pues se dispone de datos del
organismo a lo largo del tiempo, de modo que, a su vez, la información obtenida puede servir para
predecir futuros cambios medioambientales que lleguen a ser importantes para el conjunto del
ecosistema (Moreno, 2003; Kolf-Clauw et al., 2007; De la Casa, 2010).
26
Revisión bibliográfica
puesta en evidencia mucho antes que si esa monitorización se realizara directamente sobre muestras
abióticas (Spahn y Sherry, 1999).
Como se ha indicado anteriormente, la característica principal que debe cumplir una especie
bioindicadora es que reaccione con elevada sensibilidad a los cambios que acaecen en el ecosistema
a estudiar (Markert et al., 2003). No obstante, las particularidades individuales pueden influir de manera
decisiva en la interpretación de los resultados, lo cual se tendrá en cuenta también a la hora de
seleccionar un bioindicador (Hermoso de Mendoza et al., 2008).
Los bioindicadores son, por lo tanto, sensibles a los cambios ambientales y reaccionan ante
ellos como si fueran estímulos específicos. No obstante, los cambios que experimentan dichos
organismos, en muchas ocasiones, pueden verse modificados por las características individuales de
la especie elegida, dando lugar a errores. Es por ello que se hace necesario considerar no sólo las
características que como especie se deben cumplir para ser bioindicador, sino también los aspectos
individuales de dicha especie a la hora de establecer su utilidad como tal (Capó, 2002).
Las características que debe cumplir un bioindicador según Tataruch y Kierdorf (2003) deben
ser las siguientes:
27
Revisión bibliográfica
Semejanza a los humanos: dado el papel que van a realizar los bioindicadores como
centinelas de los riesgos para la salud humana, es necesario que compartan un cierto
grado de semejanzas fisiológicas.
Sin embargo, debe considerarse que son pocas las especies que cumplen los requisitos aquí
indicados, por ello se hace necesario elegir a aquellas que cumplan la mayoría ( Hermoso de Mendoza et
al., 2008).
TIPOS DE BIOINDICADORES
-Muy sensibles
-Sensibles
Grado de sensibilidad
-Poco sensibles
-Resistentes
-Detectores
-Exploradores
Forma de respuesta -Centinelas
-Acumuladores
-Organismos test o bioensayo
De ellos se conocen más parámetros fisiológicos y más preferencias alimenticias que de otros
seres vivos.
28
Revisión bibliográfica
Acumulan metales traza y otros contaminantes de forma activa desde el medio, parámetros
que no siempre se pueden utilizar en plantas.
Debido a su longevidad, los efectos de una determinada exposición pueden ser estudiados a
lo largo del tiempo.
Los humanos somos mamíferos, por lo tanto, los resultados obtenidos pueden ser
extrapolados a la población humana, permitiéndonos estudiar determinados riesgos.
Deben ser citados también diversos inconvenientes no menos importantes, como son ( Hermoso
de Mendoza et al., 2008; De la Casa, 2010):
Los niveles de contaminantes en los tejidos dependen de factores endógenos tales como la
edad o el sexo, pero los factores exógenos son determinantes a la hora de elegir una especie
como bioindicadora. Para poder determinar estos últimos se necesita un estudio previo con
gran cantidad de individuos.
El muestreo, en caso de órganos internos, implica el sacrificio del animal, así que sólo es
posible una única toma de muestras por individuo.
A pesar de todo, tal y como ya se ha indicado, los mamíferos son uno de los grupos
biológicos que presentan mejores características a la hora de actuar como bioindicadores,
reflejando fielmente la contaminación presente en su hábitat, ya sea en la comida, agua,
suelo, aire, etc., obteniendo una serie de datos que nos permiten actuar en consecuencia.
El hábitat es decisivo a la hora de seleccionar una especie como bioindicador y así, los
animales que viven cerca de núcleos de población humana son un reflejo de la contaminación que
caracteriza esa zona. Los ejemplares que viven en zonas alejadas de estos núcleos son de gran
utilidad para detectar pequeños cambios debidos a la contaminación difusa ( Frank, 1986).
Las variaciones en el área geográfica que habitan los animales así como las condiciones
climáticas están directa o indirectamente relacionadas con el comportamiento, morfología (ecotipo),
fisiología y reproducción de estas especies. Un ejemplo es el contenido en cadmio, que depende en
29
Revisión bibliográfica
gran medida de las características del suelo y así, aquellos mamíferos que vivan en suelos con un pH
ácido muestran un contenido más elevado de este elemento que los que habitan en suelo calizo
(Tataruch y Kierdorf, 2003).
3.3.2. ALIMENTACIÓN
Así pues, los herbívoros estrictos están expuestos a ciertos metales pesados como el plomo o
el cadmio por ingestión de plantas, frente a los carnívoros, que incorporan estos metales mediante la
magnificación producida en la cadena trófica ( Gamberg el at., 2005). De hecho, la contaminación por
plomo en los herbívoros no sólo se debe al contenido en plomo de la materia vegetal, sino también
por el hecho de que estos animales están mucho más expuestos a las partículas del suelo que otras
especies. En cuanto al cadmio, los niveles de este metal en los órganos de los grandes carnívoros
son generalmente muy bajos, lo que podría deberse a la reducida acumulación de este elemento en
el músculo, que representa la mayor parte de la comida de los carnívoros (Tataruch y Kierdorf, 2003).
3.3.3. SEXO
30
Revisión bibliográfica
3.3.4. EDAD
El metal pesado típico cuyo contenido se incrementa con la edad es el cadmio, debido a la
prolongada vida media del cadmio en los riñones. Así, para poder interpretar correctamente los
resultados analíticos hay que tener en seria consideración la edad de los individuos ( Tataruch y Kierdorf,
2003).
Aunque la determinación de la edad en la fauna salvaje es difícil y la mayor parte de las veces
imprecisa, deberían ser comparados los resultados de animales pertenecientes al mismo grupo de
edad para obtener unas conclusiones válidas en el caso de los metales pesados ( Tataruch y Kierdorf,
2003).
A continuación se expone una revisión de los estudios en los que se recogen datos referentes
a la concentración de metales pesados en diversos mamíferos salvajes mediante el empleo de
métodos destructivos y no destructivos. Es importante destacar que ambas técnicas son válidas, si
bien las no destructivas (en inglés NDT, de non destructive testing) evitan las implicaciones éticas y
ecológicas del muestreo destructivo. En la mayoría de las especies protegidas el sacrificio del animal,
aunque de forma controlada, puede provocar más daño que el propio compuesto tóxico a estudiar y
en estos casos debe plantearse el empleo o desarrollo de técnicas no destructivas siempre que
demuestren ser eficaces (Hermoso de Mendoza et al., 2008).
Directamente relacionado con esto, las técnicas de muestreo invasivas o no invasivas hacen
referencia al grado de daño que se infringe al animal al realizarlas. Así, en el caso concreto de fauna
silvestre son especialmente interesantes las técnicas de muestreo cuanto menos invasivas mejor
(detección de contaminantes por ejemplo en orina, heces o saliva) en las cuales la integridad física
del animal no se vea alterada y tampoco se genera un estrés innecesario sobre el mismo. No
obstante, a veces, hay que recurrir a técnicas invasivas (extracción de sangre y otras muestras
biológicas) y, en casos extremos, las técnicas a emplear pueden requerir la muerte del animal (por
ejemplo si se precisa la necropsia) (Heymann et al., 2004; Brousset et al., 2005).
Una importante ventaja de los métodos no destructivos es que se pueden tomar muestras
seriadas en la misma población e individuos, además de la mayor facilidad de muestreo, transporte y
31
Revisión bibliográfica
almacenamiento de las muestras, así como un menor estrés para la población en estudio ( Fossi y
Leonzio, 1993). La realización de análisis mediante técnicas destructivas está regulada legalmente,
indicando la normativa el número de ejemplares que se pueden emplear, el protocolo a seguir, las
especies aptas para este tipo de estudios y también las medidas y controles que se deben llevar a
cabo (Hermoso de Mendoza et al., 2008).
Los individuos de zonas urbanas son los que presentaban mayores niveles de plomo en riñón
e hígado.
El nivel de cadmio era más elevado en zonas suburbanas que en las urbanas, aumentando
de forma progresiva con la edad, al igual que ocurre en otras especies.
Entre las conclusiones obtenidas en este estudio cabe destacar la idoneidad que los autores
otorgan a esta especie como bioindicador para detectar la presencia de algunos compuestos tóxicos,
especialmente en zonas urbanizadas.
32
Revisión bibliográfica
Omnívoros
As 0,21 ± 0,36 mg/kg Piskorova et al., 2003
Cd 0,28 ± 0,23 mg/kg Piskorova et al., 2003
0,28 ± 0,16 mg/kg Gallego, 2006
Jabalí Cr
0,15 ± 0,12 mg/kg Piskorova et al., 2003
(Sus scrofa)
Hg 0,24 ± 0,2 mg/kg Piskorova et al., 2003
0,24 ± 0,1 mg/kg Piskorova et al., 2003
Pb
2,61 ± 8,35 mg/kg Gallego, 2006
Tabla 5. Contenido en metales pesados cuantificados en diferentes especies de mamíferos terrestres mediante
métodos destructivos.
33
Revisión bibliográfica
Carnívoros
Tabla 5 (cont.). Contenido en metales pesados cuantificados en diferentes especies de mamíferos terrestres
mediante métodos destructivos.
34
Revisión bibliográfica
Por todo lo anteriormente comentado se puede considerar al zorro como una especie
adecuada para su empleo como bioindicador a la hora de plantear estudios de ecotoxicidad, como el
que se propone en la presente memoria de tesis doctoral ya que esta especie se caracteriza por:
Especie cinegética legalmente regulada por lo que no son necesarias capturas ni sacrificio ex
profeso para la investigación.
Acceso a un número elevado de ejemplares abatidos todos los años que facilita estudios
cronológicos comparativos.
Toda materia, inorgánica y orgánica, está constituida por átomos, que corresponden a un gran
número de sustancias elementales o elementos químicos, los cuales se clasifican atendiendo a
diversos criterios: propiedades, lugar de descubrimiento, nombres científicos, etc ( Picado y Álvarez, 2008).
Es incierto el número total de elementos químicos existentes ya que seguramente algunos están por
descubrir y otros citados en la bibliografía científica no han sido confirmados por la IUPAC
(International Union of Pure and Applied Chemistry) al ser descubiertos en condiciones de laboratorio
(elementos sintéticos), siendo precisos estudios más detallados. Según los datos publicados por la
IUPAC en 2007, se cita la existencia de 118 elementos químicos (algunos pendientes de
confirmación) (Karol et al., 2001; Holden y Coplen, 2004; IUPAC, 2008).
Uno de los intentos más destacados para clasificar los elementos químicos descubiertos
hasta entonces fue el trabajo desarrollado por el químico ruso Dimitri Ivanovich Mendeleev en su tabla
periódica, la cual se basa en ordenar los elementos según sus propiedades químicas y, más
importante aún, el haber pronosticado y adelantado las propiedades de elementos no descubiertos
hasta entonces (Picado y Álvarez, 2008). Otros estudiosos siguieron los pasos de Mendeleev, como por
ejemplo Lothar Mayer que estableció una clasificación atendiendo a las propiedades físicas o Henry
Moseley que plasmó la ley periódica moderna, según la cual "las propiedades de los elementos
químicos y sus compuestos son funciones periódicas del número atómico de los elementos",
35
Revisión bibliográfica
ordenando los 105 elementos químicos en función de su número atómico ( Picado y Álvarez, 2008; Reger et
al, 2009).
Por definición, los elementos traza son los 80 elementos químicos que presentan una
concentración en la corteza terrestre por debajo del 0,1%, para cada uno de ellos. En conjunto, todos
no constituyen más del 0,6% del total, mientras que los 12 elementos mayores restantes (oxígeno,
hierro e hidrógeno, entre otros), suponen un 99,4%. Dentro de este amplio grupo, algunos elementos
traza son indispensables para el desarrollo de procesos biológicos esenciales, por lo cual son
identificados como oligoelementos. A pesar de ello, estos minerales esenciales pueden ser también
tóxicos para diversas formas de vida cuando sus concentraciones sean elevadas (o bien en función
de las formas químicas en que se presenten). Es, por ejemplo, lo que ocurre con el cobre, el zinc o el
cromo. Pero existe un segundo grupo de elementos traza cuya esencialidad no se ha demostrado y,
por tanto, presentan un carácter potencialmente tóxico a dosis muy bajas. Dentro de éstos destacan
especialmente: cadmio, mercurio y plomo (Kolf-Clauw et al., 2007).
Respecto a los metales de transición, los más abundantes pertenecen a los períodos 3 y 4,
los cuales forman parte de distintos minerales. Tal es el caso del Al, Mn, Fe, Cu, Zn y Ti. Se
encuentran en fase sólida, particularmente como óxidos y aluminosilicatos. Aunque estos metales son
relativamente frecuentes en el suelo y la litosfera, son muy poco solubles, de manera que la
concentración en la hidrosfera es muy baja (Doménech y Peral, 2006).
Los elementos metálicos presentes en los sistemas acuosos a muy baja concentración se
denominan elementos traza. Algunos de ellos son nutrientes esenciales para plantas y animales (Mn,
Mo, Cu, Co, Zn, Se y V), mientras que otros elementos (Ni, Sn y Cr) son esenciales sólamente para
los animales. Es importante tener en cuenta que cuando estos elementos están presentes en
sistemas ambientales a concentraciones superiores a ciertos niveles, bien como consecuencia de
desequilibrios naturales o, sobre todo, debido a su introducción por mediación de la actuación
humana, pueden resultar tóxicos para los seres vivos (Doménech y Peral, 2006).
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Revisión bibliográfica
Es importante destacar que el término metal pesado no ha sido nunca definido por ninguna entidad
con autoridad como la IUPAC. En los años 60 esta denominación empezó a emplearse en química,
otorgándole numerosos significados por diferentes autores. Pero lo cierto es que no existe coherencia
científica al no haber una relación entre la densidad y ninguna de las demás variables fisicoquímicas
con los conceptos que se han empleado para definir los metales pesados y la toxicidad o ecotoxicidad
que se les atribuye, haciendo que el término se haya quedado obsoleto (Duffus, 2002).
Al mismo tiempo que se acuña el término de metales pesados surgen regulaciones legales
que especifican una lista de metales pesados para su aplicación. Estas listas pueden diferir entre
unas normativas y otras ya que el término en cuestión, como se ha mencionado, no especifica cuales
son los elementos químicos incluidos en este grupo. Existe una tendencia, no soportada en hechos,
que asume que todos los metales pesados, denominados así, y sus compuestos son altamente
tóxicos o ecotóxicos, no existiendo datos químicos o toxicológicos que lo avalen. Así pues, el término
metal pesado se presupone que incluye todas las especies y compuestos con las mismas
propiedades fisicoquímicas, biológicas y toxicológicas, pero esta afirmación no es cierta. En un futuro
debería establecerse una nueva clasificación basada en la tabla periódica que refleje conocimientos
químicos y datos toxicológicos que se puedan predecir ( Duffus, 2002).
Aunque cada elemento químico presenta una serie de propiedades que lo caracterizan,
existen otras comunes a todos los metales. Así por ejemplo, entre las propiedades físicas de los
metales se citan (Picado y Álvarez, 2008):
Así mismo, entre las propiedades químicas de los metales se pueden enumerar las siguientes
(Picado y Álvarez, 2008):
Sus átomos disponen de 1, 2 ó 3 electrones en su última capa, pudiendo
perderlos dando lugar a la formación de iones.
Sus moléculas son monoatómicas.
Se combinan con los no metales formando sales.
37
Revisión bibliográfica
A pesar de las discrepancias entre los diversos autores, Doménech y Peral (2006) consideran
3
que los metales pesados son aquellos elementos químicos con una densidad superior a 6 g/cm ,
aproximadamente y así, prácticamente todos los metales de transición pueden considerarse metales
3
pesados. Excepciones a esta definición son el Ti, con una densidad inferior (4,5 g/cm ), pero que
también se considera un metal pesado y el As que, a pesar de ser considerado como un no-metal, por
3
su elevada densidad (5,7 g/cm ) y por algunas propiedades de carácter ambiental se suele clasificar
también como metal pesado. Otros autores definen los metales pesados como aquellos cuya
densidad es por lo menos cinco veces mayor a la del agua (Fergusson, 1990; Harte et al., 1991).
Los metales pesados considerados más importantes, tanto por su efecto tóxico como por ser
imprescindibles para los seres vivos, son: As, Cd, Co, Cr, Cu, Hg, Ni, Pb, Sn y Zn ( Fergusson, 1990; Harte
et al., 1991).
38
Revisión bibliográfica
contribuyen notablemente a la emisión de metales tales como Cu, Sn, Cr, Cd, Ni, Hg, Pt,
Ru, As, Sb, Se, Mo y Zn.
Gestión de residuos: este tipo de actividad genera emisiones notables de metales en la
incineración de residuos urbanos y en los lixiviados de los vertederos, así como en la
disposición de lodos procedentes de plantas de tratamiento de aguas residuales. En este
apartado, son importantes las emisiones de Cr, Cu, Mn, Ni, Pb y Zn.
Corrosión metálica: este fenómeno se asocia a la inestabilidad de los materiales
expuestos al medio ambiente, originando la liberación de elementos metálicos como el
hierro procedente de materiales de construcción, cobre y plomo de cañerías, cromo,
níquel y cobalto del acero, cadmio y zinc de los recubrimientos protectores del acero,
cromo y plomo de la degradación de pinturas, entre otros.
Agricultura y ganadería: en estas actividades se liberan metales como As, Cu y Zn
procedentes de los aditivos de la alimentación animal, los cuales emergen en los residuos
generados por la explotación ganadera. Igualmente importante es la contaminación
producida por la aplicación de fertilizantes a base de fosfatos y de compuestos
fitosanitarios (pesticidas, herbicidas, etc.), que a lo largo de años de aplicación han dado
lugar a emisiones de metales como As, Cu, Mn, Pb y Zn.
Industria forestal y maderera: la emisión de este tipo de industrias proviene,
principalmente, de productos empleados para la conservación de maderas y derivados
afines, siendo los metales más comúnmente implicados As, Cr y Cu.
Quema de combustibles fósiles: estos procesos originan la emisión de ingentes
cantidades de metales que previamente están presentes en el combustible en pequeñas
cantidades, y que se emiten incorporados en las cenizas de combustión. Tal es el caso de
los elementos Cd, Zn, As, Sb, Se, Cu, Mn y V.
