UNIVERSIDAD NACIONAL

SAN ANTONIO ABAD

DEL CUSCO

FACULTAD: CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL: FARMACIA Y BIOQUIMICA
DOCENTE: ZANY SIGRID FRISANCHO TRIVEÑO
CURSO: LOABORATORIO ANALISIS CLINICO II

PRUEBAS DE ANTIBIOGRAMA YMEDIOS DE

CULTIVO

ALUMNOS:
CCAHUANTICO MAMANI EDGAR LINO
PANIAGUA PANIAGUA REYNA MARGARITA
SENCA RODRIGUEZ ROXANA
HALANOCCA QUISPE YESICA
 INTRODUCCION

En el manejo clínico de la enfermedad infecciosa es indispensable la identificación del agente causal con el
objeto de hacer un control terapéutico, en lo posible, específico. Tratándose de entidades de orígen
bacteriano, este concepto es aún más estricto, toda vez que el médico cuenta con gran cantidad de agentes
antimicrobianos de los cuales debe seleccionar aquéllos que además de su fácil administración, buena
penetración y baja toxicidad sean realmente activos contra el microorganismo causal

(1). Estas consideraciones implican que el médico, además del buen conocimiento y comando de los aspectos
clínicos, conozca en profundidad los antimicrobianos y su farmacología, ordene el aislamiento e
identificación del agente etiológico y su sensibilidad frente a dichos antimicrobianos cuando éllo sea
necesario; esto permitirá establecer un manejo más confiable evitando su uso indiscriminado y la posibilidad
de seleccionar cepas bacterianas resistentes, peligro cada vez más creciente como lo destacan investigadores
de la genética bacteriana en reciente declaración mundial,

2). Para que los estudios de sensibilidad de los microorganismos a los antibióticos tengan aplicación y validez
clínica, es necesario que los procedimientos de laboratorio que la investigan sean confiables. La experiencia
mundial en el campo demuestra que es necesario una normalización de su metodología

(3). El presente trabajo, tiene por objeto dar las directrices para la correcta realización e interpretación del
antibiograma de disco que constituye el sistema más comunmente utilizado para microorganismos de
crecimiento rápido,

(4). El seguimiento estricto de estas directrices asegura al laboratorio la realización correcta del antibiograma
y al médico un resultado confiable para el manejo de su paciente. La prueba de sensibilidad utilizando el
procedimiento del disco es una modificación de la técnica descrita por Bauer, Kirby, Sherris y Turk

(5); es la técnica que se recomienda para los laboratorios clínicos. La prueba es rápida, práctica y
reproducible

(6, 7, 8). Los procedimientos de diluciones en agar o diluciones en caldo para determinar la concentración
inhibitoria mínima (CIM) de los antimicrobianos son también procedimientos satisfactorios.

Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de

microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio
de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias.
Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones extremas de pH,
temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los
requerimientos más importantes para su desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de
carbono e hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento
específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros.
 INDICE Pag

PRUEBA DE ANTIBIOGRAMA ……………………………………………………… 1

 PRUEBA ANTIBIOGRAMA, EXAMEN DE CULTIVO DE ORINA (UROCULTIVÓ) Y PRUEBAS
BIOQUÍMICAS (TSI, LIA, CITRATRO, URIA)

PRUEBA DE ANTIBIOGRAMA:
OBJETIVO

 Obtener la sensibilidad de una bacteria a un grupo de antibióticos.

 Obtención del antibiótico como su tratamiento
FUNDMENTOS TEORICOS:

El antibiograma es la prueba microbiológica que se realiza para determinar la susceptibilidad (sensibilidad o

resistencia) de una bacteria a un grupo de antibióticos. Las técnicas de antibiograma son las utilizadas en el
laboratorio de microbiología para estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos
responsables de las infecciones.