Según estimaciones realizadas por Nriagu y Pacyna (1988), el total de emisiones de metales
9
traza al medio hidrosférico suma un valor de 10 kg/año, siendo las principales fuentes de emisión el
vertido de aguas residuales domésticas, las plantas térmicas, las fundiciones y las industrias de
producción de acero. Los metales que se emiten en mayor cantidad son Mn y Zn, con flujos de
9
emisión estimados de alrededor de 200-260 x 10 kg/año. El orden de flujos de emisión de metales a
la hidrosfera es el siguiente (Doménech y Peral, 2006):
Las emisiones de metales traza al medio telúrico son superiores a las de la hidrosfera. Las
9
estimaciones cifran el flujo de emisión al suelo en 6,5 x 10 kg/año, siendo las fuentes más
relevantes la deposición de cenizas procedentes de la combustión de carburantes fósiles, las debidas
a fenómenos de corrosión y su dispersión debida al empleo de pesticidas y fertilizantes que contienen
metales pesados en su formulación. Al igual que en la hidrosfera, las principales emisiones
39
Revisión bibliográfica
9
corresponden a Mn y Zn, con valores estimados en 1.300-1.700 x 10 kg/año. El orden de flujos de
emisión al medio terrestre es el que se presenta a continuación ( Doménech y Peral, 2006):
3.4.1. ZINC
Su descubridor, en 1746, fue Andreas Marggraf, pero sería Paracelso el que le da el nombre,
el cual proviene del vocablo alemán zinke, que significaba púa en alemán antiguo, ya que este metal
se depositaba en los hornos en forma de púas (Hernández, 2006).
40
Revisión bibliográfica
Es un metal de transición que aparece de forma natural como parte de la corteza terrestre en
un 0,02% y su principal mineral es la blenda ( Martí et al., 2002). Se conocen 15 isótopos, cinco de los
cuales presentan una masa atómica de 64, 66, 67, 68 y 70, pero aproximadamente la mitad del zinc
se encuentra como isótopo 64. Se trata del cuarto metal más empleado por el hombre debido, en
parte, a su asequible precio y a que es un elemento relativamente no tóxico ( Gupta, 2007).
Número atómico 30
Solubilidad Insoluble
Valencias 2
Se pueden detectar niveles de zinc en el aire, suelo y agua, estando presente en todos los
alimentos. Además, juega un papel fundamental en el desarrollo de las funciones biológicas y
enzimáticas, siendo un elemento esencial para el crecimiento y desarrollo normal de los seres vivos
(Ogden et al., 1988; ATSDR, 2003; Hermoso de Mendoza et al., 2008). Cantidades elevadas pueden inducir
trastornos orgánicos e intoxicaciones, como por ejemplo esterilidad en ratas (ATSDR, 2003); además,
niveles elevados de zinc interfieren en la absorción de cadmio ( Hermoso de Mendoza et al., 2008).
Cierta parte del zinc es liberado al medio ambiente por procesos naturales, pero la mayor
parte del metal proviene de actividades humanas tales como la minería, producción de acero,
combustión del petróleo, incineración de residuos sólidos urbanos, etc. ( Crespón, 2008).
El zinc presenta muchas aplicaciones comerciales, entre las cuales cabe destacar los
revestimientos anticorrosión, aleaciones, fabricación de baterías secas, pinturas, caucho, tinturas y
ungüentos, entre otros (Crespón, 2008). Existen diversos productos que contienen niveles elevados de
zinc como son los recubrimientos galvanizados de hierro o acero (rejas, jaulas, transportines y vallas)
(Talcott y Pettersson, 2001; Gupta, 2007), diversos componentes automovilísticos, baterías, fungicidas y
41
Revisión bibliográfica
A nivel fisiológico presenta un gran interés ya que este metal es un oligoelemento con un
importante rol en numerosos procesos metabólicos como en la actividad de la enzima anhidrasa
carbónica. También se ha detectado su presencia en más de 200 complejos enzimáticos
(metaloenzimas), como la fosfatasa alcalina, colagenasas, polimerasas, glutamato, lactato y alcohol
deshidrogenasas y otras enzimas del metabolismo de las porfirinas, de los ácidos nucleicos y de los
lípidos (Jurado, 1983; Ogden et al., 1988; Kaplan y Pesce, 1991; Gupta, 2007). Asimismo, interviene en el proceso
de transferencia de información genética ya que participa en los procesos de síntesis de ADN y ARN
(Jurado, 1983; Kaplan y Pesce, 1991).
Desde el punto de vista de la salud animal, el zinc se estudia con mayor frecuencia por los
efectos de su carencia que por los derivados de su exceso; de hecho, existen territorios en los que se
recomienda la aplicación de fertilizantes con zinc para corregir las deficiencias de este elemento en
los pastos y hacer viable la ganadería (Underwood, 1981). Así, la deficiencia de zinc puede ocasionar
retraso del crecimiento, retraso mental, hipogonadismo, anorexia con alteraciones sensoriales (gusto
y olfato), alteraciones cutáneas, deficiencias en la cicatrización y trastornos inmunológicos, así como
perturbaciones en el metabolismo de la vitamina A, en la osificación, ocasionando cojeras y alteración
en las faneras y en las plumas de las aves (Underwood, 1981; Lacroix, 1984, Kaplan y Pesce, 1991).
42
Revisión bibliográfica
La intoxicación por zinc ha sido descrita en perros, pero no en gatos, siendo la causa más
probable su mayor discriminación a la hora de ingerir. Este proceso se caracteriza por una anemia
hemolítica, trastornos gastrointestinales como consecuencia de una irritación directa y un fallo
multiorgánico (Talcott y Pettersson, 2001).
La toxicidad del zinc depende en gran medida de la forma en la que éste se presenta y, así
por ejemplo, las sales de zinc poseen una dosis letal media (DL 50) de aproximadamente 100 mg/kg de
peso vivo en los casos de toxicidad aguda (Osweiler, 1996; Gupta, 2007), mientras que los óxidos de zinc,
presentes en cremas solares y pomadas para controlar la erupción cutánea en bebés, son menos
tóxicos. Los perros ingieren los productos cuando se les aplican de forma tópica. Se ha estimado la
dosis tóxica en el perro en aproximadamente 108 gramos de zinc ( Gupta, 2007).
Además del efecto irritante que origina el zinc sobre la mucosa gastrointestinal ( Breitschwerdt et
al., 1986; Gupta, 2007), la intoxicación aguda con zinc en cánidos se asocia a una anemia hemolítica y
cambios morfológicos eritrocitarios que incluyen la presencia de eritrocitos nucleados, cuerpos de
Heinz y esferocitos. Sin embargo, el exceso de zinc en humanos se asocia con una anemia crónica
no hemolítica que no responde a una suplementación férrica ( Breitschwerdt et al., 1986). El mecanismo
subyacente que origina la anemia hemolítica en los canidos no está claro, pero se sospecha que los
daños oxidativos juegan un papel importante; así, los cuerpos de Heinz no se observan de forma
habitual en eritrocitos normales, apareciendo estas estructuras como consecuencia de daños
oxidativos. Los cuerpos de Heinz presentes en la membrana eritrocitaria son una señal para el
sistema fagocítico mononuclear, dando lugar a una eritrofagocitosis esplénica de las células dañadas
(Latimer et al., 1989). En algunos casos se produce una fagocitosis parcial que origina esferocitos, que
son glóbulos rojos con ausencia de la palidez central y con un menor tamaño que los eritrocitos
(Breitschwerdt et al., 1986).
El daño oxidativo ocasionado por el zinc tiene lugar por diversas vías y así, por ejemplo, el
zinc disminuye la absorción de cobre en el intestino, originando una reducción de los niveles séricos
de cobre. La importancia de este hecho radica en que el cobre es un elemento esencial para la
actividad de la ceruloplasmina (ferroxidasa), una enzima que regula la velocidad a la que se libera en
hígado el hierro ligado a la transferrina y que actúa como un potente antioxidante sérico capaz de
neutralizar radicales superóxido (Frieden, 1983). Además, niveles elevados de zinc han demostrado
disminuir los niveles intracelulares de glutation en astrocitos de ratas, el cual es un importante
inhibidor de la oxidación celular (Ryu et al., 2002).
43
Revisión bibliográfica
3.4.2. PLOMO
3.4.2.a. Propiedades fisicoquímicas
Se puede definir este elemento como un metal sólido gris-azulado, pesado, dúctil y maleable
que presenta las siguientes propiedades fisicoquímicas:
Número atómico 82
Solubilidad Insoluble
Valencias +2 + 4
Inorgánicos: son poco solubles y, por lo tanto, de escasa toxicidad. Entre ellos tenemos los
óxidos (el más conocido el minio u óxido de plomo rojo, que es base de pinturas
anticorrosivas), el cromato (se usa como colorante amarillo), el arseniato de plomo (presente
en algunos plaguicidas), el carbonato (empleado como pigmento blanco) y el sulfuro o galena
(utilizado por ceramistas y alfareros).
44
Revisión bibliográfica
Orgánicos: resultan más solubles y también más tóxicos. En este grupo se encuentran el
acetato de plomo o sal de Saturno (muy soluble, se empleó como abortivo), el estearato
(aditivo de plásticos), el naftaleno de plomo (empleado en aceites industriales) y el plomo
tetraetilo (usado durante mucho tiempo como antidetonante en los carburantes).
Las fuentes naturales de liberación de este metal hacia la atmósfera están asociadas
principalmente con el vulcanismo y, en una menor proporción, con la erosión eólica. Sin embargo,
estos aportes son, en general, del orden de 10 veces menos importantes que los efectuados por otras
contaminaciones (Kolf-Clauw et al., 2007). Por tanto, la mayor parte del plomo que se encuentra en el
medio ambiente procede de actividades humanas como (Kaplan y Pesce, 1991; Roder, 2002; Gil, 2005):
Soldaduras.
Es importante destacar que el plomo se ha empleado durante siglos en las tuberías del agua,
en barnices y en pinturas, presentando estas últimas un contenido en plomo de hasta el 40% de su
peso seco (Curtis et al., 1998).
45
Revisión bibliográfica
La intoxicación crónica por plomo, sobre todo en zonas urbanas, ha llevado a restricciones
legislativas en el uso del plomo, especialmente en pinturas y gasolina ( Curtis et al., 1998; Roder, 2002).
Hasta 1999 la parte de contaminación aportada por el transporte rodado se consideraba la
mayoritaria, pero la introducción de los carburantes sin plomo y la prohibición de la gasolina con
plomo ha hecho que la contribución de esta fuente haya perdido toda preponderancia, siendo desde
hace pocos años la industria de la manufacturación la que emite más plomo al medio ambiente ( Kolf-
Clauw et al., 2007). Por el contrario, el plomo asociado a la caza, a pesar de tratarse de un fenómeno
localizado en la escala global de la biosfera, manifiesta un importante impacto ecotoxicológico ( Kolf-
Clauw et al., 2007). Sólo en Francia, se estima que cada año los cazadores liberan al medio alrededor de
60 toneladas de plomo. En algunos humedales de la Península Ibérica se han observado valores de
2
22,5 a 85,7 perdigones de plomo/m en los 10 cm más superficiales del sedimento (Mateo et al., 2006).
En medicina veterinaria, la intoxicación por plomo se describe con más frecuencia en perros,
bovinos, caballos y aves acuáticas (Merck, 2000) y, en menor medida, en gatos, cabras, ovejas y pollos,
debido a los hábitos alimenticios más selectivos, a una menor accesibilidad o una menor
susceptibilidad (Merck, 2000; Roder, 2002 ). Por otra parte, destaca la elevada tolerancia que muestran los
cerdos a la ingesta de este metal (Blood, 2002; Roder, 2002). La vía de ingreso más habitual es la
digestiva, si bien la vía inhalatoria se ha descrito en algunos casos ( Blood, 2002).
La toxicidad del plomo depende de la forma química en que se encuentre, siendo más tóxicas
las sales que el propio plomo metálico. Esta toxicidad, según Jurado (1989) decrece en el siguiente
orden: nitrato, acetato, cloruro, sulfato, sulfuro y fosfato. También se debe considerar que cualquier
situación de estrés exacerba los efectos de la intoxicación ( Pain y Rattner, 1988).
El plomo actúa prácticamente sobre todos los tejidos y órganos mediante su unión al grupo
sulfhidrilo de los sistemas enzimáticos, siendo especialmente sensible el sistema nervioso central, en
46
Revisión bibliográfica
especial en animales en desarrollo (Kuschinsky y Lüllmann, 1973; Mateo et al., 2006; Piedrola, 2008). A nivel
encefálico, los niveles elevados de plomo originan un desequilibrio en la liberación de
neurotransmisores, dando lugar a alteraciones del comportamiento, desmielinización periférica y
degeneración axonal (Klaassen y Watkins, 2001). Otros órganos que se ven seriamente afectados son los
riñones y el aparato reproductor (Kuschinsky y Lüllmann, 1973; Piedrola, 2008). Puede alterar la producción de
hemoglobina y citocromos (Hermoso de Mendoza et al., 2008). También puede reemplazar al zinc como
cofactor enzimático en algunas vías metabólicas ( Roder, 2002). En rumiantes, las partículas de plomo
alojadas en el retículo se disuelven lentamente y liberan cantidades significativas de plomo ( Merck,
2000).
Además de la hemorragia cerebelar y el edema asociado con las lesiones capilares, el plomo
es irritante, inmunodepresor, gametotóxico, teratogénico, nefrotóxico y dañino para el sistema
hematopoyético (Merck, 2000), a todo ello se debe añadir el demostrado efecto carcinógeno en
animales (Hermoso de Mendoza et al., 2008).
3.4.3. CADMIO
El cadmio fue descubierto por Friedrich Stromeyer en 1817, debiéndose su nombre al vocablo
latino cadmia, procediendo este del término griego kadmeia, que significa calamina, un mineral de
zinc (carbonato de zinc anhidro), al que se parece mucho el cadmio. La calamina debe su nombre a
que se extraía en Kadmea, la ciudadela de Tebas, la cual, según la mitología griega, fue fundada por
Cadmio, hijo de Agenor, rey de Fenicia. Plinio, por su parte, otorgó el nombre de cadmia a un polvo de
tonalidad parduzca que se acumulaba en las chimeneas de los hornos de fusión que se empleaban
en la fabricación de latón. A partir de este polvo pardo (carbonato de zinc), aisló Stromeyer el cadmio
(Hernández, 2006).
Se trata de un metal de color blanco-metálico con matiz azulado, brillante y dúctil (Gil, 2005).
47
Revisión bibliográfica
Número atómico 48
Solubilidad Insoluble
Valencias 2
El cadmio es un metal fácilmente atacable por ácidos pero de difícil oxidación, propiedad por
la que fue utilizado para proteger a otros metales como el hierro y el acero contra la corrosión.
Actualmente se emplea en infinidad de productos y procesos industriales, entre ellos ( Méndez, 2001;
Blood, 2002; Gupta, 2007):
Baterías de níquel-cadmio.
48
Revisión bibliográfica
Antihelmínticos.
Desde un punto de vista industrial destaca el empleo del cadmio en distintas formas: óxidos,
sulfuros, cloruros, bromuros, sulfatos o carbonatos, según las aplicaciones a las que se destine el
metal (Gil, 2005).
49
Revisión bibliográfica
No hay evidencias de que el cadmio sea un elemento esencial para los seres vivos. Por el
contrario, se ha demostrado que incluso a concentraciones muy bajas, es tóxico para todas las
formas de vida (Hermoso de Mendoza et al, 2008). No obstante, algunos estudios realizados con roedores,
gallinas y ganado vacuno han demostrado mayores incrementos en su peso cuando se añaden
cantidades bajas de cadmio en sus dietas, desconociéndose el origen de este efecto (NRC, 2005).
Los bioindicadores parecen ser muy sensibles al cadmio, siendo de gran interés para evaluar
su impacto en el ecosistema (Hermoso de Mendoza et al., 2008).
El efecto tóxico del cadmio se debe a los iones libres, mientras que el metal unido a la
metalotioneína es menos activo (NRC, 2005). La acción tóxica se debe a su acción inhibitoria sobre los
grupos sulfhidrilo, perturbando el metabolismo de los aminoácidos azufrados y la acción de
numerosas enzimas (anhidrasa carbónica, deshidrogenasa, carboxipeptidas, etc.), provocando
disfunciones en el crecimiento y metabolismo (Hermoso de Mendoza et al., 2008).
Otro aspecto importante es que este metal compite con el zinc y otros metales, a los que
reemplaza como cofactor en ciertas reacciones enzimáticas. El interés de este hecho radica en el
eventual papel preventivo del zinc en las intoxicaciones crónicas por cadmio ( NRC, 2005).
50
MATERIAL Y MÉTODOS
Material y métodos
4. MATERIAL Y MÉTODOS
4.1. TOMA DE MUESTRAS
La determinación de metales pesados en este estudio se realiza en muestras procedentes de
ejemplares de zorro común (Vulpes vulpes), de distintas edades y sexos, recogidas en localizaciones
representativas de las cuatro provincias gallegas durante un periodo de 8 años (2003-2011). Este
trabajo se ha realizado finalmente con 257 ejemplares seleccionados tras un estricto control,
desechando todos aquellos animales que presentaban restos de munición (perdigones) o lesiones de
origen traumático en la cavidad abdominal, por lo que el número de zorros examinados ha sido
considerablemente mayor.
La toma de datos básicos (edad, sexo, localización, etc.) y de biometría se lleva a cabo en el
lugar de reunión posterior a la cacería, donde se realiza el control oficial de los animales abatidos,
siendo cada animal identificado con un crotal auricular para garantizar la trazabilidad.
53
Material y métodos
Otras observaciones de interés para completar este trabajo y futuras investigaciones: índice
de condición corporal, presencia de parasitosis, lesiones, temperatura del cadáver (que
permite establecer la hora aproximada de la muerte) y medidas biométricas (longitudes y
peso).
De cada zorro se toma una muestra de aproximadamente 50 gramos de hígado, riñón y pelo
que se introducen directamente (sin contactar con ninguna superficie) en bolsas de plástico con
autocierre, se rotulan y se congelan a -20 ºC, donde permanecen almacenadas hasta su
procesamiento laboratorial.
En cualquier caso, las superficies y equipos que se emplean están elaborados en materiales
que no pueden dar lugar a transferencia de metales pesados en las muestras, evitando así una
posible contaminación de éstas que invalidaría los resultados del estudio. El material necesario para
la necropsia y toma de muestras se lava y limpia adecuadamente tras el procesado de cada individuo.
54
Material y métodos
Imagen 4. Recepción de los zorros en la zona de batida: toma de datos, inspección veterinaria, selección previa,
identificación individual y determinación de la edad según desgaste de las piezas dentales
55
Material y métodos
Imagen 5. Procesado en la sala de necropsia. Selección de zorros sin lesiones externas de perdigonada en
abdomen. Material necesario para la toma de muestras. Revisión previa al muestreo de la piel y vísceras para
comprobar la ausencia de lesiones o munición en el abdomen.
El material de vidrio se lava y se mantiene en una solución de ácido nítrico al 10% durante al
menos 24 horas, periodo tras el cual se realiza un doble enjuagado en agua destilada Milli-Q y se
procede al desecado del material, mientras que el material plástico es de un solo uso o se lava con
agua bidestilada.
56
Material y métodos
había tenido contacto con el cuchillo metálico empleado en la sala de necropsias, con el cual se
practicó la toma de muestras. Esta alícuota se introduce en crisoles de porcelana de un volumen
aproximado de 60 ml y seguidamente es desecada en una estufa a 105 ºC hasta la obtención de una
muestra con peso constante, lo que tiene lugar a las 24 horas (Doganoc y Sinigoj, 1995).
En el caso concreto de las muestras de pelo, con objeto de eliminar la contaminación externa
de su superficie, se realiza el lavado de las mismas previamente a su digestión. En dicho
procedimiento se realizan tres enjuagues consecutivos con un disolvente orgánico (acetona),
empleando en cada uno 10 ml de disolvente. A continuación se procede al agitado de las muestras
durante 20 minutos y a la eliminación del disolvente mediante el empleo de una pipeta. El proceso
finaliza con el lavado de las muestras con agua destilada en las condiciones descritas anteriormente.
Una vez las muestras pilosas están lavadas y secas siguen el mismo procedimiento descrito
anteriormente para las muestras desecadas.
Durante todo el procesado se controla el peso inicial de la muestra (peso húmedo) y el final
(peso seco) de la alícuota, a nivel de 0,1 mg lo cual será indispensable para la determinación final de
las concentraciones de metales.
El procedimiento seguido para analizar los metales pesados (Pb, Cd y Zn) en muestras
biológicas de tejidos internos requiere la mineralización de las muestras, asegurando la destrucción
de la materia orgánica. Esta mineralización se puede conseguir por vía seca (incineración en horno
de mufla a 450 ºC) o por vía húmeda (digestión con ácidos), optando en nuestro caso por la vía
húmeda, para lo cual se introduce 0,5 g de muestra desecada en un tubo de vidrio borosilicatado,
añadiendo en el mismo 6 ml de una mezcla de ácido nítrico, perclórico y sulfúrico, calidad “para
análisis de trazas”, en una proporción 8:8:1 (García-Fernández, 1994; Santiago et al, 1998). Los tubos que
contienen la mezcla de ácidos y las muestras problema, identificados de forma inequívoca, se
introducen en un bloque digestor Technicon BD-40 con controlador de temperatura Technicon BD-
20/40 y se mantienen durante una noche a 50 ºC.
57
Material y métodos
Además de para fines cuantitativos, esta técnica también se puede emplear con fines
cualitativos, aprovechando las diferencias entre los potenciales de reducción u oxidación de los
distintos metales presentes en la muestra, lo que permite obtener una visión analítica simultánea del
contenido de iones metálicos presentes en la muestra.
En la tercera etapa se registran las curvas de corriente potencial, tanto para los estándares
58
Material y métodos
como para la muestra problema. De acuerdo al potencial en que aparece cada señal
voltamperométrica, se puede inferir la presencia o ausencia de cada metal en la muestra;
permitiendo detectar la presencia de metales a niveles de μg/l.
(a) (b)
(c) (d)
Imagen 6. (a) Bloque digestor Technicon BD-40 con controlador de temperatura Technicon BD-20/40,
(b) Procesador 746-VA Trace Analyser, (c) Puesto de trabajo 747-VA Stand, (d) Automuestreador 813
Compact Autosampler.
59
Material y métodos
El puesto de trabajo consta de una cubeta de vidrio donde se deposita la muestra y tres
electrodos:
Se añade la disolución (50 ml) a la cubeta de medida del voltamperímetro y se miden los 3
metales pesados en un solo segmento y por duplicado, midiendo dos blancos diarios. Por su parte,
las condiciones operativas de trabajo en este dispositivo para la determinación de cadmio, plomo y
zinc en la disolución final se concretan en la tabla 9. La cuantificación de los niveles de metales
pesados en la solución final se realizó mediante la técnica de adición de patrón estándar con las
condiciones que aparecen reflejadas en la tabla 10.
Amplitud de impulsos 6 mV
Tiempo de repetición de
40 mseg
impulsos
Tiempo de reposo tras
15 seg
electrolisis
Inicio de medición -1,250 mV
60
Material y métodos
Volumen de muestra 10 ml
Siguiendo esta técnica se elabora una curva de calibrado para cada muestra, de utilidad para
cuantificar la concentración final de metales pesados. En la siguiente gráfica se pueden observar las
curvas obtenidas en el análisis de las muestras procesadas, así como las curvas de calibrado.
Gráfica 2. Curvas obtenidas en los análisis voltamperométricos en dos muestras de hígado elegidas al azar.
Izquierda: curvas para cadmio y plomo tras el barrido. A la derecha, sus correspondientes curvas de adición
estándar para la cuantificación.
61
Material y métodos
4.3.2.a. Exactitud
La exactitud indica la capacidad del método analítico para obtener resultados lo más próximos
posibles al valor real. En este caso se compara el valor medio obtenido por el método propuesto para
la determinación del metal con el valor medio obtenido por un método ya validado. Así, la validación
de la técnica de determinación de metales en muestras renales y hepáticas de zorros se lleva a cabo
mediante el empleo de una muestra certificada de músculo bovino liofilizado del BCR (referencia nº
184) que presenta las siguientes concentraciones certificadas:
Cd Pb Zn
Para poder realizar una cuantificación de forma fiable, es preciso que se dé una relación lineal
entre la concentración de los metales pesados en las muestras en estudio y las existentes en una
disolución patrón. Si elaboramos una disolución patrón y la sometemos a diluciones seriadas y
conocidas, conseguiremos conocer la respuesta lineal del equipo y podremos conocer la dilución más
baja capaz de ser determinada por el voltamperímetro.
62
Material y métodos
En todos los casos, tal como se puede apreciar en las siguientes gráficas, se obtiene una
buena linealidad entre las concentraciones estudiadas, obteniendo en todos los casos unos
2
coeficientes de correlación (R ) superiores a 0,99.
63
Material y métodos
A todas aquellas muestras con unas concentraciones inferiores a los límites de detección
señalados se les asignó un valor a efectos estadísticos de la mitad del correspondiente límite de
detección.
Muestras duplicadas: con lo que se pretende asegurar la reproductibilidad del método. Así, en
cada lote de muestras, una de ellas es procesada por cuadriplicado y en una de las mismas
se añade una cantidad conocida (400 μl) del patrón de adición. La recuperación y variabilidad
obtenida en estas muestras duplicadas garantiza la adecuación del método.
4.4.1. REACTIVOS
64
Material y métodos
4.4.2. MATERIAL
4.4.3. INSTRUMENTAL
65
Material y métodos
A cada muestra por debajo del límite de detección de la instrumentación se le asignó un valor
correspondiente a la mitad del límite de detección del elemento en cuestión para el estudio
estadístico, para de esta manera minimizar el error nominal de tipo I ( Clarke, 1998).
Así mismo se aplicó un test de Spearman para determinar las correlaciones en el contenido
de los distintos metales estudiados en las diferentes muestras biológicas. Para todos los ensayos, los
valores de p considerados para determinar las diferencias significativas fueron p<0.001, <0.01 y
<0.05.
66
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Resultados y discusión
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
A lo largo del presente apartado se relacionan los resultados obtenidos en las diferentes
observaciones y análisis realizados en las muestras procedentes de los 257 ejemplares que
conformaron el grupo de estudio, tratados estadísticamente y ordenados en tablas de resultados y
gráficas.
Tabla 14: Clasificación en grupos en función del sexo de los zorros estudiados.
El número mayor de machos que de hembras, coincidentes con las observaciones de otros
estudios realizados por nuestro grupo de investigación con anterioridad, parece indicar que en edad
temprana mueren más hembras que machos y, en ausencia de otros datos bibliográficos al respecto,
opinamos que pueda deberse a la mayor actividad desarrollada a edad temprana por las hembras, de
la misma forma que ocurre en otros carnívoros, lo que las hace más vulnerables (González, 2004; Fajardo,
2008). En cualquier caso, la relación macho/hembra en la muestra (1,295 machos por cada hembra)
es coherente con la encontrada en la mayoría de estudios, próxima a la unidad, pudiendo oscilar algo
en función de la época del año en que se realice el muestreo (Vos, 1995; Chalon et al., 1998; Fidalgo et al.,
2009).
69
Resultados y discusión
SUBGRUPOS POR
Frecuencia Porcentaje
EDAD
Juvenil 71 27,6
Geronte 56 21,8
Es lógico que el grupo "adulto" sea el más numeroso si se tiene en cuenta que el muestreo de
los animales se realiza en los últimos días de enero y primera quincena de febrero, momento en el
que los juveniles han superado su etapa de cachorros y están muy próximos a llegar a edad adulta y,
por tanto, han soportado todas las importantes pérdidas de efectivos de ese grupo de población.
Además, resulta lógico pensar que los individuos adultos (2-5 años) sean los más numerosos, ya que
resulta difícil, y sólo algunos consiguen sobrevivir más de cinco años en el medio natural.
70
Resultados y discusión
ya que contamos con la ventaja de que los zorros en nuestra latitud nacen en plena primavera (en el
mes de abril), por lo que el error cometido, en su caso, será de un año, cosa absolutamente imposible
en los animales incluidos en el grupo de jóvenes y difícil en los adultos; aunque no es posible tener la
absoluta seguridad de que algún ejemplar de cinco o seis años haya podido clasificarse
erróneamente en el grupo que no le corresponde, considerando incorrectamente como geronte a un
zorro de 5 años o adulto a uno de seis. Situación que, de ser así, puede haber ocurrido en un número
muy reducido de casos y que no reporta graves imprecisiones a un estudio como el que se ha
planteado.
Agroforestal 80 31,1
Periurbano 44 17,1
Tabla 16. Clasificación en grupos en función del hábitat de los zorros estudiados.
Para finalizar este apartado y con el fin de facilitar la comprensión de la composición del
grupo de ejemplares estudiados, en la siguiente tabla clasificamos los individuos en razón del sexo,
grupo etario y hábitat de procedencia (Tabla 17).
71
Resultados y discusión
Tabla 17. Composición del grupo de estudio en función del sexo, la edad y el hábitat.
72
Resultados y discusión
Tabla 18. Valores globales de concentración (expresados en ppm referido a peso fresco) de plomo, cadmio y zinc
en muestras de hígado, riñón y pelo en las muestras de zorro consideradas en el presente estudio.
73
Resultados y discusión
Gráfica 8. Gráfica de barras de las concentraciones de plomo, cadmio y zinc (µg/g de tejido seco) en las muestras de
hígado (izquierda), riñón (centro) y pelo (derecha) de la población de zorros que formó el grupo de estudio.
74
Resultados y discusión
Por otra parte, un análisis estadístico de correlaciones bivariadas (Tabla 19), realizado para
medir la magnitud de relación lineal entre dos variables, mostró correlación positiva estadísticamente
muy significativa entre las concentraciones de los tres metales pesados en hígado, siendo
significativa la correlación entre las concentraciones de Pb en hígado y riñón, así como entre las de
Pb en riñón y Cd en pelo (en ambos casos, con p<0,05). También se observó correlación positiva y
estadísticamente significativa entre los valores de Pb en riñón y Cd en pelo (p<0,01). Es de destacar,
sin embargo, la correlación altamente significativa observada para el Pb y el Zn en el hígado
(p<0,001). En los restantes casos, tal como se puede comprobar en dicha Tabla 19, el coeficiente r de
correlación de Pearson está muy alejado de la unidad, por lo que la variabilidad común de ambas
2
variables (r ) es pequeña. Por tanto, ninguna de las variables restantes constituyentes de cada par es
capaz de predecir el valor de la otra, ni tampoco podemos pensar, en vista de estos resultados, que la
exposición a uno de los metales supone la exposición a otros.
El análisis de correlación bivariada entre los grupos establecidos al dividir los ejemplares
estudiados en grupos diferentes según su edad, sexo o hábitat de procedencia, debido a su interés
para este estudio, ha sido considerado en un apartado específico (5.3. Estudio de las correlaciones
entre los metales pesados, los diferentes tejidos y según los factores analizados). En el presente
apartado se aporta tan solo la tabla de correlaciones bivariadas de la población completa que formó el
grupo de estudio (257 ejemplares de ambos sexos, diferentes edades y procedentes de hábitat
distintos) para que sirva en el análisis preliminar que se realiza de los datos generales.
Por tanto, el valor medio de plomo más elevado fue cuantificado en el hígado (1,653 ± 1,884
mg/kg), siendo el tejido en el que mayor variabilidad se presentó, con un máximo de 5,984 mg/kg y un
mínimo por debajo del límite de detección (N.D.). El riñón fue el órgano que presentó el valor medio
más bajo (0,059 ± 0,097 mg/kg), con un máximo de 0,926 mg/kg, y donde se detectaron valores más
homogéneos. En el pelo, por su parte, se alcanzó un promedio de 0,423 ± 0,306 mg/kg, con un
máximo de 1,105 mg/kg. En todos los tejidos, los valores mínimos se situaron por debajo del límite de
detección. Respecto a la relación entre los contenidos de plomo en los diferentes tejidos, tal como se
ha referido anteriormente, solo existe correlación de Pearson significativa entre los valores de Pb en
hígado y riñón, con valor “r” negativo y próximo a cero (- 0,124), hecho relacionado con la especial
toxicocinética de este metal, de tal forma que su órgano de acumulación es el hígado, frente al riñón,
sin prácticamente capacidad acumulativa. Con respecto a estos valores de Pb, las concentraciones
75
Resultados y discusión
medias para riñón e hígado estaban situadas por debajo de los valores críticos respectivos de 15 y 5
ppm en peso seco, que se consideran como indicativo de la toxicosis en los mamíferos ( Ma, 1996),
incluso si no se han definido niveles específicos para el zorro. Sin embargo, conviene señalar que
concentraciones de plomo en el hígado situadas en el entorno de 25-35 ppm (peso seco) están
asociadas con signos clínicos evidentes de envenenamiento en otras especies de mamíferos
relacionadas (Ma, 1996). Hay que señalar que algún animal se ha encontrado ligeramente por encima
del límite considerado tóxico para el hígado, con un valor máximo de 5,98 ppm (peso seco), lo que
indica un riesgo posible y real de envenenamiento por plomo.
Pb Pb Pb Cd Cd Cd Zn Zn Zn
N=267
hígado riñón pelo hígado riñón pelo hígado riñón pelo
Cor. 1 -0,124 ª -0,063 -0,183ªª -0,103 -0,008 -0,231ªª -0,018 0,036
Pb Pearson
hígado Sig 0,048 0,311 0,003 0,099 0,896 0,000 0,780 0,565
(bilateral)
Cor. 1 -0,016 0,059 0,033 0,126ª 0,056 -0,021 -0,044
Pb Pearson
riñón Sig 0,796 0,345 0,596 0,043 0,375 0,739 0,481
(bilateral)
Cor. 1 0,016 0,078 0,095 0,017 -0,042 -0,017
Pb Pearson
pelo Sig 0,795 0,215 0,128 0,782 0,500 0,791
(bilateral)
Cor. 1 -0,082 -0,026 -0,035 -0,047 -0,009
Cd Pearson
hígado Sig 0,189 0,673 0,581 0,457 0,886
(bilateral)
Cor. 1 -0,032 0,086 -0,030 -0,096
Cd Pearson
riñón Sig 0,608 0,171 0,628 0,125
(bilateral)
Cor. 1 0,029 0,050 -0,075
Cd Pearson
pelo Sig 0,642 0,426 0,231
(bilateral)
Cor. 1 0,105 -0,021
Zn Pearson
hígado Sig 0,092 0,734
(bilateral)
Cor. 1 -0,004
Zn Pearson
riñón Sig 0,955
(bilateral)
Cor. 1
Zn Pearson
pelo Sig
(bilateral)
76
Resultados y discusión
Al comparar estos resultados con los obtenidos en otros estudios similares, realizados con el
zorro como bioindicador, como los efectuados en la región suiza de Zurich ( Dip et al., 2001) o en la
región de Zemplín en Eslovaquia (Piskorova et al., 2003) se observa que la distribución de los metales en
los diferentes tejidos sigue las mismas pautas que las aquí expuestas, aunque con algunas
diferencias. En cuanto al plomo en el hígado, el valor promedio obtenido en este estudio supera
ligeramente el detectado por Dip et al. (2001), situado en 1,20 ± 3,61 mg/kg, pero la variabilidad
observada en esta referencia fue de más del doble.
Las concentraciones hepáticas medias fueron significativamente más altas que las
cuantificadas en nutrias y visones de Canadá, donde los valores medios del hígado se encuentran en
el rango de 0,21 a 0,79 ppm en peso seco ( Harding et al., 1998). Estos valores ahora presentados
también fueron superiores a los detectados en el hígado de zorro ártico (Alopex lagopus), donde los
valores medios eran de 0,53 µg/g (Hoekstra et al., 2003), pero claramente inferiores a los 54,1 µg/g
observados en perros por López-Alonso et al. (2006). Dichas diferencias bien podrían suponer una
confirmación acerca de la idoneidad del uso del zorro y otros carnívoros domésticos y/o salvajes
como bioindicadores, pues los valores más bajos se localizarían en zonas supuestamente menos
expuestas a contaminaciones metálicas, mientras que los animales situados en zonas
antropogenizadas estarían expuestos a niveles marcadamente superiores. Conviene señalar, sin
embargo, que estos estudios se han centrado en especies diferentes, con lo cual este factor tan
importante de variabilidad ha de ser tenido en consideración.