La determinación de la Concentración Mínima Inhibidora (CMI) es la medida de la sensibilidad de una

bacteria a un antibiótico. Es la mínima cantidad de antimicrobiano que es capaz de impedir el crecimiento de
un microorganismo en unas condiciones normalizadas. Es el método habitual utilizado en los laboratorios de
Microbiología Clínica. Para llevarlo a cabo es necesario utilizar cepas control (de referencia) con el fin de que
los resultados sean reproducibles y comparables. Este método nos ofrece información sobre la sensibilidad
de las bacterias S (sensible), I (intermedia) y R (resistente).

Sensible: si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso de un tratamiento a la dosis
habitual.

Resistente: si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy reducida. No es de esperar ningún efecto
terapéutico sea cual fuere el tipo de tratamiento.

Intermedia: cuando el éxito terapéutico es imprevisible. Se puede conseguir efecto terapéutico en ciertas
condiciones (fuertes concentraciones locales o aumento de la posología).

Se considera como antimicrobiano a una sustancia con capacidad de matar o al menos de inhibir el
crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de utilización como tratamiento en los pacientes.
Pueden ser naturales, sintéticos o semisintéticos (modificación química de un compuesto natural.

La utilidad básica del antibiograma es la instauración de un tratamiento antibiótico correcto al paciente.

Existen diferentes técnicas de laboratorio que permiten medir o calcular de forma rutinaria y de manera
semicuantitativa, las CIM (métodos manuales y métodos automatizados o semiautomatizados). Se puede
realizar mediante:

 Difusión en agar: Disco placa y E test

 Dilución: Medio sólido y Medio líquido (micro/macrodilución)
 Mecanizados y Automatizados

La Concentración Mínima Bactericida (CMB) es la mínima cantidad de antibiótico capaz de destruir el 99,9%
de una muestra inoculada en condiciones estandarizadas.

MATERIALES:
  Vernier o Regla.
 Pinza punta plana
 Placas Petri
 Erlenmeyer
 Hisopos de Algodón o aza
 Mechero
 Discos de antibioticos

EXAMEN DE UROCULTIVO
OBJETIBO

 Identificar la presencia de bacteria en la muestra.

FUNDAMENTO TEORICO:

El urocultivo es la prueba de orina que identifica la presencia de bacterias. Como los riñones y la vejiga son
estéril no hay microbios presentes, la identificación de bacterias en la orina suele ser un fuerte indicador de
una infección del tracto urinario. No siempre la presencia de bacterias indica una infección activa. Algunos de
ellas pueden colonizar la uretra y la vejiga sin causar enfermedad.

De forma más simple, podemos decir que análisis de orina nos muestra las consecuencias de una posible
infección urinaria, mientras que solamente el urinocultivo es capaz de identificar el germen que causa la
infección.

EN QUE CASO SE SOLICITA EL UROCULTIVO:

El urocultivo es importante en.

 Cuando, después de la evaluación clínica, el médico no está todavía seguro para tratar una infección
del tracto urinario.

 Cuando el primer curso de antibióticos no consigue eliminar la infección.

 Cuando existe sospecha de pielonefritis.

 En mujeres embarazadas.

 En los casos de infecciones urinarias de repetición.

 En casos de fiebre sin origen definido.

 Antes de procedimientos urológicos

RECOLECCION DE UN UROCULTIVO:

Asegurar que el paciente entienda que la recolección de orina debe ser estéril para eso se deben seguir
algunos pasos:
  Limpiar la región genital, sobre todo alrededor del meato uretral (salida de la uretra). Lo ideal es usar
gasas (compresas) estériles para limpiar y luego secar el área.
 El recipiente utilizado para recolectar la orina debe ser estéril.
 En la hora de orinar, se debe evitar el contacto de la orina con la piel circundante, como grandes
labios o el prepucio del pene.
 El primer chorro de orina es siempre despreciado, ya que solamente sirve para limpiar las impurezas
que se quedan en la uretra.
 El urocultivo debe ser llevado inmediatamente al laboratorio después de su recolección. Solamente
hay que refrigerarlo si el tiempo entre la recolección y la entrega es muy largo.