Respecto al plomo en riñón, en esta investigación se han cuantificado valores inferiores a los
observados en la literatura de referencia. Por un lado Dip et al. (2001) situaron los valores de plomo
en este órgano en 0,57 ± 0,90 mg/kg, mientras que Piskorova et al. (2003) los situaron en 0,38 ± 0,17
mg/kg tanto para jabalí como para zorro respectivamente. Por último, para comparar los valores de
este metal en pelo con los resultados de otros estudios, han de tomarse en consideración otras
especies como el ciervo con 1,319 ppm o el jabalí con 2,270 ppm ( Gallego, 2006), de tal forma que en
ambos casos se cuantifican valores muy superiores a los aquí detectados.
Con respecto a estudios en otros cánidos salvajes, como es el caso del lobo, Gamberg y
Braune (1999) cuantificaron 0,56-1,95 ppm (peso seco) de este metal en muestras de riñón, y 0,11-
0,70 ppm (peso seco) en hígado. Es digno de resaltar que el valor máximo hepático cuantificado en
los lobos de Canadá se encuentra por encima de 5 ppm en peso seco, que es similar al valor máximo
obtenido en el presente estudio. Del mismo modo, Shore et al. (2001) identificaron las
concentraciones hepáticas de plomo en lobos rusos, llegando a un nivel máximo de 24,3 ppm en
peso seco (cerca de la concentración de residuos considerada umbral y asociada con signos clínicos
de intoxicación por plomo).
En el caso del cadmio, ha sido también el hígado el órgano en el que se han encontrado las
concentraciones medias más elevadas (1,206 ± 1,339 mg/kg), siendo también el tejido donde mayor
variabilidad se encontró. El valor máximo en este órgano fue de 9,900 mg/kg y el mínimo no alcanzó
77
Resultados y discusión
el límite de detección. En el riñón se obtuvieron valores medios de 0,874 ± 1,020 mg/kg, con un
máximo muy similar al encontrado en el hígado (9,586 mg/kg) y un mínimo de 0,002 mg/kg. En
cuanto al pelo, ha sido el tejido en el que se detectaron los valores medios más bajos (0,003 ± 0,019
mg/kg) y también con una menor variabilidad. El máximo en el pelo se situó en 0,180 mg/kg y el
mínimo en este caso tampoco superó el umbral de detección. El incremento de los niveles de Cd en
los tejidos renales frente a lo observado previamente con el Pb, refleja fielmente la especial
toxicocinética de este metal, con una gran capacidad de excreción a través del tejido renal. A pesar de
ello, y curiosamente, los valores más elevados siguen correspondiendo (aunque como se ha indicado
con poca diferencia) al tejido hepático.
Respecto a los estudios en otros países europeos sobre zorros, citados anteriormente al
considerar el plomo, en el caso del cadmio es posible encontrar matices importantes. Confrontándolos
con los datos cuantificados por Piskorova et al. (2003) de 0,25 ± 0,08 mg/kg de cadmio en riñón (no
considera los otros dos tejidos) los valores del presente estudio son ligeramente superiores, aunque
en ambos casos se sitúan por debajo de la unidad. Sin embargo, la distribución de las
concentraciones por tejidos difiere de la registrada por Dip et al. (2001), que encontraron mayores
valores medios en el riñón (1,45 ± 1,43 mg/kg) que en el hígado (0,52 ± 0,51 mg/kg). Se observa, por
tanto, que los valores respecto al cadmio encontrados en la bibliografía presentan disparidades entre
sí y respecto a los de nuestro estudio, seguramente como reflejo de los niveles circundantes de
contaminación ambiental a que estaban sometidos los animales considerados en cada estudio en
concreto.
El predominio de cadmio, tanto en el hígado como en el riñón del zorro, está en línea con
estudios anteriores en mamíferos, en los que se ha demostrado que el riñón alcanza concentraciones
críticas en comparación con otros órganos (D'Havé et al., 2006; Dodds-Smith et al., 1992; Cooke, 2011; Shore y
Douben, 1994), siendo el hígado un lugar secundario de acumulación cuando se excede la capacidad
del riñón. Estudios de biomonitorización similares con lobos han mostrado mayores niveles de cadmio
a los obtenidos en el presente estudio para el riñón, y menores para el hígado, encontrándose por
encima de 0,9 y 2,1 ppm en peso seco, respectivamente para el hígado y el riñón ( Gamberg y Braune,
1999). En concreto, en el tejido renal de los lobos de Idaho fueron cuantificadas mayores
concentraciones de cadmio renal (Hoffmann et al., 2010). Los resultados obtenidos con los zorros
españoles sugieren que los niveles observados se encuentran significativamente por debajo de los
niveles de toxicidad aguda (Puls, 1994). Siguiendo con este estudio comparativo con otras especies
animales similares al zorro objeto del presente estudio, los valores del cadmio en el hígado de zorros
de Galicia fueron marcadamente superiores a los reportados en una amplia gama de mamíferos
carnívoros de Canadá (0,1-0,3 ppm peso seco), Finlandia e incluso el sur de España (0,05 a 0,12
ppm peso seco) (Harding et al., 1998; Hoekstra et al., 2003; Hyvarinen et al., 2003; Millán et al., 2008a).
78
Resultados y discusión
el pelo, para poder así comparar los resultados. Tal vez este hecho se debe a las bajas
concentraciones de ese metal en la muestra; lo que dificulta su determinación, debe recordarse que
las concentraciones de cadmio en las muestras de pelo analizadas son muy bajas, en la gran mayoría
de casos situados por debajo del límite de detección (el 96,9% del total) y que sólo algunos
ejemplares poseían valores apreciables por lo que únicamente se pueden ofrecer los resultados para
compararlos con estudios futuros (Tabla 20).
Finalmente, el zinc es, como ya se ha indicado, el metal estudiado en esta tesis con mayores
concentraciones medias. Además, el tejido en el que se encuentran sus promedios y variabilidad más
altos es el pelo (148,3±26,92 mg/kg), con un máximo de 206,300 mg/kg y un mínimo de 93,220
mg/kg. De la misma forma que ocurría con el cadmio, no se dispone de valores de referencia para el
79
Resultados y discusión
zinc en pelo de zorros dentro de los estudios consultados, por lo cual para poder hacer alguna
comparación de los presentes resultados han de tenerse en consideración estudios realizados en
otras especies.
Como se ha indicado, el segundo tipo de tejido donde se encuentran valores medios de zinc
más altos es el hígado, con casi la mitad de los que se cuantificaban en pelo (76,54 ± 25,30 mg/kg),
así como un máximo de 164,80 mg/kg y un mínimo de 16,06 mg/kg. En tercer lugar, las
concentraciones medias más bajas de zinc se encontraron en el riñón (17,10 ± 7,00 mg/kg), con un
máximo de 37,63 mg/kg y un mínimo de 0,924 mg/kg. Esta distribución de las concentraciones
coincide con la recogida por Dip et al. (2001), que también encuentran mayores cantidades en el
hígado (44,90 ± 16,70 mg/kg) que en el riñón (21,20 ± 7,80 mg/kg). Para ambos tejidos, los valores
medios del presente estudio llevado a cabo en Galicia se encuentran dentro o muy próximos a sus
rangos de variación. Este elemento es el predominante también en el cabello humano, y resultados
similares se han observado en los erizos y en otras especies de micromamíferos ( D’Havé et al., 2006;
Miekeley et al., 1998).
80
Resultados y discusión
La literatura sobre el proceso de biomonitorización y los factores que influyen en los niveles
de contaminación de los tejidos suele distinguir entre factores internos o endógenos (edad, sexo,
alimentación...) y externos o exógenos (hábitat, estacionalidad, orografía, tipos de suelos y cultivos...)
(Hermoso de Mendoza et al., 2008).
En relación con lo anterior, cabe señalar que, según Travaini y Delibes (2006) en un estudio
realizado sobre ejemplares de zorro común en Doñana, el grado de dimorfismo sexual es pequeño y
sólo se produce entre ejemplares adultos. En Galicia, en un estudio realizado por Fidalgo et al. (2009)
se observó que entre los ejemplares muestreados, los machos presentaron un peso medio de 8,09 kg
y las hembras de 6,56 kg, lo cual supone que por término medio una hembra posee sólo el 81,09% de
la masa corporal del macho. Sin embargo, otro aspecto (bien conocido en algunas especies
domésticas) que se debe considerar, es la mayor necesidad de nutrientes de las hembras durante la
gestación y lactación lo cual, en nuestra opinión, condiciona un razonable mayor ingreso de alimentos
-incluso más indiscriminado en las épocas más críticas- en el caso de las hembras que en los
machos, lo que teóricamente facilita la ingesta de contaminantes. Desconocemos si este incremento
de necesidades de las hembras durante las épocas de reproducción compensarán o superarán las
diferencias de los machos por su mayor masa corporal (Tataruch y Kierdof, 2003).
En la tabla siguiente (Tabla 21) se reflejan los valores de Pb, Cd y Zn en hígado, riñón y pelo
para los dos grupos formados en razón del género (macho y hembra). De forma similar en la Gráfica
9 se muestran los resultados, refiriendo los percentiles al 10, 25, 50 (mediana), 75 y 90%, los valores
extremos y los valores atípicos.
81
Resultados y discusión
Tabla 21. Valores de concentración (expresados en ppm referido a peso seco) de plomo, cadmio y zinc en
muestras de hígado, riñón y pelo de zorro en función del sexo.
82
Resultados y discusión
Gráfica 9. Representación de cajas de las concentraciones de plomo, cadmio y zinc (µg/g de tejido seco) en los
subgrupos de machos y hembras. Las cajas indican los percentiles al 10, 25, 50 (mediana), 75 y 90%, los valores
o
extremos (*) y los valores atípicos ( ).
83
Resultados y discusión
Con respecto al sexo, pueden ser observados en la literatura resultados contradictorios con
variaciones entre especies, poblaciones, órganos o entre los distintos metales, e incluso en muchas
ocasiones no se detecta ningún efecto del sexo para alguno de los metales no sólo para pequeños
mamíferos (Fritsch et al., 2010; González et al., 2008; Sánchez-Chardi et al., 2007; Topolska, 2004), sino también para
cánidos y otras especies relacionadas (Dip et al., 2001; Hoekstra et al., 2003). Además, no es extraño que
uno de los géneros muestre niveles más altos de un metal en particular en el hígado, mientras que el
otro pueda mostrar niveles más altos en el riñón ( Beernaert et al., 2007; Gochfeld, 1997; Millan et al., 2008). Por
otra parte, puede ser que el patrón de género para los metales se complique por el estado
reproductivo y la época del año en que tenga lugar el muestreo ( Burger, 2007; Robillard et al., 2002), así
como las diferencias de género también podría estar asociadas a los hábitos de alimentación
diferencial entre machos y hembras, como se ha indicado ya, o la dinámica de metales diferentes,
cuestiones que deben ser aclaradas (Millán et al., 2008).
Sin embargo, y a pesar de lo anteriormente expuesto, la influencia del sexo en los niveles de
cadmio ha sido demostrada en varias especies en las que las hembras presentan concentraciones
más elevadas que los machos, posiblemente debido a que las hembras consumen más comida por
kilogramo de peso que los machos (Hermoso de Mendonza et al., 2011), aunque estas diferencias no suelen
ser significativas desde el punto de vista estadístico ( Tataruch y Kierdorf, 2003). Uno de los primeros
estudios que constataba este hecho se realizó en pelo de caballo (Equus caballus) (Anke et al.,1989).
Otro estudio posterior realizado también en pelo de caballo y tendente a determinar la influencia del
sexo, mostraba unas concentraciones medias de cadmio de 0,15 ± 0,13 μg/g en el caso de los
caballos y 0,09 ± 0,06 μg/g en las yeguas (Asano et al., 2002).
Diversos autores concluyen que no existe una clara influencia del sexo en la acumulación de
plomo (Tataruch y Kierdorf, 2003; Medvedev, 1999). Sin embargo, un trabajo ya referido realizado en pelo de
perro cuantificaba 1,77 ± 1,05 μg/g y 2,06 ± 1,14 μg/g de plomo en machos y hembras
respectivamente (Hayashi et al., 1981). Por su parte, un estudio en pelo de caballo observaba que las
concentraciones de plomo eran de 0,76 ± 0,28 μg/g para los caballos y 1,24 ± 1,28 μg/g en el caso de
las yeguas (Asano et al., 2002). Si bien los valores cuantificados en zorros y perros son relativamente
similares entre sí, no ocurre igual con los cuantificados en caballos y yeguas. Esto último era
presumible, pues tanto zorros como perros, debido a sus hábitos alimenticios, pudieran haber ingerido
presas, ya sean estas aves o pequeños mamíferos, que habían sido abatidas por cazadores y así,
incorporar dicho metal activamente a sus organismos (Mateo et al., 1998).
Por último, con respecto al zinc , es como ya se ha indicado, uno de los elementos esenciales
más abundantes en el organismo (Repetto, 1995), de ahí los elevados niveles cuantificados. Estudios
similares efectuados en perros cuantificaban 205,4 ± 39,7 μg/g de zinc en pelo perteneciente a los
machos y 210,2 ± 44,6 μg/g en hembras (Hayashi et al., 1981). El estudio posterior de Asano et al. (2002)
coincidía con estas observaciones, encontrando unas concentraciones de zinc en yeguas (92 ± 25
μg/g) superiores a las halladas en los caballos (88,0 ± 31 μg/g).
84
Resultados y discusión
Se han asumido
Pb en hígado 0,202 0,653 -0,758 255 0,449
varianzas iguales
Se han asumido
Pb en riñón 0,849 0,358 -0,264 255 0,792
varianzas iguales
Se han asumido
Pb en pelo 2,575 0,11 0,246 255 0,806
varianzas iguales
Se han asumido
Cd en hígado 0,733 0,393 0,665 255 0,507
varianzas iguales
Se han asumido
Cd en riñón 0,501 0,48 -0,131 255 0,896
varianzas iguales
Se han asumido
Cd en pelo 0,298 0,586 -0,259 255 0,796
varianzas iguales
Se han asumido
Zn en hígado 0,105 0,746 0,683 255 0,495
varianzas iguales
Se han asumido
Zn en riñón 0,082 0,775 0,593 255 0,554
varianzas iguales
Tabla 22. Diferencia de medias entre el grupo de machos y hembras para las concentraciones de Pb, Cd y Zn en
hígado, riñón y pelo. La tabla expresa os resultados del test “t” de Student para muestras independientes,
asumiendo en todos los casos varianzas iguales.
85
Resultados y discusión
En cuanto a la otra variable endógena considerada, la edad, hay que tener en cuenta que es
un factor ligado fuertemente a la cantidad de contaminante medido, pues determina, especialmente
cuando se trata de xenobióticos bioacumulables, la duración de la acumulación de éstos en el
organismo (Hermoso de Mendoza et al., 2008; 2011). No existe un consenso en la literatura sobre la
existencia de una pauta acumulativa de los metales conforme aumenta la edad, aunque en algunos
estudios se ha observado una tendencia al incremento con el paso de juvenil a adulto ( Pedersen y
Lierhagen, 2006). El mejor ejemplo de este fenómeno acumulativo, según algunos investigadores, es el
cadmio; sin embargo, en cuanto al plomo la edad no parece ser un factor importante ( Tataruch y Kierdorf,
2003).
En la tabla siguiente (Tabla 23) se pueden observar los valores de concentración de plomo,
cadmio y zinc (expresados en ppm referido a peso seco) de las muestras de hígado, riñón y pelo de
los diferentes grupos de edad de zorros considerados en el presente estudio. De forma similar, y tal
como se hizo antes para el factor sexo, en la Gráfica 10 se muestran los resultados, refiriendo los
percentiles al 10, 25, 50 (mediana), 75 y 90%, los valores extremos y los valores atípicos, atendiendo
al factor edad.
86
Resultados y discusión
Tabla 23. Valores de concentración (expresados en ppm referido a peso fresco) de plomo, cadmio y zinc en
muestras de hígado, riñón y pelo de zorro en función del grupo de edad.
87
Resultados y discusión
Gráfica 10. Representación de cajas de las concentraciones de plomo, cadmio y zinc (μg/g de tejido seco) en los
subgrupos de edad. Las cajas indican los percentiles al 10, 25, 50 (mediana), 75 y 90%, los valores extremos (*)
y los valors atípicos (º)
88
Resultados y discusión
Estadístico de Levene gl1 gl2 Sig. Estadístico de Welcha gl1 gl2 Sig.
a. Distribuidos en F asintóticamente.
Tabla 24. Prueba de Levene de homogeneidad de varianzas y pruebas robustas de igualdad de las medias de
Welch para los parámetros estudiados en los subgrupos establecidos según la edad (joven, adulto y geronte).
Como en el análisis anterior, se ha podido comprobar que para algunos de los parámetros
existen diferencias significativas entre las medias de al menos dos grupos, pero no es posible saber
qué grupos son los diferentes, por lo cual se procedió con un análisis posterior para contraste de
medias dos a dos (contrastes a posteriori o pruebas post hoc) empleando en este caso DMS como
contraste a posteriori. En la tabla de comparaciones múltiples DMS (Tabla 25), es posible comprobar
que las diferencias entre grupos que se identifican con ANOVA se producen entre los siguientes
grupos:
Grupos de jóvenes con adultos y de adultos con gerontes respecto al zinc en el pelo.
Antes de continuar, cabe introducir aquí una precaución respecto al análisis de la variable edad:
en la mayoría de los estudios publicados, la variable edad no aparece con sus valores individuales
sino con los valores medios de diferentes categorías de edad (heterogéneas internamente), por lo que
hay que tener presente la posibilidad de algunas distorsiones en los resultados (Gallego, 2006).
89
Resultados y discusión
Tabla 25. Comparaciones múltiples por el método Scheffé entre los grupos de edad para las concentraciones de
Pb, Cd y Zn en los tres tejidos estudiados. En esta tabla, para hacer más fácil su interpretación, se han eliminado
los datos relativos a los parámetros en los que no existían diferencias entre ningún grupo (ver tabla 23).
90
Resultados y discusión
Con respecto al plomo, un estudio realizado en perros ( Hayashi et al., 1981) mostraba
valores de 0,81 ± 0,25 μg/g en cachorros, 1,91 ± 0,74 μg/g en los individuos entre 2 y 4 años, 2,20 ±
1,02 μg/g en los individuos entre 5 y 7 años y 2,00 ± 1,2 μg/g en los individuos mayores de 7 años,
indicando, por tanto, un incremento progresivo a medida que el animal envejecía. En pelo de caballo
se obtuvieron concentraciones de 0,71 ± 0,02 μg/g (2 años), 1,13 ± 1,31 μg/g (3 años), 0,92 ± 0,36
μg/g (4 años) y 0,77 ± 0,29 μg/g (5 años) ( Asano et al., 2002), observándose también una tendencia a
concentrarse cada vez más en función de la edad (aunque no tan evidente). Volviendo al estudio
realizado en pelo de perros, éste concluía la no existencia de un patrón de acumulación del plomo en
función de la edad (Hayashi et al., 1981), como también podría afirmarse para los zorros en función de los
resultados obtenidos salvo en el caso del hígado. Coinciden estos resultados con otros autores que
afirman que la edad no parece ser un factor significativo en la acumulación del mismo en los tejidos
blandos, pero sí lo es en los tejidos calcificados del esqueleto debido a la prolongada vida media que
el plomo posee en los huesos (Tataruch y Kierdorf, 2003). Para este metal, si el aumento de las
concentraciones con la edad está bien establecido en los huesos, el principal sitio de almacenamiento
(90%) de plomo en los mamíferos, en algunos casos se ha demostrado una clara influencia de la
edad en los niveles de este metal pesado ( Hyvarinen et al., 2003; Millán et al., 2008b). No obstante, un
aumento con la edad en los tejidos blandos no se ha demostrado en otros mamíferos, como por
ejemplo roedores (Fritsch et al., 2010) y lobos (Hoffmann et al., 2010), o incluso los resultados han indicado lo
contrario (Beernaert et al., 2007).
Respecto al cadmio, no se encontró una pauta clara en función de la edad y tan sólo existen
diferencias significativas entre los grupos juvenil y geronte para el cadmio en riñón (Tabla 25). Pero
además, las concentraciones de cadmio en el riñón presentan una pauta decreciente, detectándose
entre los jóvenes los valores medios más altos (1,135 ± 1,370 mg/kg) y los más bajos en los gerontes
(0,588 ± 0,512 mg/kg) (Tabla 23). Por tanto, nuestros resultados difieren con los encontrados en la
bibliografía consultada, que en general afirma que el cadmio es el más típico de los metales pesados
cuyo contenido se incrementa con la edad. Numerosos estudios demuestran la existencia de una
relación positiva entre la edad y la acumulación del cadmio, sobre todo, en cuanto a órganos internos
se refiere, en riñones (Tataruck y Kierdorf, 2003) y en hígado (Nostrom et al., 1986; Braune et al., 1991; Dietz et al.,
2000). Los valores hallados en un estudio realizado en pelo de perros clasificados en cuatro grupos de
edad diferentes (menores de 1 año, 2-4 años, 5-7 años y mayores de 7) eran inferiores tanto en los
cachorros (0,39 ± 0,15 μg/g), como en los adultos (0,22 ± 0,11 μg/g), mientras que los valores más
91
Resultados y discusión
altos se cuantificaban en las edades intermedias (0,44 ± 0,29 μg/g y 0,56 ± 0,26 μg/g en los
individuos de 2-4 años y 5-7, respectivamente). Sin embargo, en ningún caso en este estudio
obtenían grados de significación (Hayashi et al., 1981).
Resultados similares a los obtenidos por nosotros se han observado otros estudios en zorro
común (Dip et al., 2001) y mustélidos (Harding et al., 1998; Hyvarinen et al., 2003), no sólo en el riñón, sino
también en el tejido hepático. Sin embargo, López-Alonso et al. (2007) observaron un aumento más
notable de cadmio renal en perros en los primeros años de la vida. El estudio realizado en pelo de
caballos jóvenes (2,3 4 y 5 años) obtenía unos valores de cadmio de 0,04 ± 0,00 μg/g (2 años), 0,11 ±
0,14 μg/g (3 años), 0,11 ± 0,14 μg/g (4 años) y 0,20 ± 0,06 μg/g (5 años) ( Asano et al., 2002), lo que
mostraría una ligera tendencia a concentrarse cada vez más en función de la edad. Hay que recordar,
como se mencionó anteriormente, que el cadmio suele presentarse en valores muy bajos en los
grandes carnívoros porque no se acumula en el músculo, tan abundante en la dieta de éstos ( Tataruck y
Kierdorf, 2003). Para este metal pesado, los efectos tanto de sexo como de edad sobre sus
acumulaciones ponen de relieve la necesidad de comparar animales de características similares o de
incluir estas dos variables en el análisis de datos para los posteriores estudios de biomonitorización.
Esta ausencia de diferencias en función de la edad para el zinc son contrarias a lo obtenido
en otros estudios centrados en los osos polares ( Dietz et al., 2000) y bovinos (López Alonso et al., 2000). La
ausencia de un claro efecto relacionado con la edad en la acumulación de zinc se ha indicado
anteriormente en un amplio espectro de especies ( Dip et al., 2001; Hoffmann et al., 2010; Hyvarinen et al., 2003;
Millan et al., 2008). Este hecho podría estar de acuerdo con las hipótesis que indican que, en niveles
bajos a moderados de exposición, ciertos mecanismos homeostáticos son eficientes para mantener
algunas concentraciones de metales esenciales dentro de un rango estrecho en el cuerpo de los
vertebrados (Beernaert et al., 2007; Milton et al., 2003). Es de destacar que para los elementos considerados
fisiológicos, Hunter et al. (1989) en sus investigaciones realizadas en distintos micromamíferos, como
Apodemus sylvaticus, Microtus agrestis y Sorex araneus, al igual que hicieron Milton y Johnson
(1999), confirmaron la no influencia del factor edad, de tal forma que el contenido de zinc en los
órganos parecía ser constante e independiente de su edad.
Un estudio realizado en pelo de caballos estableció unos valores de zinc de 86,0 ± 40,7 μg/g
(2 años), 81,6 ± 7,2 μg/g (3 años), 77,5 ± 32,5 μg/g (4 años) y 101,7 ± 14,9 μg/g (5 años) ( Asano et al.,
92
Resultados y discusión
2002). El trabajo de Zongping (2003) realizado en pelo de camellos adultos de China obtuvo valores de
146,9 ± 18,2 μg/g. Se trata, en todo momento, de resultados muy similares a los obtenidos en nuestra
investigación, pues los valores más altos se presentan en los ejemplares adultos y jóvenes, siendo
estos últimos los más elevados.
Puede señalarse aquí que la bibliografía consultada en ocasiones argumenta que la mayor
acumulación de metales pesados en los ejemplares jóvenes puede estar relacionada con su riesgo de
mayor exposición a los mismos, como consecuencia de su etología, al permanecer generalmente en
áreas más restringidas, mientras que los adultos suelen vagabundear por un área más amplia (Burger y
Gochfeld, 2001). Sin embargo, con las excepciones antes indicadas, los presentes resultados, tal como
se puede ver en las tablas anteriores, difieren de esa afirmación y, además, incluso se podría
hipotetizar con que los ejemplares adultos -sobre todo aquellos sin territorio establecido- están más
expuestos a posibles contaminaciones como consecuencia de su comportamiento vagabundeador y
el aprovechamiento de recursos marginales o poco habituales. Otros autores apuntan que las crías
pueden acumular y excretar de forma diferente los metales pesados debido a las diferencias en su
dieta, su fisiología y su tasa metabólica (Gallego, 2006). Por su parte, la distribución de cada metal por
tejidos en los tres grupos de edad responde a las pautas que ya se apuntaron respecto a los valores
generales establecidos para el grupo completo de animales estudiados, de la misma forma que
ocurría cuando dividíamos en grupo inicial en los dos grupos en razón del género (machos y
hembras).
Respecto a los resultados obtenidos para los grupos establecidos considerando de forma
conjunta los factores sexo y edad, en el presente apartado, aportaremos tan solo los valores de
plomo, cadmio y zinc en los diferentes grupos y las diferencias individuales entre los grupos,
considerando en un apartado especifico de la presente memoria de tesis doctoral, debido a su
importancia y necesaria profundidad del examen de los datos, el análisis estadístico específico, las
posibles diferencias entre ellos y su significado (apartado 5.4. Influencia del sexo, la edad y el ámbito
geográfico en los niveles de plomo, cadmio y zinc en el zorro).
En las tablas 26, 27 y 28 figuran los valores medios y desviación típica de las concentraciones
medias para los tres metales, plomo, cadmio y zinc respectivamente en los grupos completo de
ejemplares, así como en machos, y hembras según cada uno de los tres grupos etarios establecidos
(joven, adulto y geronte). De forma similar, en las Gráficas 11, 12 y 13 se muestras los resultados
específicos para el plomo, en las Gráficas 14, 15 y 16 para el cadmio, y en las Gráficas 17, 18 y 19
para el zinc.
93
Resultados y discusión
Tabla 26. Valores de concentración (expresados en ppm referido a peso seco) de plomo en las muestras de
zorro en función del sexo y la edad.
Gráfica 11. Distribución de las concentraciones de plomo (µg/g de tejido seco) en las
muestras de hígado en función de los dos factores (edad y sexo) considerados.
94
Resultados y discusión
95
Resultados y discusión
Tabla 27. Valores de concentración (expresados en ppm referido a peso seco) de cadmio en las muestras de zorro
consideradas en el presente estudio en función del sexo y de la edad.
Gráfica 14. Distribución de las concentraciones de cadmio (µg/g de tejido seco) en las muestras de hígado
en función de los dos factores (edad y sexo) considerados.
96
Resultados y discusión
Gráfica 15. Distribución de las concentraciones de cadmio (µg/g de tejido seco) en las muestras de riñón
en función de los dos factores (edad y sexo) considerados.
Gráfica 16. Distribución de las concentraciones de cadmio (µg/g de tejido seco) en las muestras de pelo
en función de los dos factores (edad y sexo) considerados.
97
Resultados y discusión
Tabla 28. Valores de concentración (expresados en ppm referido a peso seco) de zinc en las muestras de zorro
consideradas en el presente estudio en función del sexo y de la edad.
Gráfica 17. Distribución de las concentraciones de zinc (µg/g de tejido seco) en las muestras de
hígado en función de los dos factores (edad y sexo).
98
Resultados y discusión
Gráfica 18. Distribución de las concentraciones de zinc (µg/g de tejido seco) en las muestras de
riñón en función de los dos factores (edad y sexo).
Gráfica 19. Distribución de las concentraciones de zinc (µg/g de tejido seco) en las muestras de pelo
en función de los dos factores (edad y sexo.
99
Resultados y discusión
Como ya se ha comentado, el zorro habita todo tipo de ambientes pero muestra especial
predilección por zonas heterogéneas, de tal forma que aprovecha la proximidad de asentamientos
humanos para alimentarse. Este contacto con las poblaciones humanas y sus hábitos tróficos, entre
otros factores, lo sitúan de partida como un bioindicador idóneo. Por ello, ver el comportamiento que
presentan las concentraciones de los metales pesados según el hábitat en el que viven los animales
muestreados cobra especial relevancia para la biomonitorización. Como mamífero debería reflejar
fielmente la contaminación presente en su hábitat (en la comida, agua, suelo, aire...) ( Hermoso de
Mendoza et al., 2008; De la Casa, 2010).
Es sabido que en Galicia el zorro presenta densidades más elevadas en las zonas
periurbanas e inferior en las de monte (Tapia y Domínguez, 2003); sin embargo, dadas las características
del muestreo en el presente estudio no fue posible contar con una distribución proporcional a esta
realidad. No obstante, y hecha esta salvedad, el número de muestras conseguidas por cada hábitat
considerado sí permite llegar a conclusiones al respecto y observar el comportamiento de los metales
pesados según se trate de un entorno periurbano, agroforestal o de monte y, en definitiva, según su
proximidad a asentamientos humanos. Con estas consideraciones, los resultados relativos al
contenido de metales pesados en función del hábitat donde tuvo lugar el muestreo, son los que se
presentan en la Tabla 29 y en la Gráfica 20.
100
Resultados y discusión
Tabla 29. Valores de concentración (expresados en ppm referido a peso seco) de plomo, cadmio y zinc en
muestras de hígado, riñón y pelo en las muestras de zorro en función del hábitat.
101
Resultados y discusión
Gráfica 20. Representación de cajas de las concentraciones de plomo, cadmio y zinc (µg/g de tejido fresco) en
Gráfica 20. Representación de cajas de las concentraciones de plomo, cadmio y zinc (μ/g de tejido fresco) en los
subgrupos establecidos por el hábitat de procedencia (monte, agroforestal y periurbano). Las cajas indican los
percentiles al 10,25,50 (mediana),75 y 90%, los valores extremos (*) y los valores atípicos (º).los s
102
Resultados y discusión
Estadístico de Levene gl1 gl2 Sig. Estadístico de Welcha gl1 gl2 Sig.
Tabla 30. Prueba de Levene de homogeneidad de varianzas y pruebas robustas de igualdad de las medias de
Welch para los parámetros estudiados en los subgrupos establecidos según el hábitat de procedencia (monte,
agroforestal y periurbano).
Pasando a un análisis más detallado de los datos obtenidos, el plomo presenta sus mayores
promedios en el ámbito agroforestal (1,976 ± 2,117 mg/kg en hígado y 0,062 ± 0,078 mg/kg en riñón).
El hábitat de monte se sitúa entre los otros dos grupos en cuanto a niveles de plomo, detectándose
1,806 ± 1,919 mg/kg en hígado, 0,060 ± 0,120 mg/kg en riñón y 0,404 ±0,308 mg/kg en pelo. Donde
menores acumulaciones de plomo se producen es en el entorno periurbano con 0,604 ± 0,442 mg/kg
en hígado, 0,054 ± 0,029 en riñón; aunque sorprendentemente son estos ejemplares los que poseen
mayores cantidades de plomo en el pelo, seguramente reflejando una contaminación eminentemente
103
Resultados y discusión
aérea, más que alimentaria. Además, tal como se puede comprobar en la Tabla 31 sólo existen
diferencias entre los grupos de hábitat para las concentraciones de Pb en hígado y las diferencias son
entre el grupo periurbano y los otras dos, pero no entre los de monte y agroforestal.
Variable Diferencia de
(I) Ámbito (J) Ámbito Error típico Sig.
dependiente medias (I-J)
Tabla 31. Comparaciones múltiples por el método Scheffé entre los distintos hábitats para las concentraciones de
Pb, Cd y Zinc en los tejidos estudiados. En esta tabla, para hacer más fácil su comprensión, se han eliminado los
datos relativos a los parámetros en los que no existían diferencias entre ningún grupo (tabla 30).
104
Resultados y discusión
Las concentraciones más elevadas de cadmio se detectaron en el hígado de los zorros que
vivían en el monte (1,266 ± 1,502 mg/kg) y las menores en el pelo de los de ámbito periurbano (0,002
± 0,015 mg/kg). En general, es en el entorno periurbano dónde menos se acumula en los órganos
(1,055 ± 1,057 en hígado y 0,872 ± 0,692 en riñón). En el agroforestal encontramos
comparativamente los valores intermedios de acumulación en hígado (1,191 ± 1,187 mg/kg) y pelo
(0,003 ± 0,019 mg/kg) y los mayores en riñón (0,930 ± 1,285 mg/kg). Finalmente, en el monte se
detectaron los mayores promedios en hígado y pelo; éstos últimos muy similares a los demás grupos
(0,003 ± 0,021 mg/kg); y los menores en riñón (0,842 ± 0,932 mg/kg). Sin embargo, y a pesar de todo
lo anterior debemos tener presente que no existen diferencias estadísticas entre los grupos por las
concentraciones de cadmio en hígado, riñón o pelo, tal como se ha mostrado con anterioridad.
El zinc es, de nuevo, el metal pesado que muestra mayores diferencias entre los grupos
formados, en este caso de hábitat. De esta forma, el zinc en hígado se acumula más en los individuos
de zonas agroforestales (80,32 ± 24,64 mg/kg), luego en los de monte (78,68 ± 26,46 mg/kg) y, en
tercer lugar, en los que viven en zonas periurbanas (63,17 ± 17,91 mg/kg); existiendo diferencias
estadísticas entre el grupo periurbano y los otros dos grupos. En el riñón, por el contrario, las
menores concentraciones aparecen en el grupo agroforestal (16,34 ± 6,543 mg/kg), con valores
medios muy similares a los de monte, mientras en el entorno periurbano es donde se detectaron las
mayores concentraciones (20,17 ± 5,764 mg/kg) observándose también en este caso diferencias
entre el grupo periurbano y los otros dos. Por su parte, el zinc presenta los promedios más altos de
este metal en el pelo de los ejemplares de monte (151,9 ± 26,97 mg/kg), seguidos de los
agroforestales (147,9 ± 28,62 mg/kg) y, con menores concentraciones los periurbanos (138,1 ± 20,71
mg/kg), observándose diferencias sólo entre los grupos periurbano y de monte.
Si se cruza el factor entorno con la variable del género (Tablas 32 a 34), observamos de
nuevo que, grosso modo, existe una acumulación de metales pesados ligeramente superior en los
machos que en las hembras. Sin embargo, las hembras de zonas de monte acumulan aparentemente
más plomo en la mayoría de tejidos; las de zonas agroforestales más cadmio; y las de zonas
periurbanas más zinc. No existe, por tanto, una pauta excesivamente clara de acumulación de
metales pesados por hábitat al compararla entre sexos. No se puede decir que cuanto más urbano
sea el entorno se producen mayores acumulaciones. Esto es ocurre con mayor frecuencia en el caso
de las hembras (con el plomo en hígado y el cadmio en hígado) que en los machos (sólo ocurre con
el zinc en riñón); la situación contraria (mayores concentraciones cuanto más lejos de poblaciones
humanas) se detectó en más ocasiones en los machos (Pb en todos los tejidos y Zn en hígado y
pelo).
Considerando conjuntamente el hábitat con el sexo (Tablas 32, 33 y 34, así como Gráficas 28,
29 y 30 para el plomo, Gráficas 31, 32 y 33 para el cadmio, y Gráficas 34, 35 y 36 para el zinc),
observamos que los ejemplares juveniles que viven en entornos periurbanos se distinguen por ser los
que acumulan menores cantidades de plomo y mayores concentraciones de zinc. Respecto al plomo,
además, los juveniles presentan mayores valores medios conforme habitan más lejos de las áreas
105
Resultados y discusión
periurbanas. El cadmio, por su parte, se comporta de modo ligeramente diferente. El grupo más
homogéneo es el de ejemplares jóvenes en zonas agroforestales, que son los que presentan valores
más altos de este metal mientras que los jóvenes periurbanos poseen los valores medios más bajos.