La mejor orina para el urocultivo es la primera de la mañana, porque durante la noche es cuando la orina
permanece más tiempo en la vejiga, favoreciendo la multiplicación de bacterias.

Luego realizar un antibiograma.

PRUEBAS BIOQUIMICAS
OBJETIVO

 Observar las reacciones bioquímicas con las bacterias.

FUNDAMENTO TEORICO:

El estudio bioquímico que se lleva a cabo como complemento de otros estudios bacteriológicos es posible
gracias a las reacciones fisiológicas y químicas que llevan a cabo los microorganismos. Para esto se emplean
medios de cultivo enriquecidos con productos útiles para el metabolismo celular, los cuales además
contienen algún indicador que hace cambiar el color del medio al efectuar dichos microorganismos sus
funciones. Los organismos varían en su capacidad para utilizar diferentes compuestos (por ejemplo:
carbohidratos, urea, citrato, etc.). De acuerdo a los productos de su actividad química, las bacterias se
pueden clasificar como:

 Zimógenas: las que fermentan los carbohidratos, desdoblándolos en alcohol, ácido láctico o acético.
 Aerógenas: las que producen gas como hidrógeno y dióxido de carbono como resultado de su
actividad metabólica.
 Anaerógenas: las que no producen cantidades visibles de gas durante su actividad metabólica.
 Cromógenas: las que producen pigmentos solubles o insolubles.
 Fotógenas: las que causan putrefacción y producen una débil fosforescencia ( algunas bacterias
marinas)
Entre las pruebas bioquímicas más comunes tenemos:

Caldos de carbohidratos con indicador de pH, rojo de fenol: Al fermentar algunos carbohidratos, muchas
bacterias producirán ácido, y con un medio con pH original alrededor de 7.4 al bajar éste a 6.8 por el ácido
que produce un cambio de color gracias a la incorporación de un indicador de pH como es el rojo de fenol.
AGAR DE HIERRO Y TRIPLE AZÚCAR (TSI

El agar TSI es uno de los más usados para ver la fermentación de carbohidratos en la familia
Enterobacteriaceae. Se pueden tener varias posibilidades de fermentación de acuerdo a las características
metabólicas del microorganismo como son:

Utilización de glucosa sola. Los microorganismos que fermentan solo la glucosa provocan en este medio una
reacción alcalina en la superficie (roja) sobre un fondo ácido (amarillo, k/a) debido a que realizan una
degradación aeróbica de la glucosa en la superficie, convirtiendo el piruvato en agua y dióxido de carbono.
Después de 18 a 24 horas de incubación como la concentración de glucosa es baja (0.1%), los
microorganismos empiezan a utilizar las peptonas que se encuentran en el medio, causando la liberación de
amoniaco y produciendo un pH alcalino (rojo) gracias al rojo de fenol que tiene el medio como indicador de
pH. En el fondo, como no hay oxígeno, se realiza una degradación anaeróbica y el piruvato se convierte en
lactato con lo cual el pH disminuye quedando el pH ácido (amarillo).

Utilización de lactosa y/o sacarosa. Algunos microorganismos tienen la facultad de fermentar la glucosa y la
lactosa resultando una reacción ácida en la superficie (amarilla) y ácida en el fondo (amarilla, a/a). En este
caso después de 18 a 24 hrs como la concentración de lactosa es alta (1.0%), o sea 10 veces más que la de la
glucosa presente, no se ha utilizado completamente y la acidez persiste tanto en el fondo como en la
superficie. En el caso de usar sacarosa la reacción sería la misma.

Sin utilización de ninguna de las anteriores. En el caso de no utilizar ninguno de los carbohidratos presentes
(glucosa, lactosa y sacarosa), lo que se usaría serían las peptonas, ya sea aeróbicamente o anaeróbicamente.
Sólo utilizándolas aeróbicamente daría una superficie alcalina (roja, k) sobre un fondo sin cambio (sc) o sea
k/sc).

Si las usara aeróbicamente daría una superficie alcalina (rojo) sobre fondo alcalino (rojo) o sea k/k. En este
medio también es posible detectar la producción de gas por la formación de burbujas dentro del medio, y la
producción de ácido sulfhídrico, el cual reaccionará con un indicador con base de fierro dando un color negro
debido al sulfuro de hierro formado.

AGAR DE HIERRO Y LISINA (LIA):

Algunos microorganismos son capaces de provocar la descarboxilacidon de los aminoácidos por inducción de
enzimas específicas, el resultado de esta descarboxilación es la producción de una amina ( o diamina) y
dióxido de carbono. Tal es el caso de la produccidon de la enzima lisina descarboxilasa la cual al actuar sobre
la lisina produce una diamina llamada cadaverina.

En el medio LIA se puede detectar la producción de la lisina descarboxilasa ya que se produce una reacción
coloreada por un cambio en el pH del medio, que contiene como indicador púrpura de bromocresol. Un
cambio del color original del medio (morado) hacia amarillo en el fondo indica una reacción ácida por la
fermentación de una pequeña cantidad de glucosa en el medio. Si el microorganismo produce lisina
descarboxilasa, la acción de esta enzima sobre la lisina dará lugar a la cadaverina, la cual provocará un
cambio de pH hacia la alcalinidad dando un color morado que sobrepasa la acidez debida a la glucosa. Así
pues, un fondo amarillo indica que no se produce lisina descarboxilasa y un color morado que si es
producida.

PRUEBA DEL CITRATO DE SIMMONS:

Ciertas bacterias tienen la capacidad de utilizar el citrato como única fuente de carbono en una serie de
reacciones como sigue:

CITRATO OXALACETATO + ACETATO OXALACETATO PIRUVATO + CO 2 PIRUVATO ACETATO + LACTATO + CO

Los ácidos orgánicos son posteriormente utilizados dando como producto final carbonatos y bicarbonatos
alcalinos. El pH alcalino así logrado hace que el indicador de pH en el medio, el azul de bromotimol vire de su
color verde original a un azul intenso.

PRUEBA DE LA UREASA:

La hidrólisis de la urea es catalizada en algunos microorganismos por una enzima específica, la ureasa, dando
lugar a dos moléculas de amonio, agua y dióxido de carbono.

Todo esto da lugar a un cambio en el pH, lo que causa que cambie el color original del medio (amarillo) a un
color rojo bugambilia por el indicador rojo de fenol. De acuerdo a la degradación de la urea el color será más
o menos intenso.

(NH2)2C=O + 2H2O---> CO2+2NH3+H2O (NH4)2CO3

MEDIO MIO (MOVILIDAD, INDOL Y ORNITINA):

Este medio como su nombre lo indica sirve para observar la movilidad, la produccíon de indol y
descarboxilación de la ornitina.

La movilidad se detectará por la presencia de turbidez alrededor del punto de inoculación. El indol se
formará si la bacteria tiene la capacidad de producir la enzima triptofanasa que desdoblará el aminoácido
triptófano en indol, ácido pirúvico y amonio. El indol es incoloro pero al reaccionar con el reactivo de Kovacs
(p-dimetil-aminobenzaldehido) que se adiciona después de que creció la bacteria, dará un color rojo violeta.

Por lo que respecta a la descarboxilacíon de la ornitina como el medio tiene púrpura de bromocresol y una
pequeña cantidad de glucosa cuando esta se fermenta se produce un color amarillo en el fondo (ornitina
descarboxilasa negativa), sin embargo al descarboxilarse la ornitina se produce putresina la cual es alcalina y
sobrepasa la acidez dada por la fermentación de las glucosa resultando en un color morado en el fondo.

MATERIAL Y EQUIPO:

 Aguja bacteriológica
 Mechero de Bunsen
 Gradilla Medios de cultivo (4 tubos cada uno)
 Agar de hierro y triple azúcar (TSI)
 Agar de hierro y lisina (LIA)
 Agar Citrato de Simmons
 Agar Urea según Christensen
 Medio de MIO