Este aspecto sí concuerda con las conclusiones de Dip et al. (2001) que encontraron que los niveles
de cadmio eran más elevados en zonas suburbanas que urbanas. Finalmente, respecto al zinc,
también se observa que el grupo de jóvenes en zonas periurbanas es el que presenta menor
variabilidad interna y las mayores concentraciones en todos los hábitats. En los gerontes se
encuentra la tendencia contraria (en hígado y pelo) ya que es en las zonas periurbanas dónde
presentan menores concentraciones y en las de monte dónde son mayores.
Tabla 32. Valores de concentración (expresados en ppm referido a peso seco) de plomo en las muestras de
zorro consideradas en el presente estudio en función del sexo y del hábitat.
106
Resultados y discusión
Gráfica 21. Distribución de las concentraciones de plomo (µg/g de tejido seco) en las
muestras de hígado en función de los dos factores (sexo y hábitat) considerados.
Gráfica 22. Distribución de las concentraciones de plomo (µg/g de tejido seco) en las
muestras de riñón en función de los dos factores (sexo y hábitat) considerados.
107
Resultados y discusión
Gráfica 23. Distribución de las concentraciones de plomo (μg/g de tejido seco) en las
muestras de pelo en función de los dos factores (sexo y hábitat).
Tabla 33. Valores de concentración (expresados en ppm referido a peso seco) de cadmio en las
muestras de zorro consideradas en el presente estudio en función del sexo y del hábitat.
108
Resultados y discusión
Gráfica 24. Distribución de las concentraciones de cadmio (µg/g de tejido seco) en las muestras de hígado en
función de los dos factores (sexo y hábitat) considerados.
Gráfica 25. Distribución de las concentraciones de cadmio (µg/g de tejido seco) en las muestras de riñón en
función de los dos factores (sexo y hábitat).
109
Resultados y discusión
Gráfica 26. Distribución de las concentraciones de cadmio (µg/g de tejido seco) en las muestras de pelo en
función de los dos factores (sexo y hábitat).
Tabla 34. Valores de concentración (expresados en ppm referido a peso seco) de cadmio en
las muestras de zorro consideradas en el presente estudio en función de sexo y hábitat.
110
Resultados y discusión
Gráfica 27. Distribución de las concentraciones de zinc (µg/g de tejido seco) en las
muestras de hígado en función de los dos factores (sexo y hábitat).
Gráfica 28. Distribución de las concentraciones de zinc (µg/g de tejido seco) en las
muestras de riñón en función de los dos factores (sexo y hábitat).
111
Resultados y discusión
Gráfica 29. Distribución de las concentraciones de zinc (µg/g de tejido seco) en las muestras de pelo en función
de los dos factores (sexo y hábitat) considerados.
112
Resultados y discusión
Tabla 35. Valores de concentración (expresados en ppm referido a peso seco) de plomo en las muestras de
zorro consideradas en el presente estudio en función de la edad y del hábitat.
113
Resultados y discusión
Gráfica 31. Distribución de las concentraciones de plomo (µg/g de tejido seco) en las muestras
de riñón en función de los dos factores (edad y hábitat).
Gráfica 32. Distribución de las concentraciones de plomo (µg/g de tejido seco) en las
muestras de pelo en función de los dos factores (edad y hábitat).
114
Resultados y discusión
Tabla 36. Valores de concentración (expresados en ppm referido a peso seco) de cadmio en las muestras de
zorro consideradas en el presente estudio en función de la edad y del hábitat.
Gráfica 33. Distribución de las concentraciones de cadmio (µg/g de tejido seco) en las muestras de hígado en función
de los dos factores (edad y hábitat).
115
Resultados y discusión
Gráfica 34. Distribución de las concentraciones de cadmio (µg/g de tejido seco) en las muestras de riñón en función
de los dos factores (edad y hábitat).
Gráfica 35. Distribución de las concentraciones de cadmio (µg/g de tejido seco) en las muestras de pelo en función de
los dos factores (edad y hábitat).
116
Resultados y discusión
Tabla 37. Valores de concentración (expresados en ppm referido a peso seco) de zinc en las muestras de zorro
coconsiderad
as en el
presente
estudio en
función de la
edad y del
hábitat.
117
Resultados y discusión
m
u
e
s
t
r
a
s
d
e
h
í
gado en función de los dos factores (edad y hábitat).
G
r
á
118
Resultados y discusión
fica 37. Distribución de las concentraciones de zinc (µg/g de tejido seco) en las
muestras de riñón en función de los dos factores (edad y hábitat).
Gráfica 38. Distribución de las concentraciones de zinc (µg/g de tejido seco) en las
muestras de pelo en función de los dos factores (edad y hábitat).
119
Resultados y discusión
Pb en Pb en Pb en Cd en Cd en Cd en Zn en Zn en Zn en
hígado riñón pelo hígado riñón pelo hígado riñón pelo
Pb en hígado 1,000 -0,1237* -0,0634 -0,1831** -0,103 -0,0082 -0,2313** -0,0175 0,0361
Zn en pelo 1,000
Tabla 38. Coeficientes de correlación de Pearson en el grupo general de estudio. Se destaca en negrita si el
coeficiente de correlación es significativamente distinto de cero con nivel de significación del 5% (*) o del 1% (**).
120
Resultados y discusión
los órganos internos de los elementos esenciales han sido sólo ocasionalmente reportadas ( Ikemoto et
al., 2004). Una posible explicación para la ausencia de correlaciones para este elemento esencial
posiblemente se encuentre asociada a los niveles de exposición diferentes, pues al tratarse de un
elemento esencial puede, en cierta medida, ser regulado en los organismos vivos por mecanismos
homeostáticos (Talmage y Walton 1991). Como resultado, la excreción de zinc y otros elementos similares
a través del pelo, puede permanecer a un nivel bajo hasta que se alcanza una concentración umbral
adecuada.
Por su parte, al considerar las correlaciones entre los metales pesados en los distintos tejidos
dentro de cada subpoblación de estudio (dividida según los factores definidos previamente), se
encontraron algunos resultados realmente interesantes. Para una revisión completa de los
coeficientes de correlación véanse las Tablas 39, 40 y 41.
Pb en Pb en Pb en Cd en Cd en Cd en Zn en Zn en Zn en
hígado riñón pelo hígado riñón pelo hígado riñón pelo
* * **
Corr. Pearson 1,000 -,140 -,075 -,209 -,199 ,066 -,288 ,000 -,059
Pb en hígado
Sig. (bilateral) ,093 ,371 ,011 ,016 ,427 ,000 ,999 ,484
121
Resultados y discusión
Corr. Pearson -,109 1,000 ,075 ,131 -,067 ,093 -,033 -,106 ,092
Pb en riñón
Sig. (bilateral) ,254 ,372 ,117 ,425 ,266 ,696 ,204 ,274
Corr. Pearson -,046 -,129 1,000 ,039 ,032 ,105 -,021 -,017 -,081
Pb en pelo
Sig. (bilateral) ,631 ,174 ,641 ,707 ,207 ,803 ,841 ,331
Corr. Pearson -,149 -,012 -,016 1,000 -,079 ,004 -,023 ,003 ,031
Cd en hígado
Sig. (bilateral) ,117 ,901 ,867 ,344 ,958 ,779 ,971 ,708
*
Corr. Pearson -,018 ,113 ,132 -,086 1,000 -,070 ,164 -,059 -,117
Cd en riñón
Sig. (bilateral) ,854 ,236 ,167 ,370 ,406 ,049 ,485 ,163
Corr. Pearson -,088 ,156 ,086 -,056 -,003 1,000 ,115 ,041 -,059
Cd en pelo
Sig. (bilateral) ,359 ,100 ,367 ,558 ,972 ,167 ,622 ,484
Corr. Pearson -,154 ,158 ,074 -,053 ,012 -,065 1,000 ,159 ,016
Zn en hígado
Sig. (bilateral) ,105 ,095 ,436 ,581 ,897 ,498 ,056 ,847
Corr. Pearson -,035 ,073 -,081 -,109 -,004 ,061 ,030 1,000 ,036
Zn en riñón
Sig. (bilateral) ,711 ,447 ,395 ,252 ,964 ,525 ,753 ,666
*
Corr. Pearson ,160 -,197 ,081 -,060 -,079 -,094 -,074 -,057 1,000
Zn en pelo
Sig. (bilateral) ,091 ,037 ,397 ,530 ,410 ,327 ,436 ,551
*La correlación es significante al nivel 0,05 (bilateral). **La correlación es significativa al nivel 0,01
(bilateral).
Macho n= 145 Celdas marcadas en fondo azul.
Hembra n= 112 Celdas marcadas en fondo sepia.
Tabla 39. Correlaciones bivariadas de los valores medios de Pb, Cd y Zn en las muestras de la
subpoblación de machos (azul) y de hembras (sepia) que formaron el grupo de estudio.
En los grupos de hábitat, también aparecen algunas correlaciones con r algo más alta,
aunque su valor sigue siendo bajo. Las correlaciones observadas en estos grupos, tal como podemos
ver en la Tabla 41, no responden a ningún patrón que se repita en los diferentes grupos, metales o
122
Resultados y discusión
tejidos. Tampoco son correlaciones que recuerden la relación de los metales pesados estudiados en
otros grupos. Además, aunque el valor r es más elevado que en los grupos estudiados anteriormente,
en ningún caso alcanza el valor 0,500.
Las correlaciones más elevadas se obtienen al distinguir un nivel más dentro de los grupos,
esto es, observando las correlaciones dentro de los grupos de edad y sexo en los diferentes hábitats.
Debe mencionarse que el tamaño de los grupos es muy diferente y en algunos casos muy reducido,
situación que se debe tener en cuenta a la hora de interpretar los resultados y la fiabilidad de los
mismos. Analizando el conjunto de los resultados, resulta hasta cierto punto sorprendente que los
mismos metales pesados no poseen correlaciones bivariadas con ellos mismos en los diferentes
tejidos estudiados y sin embargo, especialmente el plomo se correlaciona con los otros dos. Tampoco
se observa una pauta de correlación en razón del género ni del grupo etario ni del hábitat, por lo que
aportamos en este apartado simplemente los datos resumidos de forma ordenada en la tabla
respectiva, con el fin de que nos permita completar la información y la influencia de los diferentes
factores empleados en segmentar el grupo de estudio los valoraremos mediante otros análisis
estadísticos en el apartado siguiente.
123
Resultados y discusión
Pb en Pb en Pb en Cd en Cd en Cd en Zn en Zn en Zn en
hígado riñón pelo hígado riñón pelo hígado riñón pelo
Corr. Pearson 1,000 -0,15 -0,230** -0,232** -0,037 0,032 -0,287** 0,054 0,028
Pb en hígado
Sig.(bilateral) 0,091 0,009 0,008 0,676 0,72 0,001 0,54 0,751
Corr. Pearson -0,045 1,000 -0,028 0,122 -0,002 -0,063 0,10 0,037 -0,033
Pb en riñón
Sig.(bilateral) 0,743 0,757 0,168 0,986 0,481 0,259 0,675 0,71
Corr. Pearson 0,234 0,055 1,000 -0,132 0,05 0,091 0,031 0,003 -0,096
Pb en pelo
Sig. (bilateral) 0,083 0,685 0,136 0,572 0,307 0,729 0,977 0,278
Corr. Pearson -0,237 0,078 0,235 1,000 -0,109 -0,034 -0,015 -0,01 0,084
Cd en hígado
Sig. (bilateral) 0,078 0,566 0,081 0,22 0,698 0,867 0,914 0,342
Corr. Pearson -0,196 -0,031 -0,062 0,043 1,000 -0,027 0,03 -0,116 -0,113
Cd en riñón
Sig. (bilateral) 0,148 0,818 0,648 0,754 0,759 0,736 0,19 0,203
Corr. Pearson -0,146 ,587** 0,09 -0,083 0,113 1,000 -0,095 -0,018 -0,08
Cd en pelo
Sig. (bilateral) 0,282 0,000 0,507 0,543 0,407 0,286 0,838 0,367
Corr. Pearson 0,191 -0,116 0,091 -0,075 -0,174 -0,042 1,000 0,009 0,112
Zn en hígado
Sig. (bilateral) 0,159 0,395 0,504 0,583 0,20 0,756 0,922 0,207
Corr. Pearson -0,074 -0,229 -0,144 -0,125 0,122 0,10 -0,134 1,000 -0,042
Zn en riñón
Sig. (bilateral) 0,586 0,09 0,29 0,357 0,372 0,465 0,323 0,637
Corr. Pearson -0,018 -0,151 -0,153 -0,143 0,014 -0,027 0,013 0,013 1,000
Zn en pelo
Sig. (bilateral) 0,895 0,268 0,262 0,293 0,921 0,841 0,925 0,925
*La correlación es significante al nivel 0,05 (bilateral). **La correlación es significativa al nivel 0,01 (bilateral).
Adultos n= 129 Celdas marcadas en fondo azul.
Geronte n= 56 Celdas marcadas en fondo sepia.
Tabla 40. Correlaciones bivariadas de los valores medios de Pb, Cd y Zn en las muestras de los subgrupos de
edad. Los valores correspondientes a los ejemplares adultos se representan sobre fondo azul y los gerontes
sobre fondo sepia. Los datos de los ejemplares jóvenes no se representan por no existir ninguna correlación
bivariada en ese subgrupo de población.
124
Resultados y discusión
Pb en Pb en Pb en Cd Cd en Cd en Zn en Zn en Zn en
hígado riñón pelo hígado riñón pelo hígado riñón pelo
Corr. Pearson 1,000 -0,456**
Pb en hígado
Sig. (bilateral) 0
Corr. Pearson -0,179* 1,000 0,234*
Pb en riñón
Sig. (bilateral) 0,039 0,037
Corr. Pearson 1,000 0,239* -0,493** -0,305*
Pb en pelo
Sig. (bilateral) 0,033 0,001 0,044
Corr. Pearson -0,264** 1,000 0,378*
Cd en hígado
Sig. (bilateral) 0,002 0,011
Corr. Pearson 1,000
Cd en riñón
Sig. (bilateral)
Corr. Pearson 1,000
Cd en pelo
Sig. (bilateral)
Corr. Pearson -0,241* 0,176* 1,000 0,223*
0,334*
Zn en hígado
Sig. (bilateral) 0,002 0,033 0,047
0,027
Corr. Pearson 1,000 0,443**
Zn en riñón
Sig. (bilateral) 0,003
Corr. Pearson 1,000
Zn en pelo
Sig. (bilateral)
*La correlación es significante al nivel 0,05 (bilateral).
Tabla 41. Correlaciones bivariadas de los valores medios de Pb, Cd y Zn en las muestras de los subgrupos
establecidos según el hábitat de procedencia. Los valores correspondientes a los ejemplares periurbanos se
representan sobre fondo amarillo, los de monte sobre fondo verde y los agroforestales sobre fondo gris. En
blanco y sin cifras cuando no existe ninguna correlación bivariada significativa.
125
Resultados y discusión
Por tanto, en este apartado del estudio se examina, mediante técnicas estadísticas, si los
factores sexo, edad y ámbito (hábitat) influyen o no en los niveles de las variables plomo, cadmio y
zinc que presentan los zorros, cada una de ellas determinada en hígado, riñón y pelo. El análisis se
basa en un el análisis de la varianza (ANOVA) factorial y los tests asociados. Este tipo de análisis se
caracteriza por contrastar una hipótesis nula por cada factor, y por cada posible combinación de
factores, que afirma que las medias de las poblaciones definidas por los niveles del factor son iguales
y que el efecto de la interacción entre factores también es nulo ( Hair et al., 2001). Si se rechaza esta
hipótesis, sabremos que existen las diferencias estadísticamente significativas que comentamos y,
por tanto, que los factores influyen en la acumulación de metales pesados. A continuación, se pueden
realizar pruebas post hoc (HSD de Tukey y DMS) para saber exactamente qué medias son diferentes
comparando cada par de poblaciones.
No obstante, para comenzar con este análisis el primer aspecto que se debe explorar es
cómo se distribuyen los valores de los factores que introduciremos en el análisis, cuál es el
comportamiento de la variabilidad de los metales en cada factor y si ésta nos puede indicar la
presencia de una relación.
Con una simple inspección visual de los gráficos de dispersión 3D de las Gráficas 39, 40 y 41
se observa que la mayor variabilidad del plomo se aprecia en el hígado y en el pelo, la del cadmio en
el hígado y en el riñón y, en el caso del zinc, se aprecia una variabilidad considerable tanto en el
hígado, como en el riñón y en el pelo, siendo en este último donde presenta una mayor variación.
126
Resultados y discusión
Todos estos aspectos podemos verificarlos en la tabla 19 donde se expresan los principales
estadísticos, que además, han sido tenidos en cuenta para fijar los ejes de los gráficos 3D de las
Gráficas 39, 40 y 41.
Si analizamos los gráficos de dispersión 3D por sexo (Gráfica 39), se observa que
aparentemente el sexo de los ejemplares no influye en ninguno de los factores considerados y así, en
los tres gráficos de esta figura, las hembras y machos se distribuyen de forma similar.
En la Gráfica 41 se aprecia que los zorros de ámbito periurbano presentan niveles bajos de
Pb en hígado (izquierda en la gráfica) y aunque no se percibe de forma tan clara, tienden a presentar
niveles bajos de Zn en hígado (derecha en la gráfica).
Si examinamos todas estas figuras en busca de relaciones entre variables podemos concluir
que no se aprecia relación alguna entre las variables consideradas. Si recordamos el examen de los
coeficientes de correlación de Pearson podemos verificar que no existe relación lineal entre ellas.
127
Resultados y discusión
Gráfica 39. Diagramas de dispersión 3D de las muestras en función del sexo. Las concentraciones de Pb, Cd y
Zn están expresadas en µg/g de tejido seco.
Gráfica 40. Diagramas de dispersión 3D de las muestras en función de la edad. Las concentraciones de Pb, Cd
y Zn están expresadas en µg/g de tejido seco.
Gráfica 41. Diagramas de dispersión 3D de las muestras en función del ámbito geográfico. Las concentraciones
de Pb, Cd y Zn están expresadas en µg/g de tejido seco.
128
Resultados y discusión
Para examinar con más detalle el efecto de los tres factores estudiados (sexo, edad y hábitat)
en las variables consideradas (concentraciones de los metales para cada tejido) se hizo uso de la
técnica de análisis de la varianza (Peña, 2002). Inicialmente se podría pensar en considerar los tres
factores, pero tras verificar que el efecto del sexo no es significativo (Tabla 42), con los resultados del
test Z de igualdad de medias para muestras grandes, según Lapin (1990). Por este motivo se
consideró un ANOVA factorial con dos factores: la edad y el ámbito. Los cálculos se realizaron con el
paquete estadístico SPSS 19 (Pardo y Ruiz, 2002).
n1 = 112 (hembras) Pb en Pb en Pb en Cd en Cd en Cd en Zn en Zn en Zn en
n2 = 145 (machos) hígado riñón pelo hígado riñón pelo hígado riñón pelo
p-valor 0,45 0,80 0,80 0,51 0,90 N.D. 0,49 0,55 0,84
Tabla 42. Resultados del test Z para muestras grandes de comparación de medias de ambos sexos para cada
una de las variables.
Detengámonos inicialmente, por tanto, en qué ocurre con el factor sexo. En el caso del
cadmio en el pelo las cantidades son tan pequeñas (trazas) o nulas que carece de sentido la
comparación de medias (se indica con la abreviatura N.D., no detectable). Mediante este test se
contrasta la hipótesis nula de que las medias de las concentraciones de los metales son iguales en
machos y hembras; y, por tanto, se está contrastando si el sexo de los zorros repercute en las
concentraciones de metales pesados. El resultado de contrastar esta hipótesis ofrece p-valores altos
(p>0,10) en todos los casos, por lo que según el test, los resultados no son estadísticamente
significativos (ha de aceptarse la hipótesis nula de igualdad de medias). Por tanto, el factor sexo no
se puede discriminar a partir de las concentraciones de metales pesados de los tejidos, es decir, el
sexo no influye en dichas acumulaciones.
De forma más visual y a modo de ejemplo, en la Gráfica 42 se recogen los gráficos de caja
por sexo correspondientes al zinc, en los que se puede apreciar que las diferencias no son
relevantes.
129
Resultados y discusión
Gráfica 42. Representación de cajas de las concentraciones de zinc (µg/g de tejido seco) en hígado, riñón y
pelo. Las cajas indican los percentiles al 10, 25, 50 (mediana), 75 y 90%, los valores extremos (*) y los valores
o
atípicos ( ).
Concentración de metal = Efecto de la edad + Efecto del hábitat + Efecto conjunto edad*hábitat + Error
Dado que el diseño es desequilibrado (diferentes tamaños de muestra para cada combinación
de los niveles de los factores) se utilizó la descomposición de la varianza basada en una suma de
cuadrados tipo III indicada para este tipo de diseño. Los resultados obtenidos se resumen, como se
puede observar, en la Tabla 43.
130
Resultados y discusión
Pb en Cd en Zn en
p-valor Pb en riñón Pb en pelo Cd en riñón Cd en pelo Zn en riñón Zn en pelo
hígado hígado hígado
Edad <0,001 0,959 0,142 0,652 0,104 N.D. <0,001 <0,001 0,002
Hábitat 0,001 0,981 0,721 0,879 0,724 N.D. 0,001 0,024 0,022
Interacción 0,46 0,827 0,132 0,443 0,578 N.D. 0,803 0,16 0,003
Levene <0,001 0,177 0,768 0,098 0,098 N.D. 0,226 0,208 0,006
Tabla 43. Resultados de los F test asociados al ANOVA factorial de dos factores (edad y hábitat). En la tabla se
expresan el p-valor del test de no efecto de los efectos principales de la edad y el hábitat y del test de no
interacción. La última línea incluye el p-valor del test de Levene de homogeneidad de varianzas.
Una vez se conoce qué casos son válidos en el modelo es posible interpretar sus resultados.
Respecto al efecto de la interacción edad x hábitat no es significativo (p>0,10) en todos estos casos
en los que según el test de Levene se admite la homocedasticidad. Por tanto, no se puede hablar de
que exista una influencia conjunta del hábitat y la edad en las concentraciones de metales pesados.
Fijándonos en los efectos principales, sólo existe un efecto significativo de la edad (p<0,001)
en el caso del zinc en el hígado y zinc en el riñón. El efecto del hábitat sólo resulta estadísticamente
significativo en los mismos casos, para el zinc en hígado p=0,001 y para el zinc en riñón p=0,024. En
este punto, estamos en condiciones de extraer una de las principales conclusiones de nuestro
estudio, fundamentadas estadísticamente. El zinc ha resultado ser el metal pesado más eficaz a la
hora de encontrar diferencias entre los grupos por edad y hábitat. No contamos con estudios
estrictamente comparables a este respecto, ya sea porque no se emplea la misma especie como
bioindicador, ya sea porque no se analizan los mismos metales o porque no se realizan test
estadísticos (como en uno de los estudios más importantes sobre el zorro realizado por Piskorova et
al. (2003)).
Por otra parte, también podemos concluir que las muestras de metales obtenidas en el pelo
no han permitido discriminar significativamente los grupos por edad y hábitat. En la misma línea, por
ejemplo, Hermoso de Mendoza et al. (2011) tampoco encontraron que el pelo pudiese discriminar de
forma significativa entre los niveles de metales pesados por sexo y edad en el lobo del norte de
España.
A partir de este momento, los análisis estadísticos sólo permiten seguir estudiando lo que
ocurre con el zinc en hígado y riñón. El modelo ANOVA ha confirmado la existencia de diferencias
significativas en estas variables según los factores edad y hábitat, ahora es conveniente investigar
qué medias de los diferentes grupos son distintas a través de diversas técnicas (englobadas bajo la
denominación de contrastes para comparaciones múltiples o pruebas post hoc) cuyo objeto es
identificar qué grupos son estadísticamente diferentes y en cuánto oscila el valor de esas diferencias.
131
Resultados y discusión
Existen evidencias muestrales para considerar significativa (al 5%) la diferencia de medias
entre juvenil y adulto, y entre juvenil y geronte, en ambos casos tanto con respecto al zinc en hígado
como con respecto al zinc en riñón. Se observa además que el grupo juvenil parece diferenciarse más
del grupo adulto que del geronte (diferencia mínima de 17,3592 frente a 9,1252 en el zinc en hígado,
y diferencia mínima de 2,2069 frente a 0,4616 en el zinc en riñón). Por tanto, como concluíamos en el
análisis de estadísticos descriptivos, el grupo juvenil es el que mejor se diferencia de los otros grupos
de edad y esas diferencias son mayores respecto a los ejemplares adultos que a los gerontes. Estos
resultados coinciden con los obtenidos en el estudio sobre lobos referido anteriormente ( Hermoso de
Mendoza et al., 2011) en el que encontraron que los valores más altos cuantificados pertenecen a los
individuos que son aún cachorros, siguiéndole los adultos y por último, los de edades intermedias.
En cuanto al ámbito, existen evidencias muestrales para considerar significativa (al 5%) la
diferencia de medias entre el grupo periurbano y el grupo de monte, y entre el grupo periurbano y el
grupo agroforestal, en ambos casos tanto con respecto al zinc en hígado como con respecto al zinc
en riñón. Las diferencias mínimas del grupo periurbano respecto al grupo de monte y respecto al
grupo agroforestal son similares, tanto para el zinc en hígado (6,2573 vs 7,1740) como para el zinc en
riñón 0,9061 vs 0,8838).
La identificación previa de los pares de grupos para los que la diferencia de medias es
significativa al 5% (sobre fondo destacado en las Tablas 44 y 45), permite establecer a modo de
conclusión del estudio los siguientes subgrupos homogéneos recogidos en la Tabla 46. Estos
subgrupos se comprobó además que coinciden con los determinados mediante el método de Tukey,
otro método de comparaciones múltiples, que permite superar las dificultades que surgen al aumentar
el número de grupos a comparar y no poderse controlar los falsos rechazos de la hipótesis nula de
igualdad de medias (Peña, 2002).
132
Resultados y discusión
Zn en el hígado Zn en el riñón
Tabla 44. Intervalos de confianza del 95% para las diferencias de medias según la edad (método de la mínima
diferencia significativa). Destacados el fondo en aquellos grupos para los que la diferencias de medias es
significativa al 5%.
Zn en el hígado Zn en el riñón
Tabla 45. Intervalos de confianza del 95% para las diferencias de medias según el ámbito (método de la mínima
diferencia significativa). Destacados el fondo en aquellos grupos para los que la diferencia de medias es
significativa al 5%.
Zn en el hígado Zn en el riñón
Grupos por edad Grupos por ámbito Grupos por edad Grupos por ámbito
G1 G2 G1 G2 G1 G2 G1 G2
Adulto y geronte Juvenil Periurbano Monte y agroforestal Adulto y geronte Juvenil Periurbano Monte y agroforestal
Tabla 46. Subgrupos homogéneos establecidos mediante el método de la mínima diferencia significativa.
133
Resultados y discusión
Gráfica 43. Distribución de medias en función de la edad y del ámbito para las variables Zn en hígado y Zn en el
riñón.
En definitiva, las comparaciones múltiples han permitido llegar a la conclusión de que las
concentraciones de zinc en hígado y riñón de los zorros muestreados son significativamente
diferentes entre el grupo adulto/geronte y el grupo juvenil, por un lado, y el grupo periurbano y el
monte/agroforestal, por otro.
Con el zinc en riñón, podemos distinguir los mismos grupos que en el otro tejido, sin embargo,
ahora las mayores concentraciones las encontramos entre los ejemplares juveniles del ámbito
periurbano y las menores en los individuos adultos de monte.
Una vez realizado el análisis para las variables que nos permitió el modelo ANOVA
inicialmente propuesto (aquellas para las que se podía asumir homogeneidad de varianzas), se
llevaron a cabo varias transformaciones en las variables para poder estudiar su comportamiento (en
las que no se podía suponer con heterocedasticidad), realizando análisis y contrastes sobre las
mismas. En la Tabla 43 veíamos que la heterocedasticidad (según el resultado del test de Levene) era
significativa para las variables plomo en hígado (p<0,001), y para el zinc en el pelo (p=0,006). En el
134
Resultados y discusión
caso del cadmio en el pelo, como ya se comentó, las cantidades son tan pequeñas o nulas que
carece de sentido utilizar el ANOVA (lo que se indicó en la Tabla 43 con la abreviatura N.D. de no
disponible).
Para buscar una transformación de las variables plomo en hígado y zinc en pelo que permita
lograr homocedasticidad, se utilizó como referencia el método de Box-Cox, habitualmente empleado
en estadística para corregir problemas de heterocedasticidad ( Peña, 2002). En primer lugar, la
transformación resultante para la variable zinc en el pelo viene dada por
Tabla 47. Análisis de la influencia sobre la variable Zn en pelo transformada, de la edad y el hábitat en
base a los F tests asociados al ANOVA factorial.
Se puede observar que los efectos de la edad y el hábitat, así como su interacción, son todos
significativos. Esto es, existen diferencias estadísticamente significativas entre los grupos etarios, los
grupos de hábitats y la interacción entre esos grupos, en los niveles de zinc en pelo de los zorros
estudiados. La interacción edad x ámbito se aprecia en los gráficos de medias para los grupos adulto
y geronte, que siguen un comportamiento similar respecto al hábitat (Gráfica 44).
Gráfica 44. Distribución de medias en función del ámbito para las variables Zn en el pelo y Zn en pelo
(transformada).
135
Resultados y discusión
Sin embargo, el comportamiento del grupo juvenil dista considerablemente del de los otros
dos. Esto sugiere, para evitar distorsiones, la necesidad de realizar un análisis de la variable Zn en
pelo transformada sin el grupo juvenil y, posteriormente, realizar un análisis del grupo juvenil por
separado.
Zn en el pelo (transformada)
Tabla 48. Intervalos de confianza del 95 % para las diferencias de medias según el hábitat (método de
la mínima diferencia significativa) determinados excluyendo al grupo juvenil.
En segundo lugar, para analizar el grupo juvenil en la variable zinc en el pelo, se utilizó el test
Z para muestras grandes, que contrasta de forma separada la igualdad de medias. Los resultados
obtenidos se recogen en la Tabla 49. Las diferencias entre juvenil y adulto son significativas
(p=0,0172), pero no hay diferencias significativas (p=0,1121) entre juvenil y geronte. Por último, al
igual que se observó ya en la Tabla 47 para la variable zinc en pelo transformada, el test Z aplicado a
zinc en pelo permite concluir que las diferencias entre adulto y geronte son estadísticamente
significativas.
n1 = 71 (juveniles)
n2 = 130 (adultos) Juvenil vs adulto Juvenil vs geronte Adulto vs geronte
n3 = 56 (gerontes)
Tabla 49. Resultados del test Z para muestras grandes de comparación de medias de los grupos de edad en
base al Zn del pelo.
136
Resultados y discusión
Con respecto al zinc en el pelo resta analizar la influencia del hábitat en el grupo juvenil. Los
resultados de los test asociados al ANOVA de un factor (el hábitat) se recogen en la Tabla 50. El test
de Levene permite admitir la homocedasticidad (p ≈ 0,10) y en base al F test del ANOVA no se
aprecian diferencias significativas (p = 0,342) entre los diferentes hábitats en el grupo juvenil.
Antes de entrar en los resultados del test, la inspección visual del gráfico de medias (Gráfica
45) permite apreciar que en esta variable influye la edad (los juveniles presentan valores medios
inferiores a los otros dos grupos de edad), e influye también el hábitat (los zorros periurbanos
presentan valores medios inferiores a los zorros de los otros dos ámbitos).
Gráfica 45. Distribución de medias en función de la edad y el ámbito para la variable Pb en el hígado.
137
Resultados y discusión
Los resultados de la comparación de los grupos de edad obtenidos se recogen en la Tabla 51.
Son significativas las diferencias entre juvenil y adulto (p<0,001) y entre juvenil y geronte (p<0,001),
como se apreciaba en la Gráfica 45. También en el caso del plomo, el grupo juvenil presenta una
acumulación de este metal que lo distingue claramente de los otros grupos etarios.
n1 = 71 (juveniles) T
n2 = 130 (adultos) Juvenil vs adulto Juvenil vs geronte Adulto vs geronte a
n3 = 56 (gerontes) b
n1 = 44 (periurbano)
n2 = 133 (monte) periurbano vs monte vs
periurbano vs monte
agroforestal agroforestal
n3 = 80 (agroforestal)
Tabla 52. Resultados del test Z para muestras grandes de comparación de medias de los grupos de ámbito
para la variable Pb en hígado.
Para finalizar este apartado, y debido a la multitud de pasos seguidos y de análisis realizados,
hemos considerado ilustrativo, a modo de conclusión, reflejar todas las fases de este análisis
estadístico y sus resultados en un diagrama (Gráfica 46)
138
Gráfica 46. Análisis estadísticos realizados y sus principales conclusiones
Resultados y discusión
140
CONCLUSIONES
141
142
Conclusiones
6. CONCLUSIONES
1ª.- Para los dos metales pesados tóxicos estudiados, Pb y Cd, las mayores concentraciones se
cuantificaron en el hígado, mientras que, como era de esperar, el pelo mostró la mayor concentración
de Zn.
2ª.- Las concentraciones de los metales pesados estudiados se encontraban por debajo de los límites
indicadores de intoxicación excepto en algunos casos aislados, en los que la concentración de Pb
hepático alcanzaba el valor crítico establecido como indicativo de toxicidad.
3ª.- En general, las correlaciones entre los metales pesados estudiados en las diferentes muestras
poseen escaso o nulo valor para poder predecir la evolución de una variable a partir de los datos
obtenidos de otra.
4ª.- La mayor acumulación de metales pesados en los zorros no está directamente relacionada con la
proximidad a zonas de mayor densidad de población humana y sus actividades domésticas
habituales de subsistencia, sino más bien con los aprovechamientos del suelo.
5ª.- La ausencia de diferencias significativas entre ambos grupos en función del sexo, así como la
falta de una pauta concreta de acumulación de metales pesados con relación a esta variable, indican
la posibilidad de excluir esta variable de futuros estudios de biomonitorización de metales pesados
con estos animales.
6ª.- Con respecto al factor edad, tan sólo las concentraciones de Pb en el hígado parecen mostrar
este efecto acumulativo, sin poderse comprobar este mismo patrón acumulativo dependiente de la
edad en el resto de los casos estudiados.
7ª.- En definitiva, a la vista de lo expuesto, es posible considerar al zorro (Vulpes vulpes) como un
modelo adecuado para la biomonitorización de los metales pesados en el medio natural. A este hecho
contribuye la relativa facilidad para la toma de un número adecuado de muestras, su amplia
distribución geográfica y sus características etológicas.
143
144
RESÚMENES
Resúmenes
7. RESÚMENES
7.1. RESUMEN
Para llevar a cabo el estudio, se han empleado 257 zorros procedentes de batidas de caza
autorizadas en las cuatro provincias gallegas. En el trabajo se han tenido en cuenta dos factores
endógenos, la edad y el sexo, para poder determinar la influencia de ellos sobre los niveles metálicos,
de cara a ver la necesidad de considerarlos en los futuros estudios de biomonitorización. También se
ha evaluado la influencia del factor constituido por el ámbito geográfico, para determinar la influencia
de la mayor o menor proximidad a actividades humanas en los niveles metálicos obtenidos.
Tras el procesamiento adecuado de las muestras, mediante una mineralización por vía
húmeda, para determinar las concentraciones de metales pesados se ha empleado la técnica
analítica de voltamperometría de redisolución anódica, sometiéndose los resultados obtenidos a un
completo estudio estadístico.
147
Resúmenes
148
Resúmenes
7.2. RESUMO
Tras o procesamento axeitado das mostras por mineralización húmida, para determinar as
concentracións de metais pesados foi empregada como técnica analítica a voltamperometría de
redisolución anódica, sometendo os resultados a un estudo estatístico completo.
149
Resúmenes
150
Resúmenes
7.3. ABSTRACT
In the current thesis, the concentrations of Pb, Cd and Zn in samples of different internal
organs of red foxes (Vulpes vulpes) from Galicia have been determined, indirectly, in order to assess
the levels of environmental pollution associated to those heavy metals in the geographical area
occupied by the considered animals. The use of the fox, is based on the fact that it is located at the top
of the food chain, being a suitable bioindicator of environmental pollution and more specifically for the
biomonitoring of heavy metals in the natural environment, also associated with certain physiological
and ecological characteristics of the species.
To carry out the study, 257 red foxes from authorized hunts in the four Galician provinces were
used. Two different endogenous factors, age and sex, have been considered, trying to determine their
influence on metal levels, in order to evaluate if they must be considered in future biomonitoring
studies. It was also evaluated the influence of the factor constituted by the geographical area, in order
to determine the influence of the degree of proximity to human activities in the metal levels obtained.
After appropriate processing of the samples by wet mineralization, the analytical technique of
anodic stripping voltammetry was used for the determination of the heavy metal concentrations,
submitting the results to a complete statistical study.
The highest concentrations of Pb and Cd were obtained in the liver, whereas those
corresponding to Zn were obtained on hair, however it is interesting to note that the concentrations of
the three metals were generally lower than the limits set as indicators of poisoning to animals, with the
exception of some cases, more specifically Pb, where for some liver samples the critical value
established as indicative of toxicity was reached.
Moreover, it was found that, contrary to what surely expected, the accumulation of heavy
metals in the different red fox samples was not directly related to the proximity to areas of high human
population density and normal household activities subsistence, but rather with the different land uses.
Regarding to both gender and age factors, it was found non-significant differences between
groups based on gender, so this variable could be excluded from future studies of biomonitoring of
heavy metals with foxes. With respect to age, only Pb concentrations in liver appeared to be directly
influenced by this endogenous factor, being impossible to observe the same pattern in the remaining
studied metals.
In conclusion, at the present study, a comprehensive study of the levels of heavy metals in red
fox has been developed, constituting a possible first step in the validation of this species as suitable
bioindicator in future studies of environmental monitoring.
151
Resúmenes
7.4. RESUMÉ
Dans cette thèse, nous avons déterminé les concentrations de Pb, Cd et Zn dans des
échantillons de différents organes internes du renard (Vulpes vulpes) provenant de la Galice, pour
indirectement évaluer les niveaux de pollution de l'environnement par ces métaux lourds dans la
région géographique occupée par les animaux considérés. L'utilisation de cette espèce d'étude, le
renard, est basée sur le fait de qu’elle se trouve au sommet de la chaîne alimentaire, ce qui en fait
potentiellement bio-indicateur approprié de pollution de l'environnement et plus particulièrement pour
la biosurveillance des métaux lourds dans l'environnement naturel aussi associée à certaines
caractéristiques physiologiques et écologiques des espèces.
Pour réaliser cette étude, nous avons utilisé 257 renards provenant d’expéditions de chasse
autorisées dans les quatre provinces galiciennes. Au travail, nous avons examiné deux facteurs
endogènes, l'âge et le sexe, afin de déterminer leur influence sur les niveaux de métaux, pour voir la
nécessité de tenir compte de ces deux facteurs dans les études de biosurveillance futures. Également
l'influence du facteur constitué par la zone géographique a été évaluée, afin de déterminer l'influence
du degré de proximité des activités humaines dans les niveaux de métaux obtenus.
Après un traitement approprié des échantillons par minéralisation humide, afin de déterminer
les concentrations de métaux lourds. La technique d'analyse de voltampérométrie inverse a été
employée, et après les résultats on été soumis à une étude statistique complète.
Les plus fortes concentrations de Pb et Cd étaient dans le foie, tandis que pour le Zn elles ont
été obtenues sur les cheveux, mais il est intéressant de noter que les concentrations des trois métaux
étaient généralement inférieures aux limites fixées en tant qu'indicateurs de l'intoxication animaux,
sauf dans certains cas rares, en particulier pour le Pb, où pour certains échantillons de foie les
concentrations ont atteint la valeur critique établie comme indicateur de toxicité.
En ce qui concerne les facteurs de sexe et d'âge, on a constaté des différences non
significatives entre les groupes en fonction du sexe, de sorte que cette variable pourrait être exclue de
futures études de biosurveillance des métaux lourds avec des renards. Par rapport à l'âge, seulement
les concentrations de Pb dans le foie semblent être influencées directement par ce facteur endogène,
étant impossible de voir clairement la même tendance cumulative dans les autres métaux étudiés.
153
Resúmenes
En conclusion, la présente étude a mis au point une étude approfondie des niveaux de
métaux lourds dans le renard, constituant une possible première étape dans la validation de cette
espèce comme biomarqueur approprié dans de futures études de surveillance de l'environnement.
154
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175
176
ANEXOS
177
Anexos
ÍNDICE DE GRÁFICAS
pág
Gráfica 1. Programa de temperaturas empleadas en el proceso de digestión ....................................58
Gráfica 2. Curvas obtenidas en los análisis voltamperométricos en dos muestras de hígado elegidas
al azar …………………………………………………………….......................................... ......................61
Gráfica 3. Linealidad de respuesta frente a distintas concentraciones de zinc ....................................63
Gráfica 4. Linealidad de respuesta frente a distintas concentraciones de plomo .................................63
Gráfica 5. Linealidad de respuesta frente a distintas concentraciones de cadmio ...............................63
Gráfica 6. Grupos de ejemplares estudiados clasificados por sexo y edad ..........................................70
Gráfica 7. Representación de los grupos de ejemplares estudiados clasificados según sexo y
hábitat de procedencia azar …………………………………………............................ ............................71
Gráfica 8. Gráfica de barras de las concentraciones de plomo, cadmio y zinc en las muestras
de hígado, riñón y pelo de la población de zorros que formó el grupo de estudio ................................74
Gráfica 9. Representación de cajas de las concentraciones de plomo, cadmio y zinc en los
subgrupos de machos y hembras .........................................................................................................83
Gráfica 10. Representación de cajas de las concentraciones de plomo, cadmio y zinc en los
subgrupos de edad …... .........................................................................................................................88
Gráfica 11. Distribución de las concentraciones de plomo en las muestras de hígado en funció
de los dos factores (edad y sexo) considerados ....................................................................................94
Gráfica 12. Distribución de las concentraciones de plomo en las muestras de riñón en función
de los dos factores (edad y sexo) considerados ...................................................................................95
Gráfica 13. Distribución de las concentraciones de plomo en las muestras de pelo en función
de los dos factores (edad y sexo) considerados ...................................................................................95
Gráfica 14. Distribución de las concentraciones de cadmio en las muestras de hígado en
función de los dos factores (edad y sexo) considerados ......................................................................96
Gráfica 15. Distribución de las concentraciones de cadmio en las muestras de riñón en función
de los dos factores (edad y sexo) considerados ....................................................................................97
Gráfica 16. Distribución de las concentraciones de cadmio en las muestras de pelo en función
de los dos factores (edad y sexo) considerados ...................................................................................97
Gráfica 17. Distribución de las concentraciones de zinc en las muestras de hígado en función
de los dos factores (edad y sexo) considerados ...................................................................................98
Gráfica 18. Distribución de las concentraciones de zinc en las muestras de riñón en función de
los dos factores (edad y sexo) considerados .........................................................................................99
Gráfica 19. Distribución de las concentraciones de zinc (µg/g de tejido seco) en las muestras
de pelo en función de los dos factores (edad y sexo) considerados ....................................................99
179
Gráfica 20. Representación de cajas de las concentraciones de plomo, cadmio y zinc en los
subgrupos establecidos por el hábitat de procedencia (monte, agro-forestal y periurbanos) ........... 102
Gráfica 21. Distribución de las concentraciones de plomo en las muestras de hígado en función
de los dos factores (sexo y hábitat) considerados ............................................................................. 107
Gráfica 22. Distribución de las concentraciones de plomo en las muestras de riñón en función
de los dos factores (sexo y hábitat) considerados ............................................................................. 107
Gráfica 23. Distribución de las concentraciones de plomo en las muestras de pelo en función
de los dos factores (sexo y hábitat) considerados ............................................................................. 108
Gráfica 24. Distribución de las concentraciones de cadmio en las muestras de hígado en
función de los dos factores (sexo y hábitat) considerados ................................................................. 109
Gráfica 25. Distribución de las concentraciones de cadmio en las muestras de riñón en función
de los dos factores (sexo y hábitat) considerados ............................................................................. 109
Gráfica 26. Distribución de las concentraciones de cadmio en las muestras de pelo en función
de los dos factores (sexo y hábitat) considerados .............................................................................. 110
Gráfica 27. Distribución de las concentraciones de zinc en las muestras de hígado en función
de los dos factores (sexo y hábitat) considerados .............................................................................. 111
Gráfica 28. Distribución de las concentraciones de zinc en las muestras de riñón en función de
los dos factores (sexo y hábitat) considerados ................................................................................... 111
Gráfica 29. Distribución de las concentraciones de zinc en las muestras de pelo en función de
los dos factores (sexo y hábitat) considerados ................................................................................... 112
Gráfica 30. Distribución de las concentraciones de plomo en las muestras de hígado en función
de los dos factores (edad y hábitat) considerados .............................................................................. 113
Gráfica 31. Distribución de las concentraciones de plomo en las muestras de riñón en función
de los dos factores (edad y hábitat) considerados .............................................................................. 114
Gráfica 32. Distribución de las concentraciones de plomo en las muestras de pelo en función
de los dos factores (edad y hábitat) considerados .............................................................................. 114
Gráfica 33. Distribución de las concentraciones de cadmio en las muestras de hígado en
función de los dos factores (edad y hábitat) considerados ................................................................. 115
Gráfica 34. Distribución de las concentraciones de cadmio en las muestras de riñón en función
de los dos factores (edad y hábitat) considerados .............................................................................. 116
Gráfica 35. Distribución de las concentraciones de cadmio en las muestras de pelo en función
de los dos factores (edad y hábitat) considerados ............................................................................... 116
Gráfica 36. Distribución de las concentraciones de zinc en las muestras de hígado en función
de los dos factores (edad y hábitat) considerados ............................................................................... 117
Gráfica 37. Distribución de las concentraciones de zinc en las muestras de riñón en función de
los dos factores (edad y hábitat) considerados ................................................................................... 118
Gráfica 38. Distribución de las concentraciones de zinc en las muestras de pelo en función de
los dos factores (edad y hábitat) considerados .................................................................................... 118
Anexos
Gráfica 39. Diagramas de dispersión 3D de las muestras en función del sexo .................................127
Gráfica 40. Diagramas de dispersión 3D de las muestras en función de la edad .............................127
Gráfica 41. Diagramas de dispersión 3D de las muestras en función del ámbito geográfico .............127
Gráfica 42. Representación de cajas de las concentraciones de zinc en hígado, riñón y pelo .........129
Gráfica 43. Distribución de medias en función de la edad y del ámbito para las variables Zn en
hígado y Zn en el riñón ........................................................................................................................133
Gráfica 44. Distribución de medias en función del ámbito para las variables Zn en pelo y Zn en
pelo (transformada) ..............................................................................................................................134
Gráfica 45. Distribución de medias en función de la edad y el ámbito para la variable Pb en el
hígado 136
Gráfica 46. Análisis estadísticos realizados y sus principales conclusiones .......................................138
181
ÍNDICE DE MÁGENES
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Imagen 1. Distribución de los yacimientos españoles con fósiles de zorro ......................................... 13
Imagen 4. Recepción de los zorros en la zona de batida: toma de datos, inspección veterinaria,
selección previa, identificación individual, y determinación de la edad ................................................ 55
Imagen 6. a) Bloque digestor Technicon BD-40 con controlador de temperatura Technicon BD-
20/40, (b) Procesador 746-VA Trace Analyser, (c) Puesto de trabajo 747-VA Stand, (d)
Automuestreador 813 Compact Autosampler ...................................................................................... 59
Anexos
ÍNDICE DE TABLAS
pág
Tabla 1. Géneros de la familia Canidae ................................................................................................ 11
Tabla 2. Clasificación taxonómica del zorro ...........................................................................................12
Tabla 3. Alimentos ingeridos por el zorro ..............................................................................................20
Tabla 4. Tipos de bioindicadores ..........................................................................................................26
Tabla 5. Contenido en metales pesados cuantificados en diferentes especies de mamíferos
terrestres mediante métodos destructivos ............................................................................................33
Tabla 6. Propiedades fisicoquímicas del Zinc ........................................................................................41
Tabla 7. Propiedades fisicoquímicas del plomo .....................................................................................44
Tabla 8. Propiedades fisicoquímicas del cadmio ...................................................................................48
Tabla 9. Características del segmento de medida del Zn-Cd-Pb en el voltamperímetro Metrohm .......60
Tabla 10. Condiciones de realización de la técnica de adición de patrón estándar .............................61
Tabla 11. Concentraciones de Cd, Pb y Zn en muestra certificada de músculo bovino liofilizado
del BCR (referencia nº 184) ...................................................................................................................62
Tabla 12. Porcentaje de recuperación de metales pesados en muestra certificada ............................62
Tabla 13. Límites de detección de la metodología analítica empleada en el presente estudio ............... 64
Tabla 14. Clasificación en grupos en función del sexo de los zorros estudiados .................................69
Tabla 15. Clasificación en grupos en función de la edad de los zorros estudiados .............................70
Tabla 16. Clasificación en grupos en función del hábitat de los zorros estudiados .............................71
Tabla 17. Composición del grupo de estudio en función del sexo, edad y hábitat ...............................72
Tabla 18. Valores globales de concentración de plomo, cadmio y zinc en muestras de hígado,
riñón y pelo en las muestras de zorro consideradas en el presente estudio ........................................73
Tabla 19. Correlaciones bivariadas de los tres metales pesados estudiados en los diferentes
tejidos considerados ..............................................................................................................................76
Tabla 20. Tabla de frecuencias de las concentraciones de Cd en muestras de pelo ............................79
Tabla 21. Valores de concentración de plomo, cadmio y zinc en muestras de hígado, riñón y
pelo en las muestras de zorro consideradas en el presente estudio en función del sexo ....................82
Tabla 22. Diferencia de medias entre el grupo de machos y hembras para las concentraciones
de Pb, Cd y Zn en hígado, riñón y pelo ..................................................................................................85
183
Pág
Tabla 23. Valores de concentración de plomo, cadmio y zinc en muestras de hígado, riñón y
pelo en las muestras de zorro consideradas en el presente estudio en función del grupo de
edad .......................................................................................................................................... 87
Tabla 24. Prueba de Levene de homogeneidad de varianzas y pruebas robustas de igualdad de
las medias de Welch para los parámetros estudiados en los subgrupos según la edad ................... 89
Tabla 25. Comparaciones múltiples por el método Scheffé entre los grupos de edad para las
concentraciones de Pb, Cd y Zn en los tres tejidos estudiados ........................................................... 90
Tabla 26. Valores de concentración de plomo en las muestras de zorro consideradas en el
presente estudio en función del sexo y de la edad .............................................................................. 94
Tabla 27. Valores de concentración de cadmio en las muestras de zorro consideradas en el
presente estudio en función del sexo y de la edad .............................................................................. 96
Tabla 28. Valores de concentración de zinc en las muestras de zorro consideradas en el
presente estudio en función del sexo y de la edad ............................................................................... 98
Tabla 29. Valores de concentración de Pb, Cd y Zn en muestras de hígado, riñón y pelo en las
muestras de zorro consideradas en el presente estudio en función del hábitat ................................ 101
Tabla 30. Prueba de Levene de homogeneidad de varianzas y pruebas robustas de igualdad de
las medias de Welch para los parámetros estudiados en los subgrupos establecidos según el
hábitat 103
Tabla 31. Comparaciones múltiples por el método Scheffé entre los distintos hábitats para las
concentraciones de Pb, Cd y Zn en los tejidos estudiados ................................................................. 104
Tabla 32. Valores de concentración de plomo en las muestras de zorro consideradas en el
presente estudio en función del sexo y del hábitat ............................................................................ 106
Tabla 33. Valores de concentración de cadmio en las muestras de zorro consideradas en el
presente estudio en función del sexo y del hábitat estudiados .......................................................... 108
Tabla 34. Valores de concentración de zinc en las muestras de zorro consideradas en el
presente estudio en función del sexo y del hábitat ............................................................................. 110
Tabla 35. Valores de concentración de plomo en las muestras de zorro consideradas en el
presente estudio en función de la edad y del hábitat .......................................................................... 113
Tabla 36. Valores de concentración de cadmio en las muestras de zorro consideradas en el
presente estudio en función de la edad y del hábitat .......................................................................... 115
Tabla 37. Valores de concentración de zinc en las muestras de zorro consideradas en el
presente estudio en función de la edad y del hábitat .......................................................................... 117
Tabla 38. Coeficientes de correlación de Pearson en el grupo general de estudio ........................... 119
Tabla 39. Correlaciones bivariadas de los valores medios de Pb, Cd y Zn en las muestras de la
subpoblación de machos y de hembras que formaron el grupo de estudio ...................................... 121
Tabla 40. Correlaciones bivariadas de los valores medios de Pb, Cd y Zn en las muestras de
los subgrupos de edad ........................................................................................................................ 123
Anexos
Tabla 41. Correlaciones bivariadas de los valores medios de Pb, Cd y Zn en las muestras de
los subgrupos establecidos según el hábitat ........................................................................................124
Tabla 42. Resultados del test Z para muestras grandes de comparación de medias de ambos
sexos para cada una de las variables .................................................................................................128
Tabla 43. Resultados de los F test asociados al ANOVA factorial de dos factores (edad y
ámbito) .........................................................................................................................................130
Tabla 44. Intervalos de confianza del 95% para las diferencias de medias según la edad
(método de la mínima diferencia significativa) ....................................................................................132
Tabla 45. Intervalos de confianza del 95% para las diferencias de medias según el ámbito
(método de la mínima diferencia significativa) ....................................................................................132
Tabla 46. Subgrupos homogéneos establecidos mediante el método de la mínima diferencia
significativa …. .....................................................................................................................................132
Tabla 47. Análisis de la influencia sobre la variable Zn en pelo transformada, de la edad y el
hábitat en base a los F tests asociados al ANOVA factorial ................................................................134
Tabla 48. Intervalos de confianza del 95% para las diferencias de medias según el hábitat
(método de la mínima diferencia significativa) determinados excluyendo al grupo juvenil ................135
Tabla 49. Resultados del test Z para muestras grandes de comparación de medias de los
grupos de edad en base al Zn en el pelo ............................................................................................135
Tabla 50. Análisis de la influencia del hábitat en el Zn en el pelo basado en el ANOVA de un
factor (el hábitat) …………….... ...........................................................................................................136
Tabla 51. Resultados del test Z para muestras grandes de comparación de medias de los
grupos de edad para la variable Pb en hígado ...................................................................................137
Tabla 52. Resultados del test Z para muestras grandes de comparación de medias de los
grupos de ámbito para la variable Pb en hígado pelo ...........................................................................13
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